Name: Fluorescente modelo de camundongo ortotópico de câncer de pâncreas (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-09-20T08:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 48 s
Description: Aprenda a implantar células de câncer pancreático fluorescentes em camundongos Balb-c Ola Hsd-Fox1nu para monitorar progressão tumoral e metástase de forma não invasiva. Este modelo ortotópico permite avaliar efeitos de drogas in vivo.

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Agradecemos à Western University of Health Sciences pela Bolsa Intramural.

O protocolo descrito a seguir é executado sob a orientação e aprovação do Comitê de Cuidados e Uso de Animais da Universidade Ocidental. Todos os experimentos são realizados em conformidade com todas as orientações pertinentes, regulação e agências reguladoras. Cultura 1. celular <ol><li> Preparação de Meio Completo <ol><li> Usando uma câmara de segurança biológica de Classe II, preparar meio completo por adição asséptica de soro fetal de bovino (FBS) e penicilina estreptomicina (P / S) para um frasco de 500 ml de meio RPMI. Misture delicadamente por agitação. A concentração final de cada um suplemento é 10% de FBS e 1% de P / S (v / v). Por exemplo, completar a 500 ml de meio com FBS a 56 ml e 6 ml de P / S. </li><li> Coloque meio completo num banho de água a 37 ° C. </li></ol></li><li> Descongelamento e Células Propagação <ol><li> Recuperar células PANC-1 GFP de nitrogênio líquido. Descongelar o frasco por agitação suave num banho de água a 37 ° C. Nota:O descongelamento deve ser rápida (aproximadamente 2-3 minutos). </li><li> Etiqueta frascos T-75 para ser usado com (a) o nome de linha de células, data (b) Número de passagem, (c), e as iniciais (d) do pesquisador. </li><li> Limpe o frasco com 70% de etanol e transferência frasco a uma cabine de segurança biológica. </li><li> Para propagar as células, adicionar 9,0 ml de meio completo a um tubo de 15 ml. Usando uma pipeta de 1,0 ml, transferir cuidadosamente a suspensão de células e suspendê-lo em 9 ml de meio completo. </li><li> Centrifugar a 125 xg durante 8 minutos à temperatura ambiente. Transferir o frasco cónico de uma cabine de segurança biológica e aspirar o sobrenadante sem perturbar o sedimento. </li><li> Suspende-se o sedimento em 10 ml de meio completo fresco pipetando suavemente a suspensão para cima e para baixo. </li><li> Contar as células com um hemocitómetro e placa-los em frascos T-75 a uma densidade de 2,1 X 10 6 células / balão. Coloque balão numa incubadora a 37 ° C e 5% de CO 2. </li><li> Monitorizar as células por dia por olho e sob o microscópio. Se a gripeID de renovação é necessária, de forma asséptica aspirar o meio de crescimento completo do frasco e descarte. Adicionar um volume igual de meio completo fresco. </li></ol></li><li> propagação Cells <ol><li> Assepticamente remover o meio do frasco. Adicionar 5 ml de solução salina de tampão de fosfato de Dulbecco (DPBS) para lavar as células e descartar. </li><li> Separe as células a partir do balão por adição de 3 ml de 0,25% de tripsina. Incubar balão contendo tripsina a 37 ° C e CO2 a 5% durante 5 a 10 min. </li><li> Observar células ao microscópio (aumento de 10x) e garantir que eles são redondos e desalojado. </li><li> Neutralizar a tripsina, adicionando um volume igual de meio completo e quebrar aglomerados cuidado pipetando para cima e para baixo. </li><li> Contar as células utilizando um hemocitómetro e transferir o volume de suspensão de células apropriado para novos frascos à densidade celular indicado em 1.2.7; adicionar meio fresco suficiente para que o volume final é de 10 ml por frasco. </li></ol></li><li> Suspens celularesPreparação ion para Injecção Nota: Uma vez que a matriz de membrana basal, alta concentração, solidifica à temperatura ambiente, manter todos os materiais no gelo. Coloque todas as pontas de pipetas estéreis e frascos no congelador durante a noite, e manter em gelo durante o trabalho sobre a suspensão. <ol><li> Mantenha uma garrafa de meio RPMI sem quaisquer aditivos no gelo. Descongelar a matriz da membrana basal, de alta concentração, seguindo as instruções do fabricante. De preferência, alíquota em frascos menores para evitar a múltiplos ciclos de congelamento e descongelamento 10. </li><li> media aspirado de todos os frascos, e lavar com 5 ml de DPBS. Repita todas as etapas na seção anterior até ao passo 1.3.4. </li><li> Transferir o conteúdo para um tubo cónico de 15 ml e centrifugar a 125 xg durante 8 minutos à temperatura ambiente. Transferir frasco cónico a cabine de segurança biológica e re-suspender pellet usando 10 ml de DPBS. </li><li> Pipeta suavemente a suspensão cima e para baixo para quebrar o sedimento. Contagem de células utilizando um hemocitómetro. </li><li> Centrifugar mais uma vez como descrito em Step 1.4.3. Aspirar o sobrenadante e, dependendo do número de células, adicionar diluente adequado, para se obter 3 X 10 6 células num volume de 50 ul. O diluente será uma mistura de meio isento de soro e membrana basal da matriz concentração elevada numa proporção de 1: (v / v) relação 1. </li><li> Vortex a suspensão suavemente e manter em gelo em todos os momentos. A suspensão é agora pronto para a injecção. </li></ol></li><li> O implante cirúrgico Nota: Certifique-se de que todos os materiais e instrumentos cirúrgicos são estéreis. Pratique técnicas de assepsia em todos os momentos. <ol><li> Coloque uma almofada de aquecimento sobre a mesa e cobrir com uma cortina estéril. Configurar o aparelho de anestesia e assegurar todos os suprimentos estão dentro do alcance do braço. </li><li> Coloque o focinho do animal para a máscara de anestesia e configurar a anestesia a 1 L / min de oxigênio e 2,5% de isoflurano. </li><li> Esfregar suavemente no flanco do animal com iodo, e lavar com 70% de etanol. Repita três vezes. </li><li> Confirme oanimal é totalmente anestesiados por beliscar a pata traseira. O animal é totalmente anestesiado e pronto para a cirurgia se não houver resposta é observada. No entanto, se o animal se encolhe, garantir que há anestesia suficiente no vaporizador e permitir que o animal mais tempo para ir completamente sob anestesia. </li><li> Carga de aproximadamente 200 mL da suspensão de células para uma seringa de 1,0 ml de TB com uma agulha G 18 (previamente arrefecida). Substituir a agulha com uma agulha de 27 G e voltar ao gelo até estar pronto para usar. </li><li> Localize a área geral do baço (quadrante superior esquerdo do abdome) e usando uma pinça beliscar a pele em cima daquela região. Usando uma tesoura cirúrgica fazer uma incisão de aproximadamente 1,0 cm para criar um bolso. Do mesmo modo, apertar o músculo liso no topo do baço e a atravessar a fim de aceder à cavidade peritoneal. </li><li> Agarram delicadamente a extremidade caudal do baço e puxe-o para fora do corpo. O pâncreas será ligado ao baço. Espalhe o pâncreas usando um st molhadaerile Q-tip e localizar a cauda do pâncreas. </li><li> Entregue a injeção de 50 mL para a cauda do pâncreas, deixe a agulha dentro de 10 seg e girar lentamente a agulha do pâncreas. A implantação bem sucedida será parecido com uma bolha superficial, sem qualquer vazamento. </li><li> Devolver o pâncreas e baço para a cavidade peritoneal. Primeiro coloque o músculo e, em seguida, coloque a pele separadamente. Utilize uma sutura ou agrafo 6-0 para fechar a incisão. Para evitar a dor no animal, administrar cetoprofeno por via subcutânea (SC) (5 mg / kg) ao longo de 24 h. Alternativamente, SC administrar buprenorfina (0,05-0,1 mg / kg) a cada 12 horas durante um período de 36 h. </li><li> Recuperar o animal de anestesia e devolvê-lo à sua gaiola. Igualmente controlar a dor. Os animais devem ser fornecidos com o alívio da dor no momento da (ou mesmo antes - de preferência) a cirurgia. alívio adicional da dor deve ser fornecido aos animais que experimentam a dor de acordo com IACCUC-protocolo ou como prescrito pelo notendendo veterinário ou pessoa designada. </li></ol></li><li> Na imagem in vivo Nota: A captura de imagem foi realizada utilizando um sistema de imagem comercial equipado com uma câmara escura e os filtros apropriados para imagiologia de GFP. A aquisição de imagens foi realizada utilizando uma câmera CCD e um sistema óptico consistindo de lentes intercambiáveis ​​excitação / emissão (excitação: 455-495 nm; emissão: 513-557 nm). as imagens de campo claro foram capturados sem um filtro de 1 x 1 binning para cada ponto de tempo. Excitação de GFP utilizada uma fonte de luz xenon multiespectral. Os animais foram mantidos sob anestesia durante o processo de imagiologia por ligar o aparelho de anestesia com um colector de anestesia de gás integrada na câmara escura do sistema de imagem. <ol><li> Anestesiar o animal, tal como descrito em 1.5.2. Uma máscara de anestesia é, no interior da câmara escura do sistema de imagem comercial, a fim de manter o animal sob anestesia durante a imagiologiaprocesso. </li><li> Configure os filtros de excitação e emissão corretas. </li><li> Comece a obtenção de uma imagem inicial usando apenas luz branca. Mantenha a mesma posição do animal durante toda a sessão de imagem e mudar para filtros GFP para tomar uma segunda imagem. </li><li> Para obter melhores resultados sobrepor as duas imagens. Analisar a imagem para a área fluorescente e intensidade. </li></ol></li></ol>

<ol><li>Siegel, R. Pancreatic Cancer Stats: American Cancer Society: Cancer Facts & Figures. , Available from:
 <a target="_blank" href="http://www.cancer.org/acs/groups/content/@research/documents/webcontent/acspc-042151.pdf">http://www.cancer.org/acs/groups/content/@research/documents/webcontent/acspc-042151.pdf</a> (2014).</li>
<li>Smyth, E., Cunningham, D. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aSmyth%2C+E+%22Harrison%27s+Principles+of+Internal+Medicine%22">Harrison's Principles of Internal Medicine</a>. Kasper, D., et al. , 19th edn, McGraw-Hill Education. (2015).</li>
<li>Mahipal, A., Frakes, J., Hoffe, S., Kim, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Management+of+borderline+resectable+pancreatic+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22World+J+Gastrointest+Oncol%22%5BJournal%5D)">Management of borderline resectable pancreatic cancer.</a> World J Gastrointest Oncol. 7, 241-249 (2015).</li>
<li>De La Cruz, M. S., Young, A. P., Ruffin, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diagnosis+and+management+of+pancreatic+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Am+Fam+Physician%22%5BJournal%5D)">Diagnosis and management of pancreatic cancer.</a> Am Fam Physician. 89, 626-632 (2014).</li>
<li>Frese, K. K., Tuveson, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Maximizing+mouse+cancer+models%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Cancer%22%5BJournal%5D)">Maximizing mouse cancer models.</a> Nat Rev Cancer. 7, 645-658 (2007).</li>
<li>Hoffman, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Patient-derived+orthotopic+xenografts%3A+better+mimic+of+metastasis+than+subcutaneous+xenografts%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Cancer%22%5BJournal%5D)">Patient-derived orthotopic xenografts: better mimic of metastasis than subcutaneous xenografts.</a> Nat Rev Cancer. 15, 451-452 (2015).</li>
<li>Hoffman, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+multiple+uses+of+fluorescent+proteins+to+visualize+cancer+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Cancer%22%5BJournal%5D)">The multiple uses of fluorescent proteins to visualize cancer in vivo.</a> Nat Rev Cancer. 5, 796-806 (2005).</li>
<li>Jiang, Y. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Establishment+of+an+orthotopic+pancreatic+cancer+mouse+model%3A+cells+suspended+and+injected+in+Matrigel%5BTitle%5D)+AND+%22World+J+Gastroenterol%22%5BJournal%5D)">Establishment of an orthotopic pancreatic cancer mouse model: cells suspended and injected in Matrigel.</a> World J Gastroenterol. 20, 9476-9485 (2014).</li>
<li>Arranz, A., Ripoll, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advances+in+optical+imaging+for+pharmacological+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Advances in optical imaging for pharmacological studies.</a> Front Pharmacol. 6, 189(2015).</li>
<li>Corning. Corning Matrigel Matrix: Frequently Asked Questions. , Available from:
 <a target="_blank" href="http://csmedia2.corning.com/LifeSciences/media/pdf/faq_DL_026_Corning_Matrigel_Matrix.pdf">http://csmedia2.corning.com/LifeSciences/media/pdf/faq_DL_026_Corning_Matrigel_Matrix.pdf</a> (2013).</li>
<li>Metildi, C. A., Kaushal, S., Hoffman, R. M., Bouvet, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+serial+selection+of+human+pancreatic+cancer+cells+in+orthotopic+mouse+models+produces+high+metastatic+variants+irrespective+of+Kras+status%5BTitle%5D)+AND+%22J+Surg+Res%22%5BJournal%5D)">In vivo serial selection of human pancreatic cancer cells in orthotopic mouse models produces high metastatic variants irrespective of Kras status.</a> J Surg Res. 184, 290-298 (2013).</li>
<li>Kim, M. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+orthotopic+and+heterotopic+human+pancreatic+cancer+xenografts+in+immunodeficient+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">Generation of orthotopic and heterotopic human pancreatic cancer xenografts in immunodeficient mice.</a> Nat Protoc. 4, 1670-1680 (2009).</li>
<li>Katz, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Survival+efficacy+of+adjuvant+cytosine-analogue+CS-682+in+a+fluorescent+orthotopic+model+of+human+pancreatic+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Survival efficacy of adjuvant cytosine-analogue CS-682 in a fluorescent orthotopic model of human pancreatic cancer.</a> Cancer Res. 64, 1828-1833 (2004).</li>
<li>Bouvet, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Real-time+optical+imaging+of+primary+tumor+growth+and+multiple+metastatic+events+in+a+pancreatic+cancer+orthotopic+model%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Real-time optical imaging of primary tumor growth and multiple metastatic events in a pancreatic cancer orthotopic model.</a> Cancer Res. 62, 1534-1540 (2002).</li>
</ol>

Os autores não têm nada para revelar.

Descreve-se um modelo murino ortotópico de cancro do pâncreas que expressa GFP, permitindo, assim, a monitorização não invasiva do crescimento do tumor usando todo o corpo in vivo imagiologia fluorescente (Figura 1). Esta técnica permite monitorar o desenvolvimento do tumor em tempo real (Figura 3); ele pode ser uma ferramenta importante para pesquisadores para estudar a eficácia terapêutica de novos agentes contra o câncer de pâncreas. Outro aspecto importante deste modelo é q...

O câncer de pâncreas é diagnosticada com maior frequência em comparação com outros tipos de câncer e é o 4º principal causa de mortes relacionadas ao câncer nos Estados Unidos. A partir do momento do diagnóstico, mais de 90% dos pacientes morrem dentro de cinco anos 1,2. Actualmente, a remoção cirúrgica do tumor é a única cura para o cancro do pâncreas, mas menos do que 20% dos doentes são elegíveis para se submeter a cirurgia, principalmente devido ao momento do diagnóstico da doença é em fase avançada e tem metástase 3,4. A falta de sintomas específicos faz com que o câncer de pâncreas uma doença silenciosa; alguns dos sintomas incluem dor abdominal, dor nas costas, perda de apetite, náuseas e icterícia; que pode ser facilmente interpretado como doenças digestivas comuns 4. Por esta razão, é importante desenvolver novas ferramentas farmacológicas para auxiliar no diagnóstico e tratamento de cancro pancreático. A utilização de modelos animais nos permite compreender a biologia do pancrecâncer e atic proporciona um insight sobre a aplicação deste conhecimento para os seres humanos. Modelos ortotópicos xenoenxerto de câncer de pâncreas são realistas, porque os tumores crescem no órgão de origem 5. Em contraste com os modelos heterotópicos, onde as linhas de células tumorais ou fragmentos são implantados subcutaneamente, modelagem ortotópico permite a recriação do microambiente tumoral e imita a interacção das células tumorais com os seus arredores 6. O modelo de xenoenxerto de tumores descrito aqui deriva a partir da linha celular de cancro pancreático humano PANC-1 GFP, que é geneticamente manipulada para expressar a proteína fluorescente verde (GFP). Detecção de GFP permite para uma imagiologia e monitorização do crescimento do tumor e metástases 7 não-invasiva. O desenvolvimento do tumor ocorre rapidamente, de forma espontânea, e se assemelha a de tumores primários de pacientes com câncer pancreático humanos 8. modelos ortotópicos proporcionar uma previsão mais exacta da eficácia do fármaco em resposta a agentes terapêuticos, enquantosimulando o microambiente do tumor. Como mencionado acima, este modelo animal permite a detecção de fluorescência do crescimento de tumores e metástases em tempo real. detecção fluorescente permite uma imagem mais direta / live comparação com luminescência. Com a fluorescência, a luz emitida é um resultado de uma excitação por luz de um outro comprimento de onda menor; Considerando que, a emissão de luz, a luz emitida é o resultado de uma reacção química e pode não ter forte emissão 9. Além disso, todo o corpo in vivo de imagens de fluorescência não é prejudicial para o animal e permite aos investigadores para monitorizar o crescimento do tumor ao longo do tempo em resposta a tratamentos terapêuticos.

<table><tbody><tr><td>RPMI media 1640</td><td>Caisson Labs</td><td>RPL03-500ML</td><td></td></tr><tr><td>Soro Fetal Bovino&nbsp;</td><td>Gibco</td><td>10437-077</td><td></td></tr><tr><td>Penicilina Estreptomicina&nbsp; &nbsp;</td><td>Thermo Ficher Sci</td><td>15140-122</td><td></td></tr><tr><td>Membrana basal Matrigel HC, alta concentração</td><td>Corning</td><td>354248</td><td></td></tr><tr><td>SutureVet PGA 6-0 PGA</td><td>Henry Schein</td><td>39010</td><td></td></tr><tr><td>Alcare ou Antisséptico Espumado para as mãos</td><td>Steris</td><td>639680</td><td></td></tr><tr><td>DPBS (solução salina tamponada com fosfato da Dubelcco)&nbsp;</td><td>Seringa Thermo Ficher Sci</td><td>21300025</td><td></td></tr><tr><td>TB 27 G 1/2</td><td>Becton Dickinson</td><td>305620</td><td></td></tr><tr><td>Isoflurano</td><td>Blutler Schein</td><td>50562</td><td></td></tr><tr><td>Ketoprofeno</td><td>Fort Dodge Animal Health</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Tesoura Cirúrgica, 5.5" maionese reta&nbsp;</td>Linha celular GFP PANC-1 <td>22-1600</td><td></td> <td>da Henry Schein</td></tr><tr><td>&nbsp;</td>Sistema de imagem de pequenos animais <td>Anticancer, Inc</td><td></td><td></td></tr><tr><td>: iBox Scientia</td><td>UVP, LLC. Planalto, CA.</td><td></td><td>Sistema de imagem de pequenos animais para observar o tumor fluorescente em animais vivos</td></tr></tbody></table>

fluorescente modelo de camundongo ortotópico de câncer de pâncreas



Fluorescent Orthotopic Mouse Model of Pancreatic Cancer

O câncer de pâncreas continua a ser um dos cancros para os quais a sobrevivência não melhorou substancialmente nos últimos décadas. Apenas 7% dos pacientes diagnosticados vai sobreviver mais do que cinco anos. De modo a compreender e imitar o microambiente de tumores pancreáticos, utilizou-se um modelo murino ortotópico de cancro do pâncreas que permite imagem não invasiva de progressão do tumor em tempo real. Células de cancro do pâncreas que expressam a proteína fluorescente verde (GFP PANC-1) foram suspensos em matriz da membrana basal, de alta concentração, (por exemplo, Matrigel HC) com meio isento de soro e, em seguida, injectado no cauda do pâncreas por laparotomia. A suspensão de células na matriz de membrana basal elevada concentração torna-se uma substância do tipo gel, uma vez que atinja a temperatura ambiente; Portanto, gelifica quando entra em contacto com o pâncreas, criando uma vedação no local da injecção e impedir qualquer fuga de células. O crescimento do tumor ea metástase para outros órgãos são monitorados em directoanimais usando fluorescência. É fundamental utilizar os filtros apropriados para a excitação e de emissão de GFP. Os passos para a implantação ortotópica são detalhados neste artigo para que os pesquisadores podem facilmente replicar o processo em ratinhos nus. Os passos principais deste protocolo são preparação da suspensão de células, a implantação cirúrgica, e todo o corpo fluorescente imagiologia in vivo. Este modelo ortotópico foi concebido para investigar a eficácia de novos terapêutica em tumores primários e metastáticos.

Este método descreve um implante ortotópico cirúrgica das células cancerosas pancreáticas humanas fluorescentes, com foco na preparação da suspensão de células para injecção, anestesia adequada para os roedores, a entrega de suspensão de células via laparotomia, eo uso de fluorescente em imagens de pequenos animais in vivo. A detecção de um sinal verde fluorescente (sinal GFP) entre duas e três semanas pós-implantação, fornece investigadores uma sugestão visual para con...

Um procedimento para implantar células cancerígenas pancreáticas que expressam proteínas fluorescentes verdes (PANC-1 GFP) ortotopicamente no pâncreas de camundongos Balb-c Ola Hsd-Fox1nu para avaliar a progressão e metástase do tumor é apresentado aqui.

Fluorescente modelo de camundongo ortotópico de câncer de pâncreas

Pancreatic cancer remains one of the cancers for which survival has not improved substantially in the last few decades. Only 7% of diagnosed patients will ...

O objetivo geral deste procedimento é desenvolver um modelo ortotópico de câncer pancreático fluorescente em camundongo que possa ser monitorado de forma não invasiva em um animal vivo. Este modelo permite o estudo não invasivo dos efeitos de uma droga específica de interesse sobre um tumor primário e suas metástases em um animal vivo. A principal vantagem desta técnica é que os efeitos dos tratamentos podem ser facilmente observados in situ.Inicie o procedimento descongelando uma alíquota de Matrigel de alta concentração de acordo com as instruções do fabricante. Em seguida, lave cada frasco de células com cinco mililitros de DPBS e recolha as culturas com tripsina. Após a adição do meio RPMI, transfira as suspensões celulares resultantes para tubos de 15 mililitros e centrifugue as células.No final da centrifugação, transfira as células para uma cabine de segurança biológica e re-suspenda os pellets em 10 mililitros de DPBS fresco com pipetagem suave. Após a contagem, centrifugue as células novamente e dilua as suspensões celulares para uma concentração de três vezes 10 à sexta células por 50 microlitros de meio sem soro e Matrigel, gelado, um matriz de membrana basal de alta con

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Research

JoVE Journal

Cancer Research

Pesquisa sobre o Câncer

O vídeo explica um método cirúrgico passo a passo para implantação ortotópica de um fragmento tumoral de um doador canceroso para o pâncreas de um camundongo receptor não canceroso para o desenvolvimento de câncer de pâncreas. O PDAC implantado ortotopicamente pode recapturar o microambiente tecidual de cânceres pancreáticos humanos do que os modelos subcutâneos (SC) convencionais com mais precisão.

Transplante de tumor ortotópico de homoenxerto: uma técnica para gerar modelos de camundongos com tumor pancreático

Este vídeo demonstra o protocolo para implantar células cancerígenas pancreáticas que expressam proteínas fluorescentes verdes ortotopicamente no pâncreas do camundongo. O modelo ortotópico de camundongo ajuda a investigar a eficácia de novas terapêuticas em tumores primários e metastáticos.

Modelo de camundongo ortotópico fluorescente: implantando células cancerígenas que expressam GFP em camundongos para avaliar a progressão do tumor in vivo

Este vídeo demonstra um modelo ortotópico de câncer de pâncreas que utiliza Matrigel para entrega celular localizada e imagens de bioluminescência in vivo para monitoramento não invasivo da progressão do tumor. O modelo ortotópico é adequado para modelos singênicos e de xenoenxerto e pode ser usado em ensaios pré-clínicos para investigar o impacto de novas terapias anticâncer no crescimento do tumor pancreático primário e metástase.

Modelo de camundongo com câncer de pâncreas ortotópico bioluminescente: uma técnica não invasiva para monitorar a progressão do câncer em camundongos

Uma melhor compreensão da biologia do câncer de pâncreas é criticamente necessário para permitir o desenvolvimento de melhores opções terapêuticas para o tratamento de câncer no pâncreas. Para atender a essa necessidade, nós demonstramos um modelo ortotópico de câncer pancreático que permite o monitoramento não-invasivo de progressão do câncer...

Modelo ortotópico bioluminescente de progressão do câncer de pâncreas

O objetivo deste protocolo é aplicar ressonância magnética com contraste dinâmico (DCE-MRI) para xenoenxertos de tumores pancreáticos ortotópicos em camundongos. A DCE-MRI é um método não invasivo para analisar a microvasculatura em um tecido-alvo e útil para avaliar a resposta vascular em um tumor após uma nova terapia.

Contraste Dinâmico aprimorada Ressonância Magnética de um Modelo de câncer de pâncreas Orthotopic Rato

Este trabalho predefine um protocolo avançado para avaliar com precisão o carregamento de tumores por meio da detecção de sinais de proteína fluorescente verde e bioluminescência, bem como a integração da técnica de detecção molecular quantitativa.

Estudando o câncer de mama triplo negativo usando modelo de câncer de mama ortotópico

Descrevemos um protocolo para a implantação guiada por ultrassom de linhas de células de adenocarcinoma ductal pancreática derivada de urina diretamente no local do tumor nativo. Esta aproximação conduziu aos tumores pancreatic detectáveis pela exploração do ultra-som dentro de 2-4 semanas da injeção, e reduziu significativamente a semeadura da pilha do tumor da proporção na parede peritoneal em comparação à implantação ortotópica cirúrgica.

Implantação ortotópica guiada por ultrassom do Adenocarcinoma Ductal Pancreático murine

No contexto clínico, pacientes com câncer pancreático localizado serão submetidos à pancreatectomia seguida de tratamento adjuvante. Este protocolo aqui relatado visa estabelecer um método seguro e eficaz de modelagem deste cenário clínico em camundongos nus, através da implantação ortotópica de câncer pancreático seguido de pancreatectomia distal e esplenectomia.

Um modelo de rato resemcional ortotópico de câncer pancreático

A imagem in vivo de alta resolução do pâncreas foi facilitada com a janela de imagem intravital pancreática.

Visualização de nível celular longitudinal estabilizada do pâncreas em um modelo murino com uma janela de imagem intravital pancreática

Aloenxertos ortotópicos singênicos de adenocarcinoma ductal pancreático (ADP) de camundongos recapitulam a biologia, os fenótipos e as respostas terapêuticas dos subtipos da doença. Devido à sua rápida e reprodutível progressão tumoral, são amplamente utilizados em estudos pré-clínicos. Aqui, mostramos práticas comuns para gerar esses modelos, injetando culturas de PDAC murino singênico no pâncreas.

Aloenxertos Ortotópicos Singênicos de Camundongos para Modelo de Câncer de Pâncreas

Descrevemos um método para utilizar linfócitos infiltrantes de tumor (TILs) de camundongos por meio de citometria de fluxo para transferência de células adotivas. Este protocolo tem como objetivo verificar a citotoxicidade específica de TILs contra tumores em um modelo de camundongo com câncer de pâncreas singênico, fornecendo informações sobre o desenvolvimento de terapias celulares adotivas para câncer de pâncreas.

Isolamento baseado em citometria de fluxo e avaliação terapêutica de linfócitos infiltrantes de tumor em um modelo de câncer de pâncreas em camundongo

Aprenda a implantar células de câncer pancreático fluorescentes em camundongos Balb-c Ola Hsd-Fox1nu para monitorar progressão tumoral e metástase de forma não invasiva. Este modelo ortotópico permite avaliar efeitos de drogas in vivo.

Fluorescente modelo de camundongo ortotópico de câncer de pâncreas

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