Name: O uso de um baixo fluxo Sistema de Anestesia Digital para camundongos e ratos (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-09-07T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 6 s
Description: Aprenda a usar um sistema digital de anestesia de baixo fluxo para camundongos e ratos. Este método utiliza um vaporizador por injeção direta com seringa, permitindo controle preciso da entrega de anestésico com taxas de fluxo ideais para pequenos roedores.

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Os autores não têm agradecimentos.

Todos os estudos foram concluídos em conformidade com diretrizes regulatórias e institucionais. Os aspectos animais deste estudo foram avaliados pelo Programa de Uso de Animais Kent Scientific Corporation, aprovado pelo Comitê de Cuidado e Uso da Purdue Animal (PACUC), e realizada de acordo com o Guia para o Cuidado e Uso de Animais de Laboratório 22. Nota: O sistema de anestesia digital de baixo fluxo utilizado neste protocolo é equipado com um oxímetro de pulso integrado. 1. Configuração do Sistema de anestesia com baixo fluxo com Oxímetro de Pulso Integrado <ol><li> Para entrega isoflurano <ol><li> Selecione uma fonte de gás de transporte. Para utilizar a bomba de ar interna, desapertar Inlet Porto na parte traseira, permitindo que a bomba interna ao ar ambiente ingestão. </li><li> Ligue canister de carvão vegetal para esgotar porto. </li><li> Ligue o adaptador Y à frente do baixo fluxo, sistema de anestesia digital. Use os clipes codificados por cores para conectar os ramos brancos para tele cone do nariz, e ramos azuis à câmara de indução. </li><li> Fechar grampos clipe branco e clip azul aberto grampos para direcionar o fluxo de ar para a câmara. </li><li> Escolha de 2 ml de uma seringa. </li></ol></li><li> Para o monitoramento fisiológico, Usando o Oxímetro de Pulso Integrado <ol><li> Ligue o sensor pata oxímetro de pulso à porta na parte de trás do sistema de anestesia com baixo fluxo, identificado como &quot;AUX&quot;. </li></ol></li></ol> 2. Definir as configurações <ol><li> para anestesia <ol><li> Ligue o sistema de anestesia, e acessar o menu Set Up. Prima SET UP para aceder a Menu Principal&gt; Anestesia&gt; Configuração em vermelho. </li><li> Escolha do agente anestésico. Prima Set Up para realçar Tipo Anest em vermelho. Use as setas para cima e para baixo para selecionar isoflurano. </li><li> Defina o tamanho da seringa. Prima SET UP para destacar Syr Size. Use as setas para cima e para baixo para selecionar uma seringa de 2 ml. </li><li> Defina a posição vazia. Prima SET UP para highlight conjunto vazio no vermelho. Garantir seringa de vidro vazio, totalmente pressionado na seringa de retenção do bloco, colocando a seringa de modo que a seringa exploração braçadeira está assentado sobre o colar de metal da seringa. Pressione as setas para cima ou para baixo para mover o Pusher Bloco de modo que o Pusher Bloco faz contato leve com a parte superior do êmbolo da seringa. Pressione SELECT para definir a posição vazia. </li><li> Prima SET UP para destacar Remover em vermelho. Retire a seringa e encher a seringa com isoflurano usando o adaptador parte superior do frasco. </li><li> Ligar a seringa ao sistema de anestesia. </li><li> Primeiro o tubo anestésico. Prima SET UP para destacar Tubo Prime em vermelho. Pressione para baixo até o anestésico viaja através da seringa e para dentro do acessório preto no bloco vaporizador. </li><li> Ativar anestesia. Prima SET UP para destacar Ativar em vermelho. Use as setas para cima e para baixo para selecionar Sim. Imprensa Run / Voltar para voltar ao menu principal. </li><li> Seleccione a umafornecimento de ir e volume minuto. Prima Set Up para destacar Air Supply em vermelho. Use as setas para cima e para baixo para selecionar Bomba interna. Prima SET UP para destacar Vol Minuto em vermelho. Ajustar a taxa de fluxo de 250 ml / min. </li></ol></li><li> Para Monitoring Physiological <ol><li> Defina a frequência cardíaca mínima detectada para Mouse (240). Prima SET UP para aceder a Menu Principal&gt; MouseStat. Use cima e para baixo setas para definir a frequência cardíaca mínima. </li></ol></li></ol> 3. Comece a entrega de Anestesia <ol><li> Induzir o Rato <ol><li> Imprensa Run / Voltar duas vezes para entrar no modo de funcionamento e começar o fluxo de ar. </li><li> Posicione o mouse na câmara de indução, fechando a tampa firmemente. Ajuste o botão Concentração anestésico Agent para 3%. </li><li> Monitor até que o rato atingiu o plano desejado da anestesia, determinada pela perda do reflexo de endireitamento. Ajustar a concentração de anestésico Agent conforme necessário. </li><li> Uma vez que o animal perde o seu reflexo de endireitamento umnd está suficientemente anestesiados, gire o dial de concentração Anestesia para 0%. Os autores descobriram anteriormente que permitir o fluxo de ar para limpar a câmara de indução de 30-60 segundos é suficiente para purgar a câmara sem inverter a profundidade da anestesia 1. </li><li> abrir rapidamente as braçadeiras branco para dirigir o ar para a máscara, e feche os grampos azuis que conduzem à câmara de indução. </li><li> Abra a câmara longe do pesquisador, remova o rato, e se encaixam de imediato o cone do nariz. </li><li> O centro do animal numa almofada de aquecimento por infravermelhos, regulado para manter a temperatura corporal a 37 ° C por meio de uma sonda rectal de um circuito fechado de realimentação. </li><li> Quando o mouse é estável sobre o cone do nariz, ajustar a concentração de isoflurano a 1,5% ou conforme necessário para a manutenção girando o botão Concentração anestésico Agent. </li><li> Reduzir o volume minuto para manutenção. A taxa de fluxo mínima para suportar o animal é igual a 1,5-2,2 vezes o volume do animal minutos (para um rato de 30 g,um mínimo de 52 ml / min). Consulte as instruções do fabricante para um caudal recomendado configuração específica para o estilo cone do nariz e ajustar conforme necessário. Prima SET UP para aceder ao menu principal, e depois prima Set Até Vol Minuto é destacado em vermelho. Use as setas para cima e para baixo para ajustar o fluxo de destino. Imprensa Run / Voltar para voltar à tela principal. </li><li> Confirmar profundidade de anestesia, como determinado por uma falta de reflexo de retirada durante uma pitada interdigital. Aplicar pomada oftálmica para os olhos para evitar a secura durante a anestesia. </li></ol></li></ol> 4. Iniciar a monitorização fisiológica <ol><li> Coloque sensor sobre almofada de pata traseira. Posicione o sensor de modo que a luz vermelha está debaixo da pata e ilumina a pata. Use as setas acima e abaixo da tela para exibir o oxiwave. O animal está agora anestesiados com segurança usando um fluxo baixo, impulsionado por seringa, vaporizador digital. </li></ol> 5. Retire o animal <ol><li> Desligue oEntrega anestesia. <ol><li> Para interromper a entrega de anestésico, vire anestésico Agente botão de Concentração de Min (ou 0%) e remover animais da máscara. </li><li> Monitorar o mouse durante a recuperação da anestesia. Uma vez que o mouse se tornou totalmente ambulatorial, devolvê-lo para a jaula. </li></ol></li></ol>

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</ol>

Este projecto foi apoiado com equipamentos e financiamento por Kent Scientific Corporation, a American Heart Association para CJ Goergen (SDG18220010), e da Universidade de Purdue. Os autores Krista Bigiarelli e Irina Toore são funcionários de Kent Scientific Corporation, que produz equipamentos utilizados neste artigo. Abra a publicação em acesso deste artigo é patrocinado pela Kent Scientific Corporation.

O sistema de anestesia com baixo fluxo digital permite ao utilizador para anestesiar ratos eficazmente a taxas de fluxo muito baixas sem a utilização de qualquer gás comprimido. Isto difere significativamente de vaporizadores passivas padrão, a maioria das quais requerem uma fonte de gás comprimido a taxas de fluxo mínimo de cerca de 500 ml / min. vaporizadores padrão utilizam mostradores que carecem de precisão entre gradações, e eles devem ser atendidos anualmente para manter a precisão. Um sistema de anestésico conduzido seringa pode proporcionar uma concentração específica de anestésico no caudal regulado para calcular a velocidade exacta necessária da bomba de seringa. calibrações de rotina são desnecessárias, resultando em economia de custos e tempo adicionais. O caudal mínimo recomendado para manter um animal em um circuito não-reinalação é 1,5-2,2 vezes o volume minuto do animal. A taxa de fluxo de 100 ml / min utilizada neste estudo excedeu este valor mínimo para fornecer anestésico suficiente para os animais. O settin caudalGS são críticos para esta técnica de fornecimento de anestésico, tal como a taxa de fluxo está directamente relacionada com a quantidade de isoflurano utilizada para um dado período de tempo. Quando utilizado a taxas de fluxo baixas, esta técnica pode reduzir grandemente a quantidade de isoflurano necessária durante a utilização, enquanto o animal ainda é eficazmente anestesiados 1,19-21. Novos custos de equipamento entre vaporizadores tradicionais e vaporizadores digitais de baixo fluxo são comparáveis. No entanto, o sistema de anestesia com baixo fluxo digital tem a capacidade de entregar ou isoflurano ou sevoflurano. Isso elimina a necessidade de isoflurano designado e vaporizadores de precisão sevoflurano, reduzindo os custos dos equipamentos iniciais para grupos usando os dois agentes anestésicos. Comparações recentemente publicados entre tecnologias vaporizador têm sugerido redução de custos ao longo do tempo quando se utiliza um baixo fluxo de vaporizador digital 1,19,20. Os resultados destas comparações pode ser usada para aproximar potenciais economias de custos ao longo de um ano. Comosuming definições de utilização típicos realizados em incrementos de 2 horas, 5 dias por semana, durante 52 semanas, um vaporizador isoflurano tradicional vai consumir 3,8 L de isoflurano, ou doze 250 ml garrafas. Um vaporizador digital de baixo fluxo utilizado com a mesma frequência que consomem apenas 0,32 L, ou dois frascos de 250 ml. o consumo de carvão recipiente é também reduzida. Assumindo que cada recipiente contém 50 g de gás residual eliminado, um vaporizador tradicional vai encher latas de carvão, aproximadamente, 21 ao longo de um ano. Em comparação, um vaporizador digital de baixo fluxo vai exigir 6 ou menos. Um vaporizador tradicional exigiria cerca de 5 grandes cilindros de gás por ano, cada um com uma capacidade de 9.500 L. A bomba de ar interna, disponível em alguns modelos de vaporizadores de baixo fluxo digitais, elimina a necessidade de gás comprimido. Se o gás comprimido eram para ser utilizado, o sistema poderia utilizar apenas um cilindro por ano 1. A técnica pode ser modificado com base na necessidade. Baixo fluxo vaporiz digitaisers permitir que o usuário para ajustar a profundidade da anestesia com rapidez e precisão. Se a profundidade da anestesia deve ser aumentada ou diminuída, o utilizador pode aumentar a concentração de anestésico em incrementos de 0,1%, utilizando a ligação na parte superior do sistema. A taxa de fluxo pode também ser ajustada conforme necessário durante todo o procedimento. Esse protocolo utiliza uma seringa de 2 ml, embora tamanhos maiores de seringa estão disponíveis por procedimentos mais longos. A bomba de ar interna oferece aos usuários a opção para anestesiar animais sem a necessidade de uma fonte de gás comprimido. Para procedimentos que requerem gases comprimidos ou oxigênio suplementar, o usuário tem a opção de ligar uma fonte de gás para o sistema de baixo fluxo, em vez de usar o ar circundante. O usuário pode continuar a entregar a fonte de ar selecionado durante todo o procedimento, ou pode alternar entre a bomba interna e uma fonte de gás comprimido, conforme necessário. Por exemplo, o usuário pode configurar o sistema para fornecer ar ambiente através da bomba interna durante a indução e manutenção, mas livra suplementar oxigen durante a recuperação. Embora existam muitas vantagens em usar um vaporizador digital de baixo fluxo, existem limitações também. Porque uma válvula de descarga não está incluído, rubor manualmente a câmara com ar limpo antes da abertura é a única maneira de purgar a câmara de indução. Este sistema foi concebido para operar em apenas baixas taxas de fluxo e não proporcionar anestesia acima caudais de 800 mL / min, onde vaporizadores tradicionais podem ser utilizados com taxas de fluxo de até 10 L / min. Este sistema em particular é, por conseguinte, apenas adequado para espécies animais pequenos. Além disso, o sistema possui menos agente anestésico em relação a um vaporizador tradicional. Pode haver situações em que a seringa deve ser recarregados durante um procedimento. No entanto, atrasos durante o reabastecimento pode ser reduzida pela pré-encher uma seringa segundo próxima para substituir a seringa vazia. tamanhos de seringas até 10 ml estão disponíveis para reduzir a necessidade de encher seringas meados de procedimento. Finalmente, ao contrário de um vaporizador tradicional, o baixo-FLvaporizador digital ow requer eletricidade. As baterias estão disponíveis para uso nos casos em que a energia elétrica não está disponível ou em caso de falta de energia. Estudos anteriores demonstraram que os sistemas digitais de baixo fluxo consumir menos isoflurano, gás de transporte, e latas de carvão em comparação com um sistema tradicional anestesia 1,19,20. A redução do gás anestésico scavenged também pode identificar uma redução de gás anestésico resíduos, embora seja necessário mais trabalho nessas áreas. espectroscopia de infravermelho de gás pode ser usado para monitorar a produção isoflurano resíduos e emblemas dosímetros pode ser usado para quantificar a exposição isoflurano para o pessoal de laboratório em comparações futuras. Em resumo, esta técnica para entrega anestésico vai ser benéfico para grupos que realizam a anestesia roedores devido à melhoria da segurança, eficácia, e a precisão em relação aos sistemas tradicionais.

Há muitos vaporizadores de precisão disponíveis para uso veterinário que operam entre as taxas de fluxo de 0,5-10 L / min 2. Estas velocidades de fluxo não são ideais para roedores, como o intervalo é elevado em comparação com o seu pequeno volume respiratório minutos. Velocidades de fluxo elevadas não são recomendadas na prática veterinária, devido à sua promoção de hipotermia e de secagem do tracto respiratório 3,4. Além disso, muitos manuais do fabricante vaporizador veterinários comuns avisar que as taxas de fluxo elevadas podem causar um aumento na ocorrência de flutuações de contrapressão. Também tem sido mostrado que muitas vaporizadores convencionais se tornam imprecisas abaixo taxas de fluxo de 500 ml / min, e esta taxa é considerado como um caudal mínimo no domínio veterinário 5-7. Um animal pode ser mantido em um circuito T-peça ou modificado circuito de bain usando um caudal tão baixo quanto volume minuto 1,5-2,2 vezes do animal 8-10. Estas taxas de fluxo são considerados sufficient para evitar a respiração de gases expirados e evitar um aumento das concentrações de dióxido de carbono no sangue 8. Usando esta recomendação taxa de fluxo, um rato de 30 g pode ser mantida a uma taxa de fluxo de tão baixo como 52 mL / min, cerca de dez vezes menos do que a aceite ml / min mínimo de um vaporizador 500 tradicional. Enquanto um vaporizador tradicional depende do fluxo de gás e a pressão atmosférica durante a vaporização anestésico passiva, um vaporizador de injecção directa mede o fluxo total de gás fresco e injecta directamente o vapor para dentro da corrente de gás 2. Alguns vaporizadores de injecção directa utilizar uma bomba de seringa para administrar o anestésico para dentro da corrente de gás. controlos computadorizados de permitir que estes sistemas para ajustar automaticamente a velocidade da bomba de seringa para injectar o volume de agente líquido necessária para alcançar a concentração desejada do anestésico. vaporizadores conduzido Seringa estão disponíveis e aprovados para uso clínico e pediátrica, e muitas configurações semelhantes são consideradas como umestética conservação dispositivos na prática clínica 11-16. Pouco tempo após a sua aprovação, os dispositivos Conserving anestésicos com vaporizadores bomba de seringa foram adaptados para o uso em estudos com animais 8,17,18. Ao contrário de um vaporizador tradicional, um sistema de injecção directa, utilizando uma bomba de seringa não está limitado por uma taxa de fluxo mínimo, a fim de manter a precisão. Por este motivo, esta tecnologia é ideal para utilização em anestesia roedores e outros casos em que as taxas de fluxo baixas são necessárias. Os benefícios e economia de custos potenciais associados com este projeto vaporizador inspirou o desenvolvimento de novos sistemas de anestesia projetados especificamente para roedores 1,19,20. Este novo sistema também incorpora um embutido bomba de ar, que permite ao utilizador administrar anestesia sem a necessidade de uma fonte de gás comprimido. Como um benefício adicional, o sistema é pré-calibrada para uso com ambos isoflurano e sevoflurano. Com a introdução desta tecnologia vaporizador no campo de animais de laboratório, it é agora possível para anestesiar os animais pequenos de laboratório a taxas de fluxo mais perto de níveis recomendados, sem a necessidade de gás comprimido.

<table><tbody><tr><td>Equipamento anestésico</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>SomnoSuite Sistema de anestesia digital de baixo fluxo</td><td>Kent Scientific Corporation</td><td>SOMNO</td><td>Inclui adaptador anti-derramamento e anti-vapor na parte superior da garrafa; Tubulação do adaptador de Y; filtro de limpeza de carvão</td></tr><tr><td>MouseSTAT Pulse Oximeter & Monitor de freqüência cardíaca</td><td>Kent Scientific Corporation</td><td>SS-MSTAT-Module</td><td>integrado ao SomnoSuite</td></tr><tr><td>MouseSTAT Sensor de pata do mouse</td><td>Kent Scientific Corporation</td><td>MSTAT-MSE</td><td></td></tr><tr><td>Seringa de vidro de 2 ml</td><td>Kent Scientific Corporation</td><td>SOMNO-2ML</td><td></td></tr><tr><td>Câmara de indução de baixo custo, 0,5 L</td><td>Kent Scientific Corporation</td><td>SOMNO-0705</td><td></td></tr><tr><td>Máscara facial de baixo perfil, x-small</td><td>Kent Scientific Corporation</td><td>SOMNO-0304</td><td></td></tr><tr><td>Animal Warming</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>PhysioSuite Sistema de Monitoramento Fisiológico com Aquecimento Homeotérmico RightTemp</td><td>Kent Scientific Corporation</td><td>PS-RT</td><td>Inclui almofada de aquecimento infravermelho, sonda retal e sonda de temperatura da almofada</td></tr><tr><td>Agentes Anestésicos e Medicamentos</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Isoflurano (frasco de 250 ml)</td><td>Pomada Oftálmica Piramal Healthcare</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Puralube</td><td>Perrigo</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

o uso de um baixo fluxo sistema de anestesia digital para camundongos e ratos

Use of a Low-flow Digital Anesthesia System for Mice and Rats

Um vaporizador tradicional depende do fluxo de gás e da pressão atmosférica para a vaporização passiva do anestésico. Os vaporizadores de injeção direta recém-desenvolvidos utilizam uma bomba de seringa para administrar diretamente anestésicos voláteis em um fluxo de gás. Ao contrário de um vaporizador tradicional, ele pode ser usado em taxas de fluxo muito baixas, tornando-o ideal para uso em camundongos e ratos. 
A capacidade do equipamento de usar baixas taxas de fluxo pode resultar em uma economia substancial de custos devido à redução da necessidade de agentes anestésicos, gás comprimido e filtros de eliminação de carvão1. Uma taxa de fluxo mais baixa significa menos desperdício de gás anestésico e provavelmente reduz o risco de exposição ao anestésico para o pessoal do laboratório. Assim, os altos níveis de precisão e segurança associados aos vaporizadores de injeção direta, juntamente com a necessidade reduzida de agentes anestésicos, gás comprimido e filtros de carvão, são benéficos para pesquisas que requerem anestesia em pequenos animais. 
O objetivo deste protocolo é demonstrar o uso de um vaporizador de injeção direta acionado por seringa como parte de um sistema de anestesia digital de baixo fluxo. O vaporizador de injeção direta é capaz de administrar anestesia com precisão em taxas de fluxo muito baixas em comparação com um vaporizador tradicional, tornando-o uma alternativa promissora para a administração controlada de anestésico gasoso a roedores.

animais foram anestesiados e mantida com 1,3-1,5% de isoflurano, enquanto a frequência cardíaca, saturação de oxigênio e freqüência respiratória foram monitorados; ratos 3 adulto C57 / BL6NTac fêmeas (peso de 15 +/- 1 g Taconic, idade 6-7 semanas). Todos os ratos foram Murino Pathogen Free conforme determinado pelo teste de fornecedor de rotina antes da chegada à instalação. Os animais estavam em gaiolas microisolation e forneceu-livre acesso a ração padrão para roedores e água por garrafa alojados em grupo. uso isoflurano O sistema de anestesia com baixo fluxo mede a quantidade de agente anestésico que permanece na seringa durante a utilização. O volume na seringa, tal como medido pelo sistema de anestesia, foi observado que o animal foi transferido para o cone de nariz, e novamente no final do período de manutenção. O volume final wcomo subtraído do volume inicial para quantificar a quantidade de anestésico consumida durante o período de manutenção (Figura 1). Parâmetros fisiológicos Frequência cardíaca, SpO2 e taxa de respiração foram monitorados durante a manutenção através de oximetria de pulso (Figuras 2 - 4). A temperatura do corpo foi mantida a 37,5 ° C através de uma almofada de aquecimento de infravermelhos. Cada rato foi mantido com sucesso em baixos caudais de 100 mL / min de ar ambiente sob um plano cirúrgico de anestesia durante 60 min, como determinado por uma falta de reflexo de retirada a partir de uma pitada interdigital. O mouse não acordou ou responder a pitadas interdigitais aplicadas de forma intermitente durante o período de manutenção. Batimentos cardíacos dos animais (Figura 2), de oxigênio no sangue (Figura 3) e frequência respiratória (Figura 4) permaneceu relatvamente estável durante todo o estudo. Devido ao posicionamento dos animais e sensor, o sinal da frequência respiratória de rato 1 e rato 3 foi intermitente e a medição foi interrompida. Quando o posicionamento do animal foi ajustado, o sinal melhorou ea taxa respiratória medida foi comparável a outros em momentos semelhantes. O sistema digital de baixo anestesia de fluxo usado uma média de 0,63 ml de isoflurano durante os 60 minutos do período de manutenção (Figura 1). <img alt="figura 1" src="/files/ftp_upload/54436/54436fig1.jpg" /> Figura 1:.. Uso isoflurano A quantidade de isoflurano utilizada em ml por três ratinhos diferentes ao longo de 1 hora da manutenção da anestesia utilizando o sistema de anestesia com baixo fluxo digitais <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/54436/54436fig1large.jpg" target="_blank">Por favor clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a> Figura 2:.. Heart Rate A taxa de coração de três ratos em batimentos por minuto (bpm) 5-60 min após a indução anestésica inicial com o sistema de anestesia com baixo fluxo digitais <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/54436/54436fig2large.jpg" target="_blank">Por favor clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a> <img alt="Figura 3" src="/files/ftp_upload/54436/54436fig3.jpg" /> Figura 3:.. A saturação de oxigênio Os níveis de saturação de oxigênio no sangue (%) de três ratinhos 5-60 min após a indução anestésica inicial com o sistema de anestesia com baixo fluxo digitais <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/54436/54436fig3large.jpg" target="_blank">Por favor clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a> Figura 4:.. Respiração Rate A taxa de respiração de três ratos em respirações por minuto (bpm) 5-60 min após a indução anestésica inicial com o sistema de anestesia com baixo fluxo digitais <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/54436/54436fig4large.jpg" target="_blank">Por favor clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>

Aqui, apresentamos um protocolo para administrar gás anestésico de forma mais segura e eficiente a camundongos usando um sistema de anestesia digital de baixo fluxo utilizando um vaporizador de injeção direta acionado por seringa.

O uso de um baixo fluxo Sistema de Anestesia Digital para camundongos e ratos

A traditional vaporizer depends on flowing gas and atmospheric pressure for passive anesthetic vaporization. Newly developed direct injection vaporizers ...

Este protocolo demonstra o uso de um vaporizador por injeção direta acionado por seringa como parte de um sistema digital de anestesia de baixo fluxo. O vaporizador por injeção direta fornece anestesia com precisão em taxas de fluxo muito baixas em comparação com um vaporizador tradicional, tornando-se uma alternativa promissora para a administração controlada de anestésicos em roedores. Existem muitos vaporizadores de precisão disponíveis para uso veterinário que operam entre 5 e 10 litros por minuto.Essas taxas de fluxo não são ideais para roedores, pois a faixa está bem acima do volume respiratório minuto desses animais pequenos. A principal vantagem desse vaporizador é que um animal pode ser mantido com um cone nasal utilizando uma taxa de fluxo tão baixa quanto 1 1/2 vezes o volume minuto do animal. Assim, um camundongo de 30 gramas pode ser mantido com uma taxa de fluxo tão baixa quanto 52 mililitros por minuto.Primeiro, selecione uma fonte de gás de arraste. Para utilizar a bomba de ar interna, desparafuse a porta de entrada traseira, permitindo que a bomba interna aspire o ar ambiente. Em seguida, conecte um cartucho de carvão ativado à porta de escape.Em seguida, conecte o tubo de administração ao sistema de anestesia. Use os clipes codificados por cores para designar os ramais para o cone nasal e a câmara de indução. Abra as pinças para direcionar o fluxo de ar para a câmara.Para monitoramento fisiológico, conecte o sensor de pata do oxímetro de pulso à parte traseira do sistema de anestesia de baixo fluxo. Ligue o sistema de anestesia de baixo fluxo para configurar as definições. Acesse o menu Configuração da Anestesia e selecione isoflurano.Em seguida, defina o tamanho da seringa pressionando Configurar para destacar Tamanho da Seringa. Use os botões direcionais para selecionar uma seringa de dois mililitros. É importante usar a seringa de tamanho apropriado para o seu animal e duração do procedimento.Este sistema é compatível com seringas de dois, cinco e dez mililitros, acomodando uma variedade de aplicações. Após selecionar o tamanho da seringa, ajuste a posição vazia da seringa. Agora, fixe a seringa de vidro vazia e completamente comprimida no bloco de retenção da seringa.Posicione a seringa de modo que o grampo de fixação esteja assentado no colar metálico da seringa. Ajuste o bloco empurrador para que ele faça leve contato com a parte superior do êmbolo da seringa. Salve a posição vazia.Remova a seringa. Em seguida, encha-a com isoflurano utilizando o adaptador do bico da garrafa. Após o enchimento, coloque a seringa de volta no bloco de retenção e conecte o tubo de entrega.Em seguida, prepare o tubo de administração do anestésico pressionando os botões direcionais. O sistema irá pressionar a seringa até que o anestésico entre no bloco do vaporizador. É importante não preparar em excesso a seringa.Após todas as configurações serem realizadas, ative a entrega de anestesia. Agora, selecione a fonte de ar para ar ambiente e o volume minuto para 250 mililitros por minuto. Para monitoramento fisiológico, defina a frequência cardíaca mínima detectada para Mouse.Inicie o fluxo de ar para induzir anestesia no camundongo. Coloque o camundongo na câmara de indução, feche a tampa firmemente e ajuste o botão de Concentração do Agente Anestésico para fornecer 3%. Monitore o camundongo até que atinja o plano anestésico desejado, determinado pela perda do reflexo de endireitamento. Uma vez que o animal esteja suficientemente anestesiado, gire o botão de Concentração do Agente Anestésico para fornecer 0%. Em seguida, abra as pinças para direcionar o fluxo de ar para o cone nasal e feche as pinças que levam à câmara de indução.Retire o camundongo da câmara e coloque-o imediatamente sobre o cone nasal. Em seguida, posicione o animal no centro de um tapete aquecedor por infravermelho, ajustado para manter a temperatura corporal a 37 graus Celsius por meio de uma sonda retal em um circuito de realimentação. Com o camundongo posicionado sobre o cone nasal, ajuste a concentração de isoflurano para 1,5%. Agora, reduza o volume minuto para sustentar a manutenção da anestesia.Confirme a profundidade da anestesia determinada pela ausência do reflexo de retirada durante uma pinça interdigital. Aplique pomada oftálmica nos olhos para prevenir ressecamento durante a anestesia. Inicie o monitoramento fisiológico colocando o sensor sobre a almofada da pata traseira.Posicione o sensor de modo que a luz vermelha ilumine a pata. Exiba o oxiwave para visualizar o sinal do sensor. Gire o botão de Concentração do Agente Anestésico para o Mínimo para administrar 0% e remova o animal do cone nasal.Monitore atentamente o camundongo durante a recuperação da anestesia. Assim que o camundongo estiver completamente ambulatório, devolva-o à gaiola. Esta figura mostra a quantidade de isoflurano utilizada em mililitros para três camundongas fêmeas C57 Black 6 de seis a sete semanas de idade durante uma hora de manutenção da anestesia utilizando o sistema digital de anestesia de baixo fluxo.Devido às baixas taxas de fluxo, o vaporizador digital acionado por seringa de baixo fluxo consumiu menos de um mililitro de isoflurano ao longo de uma hora. A frequência cardíaca dos três camundongos, medida em batimentos por minuto usando oximetria de pulso entre cinco e 60 minutos após a indução, é mostrada aqui. As frequências cardíacas dos animais permaneceram relativamente estáveis e consistentes durante o período de manutenção.Esta figura mostra os níveis de saturação de oxigênio dos três camundongos ao longo do mesmo período de tempo. Por fim, a taxa de respiração dos camundongos em respirações por minuto entre cinco e 60 minutos após a indução com o sistema digital de anestesia de fluxo baixo é mostrada aqui. A bomba de ar interna oferece aos usuários a opção de anestesiar animais sem a necessidade de uma fonte de gás comprimido.Para procedimentos que exigem gás comprimido ou oxigênio suplementar, o usuário tem a opção de conectar uma fonte de gás ao vaporizador de fluxo baixo em vez de usar ar. Vaporizadores de fluxo baixo acionados por seringa são capazes de taxas de fluxo tão baixas quanto 10 mililitros por minuto, ao mesmo tempo em que fornecem concentrações precisas de anestésico. Assim, esta técnica será benéfica para grupos que realizam anestesia em roedores devido ao maior segurança, eficácia e precisão em comparação com sistemas tradicionais.

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Research

JoVE Journal

Medicine

Medicina

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Aprenda a usar um sistema digital de anestesia de baixo fluxo para camundongos e ratos. Este método utiliza um vaporizador por injeção direta com seringa, permitindo controle preciso da entrega de anestésico com taxas de fluxo ideais para pequenos roedores.

O uso de um baixo fluxo Sistema de Anestesia Digital para camundongos e ratos

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