Name: O modelo de roedor de nonarterítica óptica isquêmica anterior Neuropatia (rNAION) (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-11-20T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 49 s
Description: Aprenda a criar o modelo rNAION em roedores para estudar mecanismos de resposta ao acidente vascular cerebral no nervo óptico. Esta técnica indolor permite avaliar agentes neuroprotetores e investigar edema e inflamação pós-AVC.

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Agradecemos aos muitos estudantes e companheiros que trabalharam sobre este modelo para melhorar a sua eficácia, e compreender seus mecanismos. Agradecimentos especiais são devidos a Dr de. Mary Johnson (Universidade de Maryland-Baltimore), Nitza Goldenberg-Cohen (Schneiderman Childrens Hospital, Petah-Tikva, Israel), Charles Zhang (Einstein Medical College, Bronx, NY), e Valerie Touitou (Hopital Salpetrie, Paris, França). Este estudo foi financiado em parte por RO1 EY015304 para SLB.

Este protocolo foi aprovado pela Universidade de Maryland Animal Care Institucional e Comitê de Utilização (IACUC; Baltimore, MD, EUA) 1. Experimental Set-up <ol><li> Faça um costume projetado lente de contato de um grau claro óptica circular 7 mm de diâmetro Plexiglas, de 3 mm de espessura. Corte as lentes circulares com uma imprensa de broca. Use uma broca padrão para fazer a curva interior, e, finalmente, polir as curvas internas e externas usando um polidor de lentes de contato do grão ultrafino (1000/3000). </li><li> Prepare 2,5 mM Rose Bengal (RB) em pH 7,4 tampão fosfato salino (PBS) com antecedência, filtro de esterilização com um filtro de seringa de 0,45 micron e armazenamento de alíquotas de 1 ml em -20 ° C num recipiente à prova de luz até 6 meses. NOTA: O uso de animais machos exogâmicas albinos, como Sprague Dawley minimiza as diferenças de resposta dependentes de tensão, permite maior facilidade de indução e reduz a variabilidade que pode ocorrer com cycli estrofeminino ng. </li><li> Configurar a frequência duplicou granada de alumínio de neodímio-ítrio (Fd-YAG) laser médico oftalmológico, o que gera uma luz laser de 532 nm. Montar o laser sobre uma lâmpada de fenda oftálmica Haag-Streit usando um adaptador de laser oftalmológico padrão. Este dispositivo disponível comercialmente permite a visualização simultânea de aplicação mancha olho e laser do animal. O laser médico também tem um feixe de mira para a focagem adequada e centragem utilizando mesmo tamanho de ponto como indução laser. parâmetros de potência do laser são os seguintes: <ol><li> Para a indução rNAION rato: use 500 um ponto de tamanho / 50 do laser mW de potência / 1.000 ms duração / 1.000 intervalo ms. </li><li> Para a indução rNAION mouse: alterar o tamanho do ponto a 300 mm para disco óptico menor e deixar outros parâmetros o mesmo que a configuração do rato. </li><li> Rotineiramente usar um medidor de potência do laser para assegurar a potência do laser. </li></ol></li></ol> 2. Procedimento Experimental <ol><li> Ligue a potência do lasere configurar o parâmetro do laser apropriado. Aquecer a laser para, pelo menos, cinco minutos antes da utilização. </li><li> Pesa-se o animal para determinar a dose apropriada para a cetamina / xilazina e corante RB. Anestesiar o animal por injecção intraperitoneal de uma mistura de 1 ml / kg de 80 mg / ml de cetamina e 4 mg / ml de xilazina. </li><li> Deixe o animal em uma gaiola aquecida até que esteja totalmente anestesiado. Verifique se há nenhuma resposta a estímulos aversivos (cauda ou pitada dedo do pé). Verifique animais para a profundidade da anestesia a cada 10 min. </li><li> Dilatar as pupilas do animais com tropicamida a 1% e anestesiar a superfície do olho com 0,5% de proparacaina. Se o uso de animais pigmentados, como Long Evans, um 2,5% gotas oculares neosynephrine vai aumentar a dilatação da pupila. </li><li> Use a tesoura para cortar os bigodes perto do focinho do lado para ser induzido para evitar o bloqueio a vista. </li><li> Coloque uma gota de 1% de metilcelulose ou outra gota de acoplamento oftálmica para o interior da lente de contato feito por encomenda, e depois aplicar a lente em tele olho de rato. </li><li> Colocar o animal sobre uma plataforma ajustada para a altura da lâmpada de fenda. Definir a cabeça do animal em um ângulo de 45 °, de modo que o olho é perpendicular à lâmpada de fenda e feixe de laser. </li><li> Visualize no olho através da lâmpada de fenda oftálmica. Verifique se o feixe de mira é o tamanho certo, bem como focado e centrado diretamente sobre o nervo óptico visualizado. Fotografar o fundo da retina usando uma câmera digital com alta ASA (1.200 - 2.000) Velocidade montado em uma das peças oculares da lâmpada de fenda com um adaptador personalizado feito. NOTA: A capacidade de ver os vasos da coróide revela a transparência da retina. Este é um sinal importante, a fim de ser capaz de detectar a isquemia retiniana mais tarde, que podem confundir a interpretação, se ocorrer. rNAION é a isquemia do nervo óptico, o que resulta na perda de CGR isolado, enquanto isquemia retinal resulta em danos na retina que afecta todas as células das camadas internas da retina. </li><li> Opcionalmente, ainda mais a imagem da retina enervo óptico usando um domínio de óptica espectral coerência tomógrafo (SD-08 de outubro) para avaliar o olho induzida por un. Digitalizar en face (Figura 3B), bem como 7 varreduras em corte transversal através da retina (Figura 3C). O SD-OCT imagem usa a mesma lente de contato usado para indução laser. </li><li> Injectar 1 ml / kg RB por via intravenosa através da veia da cauda, ​​e aguarde 30 segundos, em seguida, ativar o poder do laser. Este atraso de tempo permite que a RB para distribuir uniformemente por toda a circulação. Nós usamos um pulso de laser de 50 mW em um seg / pulso. energias maiores (≥ 60 mW) pode danificar a retina ou causar isquemia vascular da retina. Cuidado: Certifique-se de toda a gente tem um par de óculos de filtragem de segurança do laser do comprimento de onda de bloqueio adequada para evitar a luz do laser de rua entrando olho do investigador. NOTA: A administração de laser deve ser administrado rapidamente após a injecção IV RB desde que o corante é rapidamente eliminado da circulação. Quanto mais tempo a indução de laser, quanto mais grave a isquemia do nervo óptico. Geralmente, os animais são dadas 7 - 12 s impulsos numa sucessão rápida. O contacto da luz laser com o corante circulante dá os vasos do nervo óptico uma bela brilho de ouro que pode ser visto através da lâmpada de fenda (Figura 4B). Isto prova que o corante foi injectada sistemicamente e distribuída para a corrente sanguínea. Se o brilho é fraco, ou nenhum (Figura 4A), o corante não foi injetado por via intravenosa. Neste caso, não dão uma segunda injecção imediatamente, uma vez que o animal vai necessitar de recuperar durante pelo menos dois dias antes da reinjecção. </li><li> Imediatamente após a indução, retire a lente de contato. Cubra os dois olhos com pomada oftálmica antibiótica triplo (Neosporin / polimixina / bacitracina) com dexametasona, e colocar o animal em uma almofada de aquecimento de 37 ° C em uma única gaiola alojados sob observação até a recuperação completa. <ol><li> Limpe a lente de contato com água destilada water e seque com um pano de limpeza não abrasivo para uso futuro. </li><li> Dois dias após a indução avaliar o edema do nervo óptico por ambos cor fotografia fundo e SD-OCT análise 8. NOTA: Comparando o grau de edema do nervo óptico dá uma estimativa da gravidade da isquemia do nervo óptico. Em dois dias, a margem de disco nervo óptico é turva, e as veias da retina são ligeiramente dilatada, em comparação com o olho contralateral (induzida por un). Execute eletrorretinografia (ERG) e flash potencial evocado visual (VEP 11) em duas e quatro semanas após a indução para análise de eletrofisiologia. </li></ol></li></ol>

<ol><li>Banik, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nonarteritic+Anterior+Ischemic+Optic+Neuropathy%3A+An+Update+on+Demographics%2C+Clinical+Presentation%2C+Pathophysiology%2C+Animal+Models%2C+Prognosis%2C+and+Treatment%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Experimental+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Nonarteritic Anterior Ischemic Optic Neuropathy: An Update on Demographics, Clinical Presentation, Pathophysiology, Animal Models, Prognosis, and Treatment.</a> J. Clin. Experimental Ophthalmol. 10, 1-5 (2013).</li>
<li>IONDT study group. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characteristics+of+patients+with+nonarteritic+anterior+ischemic+optic+neuropathy+eligible+for+the+Ischemic+Optic+Neuropathy+Decompression+Trial%5BTitle%5D)+AND+%22Arch+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Characteristics of patients with nonarteritic anterior ischemic optic neuropathy eligible for the Ischemic Optic Neuropathy Decompression Trial.</a> Arch Ophthalmol. 114, 1366-1374 (1996).</li>
<li>Tesser, R. A., Niendorf, E. R., Levin, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+morphology+of+an+infarct+in+nonarteritic+anterior+ischemic+optic+neuropathy%5BTitle%5D)+AND+%22Ophthalmology%22%5BJournal%5D)">The morphology of an infarct in nonarteritic anterior ischemic optic neuropathy.</a> Ophthalmology. 110, 2031-2035 (2003).</li>
<li>Bernstein, S. L., Johnson, M. A., Miller, N. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nonarteritic+anterior+ischemic+optic+neuropathy+%28NAION%29+and+its+experimental+models%5BTitle%5D)+AND+%22Prog+Retin+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Nonarteritic anterior ischemic optic neuropathy (NAION) and its experimental models.</a> Prog Retin Eye Res. 30, 167-187 (2011).</li>
<li>Nicholson, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((PGJ2+Provides+Prolonged+CNS+Stroke+Protection+by+Reducing+White+Matter+Edema%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">PGJ2 Provides Prolonged CNS Stroke Protection by Reducing White Matter Edema.</a> PLoS One. 7 (12), (2012).</li>
<li>Goldenberg-Cohen, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oligodendrocyte+Dysfunction+Following+Induction+of+Experimental+Anterior+Optic+Nerve+Ischemia%5BTitle%5D)+AND+%22Invest+Ophthalmol+Vis+Sci%22%5BJournal%5D)">Oligodendrocyte Dysfunction Following Induction of Experimental Anterior Optic Nerve Ischemia.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 46, 2716-2725 (2005).</li>
<li>Bernstein, S. L., Guo, Y., Kelman, S. E., Flower, R. W., Johnson, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+and+cellular+responses+in+a+novel+rodent+model+of+anterior+ischemic+optic+neuropathy%5BTitle%5D)+AND+%22Invest+Ophthalmol+Vis+Sci%22%5BJournal%5D)">Functional and cellular responses in a novel rodent model of anterior ischemic optic neuropathy.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 44, 4153-4162 (2003).</li>
<li>Berger, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spectral-Domain+Optical+Coherence+Tomography+of+the+Rodent+Eye%3A+Highlighting+Layers+of+the+Outer+Retina+Using+Signal+Averaging+and+Comparison+with+Histology%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Spectral-Domain Optical Coherence Tomography of the Rodent Eye: Highlighting Layers of the Outer Retina Using Signal Averaging and Comparison with Histology.</a> PLoS One. 9 (5), (2014).</li>
<li>Huang, T. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protective+effects+of+systemic+treatment+with+methylprednisolone+in+a+rodent+model+of+non-arteritic+anterior+ischemic+optic+neuropathy+%28rNAION%29%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Protective effects of systemic treatment with methylprednisolone in a rodent model of non-arteritic anterior ischemic optic neuropathy (rNAION).</a> Exp Eye Res. 131, 69-76 (2015).</li>
<li>Mantopoulos, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+Experimental+Model+of+Optic+Nerve+Head+Injury%5BTitle%5D)+AND+%22Invest+Ophthalmol+Vis+Sci%22%5BJournal%5D)">An Experimental Model of Optic Nerve Head Injury.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 57, 6222(2014).</li>
<li>You, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Visual+Evoked+Potential+Recording+in+a+Rat+Model+of+Experimental+Optic+Nerve+Demyelination%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Visual Evoked Potential Recording in a Rat Model of Experimental Optic Nerve Demyelination.</a> J. Vis. Exp. (101), e52934(2015).</li>
<li>Templeton, J. P., Geisert, E. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+practical+approach+to+optic+nerve+crush+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Vis%22%5BJournal%5D)">A practical approach to optic nerve crush in the mouse.</a> Mol Vis. 18, 2147-2152 (2012).</li>
<li>Magharious, M. M., D'Onofrio, P. M., Koeberle, P. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optic+Nerve+Transection%3A+A+Model+of+Adult+Neuron+Apoptosis+in+the+Central+Nervous+System%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Optic Nerve Transection: A Model of Adult Neuron Apoptosis in the Central Nervous System.</a> J Vis Exp. (51), e2241(2011).</li>
<li>Wang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Novel+Rodent+Model+of+Posterior+Ischemic+Optic+Neuropathy%5BTitle%5D)+AND+%22JAMA+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">A Novel Rodent Model of Posterior Ischemic Optic Neuropathy.</a> JAMA Ophthalmol. 131 (2), 194-204 (2013).</li>
<li>Huang, T. L., Chang, C. H., Chang, S. W., Lin, K. H., Tsai, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficacy+of+Intravitreal+Injections+of+Antivascular+Endothelial+Growth+Factor+Agents+in+a+Rat+Model+of+Anterior+Ischemic+Optic+Neuropathy%5BTitle%5D)+AND+%22IOVS%22%5BJournal%5D)">Efficacy of Intravitreal Injections of Antivascular Endothelial Growth Factor Agents in a Rat Model of Anterior Ischemic Optic Neuropathy.</a> IOVS. 56, 2290-2296 (2015).</li>
</ol>

Autores não têm nada a revelar.

Embora haja um certo número de modelos de lesão do nervo óptico (esmagamento do nervo óptico 12, a transecção do nervo óptico 13, e PION 14), o modelo rNAION é humano, adaptável a ambos os ratos e ratinhos. Assemelha-se mais de perto a situação clínica humana de NAION. Esta condição inclui anterior progressiva edema do nervo óptico, uma síndrome do compartimento anterior do nervo óptico, isquemia focal axonal, isolado lesão axonal de células ganglionares da retina e perda de mais de um c...

Anterior não arterítica neuropatia óptica isquêmica (NAION) é uma lesão isquêmica focal da porção anterior do nervo óptico (ON) 1. NAION é a causa mais comum de súbita nervo relacionada perda de visão óptica em indivíduos com idade superior a 50 2. O mecanismo acredita-se ser uma síndrome do compartimento que resulta em edema intraneural, e provoca a compressão dos capilares que abastecem os axónios no interior do nervo óptico 3. Uma vez que o NO é, na verdade, um aparelho do sistema nervoso central (SNC), o modelo de roedor NAION (rNAION) podem ser usadas para estudar os mecanismos e as respostas a derrames do SNC isolada da substância branca. O modelo rNAION podem portanto ser úteis no dissecando muitos problemas associados com o acidente vascular cerebral relacionado danos à substância branca. Ele pode ser usado para avaliar diferentes estratégias neuroprotectoras e agentes de acidente vascular cerebral em matéria branca. Uma das características mais atraentes do modelo é que ele é, Um procedimento não invasivo indolor. A energia laser pode ser ajustado para produzir vários graus de dano isquémico. Outra característica é que ele se baseia em radicais superóxido induzida por laser para danificar o endotélio capilar, produzindo uma disfunção progressiva capilar. É esta disfunção progressiva e edema que acredita-se ser muito semelhante ao mecanismo que faz com que NAION. A pesquisa mostrou que ele não causa a coagulação do capilar directa, mas funciona através de pelo menos dois mecanismos: superóxido induzida por morte e de extracção de algum do capilar de células endoteliais 4, e de NFkB (factor nuclear-cadeia kappa-luz-potenciador de células B activadas ) associado regulação inflamatória-se em permanecer endotélio, com o aumento do transporte de fluidos através das membranas celulares para o interstício 5. O encerramento dos capilares nervo óptico e compressão causados ​​por resultado a acumulação de fluido intersticial em isquemia cabeça do nervo óptico. Um diagrama esquemático é mostrado naFigura 2. O modelo rNAION pode ser usado em ambas as espécies de ratos e camundongos 6,7, e pode ser variada no nível da sua gravidade, a partir de uma lesão ligeira a uma destruição total, mas indolor do nervo óptico e da retina, tais como a oclusão da artéria central da retina (OACR).

<table><tbody><tr><td>Laser de 50 mW 532 nm</td><td>Iridex</td><td></td><td>Laser oftálmico padrão</td></tr><tr><td>0 - 100 mW Laser de 532 nm</td><td>Tecnologias</td><td></td> Laserglow <td>Substituto do adaptador de</td></tr><tr><td>lâmpada de fenda a laser</td><td>iridex Adaptador acoplado Iridex</td><td></td><td>SMA para saída de laser</td></tr><tr><td>Medidor laser Coherent Fieldmate com sensor de termopilha</td><td>Coerente</td><td></td><td>outros também apropriados</td></tr><tr><td>Exame oftálmico Lâmpada de fenda biomicroscópio</td><td>Vários</td><td></td><td>Haag-Streit é o melhor; versões mais baratas disponíveis no ebay</td></tr><tr><td>Rose Bengal</td><td>Sigma</td><td>330000-1G</td><td>Agente fotoindutor Lente de</td></tr><tr><td>contato de fundo ou lamínula de vidro</td><td>personalizada / Cantor e Nissel (Reino Unido)</td><td></td> <td>Lente plástica planoconvexa projetada sob medida para exame oftalmológico e indução</td></tr><tr><td>Tropicamida 1%</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Composto de polimento Tamiya</td><td>Tamiya, INC</td><td>87068</td><td>lente de contato de polimento</td></tr><tr><td>2,5% Hipromelose (Goniovisc)/1% Metilcelulose</td><td>HUB Agente</td><td>de acoplamento</td>de <td></td> lentes de contato farmacêutico</tr><tr><td>2,5% Neosinefrina Gotas oftálmicas</td><td>Alcon labs</td><td></td><td>agente dilatador de pupila</td></tr><tr><td>Tropicamida 1%</td> <td>Agente dilatador de pupila</td> <td>Alcon labs</td><td></td></tr><tr><td>0,5% Proparacaína</td><td>Alcon labs</td><td></td><td>anestésico tópico</td></tr><tr><td>30 G seringa de insulina de agulha fundida</td><td>Vários</td><td>Vários</td><td>para injeção intravenosa de rosa bengala</td></tr><tr><td>Pomada antibiótica oftámica com dexametasona adicionada (pomada antibiótica tripla)</td> <td>Vários</td><td>Vários</td><td>Aplicar após indução para minimizar cicatrizes na córnea</td></tr><tr><td>Heidelberg Corporation Tomógrafo de coerência óptica de domínio espectral</td><td>Heidelberg Corporation</td><td></td><td>For Optical coerence measurements baseline e post-induction; não essencial para indução</td></tr></tbody></table>

o modelo de roedor de nonarterítica óptica isquêmica anterior neuropatia (rnaion)

The Rodent Model of Nonarteritic Anterior Ischemic Optic Neuropathy (rNAION)

A neuropatia óptica isquêmica anterior não arterítica (NAION) é uma lesão isquêmica focal do nervo óptico que afeta 1/700 indivíduos ao longo da vida. A NAION resulta em edema do nervo óptico, perda seletiva dos neurônios das células ganglionares da retina (RGCs) e atrofia do nervo óptico. Um modelo de roedor de NAION que expressa a maioria das características e sequelas de NAION foi desenvolvido, aplicável a ratos e camundongos. Este modelo utiliza uma aplicação de laser focal de comprimento de onda de 532 nm para iluminar um corante fotoativo, Rose Bengal (RB), para causar danos capilares e vazamento no nervo óptico anterior alvo (a região laminar). Após a indução da RNAi, há uma isquemia precoce do nervo óptico, edema do nervo óptico e inflamação intraneural, seguida por RGC seletivo e perda axonal. Como o nervo óptico é um trato da substância branca do SNC, o modelo rNAION é aplicável a estudos mecanísticos de isquemia seletiva da substância branca, bem como análises neuroprotetoras e mecanismos de curto e longo prazo de resposta glial e neuronal à isquemia.

<html> A visualização da lente de contato habilitado central de retina (Figura 1). O ponto de laser focal ilumina o disco óptico na parte posterior da retina (Figura 2). A retina normal, induzida por un é mostrado fotografada pela lâmpada de fenda bio-microscópio (Figura 3A) e pela SD-OCT (Figura 3B e 3C). Durante a indução do laser, quando não está presente corante está presente na circulação, de luz laser não resulta em...

O relatório a seguir descreve como replicar o modelo de roedor de neuropatia óptica isquêmica anterior não arterítica (rNAION), usando os parâmetros apropriados de corante, lente de contato e laser. Também revelamos as etapas apropriadas para avaliar a lesão de RNAion in vivo.

O modelo de roedor de nonarterítica óptica isquêmica anterior Neuropatia (rNAION)

Nonarteritic anterior ischemic optic neuropathy (NAION) is a focal ischemic lesion of the optic nerve that affects 1/700 individuals throughout their ...

O objetivo geral deste procedimento é produzir um modelo de neuropatia óptica isquêmica anterior em roedores, para ser utilizado na caracterização dos mecanismos de resposta ao acidente vascular cerebral. E para analisar a eficácia de agentes neuroprotetores no tratamento do acidente vascular no nervo óptico. Esta abordagem pode ajudar a responder perguntas fundamentais na área do acidente vascular no nervo óptico.Incluindo mecanismos de edema, inflamação pós-acidente vascular cerebral e vias de proteção e reparo. A principal vantagem dessa técnica é que o dano isquêmico está isolado na porção anterior do nervo óptico. Sem cirurgia, a técnica é indolor.E a gravidade do dano pode ser variada de forma reprodutível conforme desejado. Este método evita a dor associada a muitos modelos de lesão nervosa, incluindo esmagamento ou corte do nervo óptico.Ele também permite uma análise detalhada dos efeitos da isquemia exógena isolada, em uma única classe de neurônios, in vivo. Comece obtendo uma lente de contato personalizada projetada de acordo com as especificações indicadas. Além disso, prepare 2,5 milimolar de verde de bengala em solução salina tamponada com fosfato pH 7,4.Os preenchimentos são esterilizados com um filtro de seringa de 0,5 mícron. Prepare alíquotas de um mililitro, coloque as alíquotas em um recipiente hermético e protegido da luz e armazene a menos 20 graus Celsius por até seis meses. No dia do procedimento, prepare o laser médico oftálmico de neodímio-yttrium alumínio garnet com frequência duplicada.Que gera uma luz laser de 532 nanômetros. Monte o laser em uma lâmpada de fenda oftálmica Haag-Streit, utilizando um adaptador laser oftálmico padrão, para permitir a visualização simultânea do olho do animal e a aplicação do ponto laser. Ligue o laser e deixe aquecer por pelo menos cinco minutos antes do uso.Defina os parâmetros apropriados de potência do laser para o animal experimental utilizado. Monte uma câmera digital de alta velocidade ASA em uma das oculares da lâmpada de fenda, com um adaptador feito sob medida. Após anestesiar adequadamente o animal experimental e garantir o nível apropriado de anestesia, pela ausência de resposta ao aperto no dedo do pé.Dilua as pupilas dos animais com tropicamida a um por cento. E anestesie a superfície do olho com proparacaína a 0,5 por cento. Em seguida, use a tesoura para cortar os vibrissas próximos ao focinho no lado da indução, para permitir uma visão clara do olho.Em seguida, coloque uma gota de metilcelulose a um por cento, ou outra gota oftálmica de acoplamento, na parte interna da lente de contato personalizada. Depois, aplique a lente sobre o olho do rato. Coloque o animal sobre uma plataforma, ajustada à altura da lâmpada de fenda.Posicione a cabeça do animal em um ângulo de 45 graus, de modo que o olho fique perpendicular à lâmpada de fenda e ao feixe do laser. Em seguida, visualize o olho através da lâmpada de fenda oftálmica. Em um olho saudável, a cabeça do nervo óptico apresenta uma borda nítida e uma região ao redor avermelhada. Os vasos retinianos são finos e distribuídos uniformemente.Certifique-se de que o feixe de mira está no tamanho correto, bem focalizado e centralizado diretamente sobre o nervo óptico visualizado. Em seguida, fotografe o fundo de retina utilizando a câmera digital.A seguir, injete um miligrama por quilograma de verde de rosa por via intravenosa através da veia da cauda. E aguarde 30 segundos. Uma injeção suave, contínua e intervenosa de verde de rosa deve ser seguida, após 30 segundos, pela exposição à laser da cabeça do nervo óptico.A variação no tempo entre essas duas etapas resulta em aumento da variabilidade do grau de dano do acidente vascular no nervo óptico, o que pode enviesar seus resultados. Após 30 segundos, ative a potência do laser.O nervo óptico apresenta um brilho dourado dentro dos vasos, emergindo do disco no ponto de incidência do laser. Isso indica a presença de verde de bengala na corrente sanguínea, iluminado pela luz verde do laser. Imediatamente após a indução, remova a lente de contato e cubra ambos os olhos com pomada oftálmica contendo antibiótico triplo e dexametasona.Mantenha o animal individualmente, em uma gaiola sobre uma placa aquecida a 37 graus Celsius, sob observação rigorosa até a recuperação completa. Esta imagem colorida do fundo do olho mostra inchaço do nervo óptico e palidez da papila óptica, com perda do rubor coroidal circundante.As veias estão dilatadas e curvas. Esta imagem de SDOCT de face n, pós-indução, mostra edema de disco e dilatação venosa. A direção do varredura é indicada com uma seta verde; a seção transversal na próxima imagem é gerada a partir da área dentro da caixa verde.Aqui, uma seção transversal mostra edema do disco do nervo óptico, evidenciado pela redução da intensidade cinza e aumento da espessura da camada de fibras nervosas da retina. Consistente com maior teor de água. O diâmetro do nervo óptico intrarretiniano, indicado entre as setas pretas, está aumentado.Ao realizar este procedimento, é importante lembrar-se de ter uma lente de contato limpa e polida ou lamínula que permita uma boa visualização do nervo e um foco preciso da luz do laser sobre o nervo. Após este procedimento, outros métodos como imunohistoquímica, análise de citocinas ou análise de expressão gênica podem ser realizados para responder perguntas adicionais.Como respostas inflamatórias após acidente vascular cerebral, ou alterações nos tecidos-alvo.

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Medicine

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Este protocolo mostra como retrogradamente rótulo células ganglionares da retina, e como posteriormente fazer uma lesão por esmagamento do nervo óptico, a fim de analisar a sobrevivência das células ganglionares da retina e apoptose. É um modelo de doença experimental para diferentes tipos de neuropatia óptica, incluindo glaucoma.

Nervo Óptico um modelo murino de lesão por esmagamento Estudo de Sobrevivência de células da retina Gânglio

O objetivo deste protocolo é para induzir fotoquimicamente lesão isquêmica ao nervo óptico posterior em ratos. Este modelo é fundamental para estudos de fisiopatologia da neuropatia óptica isquêmica posterior e abordagens terapêuticas para essa e outras neuropatias ópticas, bem como de outras doenças isquêmicas do sistema nervoso central.

Modelo de Rato Induzida fotoquimicamente posterior neuropatia óptica isquémica

Aqui, apresentamos o protocolo de neovascularização coroidal induzida por laser de camundongo (CNV), um modelo experimental que recria as características vasculares da degeneração macular relacionada à idade neovascular (DMRI). Uma vez dominado, ele pode induzir a CNV de forma confiável e eficaz como um sistema modelo para testar várias medidas experimentais.

Um modelo de rato para induzida por laser coróide Neovascularização

O glaucoma é caracterizado por danos às células ganglionares da retina. A indução de glaucoma em modelos animais pode fornecer informações sobre o estudo desta doença. Aqui, descrevemos um procedimento que induz a perda de RGCs em um modelo de rato in vivo e demonstra a preparação de retinas de montagem inteira para análise.

Glaucoma de indução de Procedimento em um<em&gt; In Vivo</em&gt; Modelo de Rato e Whole mount-Retina Preparação

Secundária degeneração das células ganglionares da retina (RGCs) comumente ocorre no glaucoma. Este estudo descreve uma abordagem inovadora e operativa para transecção parcial nervo óptico. O uso dessa abordagem operativa de economia de espaço amplia gama de aplicação do modelo e permite a exploração dos mecanismos de lesão secundária em RGCs de uma maneira nova.

Transecção parcial nervo óptico em ratos: um modelo estabelecido com uma nova abordagem operativa para avaliar secundária degeneração das células ganglionares da retina

Aqui, apresentamos um protocolo para induzir hipertensão ocular e neurodegeneração glaucomatous nos olhos do rato por injeção intracameral de óleo de silicone e o procedimento para a remoção de óleo de silicone da câmara anterior para retornar pressão intraocular elevada para Normal.

Um modelo reversível da hipertensão ocular óleo-induzida do silicone nos ratos

A retinopatia induzida pelo oxigênio (OIR) pode ser usada para modelar doenças isquêmicas da retina, como a retinopatia da prematuridade e a retinopatia diabética proliferativa e servir de modelo para estudos de prova de conceito na avaliação de drogas antiangiogênicas para doenças neovasculares. O OIR induz a neovascularização robusta e reprodutível na retina que pode ser quantificada.

Modelo de Retinopatia Induzida por Oxigênio para Doenças Isquêmicas da Retina em Roedores

Aqui, descrevemos um modelo de camundongo de isquemia de retina por oclusão da artéria carótida comum bilateral transitória usando suturas simples e um grampo. Este modelo pode ser útil para entender os mecanismos patológicos da isquemia da retina causada por anormalidades cardiovasculares.

Um modelo murino de lesão isquêmica da retina induzida pela oclusão da artéria da carótida comum bilateral transitória

Este artigo apresenta instruções detalhadas para realizar o esmagamento do nervo óptico em um modelo de coelho usando técnicas cirúrgicas oftálmicas padrão.

Uma abordagem cirúrgica para esmagamento do nervo óptico em um modelo de coelho

Este protocolo descreve uma técnica única usando uma abordagem transconjuntival para acessar o nervo óptico de rato para injeções.

Abordagem transconjuntival para injeção no nervo óptico de rato

Aprenda a criar o modelo rNAION em roedores para estudar mecanismos de resposta ao acidente vascular cerebral no nervo óptico. Esta técnica indolor permite avaliar agentes neuroprotetores e investigar edema e inflamação pós-AVC.

O modelo de roedor de nonarterítica óptica isquêmica anterior Neuropatia (rNAION)

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