Name: Infecção experimental com Listeria monocytogenes Como um modelo para estudar o anfitrião Respostas interferão-y (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-11-16T13:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 10 s
Description: Aprenda a infectar camundongos C57BL/6J com Listeria monocytogenes e medir respostas de interferon-γ em células imunes. Este protocolo simples auxilia na triagem de agentes que modulam a sobrevivência e resposta imunológica.

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O desenvolvimento deste protocolo foi apoiado por uma subvenção operacional do CIHR (MOP97807) ao SED.

<ol><li>Pamer, E. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immune+responses+to+Listeria+monocytogenes%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Immunol%22%5BJournal%5D)">Immune responses to Listeria monocytogenes.</a> Nat Rev Immunol. 4 (10), 812-823 (2004).</li>
<li>Ranson, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Invariant+V+alpha+14%2B+NKT+cells+participate+in+the+early+response+to+enteric+Listeria+monocytogenes+infection%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">Invariant V alpha 14+ NKT cells participate in the early response to enteric Listeria monocytogenes infection.</a> J Immunol. 175 (2), 1137-1144 (2005).</li>
<li>Bancroft, G. J., Schreiber, R. D., Unanue, E. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Natural+immunity%3A+a+T-cell-independent+pathway+of+macrophage+activation%2C+defined+in+the+scid+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Immunol+Rev%22%5BJournal%5D)">Natural immunity: a T-cell-independent pathway of macrophage activation, defined in the scid mouse.</a> Immunol Rev. 124, 5-24 (1991).</li>
<li>Soudja, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Memory-T-cell-derived+interferon-gamma+instructs+potent+innate+cell+activation+for+protective+immunity%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">Memory-T-cell-derived interferon-gamma instructs potent innate cell activation for protective immunity.</a> Immunity. 40 (6), 974-988 (2014).</li>
<li>Schoenborn, J. R., Wilson, C. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulation+of+interferon-gamma+during+innate+and+adaptive+immune+responses%5BTitle%5D)+AND+%22Adv+Immunol%22%5BJournal%5D)">Regulation of interferon-gamma during innate and adaptive immune responses.</a> Adv Immunol. 96, 41-101 (2007).</li>
<li>Filipe-Santos, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inborn+errors+of+IL-12%2F23-+and+IFN-gamma-mediated+immunity%3A+molecular%2C+cellular%2C+and+clinical+features%5BTitle%5D)+AND+%22Semin+Immunol%22%5BJournal%5D)">Inborn errors of IL-12/23- and IFN-gamma-mediated immunity: molecular, cellular, and clinical features.</a> Semin Immunol. 18 (6), 347-361 (2006).</li>
<li>Flynn, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+essential+role+for+interferon+gamma+in+resistance+to+Mycobacterium+tuberculosis+infection%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Med%22%5BJournal%5D)">An essential role for interferon gamma in resistance to Mycobacterium tuberculosis infection.</a> J Exp Med. 178 (6), 2249-2254 (1993).</li>
<li>Cooper, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Disseminated+tuberculosis+in+interferon+gamma+gene-disrupted+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Med%22%5BJournal%5D)">Disseminated tuberculosis in interferon gamma gene-disrupted mice.</a> J Exp Med. 178 (6), 2243-2247 (1993).</li>
<li>Dalton, D. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiple+defects+of+immune+cell+function+in+mice+with+disrupted+interferon-gamma+genes%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Multiple defects of immune cell function in mice with disrupted interferon-gamma genes.</a> Science. 259 (5102), 1739-1742 (1993).</li>
<li>Harty, J. T., Bevan, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Specific+immunity+to+Listeria+monocytogenes+in+the+absence+of+IFN+gamma%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">Specific immunity to Listeria monocytogenes in the absence of IFN gamma.</a> Immunity. 3 (1), 109-117 (1995).</li>
<li>Huang, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immune+response+in+mice+that+lack+the+interferon-gamma+receptor%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Immune response in mice that lack the interferon-gamma receptor.</a> Science. 259 (5102), 1742-1745 (1993).</li>
<li>Wang, Z. E., Reiner, S. L., Zheng, S., Dalton, D. K., Locksley, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CD4%2B+effector+cells+default+to+the+Th2+pathway+in+interferon+gamma-deficient+mice+infected+with+Leishmania+major%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Med%22%5BJournal%5D)">CD4+ effector cells default to the Th2 pathway in interferon gamma-deficient mice infected with Leishmania major.</a> J Exp Med. 179 (4), 1367-1371 (1994).</li>
<li>Hess, J., Ladel, C., Miko, D., Kaufmann, S. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Salmonella+typhimurium+aroA-+infection+in+gene-targeted+immunodeficient+mice%3A+major+role+of+CD4%2B+TCR-alpha+beta+cells+and+IFN-gamma+in+bacterial+clearance+independent+of+intracellular+location%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">Salmonella typhimurium aroA- infection in gene-targeted immunodeficient mice: major role of CD4+ TCR-alpha beta cells and IFN-gamma in bacterial clearance independent of intracellular location.</a> J Immunol. 156 (9), 3321-3326 (1996).</li>
<li>Ikeda, H., Old, L. J., Schreiber, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+roles+of+IFN+gamma+in+protection+against+tumor+development+and+cancer+immunoediting%5BTitle%5D)+AND+%22Cytokine+Growth+Factor+Rev%22%5BJournal%5D)">The roles of IFN gamma in protection against tumor development and cancer immunoediting.</a> Cytokine Growth Factor Rev. 13 (2), 95-109 (2002).</li>
<li>Hodge, D. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((IFN-gamma+AU-rich+element+removal+promotes+chronic+IFN-gamma+expression+and+autoimmunity+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Autoimmun%22%5BJournal%5D)">IFN-gamma AU-rich element removal promotes chronic IFN-gamma expression and autoimmunity in mice.</a> J Autoimmun. 53, 33-45 (2014).</li>
<li>Seery, J. P., Carroll, J. M., Cattell, V., Watt, F. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antinuclear+autoantibodies+and+lupus+nephritis+in+transgenic+mice+expressing+interferon+gamma+in+the+epidermis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Med%22%5BJournal%5D)">Antinuclear autoantibodies and lupus nephritis in transgenic mice expressing interferon gamma in the epidermis.</a> J Exp Med. 186 (9), 1451-1459 (1997).</li>
<li>Peng, S. L., Moslehi, J., Craft, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Roles+of+interferon-gamma+and+interleukin-4+in+murine+lupus%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">Roles of interferon-gamma and interleukin-4 in murine lupus.</a> J Clin Invest. 99 (8), 1936-1946 (1997).</li>
<li>Savinov, A. Y., Wong, F. S., Chervonsky, A. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((IFN-gamma+affects+homing+of+diabetogenic+T+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">IFN-gamma affects homing of diabetogenic T cells.</a> J Immunol. 167 (11), 6637-6643 (2001).</li>
<li>Miller, C. H., Maher, S. G., Young, H. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinical+Use+of+Interferon-gamma%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+N+Y+Acad+Sci%22%5BJournal%5D)">Clinical Use of Interferon-gamma.</a> Ann N Y Acad Sci. 1182, 69-79 (2009).</li>
<li>Paget, C., Chow, M. T., Duret, H., Mattarollo, S. R., Smyth, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+gammadelta+T+cells+in+alpha-galactosylceramide-mediated+immunity%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">Role of gammadelta T cells in alpha-galactosylceramide-mediated immunity.</a> J Immunol. 188 (8), 3928-3939 (2012).</li>
<li>Leonard, J. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+single-dose+interleukin-12+exposure+on+interleukin-12-associated+toxicity+and+interferon-gamma+production%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Effects of single-dose interleukin-12 exposure on interleukin-12-associated toxicity and interferon-gamma production.</a> Blood. 90 (7), 2541-2548 (1997).</li>
<li>Zenewicz, L. A., Shen, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Innate+and+adaptive+immune+responses+to+Listeria+monocytogenes%3A+a+short+overview%5BTitle%5D)+AND+%22Microbes+Infect%22%5BJournal%5D)">Innate and adaptive immune responses to Listeria monocytogenes: a short overview.</a> Microbes Infect. 9 (10), 1208-1215 (2007).</li>
<li>Viegas, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((IFN-gamma+production+by+CD27%28%2B%29+NK+cells+exacerbates+Listeria+monocytogenes+infection+in+mice+by+inhibiting+granulocyte+mobilization%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Immunol%22%5BJournal%5D)">IFN-gamma production by CD27(+) NK cells exacerbates Listeria monocytogenes infection in mice by inhibiting granulocyte mobilization.</a> Eur J Immunol. 43 (10), 2626-2637 (2013).</li>
<li>Selvanantham, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nod1+and+Nod2+enhance+TLR-mediated+invariant+NKT+cell+activation+during+bacterial+infection%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">Nod1 and Nod2 enhance TLR-mediated invariant NKT cell activation during bacterial infection.</a> J Immunol. 191 (11), 5646-5654 (2013).</li>
<li>Becavin, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+widely+used+Listeria+monocytogenes+strains+EGD%2C+10403S%2C+and+EGD-e+highlights+genomic+variations+underlying+differences+in+pathogenicity%5BTitle%5D)+AND+%22MBio%22%5BJournal%5D)">Comparison of widely used Listeria monocytogenes strains EGD, 10403S, and EGD-e highlights genomic variations underlying differences in pathogenicity.</a> MBio. 5 (2), e00969-e00914 (2014).</li>
<li>Jones, G. S., D'Orazio, S. E. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Unit+9B.2+Listeria+monocytogenes%3A+cultivation+and+laboratory+maintenance%2C+Chapter+31B%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Protoc+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Unit 9B.2 Listeria monocytogenes: cultivation and laboratory maintenance, Chapter 31B.</a> Curr Protoc Microbiol. , (2013).</li>
<li>Conour, L. A., Murray, K. A., Brown, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preparation+of+animals+for+research--issues+to+consider+for+rodents+and+rabbits%5BTitle%5D)+AND+%22ILAR+J%22%5BJournal%5D)">Preparation of animals for research--issues to consider for rodents and rabbits.</a> ILAR J. 47 (4), 283-293 (2006).</li>
<li>Obernier, J. A., Baldwin, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Establishing+an+appropriate+period+of+acclimatization+following+transportation+of+laboratory+animals%5BTitle%5D)+AND+%22ILAR+J%22%5BJournal%5D)">Establishing an appropriate period of acclimatization following transportation of laboratory animals.</a> ILAR J. 47 (4), 364-369 (2006).</li>
<li>BD LSR II User's Guide. , download from bdbiosciences.com. 
 <a target="_blank" href="http://flowcytometry.sysbio.med.harvard.edu/documents/BD%20LSRII%20User's%20Guide.pdf">http://flowcytometry.sysbio.med.harvard.edu/documents/BD%20LSRII%20User's%20Guide.pdf</a> (2007).</li>
<li>Flowjo Tutorial. , download from bdbiosciences.com. 
 <a target="_blank" href="http://www.flowjo.com/tutorials">http://www.flowjo.com/tutorials</a> (2016).</li>
<li>Zhang, M. A., Ahn, J. J., Zhao, F. L., Selvanantham, T., Mallevaey, T., Stock, N., Correa, L., Clark, R., Spaner, D., Dunn, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antagonizing+peroxisome+proliferator-activated+receptor+alpha+%28PPARalpha%29+activity+enhances+Th1+immunity+in+male+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Antagonizing peroxisome proliferator-activated receptor alpha (PPARalpha) activity enhances Th1 immunity in male mice.</a> J. Immunol. , (2015).</li>
<li>Kaplan, E. L., Meier, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nonparametric+estimation+from+incomplete+observations%5BTitle%5D)+AND+%22J+Amer+Stat+Assoc%22%5BJournal%5D)">Nonparametric estimation from incomplete observations.</a> J Amer Stat Assoc. 53, 457-481 (1958).</li>
<li>Brown, D. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Limited+role+of+CD28-mediated+signals+in+T+helper+subset+differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Med%22%5BJournal%5D)">Limited role of CD28-mediated signals in T helper subset differentiation.</a> J Exp Med. 184 (3), 803-810 (1996).</li>
<li>Czuprynski, C. J., Brown, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+relative+difference+in+anti-Listeria+resistance+of+C57BL%2F6+and+A%2FJ+mice+is+not+eliminated+by+active+immunization+or+by+transfer+of+Listeria-immune+T+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Immunology%22%5BJournal%5D)">The relative difference in anti-Listeria resistance of C57BL/6 and A/J mice is not eliminated by active immunization or by transfer of Listeria-immune T cells.</a> Immunology. 58 (3), 437-443 (1986).</li>
<li>Busch, D. H., Vijh, S., Pamer, E. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+model+for+infection+with+Listeria+monocytogenes%2C++Chapter+19%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Protoc+Immunol%22%5BJournal%5D)">Animal model for infection with Listeria monocytogenes, Chapter 19.</a> Curr Protoc Immunol. , (2001).</li>
<li>Mekada, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+differences+among+C57BL%2F6+substrains%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Anim%22%5BJournal%5D)">Genetic differences among C57BL/6 substrains.</a> Exp Anim. 58 (2), 141-149 (2009).</li>
<li>Ivanov, I. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Specific+microbiota+direct+the+differentiation+of+IL-17-producing+T-helper+cells+in+the+mucosa+of+the+small+intestine%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Host+Microbe%22%5BJournal%5D)">Specific microbiota direct the differentiation of IL-17-producing T-helper cells in the mucosa of the small intestine.</a> Cell Host Microbe. 4 (4), 337-349 (2008).</li>
<li>Bou Ghanem, N. E., Myers-Morales, T., Jones, G. S., D'Orazio, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oral+transmission+of+Listeria+monocytogenes+in+mice+via+ingestion+of+contaminated+food%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Oral transmission of Listeria monocytogenes in mice via ingestion of contaminated food.</a> J Vis Exp. (75), e50381(2013).</li>
<li>Lecuit, M., Dramsi, S., Gottardi, C., Fedor-Chaiken, M., Gumbiner, B., Cossart, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+single+amino+acid+in+E-cadherin+responsible+for+host+specificity+towards+the+human+pathogen+Listeria+monocytogenes%5BTitle%5D)+AND+%22Embo+J%22%5BJournal%5D)">A single amino acid in E-cadherin responsible for host specificity towards the human pathogen Listeria monocytogenes.</a> Embo J. 18 (14), 3956-3963 (1999).</li>
<li>Wollert, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extending+the+host+range+of+Listeria+monocytogenes+by+rational+protein+design%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Extending the host range of Listeria monocytogenes by rational protein design.</a> Cell. 129 (5), 891-902 (2007).</li>
<li>Brunt, L. M., Portnoy, D. A., Unanue, E. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Presentation+of+Listeria+monocytogenes+to+CD8%2B+T+cells+requires+secretion+of+hemolysin+and+intracellular+bacterial+growth%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">Presentation of Listeria monocytogenes to CD8+ T cells requires secretion of hemolysin and intracellular bacterial growth.</a> J Immunol. 145 (11), 3540-3546 (1990).</li>
<li>Muraille, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distinct+in+vivo+dendritic+cell+activation+by+live+versus+killed+Listeria+monocytogenes%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Immunol%22%5BJournal%5D)">Distinct in vivo dendritic cell activation by live versus killed Listeria monocytogenes.</a> Eur J Immunol. 35 (5), 1463-1471 (2005).</li>
<li>Datta, S. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vaccination+with+irradiated+Listeria+induces+protective+T+cell+immunity%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">Vaccination with irradiated Listeria induces protective T cell immunity.</a> Immunity. 25 (1), 143-152 (2006).</li>
<li>Geginat, G., Schenk, S., Skoberne, M., Goebel, W., Hof, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+approach+of+direct+ex+vivo+epitope+mapping+identifies+dominant+and+subdominant+CD4+and+CD8+T+cell+epitopes+from+Listeria+monocytogenes%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">A novel approach of direct ex vivo epitope mapping identifies dominant and subdominant CD4 and CD8 T cell epitopes from Listeria monocytogenes.</a> J Immunol. 166 (3), 1877-1884 (2001).</li>
<li>Shen, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recombinant+Listeria+monocytogenes+as+a+live+vaccine+vehicle+for+the+induction+of+protective+anti-viral+cell-mediated+immunity%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Recombinant Listeria monocytogenes as a live vaccine vehicle for the induction of protective anti-viral cell-mediated immunity.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 92 (9), 3987-3991 (1995).</li>
<li>Foulds, K. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cutting+edge%3A+CD4+and+CD8+T+cells+are+intrinsically+different+in+their+proliferative+responses%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">Cutting edge: CD4 and CD8 T cells are intrinsically different in their proliferative responses.</a> J Immunol. 168 (4), 1528-1532 (2002).</li>
</ol>

Sem conflitos de interesse a divulgar.

Descrevemos aqui um protocolo de como levar a cabo uma infecção experimental de base com a estirpe de L. monocytogenes EGD de 25 em camundongos C57BL / 6J machos ou fêmeas. Este protocolo foi criado com a finalidade de estudar o efeito de uma molécula pequena novela IS001 sobre a produção de IFN-γ por linfócitos inata e adaptativa in vivo 31. Ao monitorar depuração bacteriana e sobrevivência pós-infecção, percepções foram obtidas em como essas mudanças em IFN-γ comprometido a capa...

IFN-γ é uma citocina que é crucial para mediar a imunidade contra os agentes patogénicos intracelulares e para controlar o crescimento do tumor 5. A importância desta citocina na resistência bacteriana é evidente na observação de que os seres humanos com mutações na via de sinalização de IFN-γ são altamente susceptíveis à infecção com micobactérias e salmonelas 6. De modo semelhante, os ratinhos deficientes em IFN-γ ou os defeitos exibem receptor de IFN-γ na resistência à micobactérias 7-9 e outros patogénios intracelulares, incluindo L. monocytogenes 10,11, Leishmania major 12, 13 Salmonella typhimurium, e certos vírus 11. Em adição aos agentes patogénicos que combatem, IFN-γ desempenha um papel fundamental na defesa contra hospedeiro-14 tumores. Embora uma maior produção de IFN-γ é benéfica no contexto da infecção ou cancro, a produção prolongada desta citocina tem sido associada to o desenvolvimento de auto-imunidade sistémica 15-17 e a aceleração da diabetes do tipo I no modelo de ratinho diabético não obeso 18. As principais fontes de IFN-γ incluem células NK, células NKT, γδ células T, células T auxiliares 1 (Th1), e linfócitos T citotóxicos (CTL) 5,19,20. IFN-γ aumenta tanto a imunidade inata e adaptativa por: (1) para cima de regulação de complexo principal de histocompatibilidade (MHC) de classe I e expressão II, (2) aumento da expressão de moléculas co-estimulatórias em células que apresentam antigénios, (3) de macrófagos aumentando factores de fagocitose e a produção de citocinas pró-inflamatórias e microbicidas (por exemplo, óxido nítrico e espécies reactivas de oxigénio), (4) promover a diferenciação de células T CD4 + naive em células efectoras Th1, (5) promover a troca de classe de anticorpo para a imunoglobulina ( Ig) 2a e IgG3 (no rato), (6) indução da produção de quimiocinas para recrutar células imunes para os locais de Infection, e (7) o aumento de células NK e respostas CTL 5,19. Dada a importância crucial de IFN-γ na resposta do hospedeiro a infecções e tumores, recombinante IFN-γ foi testado como um tratamento para várias infecções e doenças malignas (revisto em 19). No entanto, porque a administração sistémica de IFN-γ ou promover a citoquina Th1 interleucina-12 (IL-12) está associada a efeitos colaterais e toxicidade relacionada com a dose 19,21, há interesse no desenvolvimento de estratégias alternativas para aumentar a produção de IFN-γ pela células do sistema imunológico. O desenvolvimento de novos produtos biológicos e moléculas pequenas requer em ferramentas de rastreio in vivo para testar se tais agentes de aumento da produção de IFN-γ durante uma resposta imune e se isto traduz-se efeitos biológicos significativos, tais como aumentos de sobrevivência do animal. A infecção experimental de ratinhos com a bactéria L. monocytogenes gram-positiva tem sido um modelo para instrumentaldecifrar o papel do IFN-γ no hospedeiro-imunidade contra os agentes patogénicos intracelulares 1,22. Infecção de camundongos com o patógeno por via intravenosa ou por via intraperitoneal (ip) leva à rápida disseminação da bactéria para o baço e fígado, onde eles se tornam internalizadas pelos macrófagos residentes e hepatócitos com cargas bacterianas pico no baço ocorrem entre 3 e 4 dias pós- infecção 1,3,22. Produção de IFN-γ por células NK é importante para a activação de macrófagos e resistência precoce contra o agente patogénico 3; No entanto, em doses infecciosas elevados, a produção de IFN-γ também pode ser prejudicial para a depuração de agentes patogénicos 23. As células NKT são também uma fonte de IFN-γ no baço e no fígado durante o controlo de início de patógenos 2,24 e essa produção foi mostrado para amplificar a produção de IFN-γ por outros tipos de células, incluindo células NK 2. Por outro lado, mais tarde, que actuam linfócitos T adaptativos, células T CD8 + em particular, são importantes para mediar a folga do patógeno ea protecção contra 1,4,22 re-infecção. Este modelo de infecção tem sido atraente para os investigadores para uma série de razões (revisto em 1). Em primeiro lugar, a infecção com o agente patogénico é altamente reprodutível e induz uma forte resposta imunitária Th1 e celular. Em segundo lugar, durante a infecção subletal, carga bacteriana está concentrado no fígado e baço, onde ele pode ser facilmente medido. Em terceiro lugar, o agente patogénico pode ser manuseado com segurança sob condições de segurança biológica de nível 2 (BSL2). Em quarto lugar, o organismo e a resposta imune que gera têm sido extensivamente caracterizados. Finalmente, uma variedade de estirpes mutantes e geneticamente modificadas têm sido desenvolvidos que estão disponíveis para uso. Descrito aqui é um protocolo básico para inoculação de camundongos C57BL / 6J com a estirpe EGD de L. monocytogenes 25 e para medir IFN - γ rerespos- por NK, NKT, e os linfócitos adaptativos pós-infecção. Também é descrito como para medir a carga bacteriana no baço e no fígado após a infecção subletal e para realizar estudos de sobrevivência após a infecção com uma dose de LD 50 modificada do agente patogénico. Finalmente, os dados representativos são mostrados de como este protocolo pode ser utilizado para pesquisar o efeito de novos tratamentos sobre as respostas de IFN-y e sobrevivência do ratinho de infecção por L. monocytogenes.

<table><tbody><tr><td>Caldo de Infusão Brain Heart, BD Modificado</td><td></td><td>299070</td><td>qualquer marca deve ser apropriada</td></tr><tr><td>Agar</td><td>BD</td><td>214010</td><td>qualquer marca deve ser apropriada</td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>X100</td><td>qualquer marca deve ser apropriada</td></tr><tr><td>1x PBS</td><td>Sigma</td><td>D8537</td><td>qualquer marca deve ser apropriada</td></tr><tr><td>TissueLyser II</td><td>Qiagen</td><td>85300</td><td>qualquer marca deve ser apropriada</td></tr><tr><td>Cloreto de amônio (NH3Cl)</td><td></td><td></td><td>qualquer marca deve ser apropriada</td></tr><tr><td>KHCO3</td><td></td><td></td><td>qualquer marca deve ser apropriada</td></tr><tr><td>Na2EDTA</td><td></td><td></td><td>qualquer marca deve ser apropriada</td></tr><tr><td>RPMI 1640</td><td>Gibco</td><td>22400089</td><td>qualquer marca deve ser apropriada</td></tr><tr><td>Soro Fetal Bovino</td><td>Gibco</td><td>12483</td><td>Antes de usar, inative o calor a 56 &graus; C por 30 min</td></tr><tr><td>L-glutamina</td><td>Gibco</td><td>25030</td><td>qualquer marca deve ser apropriada</td></tr><tr><td>Aminoácidos não essenciais</td><td>Gibco</td><td>11140</td><td>qualquer marca deve ser apropriada</td></tr><tr><td>Penicilina/Estreptomicina</td><td>Gibco</td><td>15140</td><td>qualquer marca deve ser apropriada</td></tr><tr><td>Inibidor de Transporte de Proteína GolgiStop (contendo Monensina)</td><td>BD</td><td>554724</td><td>Use 4 &mu; l em cultura de células de 6 ml</td></tr><tr><td>16% Paraformaldeído</td><td>Microscopia Eletrônica Ciências</td><td>15710</td><td>Diluir a 4% PFA em ddH2O ou 1x PBS</td></tr><tr><td>10x Tampão Perm/Wash</td><td>BD</td><td>554723</td><td>Diluir 1x em ddH2O</td></tr><tr><td>Bloco Fc, Anti-Mouse CD16/CD32 Purificado</td><td>eBioscience</td><td>14-0161</td><td>Diluir 1:50</td></tr><tr><td>Corante de Viabilidade Fixável eFluor 506</td><td>eBioscience</td><td>65-0866</td><td>Diluir 1:1.000 (também usamos corantes de viabilidade de sondas moleculares)</td></tr><tr><td>anti-Mouse CD4-PE-Cy5 (GK1.5)</td><td>eBioscience</td><td>15-0041</td><td>O fabricante recomenda um determinado tamanho de teste; no entanto, isso deve ser ajustado antes do uso.</td></tr><tr><td>anti-Mouse CD8-FITC (53-6.7)</td><td>eBioscience</td><td>11-0081</td><td>O fabricante recomenda um determinado tamanho de teste; no entanto, este deve ser ajustado antes do uso.</td></tr><tr><td>PBS57/mCD1d tetrâmero-APC</td><td>NIH Tetramer Core Facility</td><td>N/A</td><td>Obtido como presente da instalação</td></tr><tr><td>anti-Mouse TCR&beta;-PE-Cy7 (H56-597)</td><td>eBioscience</td><td>25-5961</td><td>O fabricante recomenda um determinado tamanho de teste; no entanto, este deve ser titulado antes do uso.</td></tr><tr><td>anti-Mouse NKp46-APC-eFluor780 (29A1.4)</td><td>eBioscience</td><td>47-3351</td><td>O fabricante recomenda um determinado tamanho de teste; no entanto, isso deve ser ajustado antes do uso.</td></tr><tr><td>anti-Mouse CD45 PE-Cyanine7 (30-F11)</td><td>eBioscience</td><td>25-0451</td><td>O fabricante recomenda um determinado tamanho de teste; no entanto, este deve ser titulado antes do uso.</td></tr><tr><td>anti-Mouse IFN gama-PE (XMG1.2)</td><td>eBioscience</td><td>12-7311</td><td>O fabricante recomenda um determinado tamanho de teste; no entanto, isso deve ser ajustado antes do uso.</td></tr><tr><td>OneComp eBeads</td><td>eBioscience</td><td>01-1111</td><td>Use uma gota por mancha</td></tr><tr><td>Kit ELISA de gama IFN de camundongo</td><td>eBioscience</td><td>88-7314</td><td>Usado para medir o interferon gama no sobrenadante</td></tr> de <tr><td>cultura Tubos ventilados de 50 ml para cultura</td><td></td><td></td><td>Usado para cultura da bactéria, qualquer marca deve ser apropriada</td></tr><tr><td>Tubos</td><td></td><td></td> de microcentrífuga de 1,5 ml <td>qualquer marca deve ser apropriada</td></tr><tr>placas <td></td><td></td><td>de Petri bacterianas</td><td>qualquer marca deve ser apropriada</td></tr><tr><td>2 ml ciroviais</td><td></td><td></td><td>qualquer marca deve ser apropriada</td></tr><tr><td>Espectrômetro</td><td></td><td></td> UV <td>qualquer marca deve ser apropriada</td></tr><tr><td>agulhas</td><td></td><td></td> de engenharia de segurança <td>qualquer marca deve ser apropriada</td></tr><tr><td>C57BL/6J</td><td>Jackson laboratories</td><td>Estoque#000664</td><td>Pedido para chegada às 7 semanas</td></tr><tr><td>Alvejante</td><td></td><td></td><td>Para descontaminação</td></tr><tr><td>70% Etanol</td><td></td><td></td><td>Para descontaminação</td></tr><tr><td>Contas de</td><td></td><td></td> vidro <td>de qualquer marca deve ser apropriada</td></tr><tr><td>Rotor de</td><td></td><td></td> centrífuga<td>, baldes, tampas de balde.</td></tr><tr><td>Microcentrífuga</td><td></td><td></td><td>qualquer marca deve ser apropriada</td></tr><tr><td>Glicerol</td><td></td><td></td> estéril <td>qualquer marca deve ser apropriada</td></tr><tr><td>Pontas de</td><td></td><td></td> pipeta <td>qualquer marca deve ser apropriada</td></tr><tr><td>Pipeta</td><td></td><td></td><td>qualquer marca deve ser apropriada</td></tr><tr><td>Instrumentos</td><td></td><td></td> cirúrgicos <td>qualquer marca deve ser apropriada</td></tr><tr><td>70 mícrons filtros</td><td></td><td></td><td>qualquer marca deve ser apropriada</td></tr><tr><td>Seringa</td><td></td><td></td> de 3 ml <td>qualquer marca deve ser apropriada</td></tr><tr><td>Pipeta qualquer</td><td></td><td></td><td>marca deve ser apropriada</td></tr><tr><td>Unidades</td><td></td><td></td> de Filtração <td>qualquer marca deve ser apropriada</td></tr><tr><td>Azul</td><td></td><td></td><td>de Tripano Diluir 1 a 9 em ddH2O, qualquer marca deve ser apropriada</td></tr><tr><td>Hemocitômetro</td><td></td><td></td><td>qualquer marca deve ser apropriada</td></tr><tr>Placas <td></td><td></td><td>de fundo redondo</td><td>qualquer marca deve ser apropriada</td></tr><tr><td>Tubos FACs</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-959-5</td><td></td></tr><tr><td>BD LSR II</td><td>BD</td><td></td><td>Qualquer citômetro de fluxo pode ser usado para aquisição que tenha uma configuração de laser apropriada e conjunto de filtros para discriminar os fluorocormes</td></tr><tr><td>Flowjo software</td><td>Treestar</td><td></td><td>Utilizado para análise de dados. Outros tipos de software de análise de dados também serão apropriados</td></tr><tr><td>Pipetador multicanal (0 - 300 &micro; l)</td> <td>Eppendorf</td><td></td><td>Usado para lavar células e adicionar anticorpos durante a coloração por citometria de fluxo</td></tr><tr><td>Ácido</td><td></td><td></td> acético <td>Usado para lavar contas de vidro, qualquer marca deve ser apropriada</td></tr><tr><td>Sistema de Preservação Bacteriana do Microbanco</td><td>Diagnóstico Pro-lab</td><td>Usado como uma alternativa aos estoques de glicerol para armazenamento de bactérias a longo prazo</td><td></td></tr></tbody></table>

infecção experimental com<em&gt; listeria monocytogenes</em&gt; como um modelo para estudar o anfitrião respostas interferão-y

Experimental Infection with Listeria monocytogenes as a Model for Studying Host Interferon-&#947; Responses

L. monocytogenes é uma bactéria Gram-positiva que é uma causa da doença de origem alimentar em humanos. A infecção experimental de ratinhos com este patogénio tem sido altamente informativos sobre o papel das células do sistema imune inata e adaptativa e citocinas específicas na imunidade do hospedeiro contra agentes patogénicos intracelulares. Produção de IFN-γ por células inatas durante a infecção com L. monocytogenes subletal é importante para a activação de macrófagos e de controlo no início do patógeno 1-3. Além disso, a produção de IFN-γ por linfócitos memória adaptativa é importante para aprontar a activação de células inatas sobre reinfecção 4. A L. monocytogenes modelo de infecção, portanto, serve como uma grande ferramenta para investigar se novas terapias que são projetados para aumentar a produção de IFN-γ ter um impacto sobre respostas de IFN-γ in vivo e têm efeitos biológicos produtivos, tais como aumento da depuração bacteriana ou melhorar a sobrevivência do mouse a partir deinfecção. Aqui descrito é um protocolo de base para a forma de realizar infecções intraperitoneais de murganhos C57BL / 6J com a estirpe de L. monocytogenes EGD e para medir a produção de IFN-γ pelas células NK, células NKT, e adaptativas linfócitos por citometria de fluxo. Além disso, os procedimentos são descritos em: (1) crescimento e preparar as bactérias para inoculação, (2) medir a carga bacteriana no baço e no fígado, e (3) medida a sobrevivência dos animais a pontos finais. Os dados representativos são também fornecidos para ilustrar a forma como este modelo de infecção pode ser utilizado para testar o efeito de agentes específicos nas respostas de IFN-gama para L. monocytogenes e sobrevivência dos ratinhos com esta infecção.

A Figura 3 apresenta algum fluxo típico citometria de coloração de IFN-γ em células NK e NKT esplénicas às 24 h pós-infecção com 10 5 CFU de o agente patogénico. Esta figura também ilustra a estratégia de propagação para o painel de coloração descrito na Tabela 2. A Figura 4 mostra alguns dados representativos que foram obtidos numa experiência em que ratos machos foram tratados com o antagonista de PPAR? IS001 ou veículo de c...

Este protocolo descreve como para inocular ratinhos C57BL / 6J com a estirpe de Listeria monocytogenes EGD (L. monocytogenes) e para medir o interferão-γ (IFN-γ) respostas de células assassinas naturais (NK), as células T assassinas naturais (NKT), e adaptativa linfócitos T após a infecção. Este protocolo descreve como também a realização de estudos de sobrevivência de ratinhos após a infecção com uma dose de LD 50 modificada do agente patogénico.

Infecção experimental com<em&gt; Listeria monocytogenes</em&gt; Como um modelo para estudar o anfitrião Respostas interferão-y

L. monocytogenes is a gram-positive bacterium that is a cause of food borne disease in humans. Experimental infection of mice with this pathogen has been ...

Os objetivos gerais deste protocolo são cultivar e infectar camundongos C57 blacksix com a cepa EGG de *Listeria monocytogenes* e medir a carga bacteriana, as respostas de interferon gama, bem como a sobrevivência e a resposta à infecção por este patógeno. Este protocolo pode ajudar pesquisadores a triar agentes ou genes que tenham impacto sobre as respostas de interferon gama e sobre a sobrevivência animal após infecção bacteriana. A principal vantagem desta técnica é que ela é relativamente simples de ser montada no laboratório.Até mesmo para aqueles com pouca experiência no cultivo de bactérias. Também demonstrará o procedimento Jennifer Ahn, aluna de pós-graduação do meu laboratório. Comece mergulhando a ponta estéril de uma pipeta no estoque de glicerol descongelado em temperatura ambiente da linhagem L monocytogenes EGG.E imediatamente risque a ponta de vai e vem em uma seção de uma placa de infusão cerebral e cardíaca ou placa BHI. Este é o primeiro riso. Gire a placa em 90 graus e arraste uma nova ponta de pipeta através do primeiro riso, espalhando o inóculo para o próximo quarto da placa.Esta é a estria secundária. Em seguida, gire e espalhe a estria secundária em um terceiro quarto da placa para fazer a estria terciária. Agora, inverta a placa e incube-a a 37 graus celsius durante a noite.Colônias únicas e uniformes devem ser visíveis na última série de estrias entre 16 e 24 horas. Quando as colônias aparecerem, distribua 10 mililitros de caldo BHI estéril em um tubo estéril de 50 mililitros com ventilação e use uma ponteira estéril para transferir uma colônia de L. monocytogenes da placa para o caldo. Incube o caldo inoculado durante a noite em um incubador com agitação orbital a 37 graus Celsius e 225 rotações por minuto, até que a DO600 atinja um. Para o preparo do inóculo experimental de infecção por L. monocytogenes, em uma cabine de segurança biológica, inocular um tubo de meio BHI com 100 microlitros da cultura de crescimento prolongado. Após nova incubação a 37 graus celsius, sob agitação, até atingir a OD600 desejada, transferir o conteúdo da cultura para um tubo de centrífuga estéril para centrifugação. Utilizar então uma bomba de vácuo conectada a um frasco coletor contendo água sanitária para aspirar o sobrenadante.Lave o pellet duas vezes com PBS nas mesmas condições de centrifugação. Após a segunda lavagem, reconstitua as bactérias em PBS e dilua na concentração apropriada. Para administrar a UFC de interesse a cada camundongo em um volume de 200 microlitros.Em seguida, misture bem a suspensão com uma ponteira estéril para garantir que as bactérias estejam uniformemente distribuídas. Então, aspire 200 microlitros do inóculo em uma seringa de um mililitro com segurança projetada, equipada com uma agulha de 25 graus. Agora, segure um camundongo com a mão menos dominante pelo tecido solto ao redor dos ombros.E injete todos os 200 microlitros do inóculo no quadrante inferior do abdômen, logo lateral à linha média para evitar a bexiga, utilizando uma agulha e seringa novas para cada animal. Para medir a carga bacteriana máxima da infecção, no terceiro dia após a infecção, imobilize as patas de um animal experimental na posição supina sobre uma placa de dissecação. E desinfete a pele com etanol a 70 por cento.Usando tesoura cirúrgica estéril de corte forte, faça uma incisão do tórax até a virilha. Em seguida, faça uma incisão da região média da virilha em direção a cada joelho e da região média do tórax em direção a cada cotovelo. Disseque com movimentos rombos, separe e reflita a pele, fixando-a aberta com agulhas de calibre 25.Desinfete a camada muscular com mais etanol a 70 por cento. Em seguida, utilizando tesoura fina estéril, faça uma incisão mediana na parede peritoneal. Use pinça para segurar o processo xifoide.Faça incisões na parede peritoneal começando pelo processo xifoide e avançando lateralmente em cada lado. Siga a caixa torácica até logo abaixo do diafragma. Isso revelará o fígado.Em seguida, use uma tesoura estéril para cortar um pedaço com cerca de 100 miligramas de um lobo. Coloque o tecido em um tubo microcentrífugo de 1,5 mililitro previamente pesado, contendo 0,2 a 0,3 gramas de esferas de vidro estéreis lavadas com ácido, com diâmetro de 1,5 a 2 milímetros. E use a pinça para afastar suavemente os órgãos do lado esquerdo da cavidade peritoneal, a fim de visualizar o baço.Use a pinça para segurar suavemente o baço, cortando o tecido conjuntivo ao redor para liberar o órgão da cavidade peritoneal. Coloque o baço em um tubo diferente do fígado e transfira os tecidos para o laboratório em um recipiente à prova de vazamentos contendo gelo. Agite os tubos utilizando um homogeneizador de esferas por três minutos a uma frequência de 30 hertz.Em seguida, prepare uma série de diluições em dez vezes dos homogenatos em PBS contendo 0,1 por cento de triton X-100. Depois, utilize um alisador estéril para espalhar 100 microlitros de cada homogenato diluído em uma placa de ágar BHI. E transfira as placas para uma estufa a 37 graus celsius para uma incubação noturna.Mantenha as placas que contêm até 300 colônias por placa. Conte as colônias em cada placa. Para medir o CD4 nas respostas de interferon gama de células T CT8, colete os baços de camundongos infectados com dois décimos elevado a menos quatro UFC do patógeno conforme demonstrado anteriormente.Processe os baços para obter uma suspensão simples de vida de células vermelhas do sangue. E ressuspenda o pellet em uma concentração de quatro vezes dez à sexta potência de células por mililitro em meio RPMI completo contendo FCS. Em seguida, semeie um mililitro de células por poço em uma placa de 24 poços com um volume igual de L. monocytogenes descongelado e inativado pelo calor e coloque as culturas frias em um incubador a 37 graus Celsius.Após 20 horas, adicione 0,66 microlitros por mililitro de inibidor de transporte proteico aos poços. E devolva a placa ao incubador. Quatro horas depois, em uma cabine de segurança biológica, colete 500 microlitros de sobrenadante de cultura e congele as amostras a menos 80 graus Celsius para a posterior medição de interferon gama por ELISA.Em seguida, transfira as células para um único tubo estéril de 15 mililitros, lavando as cavidades com PBS e reunindo a lavagem com as células coletadas para coloração e análise por citometria de fluxo. O pico da carga bacteriana ocorre no baço dois a três dias após a infecção e é reduzido drasticamente pela adição de um antagonista do PPAR Alfa antes da infecção.Sete dias após a infecção, a retimulação de células T do baço positivas para CD4 e positivas para CD8 *ex vivo* com patógeno morto pelo calor induz uma resposta positiva de interferon gama em células positivas para CD4 e positivas para CD8, conforme detectado por citometria de fluxo. O tratamento com o antagonista do PPAR alfa antes da infecção potencializa as respostas de interferon gama pelas células CD4 e CD8. Além disso, o tratamento com o antagonista do PPAR alfa aumenta significativamente a sobrevida após infecção com a dose LD50 do patógeno, demonstrando a utilidade deste modelo para investigar o impacto de novas drogas que modulam as respostas de interferon gama sobre a sobrevivência animal após infecção.Uma vez dominados, todos os procedimentos deste protocolo podem gerar os dados desejados em algumas semanas, se realizados corretamente. A técnica pode ser ainda adaptada infectando camundongos com cepas de *Listeria monocytogenes* que expressam antígenos modelo e utilizando agentes tetraméricos de classes I e II do MAC específicos para esses antígenos. Isso permitirá medir a expansão de linfócitos T após a infecção.Após seu desenvolvimento, esta técnica tornou-se um modelo fundamental para decifrar o papel do interferon gama na imunidade do hospedeiro contra patógenos intracelulares. Após assistir a este vídeo, você deverá ter uma boa compreensão de como cultivar e infectar camundongos C57 BlackSix com Listeria monocytogenes, bem como medir a carga bacteriana e as respostas de interferon gama à infecção.Não se esqueça de que trabalhar com Listeria monocytogenes pode ser perigoso para indivíduos imunocomprometidos, como mulheres grávidas, crianças muito jovens ou idosos. Portanto, o patógeno deve ser manipulado apenas por indivíduos imunocompetentes sob condições de nível de biossegurança dois.

experimental-infection-with-listeria-monocytogenes-as-model-for

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Imunologia e Infecção

Listeria monocytogenes é um organismo modelo para estudar as respostas imunológicas e suscetibilidade genética para as bactérias intracelulares em camundongos. Este método permite que sejam medidos carga bacteriana e gerar uma única célula suspensões de fígado e do baço de ratos para análise FACS para determinar mudanças em células do sistema imunológico devido à infecção por Listeria.

Medir a carga bacteriana e resposta imune em camundongos infectados com Listeria monocytogenes</em

Fonte: Seman, B. G., et al. Um modelo de imagem neonatal para sepse bacteriana gram-negativa. J. Vis. Exp. (2020)O vídeo demonstra um modelo neonatal de camundongo para estudar infecção sistêmica usando bactérias bioluminescentes encapsuladas. Filhotes neonatais são injetados com suspensões bacterianas de alta ou baixa dose e retornados à mãe para cuidados pós-natais. As bactérias encapsuladas escapam da detecção imune precoce, se espalham sistêmicamente e são visualizadas ao longo do tempo por...

Modelagem da Infecção em Camundongos Neonatais Usando Bactérias Bioluminescentes Encapsuladas

Fonte: Radulovic, K., et al. Injeções de lipopolissacarídeo em camundongos para imitar a entrada de produtos derivados de microbianos após ruptura da barreira intestinal. J. Vis. Exp. (2018)Este vídeo demonstra um procedimento passo a passo para injetar lipopolissacarídeo (LPS) em camundongos intraperitonealmente para induzir inflamação sistêmica.

Injeção intraperitoneal de lipopolissacarídeo bacteriano em camundongos para estudar respostas imunes sistêmicas

Source: Ahn, J. J., et al., Experimental Infection with Listeria monocytogenes as a Model for Studying Host Interferon-γ Responses. J. Vis. Exp. (2016)This video demonstrates the preparation of mouse splenocyte cultures from Listeria monocytogenes-infected mice for downstream cytokine analysis. It includes ex vivo bacteria-derived antigen stimulation and sample processing to study T cell responses.

In Vitro Stimulation of Mouse Splenocytes with Heat-Killed Listeria monocytogenes

Este vídeo demonstra um método de imagem para visualizar a secreção in situ de interferon-gama (IFN-γ) no baço de camundongo. Após a infecção bacteriana e a indução do acúmulo de IFN-γ dentro das células T e células assassinas naturais, o baço é colhido do camundongo. Após a obtenção de cortes de tecido, a imunocoloração é realizada para visualizar o IFN-γ dentro das células.

Ensaio para a identificação da secreção de interferon-gama em órgãos linfóides murinos

Este vídeo demonstra a quantificação da carga bacteriana infecciosa do cérebro de camundongo perfundido infectado com Listeria monocytogenes.

Avaliação da colonização bacteriana em um cérebro de camundongo após infecção por Listeria monocytogenes

Este artigo descreve um novo método para a infecção oral de camundongos,...

Transmissão Oral de<em&gt; Listeria monocytogenes</em&gt; Em camundongos através de ingestão de alimentos contaminados

A Listeria monocytogenes é uma bactéria patogénica gram positiva frequentemente utilizado como um importante modelo para o estudo de parasitismo intracelular. Imagiologia tarde L. monocytogenes fases de infecção dentro do contexto de telas de ARN pequenos interferentes permite o estudo global de vias celulares necessários para a infecção bacteriana de células hospedeiras alvo.

Imagiologia inLC Secreção para investigar infecção celular pelo patógeno bacteriano<em&gt; Listeria monocytogenes</em

Descrevemos dois ensaios in vitro e in vivo de infecção que podem ser usados para analisar as atividades dos fatores do hospedeiro-codificação.

Usando um patógeno bacteriano para sonda para celular e organísmica-nível Host respostas

Aqui, nós descrevemos um método confocal simples da imagem latente para visualizar a localização in situ das pilhas que secretoras a gama do interferon do citocinas em órgãos lymphoid secundários murino. Este protocolo pode ser estendido para a visualização de outras citocinas em diversos tecidos.

Imagem latente da produção in situ da gama do interferon no spleen do rato depois da infecção dos monocytogenes de Listeria

Aprenda a infectar camundongos C57BL/6J com Listeria monocytogenes e medir respostas de interferon-γ em células imunes. Este protocolo simples auxilia na triagem de agentes que modulam a sobrevivência e resposta imunológica.

Infecção experimental com

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