Name: Induzindo completa Polyp Regeneração do aboral Physa da Anémona Starlet Vectensis Nematostella (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-01-14T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 17 s
Description: Aprenda a induzir regeneração completa de pólipo a partir de fragmentos aborais na anêmona Nematostella vectensis. Este método permite estudar mecanismos celulares e moleculares da regeneração em cnidários.

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Este trabalho foi apoiado por uma Stem Cell New York Science (NYSTEM C028107) Grant para GHT.

1. Condicionado dos Animais para temperatura, Nutrição e ciclo claro / escuro <ol><li> Obter adultos Nematostella vectensis de um dos numerosos laboratórios Nematostella em todo o mundo, ou um fornecedor sem fins lucrativos (Tabela 1) </li><li> Manter Nematostella a uma temperatura constante (tipicamente entre 18 e 21 ° C) no escuro, em &quot;1 / 3x&quot; mar artificial água (ASW) a uma salinidade de 12 partes por mil (ppt). Manter culturas simples de soda-cal placas de cultura de vidro, tipicamente 250 mL ou 1,5 L de capacidade 11. Nota: Estas condições de cultura simples são comumente usado entre os laboratórios que estudam Nematostella, mas cuidado cultura também pode ser automatizado 19. </li><li> Alimente Nematostella Artemia recém nascidos náuplios 2 - 4x por semana. Escotilha Artemia cistos em força total (36 ppt) ou 1 / 3x ASW a 30 ° C, em um prato de vidro retangular raso 20 ou emqualquer um de uma série de pequena escala, incubadoras artémia comerciais ou caseiros. Se uma incubadora não está disponível, camarão eclodem na RT, mas fazê-lo de forma mais lenta. Nota: Isso muitas vezes requer mais de 24 h para a conclusão. </li><li> Substituir a água cultura anêmona, pelo menos uma vez por semana. Para uma melhor saúde do adulto, completamente limpa (sem sabão) a cultura tigelas, uma vez por semana de secreções mucosas acumuladas, que o revestimento da bacia e pode armadilha restos de comida e resíduos, e enredar os animais. </li></ol> 2. Seleção e relaxamento dos Animais Nutricionalmente condicionado <ol><li> Seleccione pólipos pareados por tamanho de aproximadamente o mesmo comprimento (3 - 5 cm, quando naturalmente relaxado) e coloque-os em uma tigela separada da colônia durante três dias antes da amputação. Nota: O número de animais seleccionados para o corte vai ser determinada pela experiência sendo realizada, é claro, mas, em geral, nós recomendamos pelo menos cinco animais por ponto de amostragem com seis repetições. Assim,Numa experiência típica de um mínimo de 30 animais seria pré-seleccionado. Em geral, é sábio para selecionar mais do que o número mínimo (30), uma vez que são amputações irregular (veja abaixo) podem posteriormente afetar pontuação. </li><li> Remover o prato de animais seleccionados a partir do incubador em luz ambiente, pelo menos, uma hora antes da amputação. Nota: A exposição à luz ambiente e vibrações de manipulação provavelmente fará com que os animais a se contrair, então eles precisam de ser adaptados ou &quot;relaxado&quot; por incubação na bancada do laboratório. Os animais irão tornar-se refractário ao toque e a exposição à luz e em que ponto pode ser movido por pipetagem suave. </li><li> Opcional: Anestesiar os animais através da adição de 7,5% de MgCl 2 (em 1 / 3x ASW). Delicadamente adicionar a solução de MgCl2 para a tigela com um padrão de plástico de 5 mL pipeta. Nota: Embora os animais acabará por se tornar habituados à luz e à manipulação física, pode ser vantajoso para anestesiar animais para manter ou &quot;consertar&quot; tele relaxou estado depois que eles se tornaram 16,21,22 alongado. </li><li> Utilizar um grande furo (&gt; 0,5 cm) de pipeta de plástico para transferir (em 1 / 3x ASW) cinco animais da piscina para ser amputado, no fundo de uma placa de corte de vidro estéril de 100 mm de diâmetro contendo 12 ppt ASW. Coloque o prato no palco de um microscópio estereoscópico com ampliação variável entre 10 - 40X. Nota: Se os animais não foram anestesiadas e relaxado para o corte, eles ainda podem responder ao toque e iluminação estereoscópio e, portanto, pode precisar de alguns minutos para se tornar relaxado novamente. </li></ol> 3. A amputação <ol><li> Usando um bisturi estéril, amputa o physa aboral de cada pólipo, com o objetivo de se obter uma secção da physa que é aproximadamente do mesmo comprimento como é largo e não contendo mesentério. Nota: O site corte ideal é apenas aboral à rescisão do mesentério. No plano de corte existe uma transição de mesentério adequada para diluir lines correspondente a cada inserção do mesentério (ver Figura 1, as setas). Ausência de mesentério é crítica porque produz muco que podem facilitar &#39;ligar&#39; o buraco 17,30. <ol><li> Colocar a lâmina de bisturi em contacto com o animal no local desejado de amputação. Fazer isso sem ajuda (mão livre), ou agarrando suavemente o corpo do animal com um # 5 fórceps (estilo Dumont ou similar). </li><li> Cortar o tecido, aproveitando a lâmina curva do bisturi em um movimento de &quot;balanço&quot; em todo o corpo. Nota: O tecido deve cortar limpa quanto o bisturi é abalada e libertar a seção desejada da physa do doador. No entanto, se um pequeno pedaço de tecido ainda liga o corpo e o physa, cortá-lo com o bisturi. Não tente separar as peças conectadas puxando, pois isso pode danificar o physa. </li></ol></li><li> Remover cada pólipo amputada &#39;doador&#39; do prato e devolvê-lo a um sepabowl taxa rotulados &#39;amputados comuns »; datar a tigela e devolvê-lo à cultura estoque. Nota: pólipos amputados irá curar a ferida aboral dentro de um dia e em seguida, podem ser alimentados normalmente. Eles vão regenerar uma physa aparência normal dentro de duas semanas em que ponto o physa pode ser amputados novamente se desejar. </li><li> Lavar o physa excisado que permanecem no prato de corte de 12 ppt ASW, em seguida, transferir cada physa a um poço separado estéril numa placa de cultura de células multi-poços que já tem 10 mL de 12 ppt ASW em cada poço. Nota: Este exemplo usa uma placa de seis, com cada poço de detenção de 10 ml de água do mar e cinco physa excisada. Na água do mar em geral devem cobrir o physa suficiente para evitar a exposição ao ar devido ao movimento na manipulação e evaporação potencial. A placa de poços ou deve ter uma tampa. </li><li> Repita os passos de 3,1-3,3 para recolher, pelo menos, 5 physa em cada poço reservado para cada tratamento experimental. </li><li> Incubar a physa a uma temperatura que vai provide a melhor taxa de regeneração para os interrogatórios experimentais planejadas. Colocar a placa contendo o physa em uma incubadora de temperatura regulada, a uma temperatura fixa, determinada pela desejada taxa de regeneração. Nota: O physa irá regenerar tecidos em falta e formar um pólipo completa quando incubados a temperaturas entre 15 e 27 ° C. A taxa de regeneração é dependente da temperatura, excepto para as primeiras duas fases. O dia médio para atingir Fase 4 para todas as temperaturas é 7 d após o corte e isso também coincide com a regeneração a 21 ° C. A 27 ° C, Fase 4 é atingido cerca de 3 dias mais cedo e a 15 ° C, Fase 4 é retardada por cerca de 3 d em comparação com a regeneração a 21 ° C (ver também referência 10). </li></ol> 4. Avaliação de regeneração com o sistema de estadiamento Nematostella Regeneração (ENSR) <ol><li> Marcar o physa usando um microscópio estéreo de composto com magnific variávelção (10 - 80X). Marcar o physa Nematostella recém-cortada como estágio 0 e continuar marcando, ao mesmo tempo, cada amputação dia pós (dpa) usando a ENSR 10. Nota: Para os critérios de paragem-chave e detalhes, consulte Referência 10. <ol><li> Pontuação physa como Estágio 0 (ferida aberta) se um physa recém-cortada aparece como uma massa em forma Cup- semelhante a um balão flácido, com um local de ferida aberta é provável visível. Nota: As bordas da ferida também pode ficar juntos desde o início, mas o tecido ainda vai ser recolhido e falta de rigidez. As bordas da ferida aberta pode ser observado a sofrer contracção radial, a ferida cicatriza. </li><li> Pontuação physa como Fase 1 (ferida fechada) se a ferida da amputação parece fechada. Nota: local da ferida irá corresponder ao futuro pólo oral. A superfície exterior em torno do futuro pólo oral podem começar a exibir arcos distintos correspondentes aos subjacentes endodérmicas radialmente simétrica inserções mesentéricos. </li><li> ph pontuaçãoysa como Fase 2 (radial dos arcos) se a superfície do pólo oral parece inflado, revelando oito arcos dispostos em relevo um padrão radialmente simétrico e separados por ranhuras. Observar pequenas bolhas, hemisféricas no vértice dos arcos. Eles serão tão alto quanto ampla transitória, provável, e, inicialmente composta por uma camada de células ectodérmica única. Nota: Em alguns casos bolhas duas camadas pode estabilizar. Nota: Neste ou mais tarde encena uma camada de muco podem aparecer para encapsular o physa (Figura 2) em uma &quot;bainha&quot; membranoso. Este material de encapsulação deve ser removido para facilitar a pontuação. </li><li> Pontuação physa como Stage 3 (Tentáculo), se as papilas dos tentáculos contendo endoderme e ectodérmicas camadas de tecido são formadas de forma estável no final oral de pelo menos alguns arcos radiais. Nota: Os tentáculos são mais longos do que eles são largas e são minimamente móveis. O physa vai mostram aumento, mas a inflação variável para que rudimentos mesentério pode tornar-se visvel que se prolonga a partir da inserção do mesentério na cavidade do corpo (coelenteron). </li><li> Pontuação physa como Fase 4 (mesentérios linear) se o physa contém oito distintos, mesentérios visíveis que se estendem para o coelenteron de inserções na parede do corpo, com comprimentos orais-aboral que são mais do que duas vezes a sua largura radial medida a partir de onde eles parecem ligar para a faringe, na sua extremidade aboral (enterostome). Nota: Quatro ou menos mesentérios têm bordas livres internos &quot;pregas&quot;. A faringe é visível. Mais de oito tentáculos são visíveis, móveis e às vezes eles contrair no corpo. </li><li> Pontuação physa como Stage 5 (predominantemente plissadas mesentérios) se o physa tem mais de quatro mesentérios com pregas, eo pregas é mais completo e sinuosa do que no estágio 4. O animal tem uma aparência adulta quase &quot;normal&quot;, mas não há nenhum visível células gonadais. </li></ol></li></ol>

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<li>Rodolfo, C., Di Bartolomeo, S., Cecconi, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autophagy+in+stem+and+progenitor+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Mol+Life+Sci%22%5BJournal%5D)">Autophagy in stem and progenitor cells.</a> Cell Mol Life Sci. 73 (3), 475-496 (2016).</li>
<li>Guan, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autophagy+in+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Autophagy%22%5BJournal%5D)">Autophagy in stem cells.</a> Autophagy. 9 (6), 830-849 (2013).</li>
<li>Phadwal, K., Watson, A. S., Simon, A. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tightrope+act%3A+autophagy+in+stem+cell+renewal%2C+differentiation%2C+proliferation%2C+and+aging%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Mol+Life+Sci%22%5BJournal%5D)">Tightrope act: autophagy in stem cell renewal, differentiation, proliferation, and aging.</a> Cell Mol Life Sci. 70 (1), 89-103 (2013).</li>
<li>Varga, M., Fodor, E., Vellai, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autophagy+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Methods%22%5BJournal%5D)">Autophagy in zebrafish.</a> Methods. 75, 172-180 (2015).</li>
<li>Varga, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autophagy+is+required+for+zebrafish+caudal+fin+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Death+Differ%22%5BJournal%5D)">Autophagy is required for zebrafish caudal fin regeneration.</a> Cell Death Differ. 21 (4), 547-556 (2014).</li>
<li>Gonzalez-Estevez, C., Salo, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autophagy+and+apoptosis+in+planarians%5BTitle%5D)+AND+%22Apoptosis%22%5BJournal%5D)">Autophagy and apoptosis in planarians.</a> Apoptosis. 15 (3), 279-292 (2010).</li>
<li>Buzgariu, W., Chera, S., Galliot, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Methods+to+investigate+autophagy+during+starvation+and+regeneration+in+hydra%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Enzymol%22%5BJournal%5D)">Methods to investigate autophagy during starvation and regeneration in hydra.</a> Methods Enzymol. 451, 409-437 (2008).</li>
<li>Tettamanti, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autophagy+in+invertebrates%3A+insights+into+development%2C+regeneration+and+body+remodeling%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Pharm+Des%22%5BJournal%5D)">Autophagy in invertebrates: insights into development, regeneration and body remodeling.</a> Curr Pharm Des. 14 (2), 116-125 (2008).</li>
</ol>

Os autores não têm nada a divulgar.

Uso de Nematostella como um modelo de cura de feridas e a regeneração está a tornar-se cada vez mais popular. Assim, é importante ser capaz de visualizar os padrões morfológicos de um protocolo em particular antes de análises celulares e moleculares eficazes podem ser atribuídas e comparados. Nematostella têm um elevado grau de &quot;flexibilidade&quot; regenerativa, ser capaz de mudar a quase qualquer estrutura que falta amputado em qualquer local, em fases pós-Planula de vida. Assim, vários investiga...

A observação de regeneração em um único hidra foi o evento seminal na advento da biologia como um 1,2 ciência experimental. Regeneração continua a ser um fenômeno da extraordinariamente amplo apelo para biólogo e leigo alike. O potencial para os biólogos do desenvolvimento, médicos, cientistas biomédicos e engenheiros de tecido para entender e superar os limites sobre a regeneração humana faz biologia regeneração mais de intrinsecamente interessante. Agora, com o uso de tecnologias emergentes, como a sequenciação do genoma e ganho e perda de ferramentas de função, o campo está pronta para provocar mecanismos além regenerativos e compreender, finalmente, como espécies diferentes podem se regenerar enquanto outros não podem. O grau de comunalidade nas respostas moleculares, celulares e morfológicas continua a ser elucidado, mas até agora parece que as respostas básicas entre os animais que podem regenerar é mais similar do que teria sido imagiNED há apenas uma década 3. Cnidários em particular, são facile na regeneração quase todas as suas partes do corpo em meio a um amplo espectro de diversidade morfológica. A partir do solitário pólipo de água doce, Hidra, juntamente com as pequenas pólipos marinhos que constroem imensos recifes de coral, para os Siphonophores coloniais complexos, tais como o Português Man-O-War, a regeneração é muitas vezes um modo de reprodução, além de um mecanismo de reparar ou reformar partes do corpo danificadas ou perdidas resultantes de lesões e predação. Se as diversas espécies de Cnidaria utilizar mecanismos semelhantes ou diferentes para a regeneração é uma questão fundamentalmente interessante 4-6. Nós, e outros têm vindo a desenvolver o anthozoan, Nematostella vectensis como um modelo para a regeneração 7-17. Recentemente, desenvolveu um sistema de estadiamento para descrever a regeneração de um órgão inteiro a partir de um pedaço morfologicamente uniforme de tecido cortada a partir das aboral final do pólipo 10. Enquanto pólipos Nematostella pode regenerar quando cortada em qualquer nível, nós escolhemos para cortar adultos em uma posição aboral na região mais morfologicamente simples, o physa, em parte porque este é perto do plano normal da fissão assexual natural, 18, e também porque licenças de observação e análise molecular de como um corpo inteiro é remontado a partir dos componentes morfológicos mais simples. A encenação Sistema Nematostella Regeneração (ENSR) fornece um conjunto relativamente simples de pontos de referência morfológicas que poderiam ser usados para marcar o progresso de qualquer aspecto da regeneração por um physa amputada, em condições de cultura normais ou experimentalmente perturbado situações como pequenos tratamentos molécula, a manipulação genética ou alteração ambiental. Como antecipado, a NRSS está sendo adotado como um andaime morfológico em que os eventos celulares e moleculares de regeneração pode ser referenciado10. Finalmente o nosso método de corte produz uma Gaping buracos várias ordens de magnitude maior do que a punção ponto pinos usado em um estudo recente 17, mas ambas as feridas cicatrizam em torno de 6 horas. Documentar as fases visualmente distintas de prender e de encerramento de feridas deve sugerir abordagens experimentais para explicar a aparente independência do tamanho de uma ferida e o tempo que leva para a fechar. Assim, uma compreensão visual mais profunda do processo de amputação aboral, fornecida por este protocolo, irá auxiliar investigações ulteriores sobre esta sistema de regeneração de modelo e ampliar a aplicação deste sistema de estadiamento usando Nematostella vectensis.

<table><tbody><tr><td>Nematostella vectensis, adultos</td><td>Marine Biological Lab (MBL)</td><td></td> <td>fornecedor sem fins lucrativos Prato de</td></tr><tr><td>cultura de vidro, 250 mL</td><td>Carolina Biological Supply</td><td>741004</td><td>250 mL</td></tr><tr><td>Prato de cultura de vidro, 1.500 mL</td><td>Carolina Biological Supply</td><td>741006</td><td>1.500 mL</td></tr><tr><td>Pipeta de transferência de polietileno, 5&nbsp; mL</td><td>USA Scientific&nbsp;</td><td>1022-2500</td><td>furo estreito,</td></tr><tr><td>pipeta de transferência de polietileno graduado, cônico</td><td>Samco</td><td>202-205</td><td>cortou 1 polegada de ponta para fazer furo largo</td></tr><tr><td>Navalha de segurança de penas</td> de<td>bisturi descartável</td> Co. Ltd <td>no. 10</td><td>lâmina deve ser curvada</td></tr> <tr><td># 5 Dumont Pinças de ponta fina</td><td>Roboz</td><td>RS5045</td><td>fornecedores alternativos disponíveis</td></tr><tr><td>Placa de Petri Pyrex, 100 mm de diâmetro</td><td>Corning</td><td>3160</td><td>pode substituir outras placas de vidro Petri</td></tr><tr><td>Placa estéril de 6 poços</td><td>Corning Falcon&nbsp;</td><td>353046</td><td>ou similar de outro fabricante</td></tr><tr><td>Placa estéril de 12 poços</td><td>Nunc&nbsp;</td><td>150628</td><td>ou similar de outro fabricante</td></tr><tr><td>Placa estéril de 24 poços</td><td>Cellstar, Greiner bio-one</td><td>662-160</td><td>ou similar de outro fabricante</td></tr><tr><td>Kit de camarão em salmoura</td><td>Baía de São Francisco; drsfostersmith.com</td><td>CD-154005</td><td>opção para o cultivo de camarão em salmoura</td></tr><tr>prato<td>de pirex</td><td>comum em supermercados</td><td></td><td>opção para o cultivo de artêmia</td></tr><tr><td>Mistura Artificial de Água do Mar 50 Gal ou Mais&nbsp;</td><td>Instant Ocean; drsfoster-smith.com</td><td>CD-116528</td><td>outras marcas podem ser suficientes</td></tr><tr><td>Banheira de plástico para estoque Preparação ASW</td><td>várias</td><td></td><td>latas de lixo de plástico comuns de 25 galões OK</td></tr><tr><td>Polipropileno Carboy</td><td>Carolina Biological Supply</td><td>716391</td><td>Para estoque de trabalho de ASW @ 12 ppt</td></tr><tr><td>Beaker, Graduado, 4.000 mL</td><td>PhytoTechnology Laboratories</td><td>B199</td><td>Para diluição de 36 ppt ASW para 12 ppt</td></tr><tr><td>Estereomicroscópio e fonte de luz</td><td>vários&nbsp;</td><td></td><td>com ampliação contínua de 1 a 40X</td></tr></tbody></table>

induzindo completa polyp regeneração do aboral physa da anémona starlet vectensis nematostella

Inducing Complete Polyp Regeneration from the Aboral Physa of the Starlet Sea Anemone Nematostella vectensis

Cnidários e, especificamente, Hydra, foram os primeiros animais indicado para regenerar estruturas danificadas ou cortada, e na verdade esses estudos sem dúvida lançados investigação biológica moderna através do trabalho de Trembley mais de 250 anos atrás. Presentemente o estudo de regeneração tenha visto um ressurgimento usando ambos os organismos regenerativos &quot;clássicas&quot;, tais como a hidra, e Planaria Urodelos, bem como um alargamento do espectro de espécies que abrangem a gama de metazoários, a partir de esponjas através de mamíferos. Além de seu interesse intrínseco como um fenômeno biológico, a compreensão de como a regeneração funciona em uma variedade de espécies irá informar-nos sobre se a processos regenerativos compartilhar recursos e / ou espécies comuns ou mecanismos celulares e moleculares específicas ao contexto. A anêmona de mar estrela, Nematostella vectensis, é um organismo modelo emergente para a regeneração. Como Hydra, Nematostella é membro do filo antiga, cnidaria, mas dentro de tele anthozoa classe, um clado irmão do Hydrozoa que é evolutivamente mais basal. Assim, os aspectos da regeneração na Nematostella será interessante comparar e contrastar com os de Hydra e outros cnidários. Neste artigo, apresentamos um método para bissetriz, observar e classificar a regeneração do fim aboral do adulto Nematostella, que é chamado de physa. O physa naturalmente sofre fissão como um meio de reprodução assexuada, e quer fissão naturais ou amputação manual da physa desencadeia re-crescimento e reforma de morfologias complexas. Aqui temos codificada estas alterações morfológicas simples em um sistema de estadiamento Nematostella Regeneração (a ENSR). Usamos o NRSS para testar os efeitos de cloroquina, um inibidor da função lisossómica que bloqueia autofagia. Os resultados mostram que a regeneração de estruturas de pólipos, particularmente os mesentério, é anormal quando autofagia é inibida.

A progressão de eventos morfológicas durante a regeneração em physa cortada é mostrado na Figura 1A, que inclui vistas representativas de physa em cada fase NRSS. O site típico physa corte é indicado no adulto (setas). As fotografias na Figura 1A mostra a regeneração progressiva das estruturas orais e corporais a partir physa recém-cortada através pólipo completamente formado. Figura 1B, C mostram a disposição dos septos internos, os mes...

Aqui demonstramos como induzir e monitorar a regeneração na anêmona-do-mar Nematostella vectensis, um modelo de antozoário cnidário. Demonstramos como amputar e categorizar a regeneração usando um sistema de estadiamento morfológico e usamos esse sistema para revelar um requisito de autofagia na regeneração de estruturas de pólipos.

Induzindo completa Polyp Regeneração do aboral Physa da Anémona Starlet Vectensis Nematostella

Cnidarians, and specifically Hydra, were the first animals shown to regenerate damaged or severed structures, and indeed such studies arguably launched ...

O objetivo geral deste procedimento é ilustrar a série previsível de mudanças morfológicas que ocorreram durante a regeneração de um pólipo completo a partir de uma pequena seção de tecido removida da ponta aboral da nematostella vectensis Este método pode ajudar a responder a questões-chave na biologia da regeneração, como a forma como as células no local de uma ferida se reorganizam e se desdobram para refazer as estruturas ausentes. Tive a ideia desse método porque queria ver como pólipos relativamente complexos poderiam se recompor, começando com a menor quantidade de informações morfológicas. A demonstração visual desse método é crítica porque a progressão do estágio após a ferida inicial às vezes é obscurecida por uma membrana mucosa.Geralmente, os indivíduos novos neste método terão dificuldade em obter uma separação completa do tecido no local da ferida, devido à natureza macia, pegajosa e gelatinosa do pólipo. Comece este procedimento com o condicionamento de nematostella vectensis conforme descrito no protocolo de texto. É especialmente importante ao usar essa técnica que os animais selecionados sejam do mesmo tamanho e tenham o mesmo histórico de cultura, como alimentaçã

inducing-complete-polyp-regeneration-from-aboral-physa-starlet-sea

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Biologia do Desenvolvimento

Métodos que produzem embriões morphant são essenciais para estudar mecanismos de desenvolvimento e redes de regulação gênicas. A estrela do mar Patiria miniata é um sistema modelo emergente para estes estudos. Aqui apresentamos um protocolo para a obtenção de gametas, produzindo culturas de embriões, e microinjeção rápida de zigotos de esta espécie.

Um Método para microinjeção de Patiria minata zigotos

A Turbellaria mediterranea Schmidtea é um excelente modelo para o estudo de células-tronco e regeneração de tecidos. Esta publicação descreve um método para remover seletivamente um órgão, a faringe, expondo os animais para a química de azida sódica. Este protocolo também descreve métodos para monitorar a regeneração da faringe.

Química amputação e regeneração da faringe nos Turbellaria mediterranea Schmidtea

A gigante Ciliophora, Stentor coeruleus, é um excelente sistema para estudar regeneração e cicatrização de feridas. Apresentamos os procedimentos para o estabelecimento de culturas de células de Stentor de células únicas ou fragmentos de células, induzindo a regeneração de células de corte, quimicamente, induzindo a regeneração da banda membranellar e aparelhos orais, imagem e análise de célula regeneração.

Métodos para o estudo da regeneração em Stentor

O objetivo deste protocolo é genótipo o vectensis do nematostella do Anemone de mar durante o gastrulação sem sacrificar o embrião.

Genotyping de Anemone de mar durante o desenvolvimento adiantado

Aqui, descrevemos um protocolo para obter extrato de veneno bruto da anêmona do mar e detectar sua atividade hemolítica e fosfolipase.

Identificação da Atividade Hemolítica e Fosfolipase em Extratos Brutos de Anêmonas do Mar por Bioensaões Simples

O resgate de pólipos é um processo induzido pelo estresse agudo, no qual os pólipos de coral digerem o tecido que os conecta à sua colônia e se desprendem dele para viver como indivíduos. O presente protocolo descreve como induzir a micropropagação de corais por meio de tratamentos de hipersalina ou água do mar sem cálcio.

Indução de resgate de pólipos em colônias de corais para obtenção de micropropagates individualizados para uso experimental em laboratório

Este trabalho descreve um método para criar feridas no epitélio de uma Clytia hemisphaerica medusa viva e obter imagens de cicatrização de feridas em alta resolução in vivo. Adicionalmente, uma técnica para introduzir corantes e drogas para perturbar processos de sinalização nas células epiteliais e matriz extracelular durante a cicatrização de feridas é apresentada.

Caracterização da cicatrização de feridas epiteliais in vivo utilizando o organismo modelo cnidário Clytia hemisphaerica

Descrevemos um protocolo simples para remover o estatocisto e tecidos associados no ctenóforo Mnemiopsis leidyi, que é passível de imagens ao vivo.

Remoção Cirúrgica de um Órgão Sensorial Complexo em Ctenóforos Altamente Regenerativos

As células sanguíneas de Drosophila, ou hemócitos, circulam entre os locais residentes e a circulação.  Na larva, os hemócitos residentes (sésseis) localizam-se em microambientes indutivos, as bolsas hematopoiéticas, enquanto os hemócitos circulantes se movem livremente na hemolinfa. O objetivo deste protocolo é o isolamento e quantificação padronizados dessas duas populações de hemócitos comportamentalmente distintas, mas intercambiáveis.

Ensaiando populações de células do sangue<em&gt; Drosophila melanogaster</em&gt; Larva

Aqui descrevemos o fluxo de trabalho para usar o sistema TetON para alcançar a expressão gênica específica do tecido na barbatana caudal do peixe-zebra em regeneração adulta.

Uso do Sistema de Teton para estudar os mecanismos moleculares de Regeneração Zebrafish

Aprenda a induzir regeneração completa de pólipo a partir de fragmentos aborais na anêmona Nematostella vectensis. Este método permite estudar mecanismos celulares e moleculares da regeneração em cnidários.

Induzindo completa Polyp Regeneração do aboral Physa da Anémona Starlet Vectensis Nematostella

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