Name: Lateral Crônica Cranial Janela Preparação Ativa In Vivo Observação Após Distal Middle Cerebral Oclusão da Artéria em Ratos (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-12-29T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 41 s
Description: Aprenda a preparar uma janela craniana lateral combinada com oclusão permanente da artéria cerebral média em camundongos para microscopia intravital longitudinal. Este método permite imagens in vivo de alterações agudas e crônicas após AVC.

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VP é participante do Programa Charité Clinical Scientist, financiado pela Charité - Universitätsmedizin Berlin e pelo Berlin Institute of Health. TB é bolsista de mobilidade de pós-doutorado do SNSF. Os autores recebem apoio financeiro da EinsteinStiftung/A-2012-153 para PV.

ÉTICA DECLARAÇÃO: Experimentos envolvendo indivíduos animais foram realizados de acordo com as diretrizes e regulamentos estabelecidos pela Landesamt fuer Gesundheit und Soziales, Berlim, Alemanha (G0298 / 13) e os critérios de chegar, conforme aplicável. Para este estudo, 10 a 12 do sexo masculino semanas de idade C57BL / 6J foram usadas. 1. Lateral Crônica Cranial Preparação Janela <ol><li> Realizar a anestesia com uma injecção subcutânea de cetamina (90 mg / kg) e xilazina (10 mg / kg). Teste para sedação adequada com um estímulo doloroso. </li><li> Esterilizar os instrumentos cirúrgicos e campo cirúrgico com 70% de etanol. </li><li> Remova o cabelo do couro cabeludo desde o pescoço até os olhos usando uma máquina de barbear roedor. </li><li> Fixar a cabeça em um quadro estereotáxico. </li><li> Use dexpantenol pomada olho em ambos os olhos para evitar a desidratação. </li><li> Limpar a área cirúrgica para remover todos os pêlos e esterilizá-lo com 3 camadas de 74,1% de etanol e 10% de 2-propanolol. </li><li> Executar uma linha médiaincisão do pescoço para os olhos usando um bisturi. </li><li> Abrangem o retalho de pele com 4 suturas tenting. </li><li> Remover cuidadosamente o periósteo no hemisfério esquerdo raspando-o com um bisturi para o ponto onde começa o músculo temporal. NOTA: Esta preparação também serve para criar uma boa área de adesão para a cola dental, que fixa a tampa de vidro. </li><li> Realizar uma craniotomia fronto-parietal com um diâmetro de 4 mm diluindo o crânio na borda do retalho ósseo usando um microdrill. Aplicar soro fisiológico durante a perfuração para evitar lesões de calor. </li><li> Elevar o retalho ósseo com cânulas e removê-lo usando micropinças. </li><li> Lavar cuidadosamente e extensivamente com solução salina. </li><li> Misture a cola dentária até que tenha a consistência apropriada e não é fluido (isto é, a cola não deve produzir fios mais). Coloque-o sobre o osso ao redor da craniotomia. </li><li> Coloque uma tampa de vidro com um 6 mm de diâmetro na cola preparada e corrigi-lo com the resto da cola dentária. Certifique-se de que é estanque. Aguarde até que a cola é seco e duro, testando-a com uma pinça. NOTA: Uma irrigação adicional acelera o processo de cura. </li><li> Retirar as suturas tenting e fechar a ferida com suturas de pele. </li><li> Puxe a pele do flanco do mouse. Inserir uma agulha subcutânea e gentilmente substituir 0,5 ml de solução salina estéril por via subcutânea para o equilíbrio de fluidos. </li><li> Após a cirurgia, manter os animais na gaiola recuperação aquecida durante 90 min. Espere até que os animais são completamente acordado antes de deixá-los sozinhos. Espere até que os animais são completamente recuperado antes de devolvê-los a uma gaiola com outros animais. </li><li> Repetir a substituição do volume de solução salina por via subcutânea, após cerca de 12 horas, tal como descrito no passo 1.16. </li><li> Sempre aplicar analgesia através de sonda gástrica ou directamente para dentro da cavidade oral após a cirurgia (por exemplo, paracetamol (10 mg / ml) ou outros fármacos anti-inflamatórios não esteróides). </li><li> Verifica a<html> condição dos animais todos os dias após a cirurgia, e sempre fornecem purê de alimentos de origem animal no chão, em uma placa de petri para tornar a alimentação simples e para evitar a perda de peso crítico após a cirurgia. NOTA: microscopia intravital pode ser realizada no primeiro dia após a preparação janela craniana. </li><li> Aplicar anestesia isoflurano e corrigir o animal em um suporte de cabeça. Abra a sutura da pele e limpar a janela com cotonetes e solução salina estéril. Após 24 h, a janela craniana deve ser preenchido com fluido cerebrospinal por esse ponto de tempo, que permite a criação de imagens. Realizar imagem usando protocolos de microscopia estabelecidos 18. </li></ol> 2. Distal MCAo NOTA: O procedimento MCAo deve ser realizada cerca de 5 d após a preparação CW. Isto minimiza a interferência a partir da reacção imune causada pela preparação CW com a reacção imune induzida por acidente vascular cerebral. &quot;Src =&quot; / files / ftp_upload / 54701 / 54701fig1.jpg &quot;/&gt; Figura 1. Visão Geral do Distal MCAo. A. Esta é uma boa visão geral sobre os vasos antes do op. B. Os vasos após o primeiro contato bipolar. C. Os vasos após segundo contato bipolar. D. A visão geral sobre os vasos, que são completamente fechados agora. E. visão geral final com menor ampliação. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/54701/54701fig1large.jpg" target="_blank">Por favor clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a> <ol><li> Anestesiar os ratos usando uma máscara de anestesia e um regime anestésico adequado, em consulta com o pessoal veterinário (por exemplo, indução com 1,5-2% isoflurano e manutenção com 1,0-1,5% de isoflurano em 2/3 N 2 O e 1/3 O2 via um vaporizador). </li><li> Raspar e remover o cabelo e desinfectar a pele e pele circundante com um agente apropriado (por exemplo, álcool etílico a 70%), e secá-lo depois. </li><li> Manter a temperatura do corpo dos ratos a 36,5 ° C ± 0,5 ° C durante a cirurgia. Uma realimentação controlada almofada de aquecimento, aquecido de acordo com a temperatura rectal do rato, é altamente recomendável. </li><li> Coloque o animal na posição lateral. Corrigir o nariz na máscara de anestesia e ajustar a concentração de isoflurano para 1,0-1,5%. </li><li> Aplicar pomada molhado (dexpantenol) para ambos os olhos. </li><li> Use a incisão na pele feita para a preparação CW. </li><li> Suavemente separar a pele e o músculo temporal identificar por baixo. </li><li> Ajustar a energia do gerador de alta frequência (5-7 W) e utilizar o modo bipolar. </li><li> Use a pinça eletrocoagulação e remova cuidadosamente o músculo temporal do crânio, criando um retalho do músculo, sem remover totalmente o músculo. </li><li> Identificar o MCA abaixo do crânio transparente na parte rostral da área temporal, dorsal à retro-orbital sinusal. Se a bifurcação MCA não pode ser identificado, tentar identificar o recipiente mais rostral. </li><li> Diluir o crânio acima do ramo MCA com uma microdrill enquanto continuamente irrigação para evitar danos causados ​​pelo calor. </li><li> Levante o osso com cânulas e removê-lo com micropinças. </li><li> Diminuir a energia do gerador de alta frequência para 3-5 W. </li><li> Aproxime-se da artéria de cima e suavemente tocá-lo com as pinças bipolares de ambos os lados, sem levantar a embarcação. </li><li> Coagular a artéria proximal e distal à bifurcação navio. </li><li> Espere por 30 segundos e, em seguida, toque a artéria com cuidado para garantir que o fluxo de sangue é permanentemente interrompida. Repita o eletrocoagulação se um recanalização é observado. </li><li> Corrigir o músculo temporal com 1 ou 2 pontos na parte de inserção do músculo para cobrir o defeito ósseo, se possível. </li><li> Suturar a ferida e colocar o animal na caixa de recuperação do aquecida. Em geral, os animais recuperação rapidamente após anest volátilhesia. </li><li> Para a substituição de volume, aplicam-se por via subcutânea 0,5 ml de solução salina estéril, tal como descrito no passo 1.16. </li><li> Após a cirurgia, que os animais possam ficar na gaiola de recuperação aquecida por 90 min. Espere até que os animais são conscientes antes de deixá-los sozinhos. Apenas devolvê-los para uma gaiola com outros animais quando eles são totalmente recuperado. </li><li> Repetir a substituição de volume, tal como explicado no passo 1.16, depois 12 h. </li><li> Aplicar analgesia pós-operatória através da água de beber (por exemplo, paracetamol (10 mg / ml) ou outros fármacos anti-inflamatórios não esteróides). </li><li> Verifique a condição médica dos animais todos os dias após a cirurgia. Fornecer alimentos de origem animal purê em uma placa de petri no chão para simplificar a comer e para minimizar a perda de peso pós-operatória. </li></ol> 3. Sham Tratamento <ol><li> Efectuar todos os procedimentos de forma idêntica às etapas 1 e 2, descritos acima, incluindo CW preparação, exceto não coagular o ar cerebral média expostatery. </li></ol>

<ol><li>Mukherjee, D., Patil, C. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epidemiology+and+the+global+burden+of+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22World+Neurosurg%22%5BJournal%5D)">Epidemiology and the global burden of stroke.</a> World Neurosurg. 76 (6), Suppl 85-90 (2011).</li>
<li>Ebinger, M., Prüss, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+the+use+of+ambulance-based+thrombolysis+on+time+to+thrombolysis+in+acute+ischemic+stroke%3A+a+randomized+clinical+trial%5BTitle%5D)+AND+%22JAMA%22%5BJournal%5D)">Effect of the use of ambulance-based thrombolysis on time to thrombolysis in acute ischemic stroke: a randomized clinical trial.</a> JAMA. 311 (16), 1622-1631 (2014).</li>
<li>Ebinger, M., Lindenlaub, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prehospital+thrombolysis%3A+a+manual+from+Berlin%5BTitle%5D)+AND+%22J+vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Prehospital thrombolysis: a manual from Berlin.</a> J vis Exp. (81), e50534(2013).</li>
<li>Bogousslavsky, J., Van Melle, G., Regli, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Lausanne+Stroke+Registry%3A+analysis+of+1%2C000+consecutive+patients+with+first+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">The Lausanne Stroke Registry: analysis of 1,000 consecutive patients with first stroke.</a> Stroke. 19 (9), 1083-1092 (1988).</li>
<li>Engel, O., Kolodziej, S., Dirnagl, U., Prinz, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modeling+stroke+in+mice+-+middle+cerebral+artery+occlusion+with+the+filament+model%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Modeling stroke in mice - middle cerebral artery occlusion with the filament model.</a> J Vis Exp. (47), (2011).</li>
<li>Donnan, G. A., Fisher, M., Macleod, M., Davis, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stroke%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Stroke.</a> Lancet. 371 (9624), 1612-1623 (2008).</li>
<li>Meairs, S., Wahlgren, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stroke+research+priorities+for+the+next+decade--A+representative+view+of+the+European+scientific+community%5BTitle%5D)+AND+%22Cerebrovasc+Dis%22%5BJournal%5D)">Stroke research priorities for the next decade--A representative view of the European scientific community.</a> Cerebrovasc Dis. 22 (2-3), 75-82 (2006).</li>
<li>Rosamond, W., Flegal, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heart+disease+and+stroke+statistics--2007+update%3A+a+report+from+the+American+Heart+Association+Statistics+Committee+and+Stroke+Statistics+Subcommittee%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Heart disease and stroke statistics--2007 update: a report from the American Heart Association Statistics Committee and Stroke Statistics Subcommittee.</a> Circulation. 115 (5), 69-171 (2007).</li>
<li>Moskowitz, M. A., Lo, E. H., Iadecola, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+science+of+stroke%3A+mechanisms+in+search+of+treatments%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">The science of stroke: mechanisms in search of treatments.</a> Neuron. 67 (2), 181-198 (2010).</li>
<li>Dirnagl, U., Iadecola, C., Moskowitz, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathobiology+of+ischaemic+stroke%3A+an+integrated+view%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Pathobiology of ischaemic stroke: an integrated view.</a> Trends Neurosci. 22 (9), 391-397 (1999).</li>
<li>Dirnagl, U., Endres, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Found+in+Translation%3A+Preclinical+Stroke+Research+Predicts+Human+Pathophysiology%2C+Clinical+Phenotypes%2C+and+Therapeutic+Outcomes%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Found in Translation: Preclinical Stroke Research Predicts Human Pathophysiology, Clinical Phenotypes, and Therapeutic Outcomes.</a> Stroke. , (2014).</li>
<li>Prinz, V., Hetzer, A. -M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MRI+heralds+secondary+nigral+lesion+after+brain+ischemia+in+mice%3A+a+secondary+time+window+for+neuroprotection%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cereb+Blood+Flow+Metab%22%5BJournal%5D)">MRI heralds secondary nigral lesion after brain ischemia in mice: a secondary time window for neuroprotection.</a> J Cereb Blood Flow Metab. , (2015).</li>
<li>Shih, A. Y., Mateo, C., Drew, P. J., Tsai, P. S., Kleinfeld, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+polished+and+reinforced+thinned-skull+window+for+long-term+imaging+of+the+mouse+brain%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">A polished and reinforced thinned-skull window for long-term imaging of the mouse brain.</a> J Vis Exp. (61), (2012).</li>
<li>Holtmaat, A., Bonhoeffer, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term%2C+high-resolution+imaging+in+the+mouse+neocortex+through+a+chronic+cranial+window%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">Long-term, high-resolution imaging in the mouse neocortex through a chronic cranial window.</a> Nat Protoc. 4 (8), 1128-1144 (2009).</li>
<li>Iadecola, C., Dirnagl, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+microcircualtion--fantastic+voyage%3A+introduction%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">The microcircualtion--fantastic voyage: introduction.</a> Stroke. 44 (6), Suppl 1 83(2013).</li>
<li>Blinder, P., Tsai, P. S., Kaufhold, J. P., Knutsen, P. M., Suhl, H., Kleinfeld, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+cortical+angiome%3A+an+interconnected+vascular+network+with+noncolumnar+patterns+of+blood+flow%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Neurosc%22%5BJournal%5D)">The cortical angiome: an interconnected vascular network with noncolumnar patterns of blood flow.</a> Nat Neurosc. 16 (7), 889-897 (2013).</li>
<li>Shih, A. Y., Driscoll, J. D., Drew, P. J., Nishimura, N., Schaffer, C. B., Kleinfeld, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Two-photon+microscopy+as+a+tool+to+study+blood+flow+and+neurovascular+coupling+in+the+rodent+brain%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cereb+Blood+Flow+Metab%22%5BJournal%5D)">Two-photon microscopy as a tool to study blood flow and neurovascular coupling in the rodent brain.</a> J Cereb Blood Flow Metab. 32 (7), 1277-1309 (2012).</li>
<li>Cabrales, P., Carvalho, L. J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intravital+microscopy+of+the+mouse+brain+microcirculation+using+a+closed+cranial+window%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Intravital microscopy of the mouse brain microcirculation using a closed cranial window.</a> J Vis Exp. (45), (2010).</li>
<li>Rosell, A., Agin, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distal+occlusion+of+the+middle+cerebral+artery+in+mice%3A+are+we+ready+to+assess+long-term+functional+outcome%5BTitle%5D)+AND+%22Transl+Stroke+Res%22%5BJournal%5D)">Distal occlusion of the middle cerebral artery in mice: are we ready to assess long-term functional outcome.</a> Transl Stroke Res. 4 (3), 297-307 (2013).</li>
<li>Dorand, R. D., Barkauskas, D. S., Evans, T. A., Petrosiute, A., Huang, A. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+intravital+thinned+skull+and+cranial+window+approaches+to+study+CNS+immunobiology+in+the+mouse+cortex%5BTitle%5D)+AND+%22Intravital%22%5BJournal%5D)">Comparison of intravital thinned skull and cranial window approaches to study CNS immunobiology in the mouse cortex.</a> Intravital. 3 (2), (2014).</li>
<li>Balkaya, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessing+post-stroke+behavior+in+mouse+models+of+focal+ischemia%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cereb+Blood+Flow+Metab%22%5BJournal%5D)">Assessing post-stroke behavior in mouse models of focal ischemia.</a> J Cereb Blood Flow Metab. 33 (3), 330-338 (2013).</li>
<li>Balkaya, M., Kröber, J., Gertz, K., Peruzzaro, S., Endres, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+long-term+functional+outcome+in+a+murine+model+of+mild+brain+ischemia%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">Characterization of long-term functional outcome in a murine model of mild brain ischemia.</a> J Neurosci Methods. 213 (2), 179-187 (2013).</li>
<li>Freret, T., Bouet, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Behavioral+deficits+after+distal+focal+cerebral+ischemia+in+mice%3A+Usefulness+of+adhesive+removal+test%5BTitle%5D)+AND+%22Beh+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Behavioral deficits after distal focal cerebral ischemia in mice: Usefulness of adhesive removal test.</a> Beh Neurosci. 123 (1), 224-230 (2009).</li>
<li>Liu, S., Zhen, G., Meloni, B. P., Campbell, K., Winn, H. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((RODENT+STROKE+MODEL+GUIDELINES+FOR+PRECLINICAL+STROKE+TRIALS+%281ST+EDITION%29%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Stroke+Trans+Med%22%5BJournal%5D)">RODENT STROKE MODEL GUIDELINES FOR PRECLINICAL STROKE TRIALS (1ST EDITION).</a> J Exp Stroke Trans Med. 2 (2), 2-27 (2009).</li>
<li>Florian, B., Vintilescu, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term+hypothermia+reduces+infarct+volume+in+aged+rats+after+focal+ischemia%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosci+Lett%22%5BJournal%5D)">Long-term hypothermia reduces infarct volume in aged rats after focal ischemia.</a> Neurosci Lett. 438 (2), 180-185 (2008).</li>
<li>Noor, R., Wang, C. X., Shuaib, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+hyperthermia+on+infarct+volume+in+focal+embolic+model+of+cerebral+ischemia+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosci+Lett%22%5BJournal%5D)">Effects of hyperthermia on infarct volume in focal embolic model of cerebral ischemia in rats.</a> Neurosci Lett. 349 (2), 130-132 (2003).</li>
<li>Barber, P. A., Hoyte, L., Colbourne, F., Buchan, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Temperature-regulated+model+of+focal+ischemia+in+the+mouse%3A+a+study+with+histopathological+and+behavioral+outcomes%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Temperature-regulated model of focal ischemia in the mouse: a study with histopathological and behavioral outcomes.</a> Stroke. 35 (7), 1720-1725 (2004).</li>
<li>Shin, H. K., Nishimura, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mild+induced+hypertension+improves+blood+flow+and+oxygen+metabolism+in+transient+focal+cerebral+ischemia%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Mild induced hypertension improves blood flow and oxygen metabolism in transient focal cerebral ischemia.</a> Stroke. 39 (5), 1548-1555 (2008).</li>
<li>Kapinya, K. J., Prass, K., Dirnagl, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isoflurane+induced+prolonged+protection+against+cerebral+ischemia+in+mice%3A+a+redox+sensitive+mechanism%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroreport%22%5BJournal%5D)">Isoflurane induced prolonged protection against cerebral ischemia in mice: a redox sensitive mechanism.</a> Neuroreport. 13 (11), 1431-1435 (2002).</li>
<li>Gertz, K., Priller, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Physical+activity+improves+long-term+stroke+outcome+via+endothelial+nitric+oxide+synthase-dependent+augmentation+of+neovascularization+and+cerebral+blood+flow%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Res%22%5BJournal%5D)">Physical activity improves long-term stroke outcome via endothelial nitric oxide synthase-dependent augmentation of neovascularization and cerebral blood flow.</a> Circ Res. 99 (10), 1132-1140 (2006).</li>
<li>Dirnagl, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bench+to+bedside%3A+the+quest+for+quality+in+experimental+stroke+research%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cereb+Blood+Flow+Metab%22%5BJournal%5D)">Bench to bedside: the quest for quality in experimental stroke research.</a> J Cereb Blood Flow Metab. 26 (12), 1465-1478 (2006).</li>
</ol>

Os autores não têm nada a divulgar.

AVC é uma das principais causas de incapacidade a longo prazo e de morte em todo o mundo 1. Além do tratamento agudo, investigando novas abordagens e mecanismos para acelerar e melhorar a recuperação após acidente vascular cerebral continua a ser um objectivo primordial médica 7. pesquisadores tempos experimentais frequentemente empregam modelos de roedores de isquémia cerebral focal. De facto, os modelos indutores transiente ou permanente MCAo imitar um dos tipos mais comuns de isquemia cerebral f...

O acidente vascular cerebral está entre as principais causas de incapacidade e morte em longo prazo em todo o mundo1, ficando em segundo lugar depois da doença coronariana. Além disso, o AVC é a principal causa de incapacidade a longo prazo, ressaltando seu tremendo impacto socioeconômico6-8. Além do tratamento agudo, a investigação de novas abordagens e mecanismos para acelerar e melhorar a recuperação após o AVC continua sendo um objetivo médico primordial7. 
Nas últimas décadas, os dados da pesquisa experimental de AVC contribuíram substancialmente para a compreensão das complexas cascatas fisiopatológicas desencadeadas pela isquemia9,10. Excitotoxicidade, apoptose, despolarização peri-infarto e inflamação foram identificadas como os mediadores mais relevantes da morte celular após isquemia cerebral focal. Além disso, usando modelos animais de isquemia cerebral, conceitos importantes, modalidades diagnósticas e abordagens terapêuticas foram desenvolvidos e validados (por exemplo, "penumbra" e trombólise)11.
A disponibilidade de modelos experimentais de AVC, combinados com modalidades de imagem não invasivas (por exemplo, ressonância magnética (RM), tomografia computadorizada ou análise de contraste de manchas a laser), permite ao pesquisador investigar alterações fisiopatológicas hiperagudas e crônicas induzidas pelo insulto isquêmico de maneira longitudinal12. Juntamente com o estudo do perfil espaço-temporal da lesão em evolução, alterações semelhantes à plasticidade neuronal podem ser investigadas e correlacionadas com resultados funcionais e achados histológicos. Nos últimos anos, novos avanços metodológicos foram feitos usando a combinação de modelos de isquemia cerebral e microscopia in vivo via janelas cranianas13. Essas novas técnicas permitem que os investigadores analisem a unidade neurovascular em nível celular e molecular, com grande poder analítico nas fases aguda, subaguda e crônica após isquemia cerebral focal14. Além disso, a microscopia in vivo da dinâmica microcirculatória revelou novos aspectos da função e angioarquitetura da microvasculatura cerebral, com significativa relevância fisiopatológica15-17. 
Neste protocolo, apresentamos como realizar uma preparação crônica de CW lateral ao seio sagital e como induzir cirurgicamente um AVC distal sob a janela. Este modelo de camundongo pode ser aplicado a imagens sequenciais de alterações agudas, subagudas e crônicas após isquemia cerebral focal por meio de epi-iluminação, varredura a laser confocal e microscopia intravital de dois fótons.

<table><tbody><tr><td>Microscópio cirúrgico binocular</td><td>Zeiss</td><td>Stemi 2000 C</td><td></td></tr><tr><td>Fonte de luz para microscópio</td><td>Zeiss</td><td>CL 6000 LED</td><td></td></tr><tr><td>Almofada de aquecimento com sonda retal</td><td>FST</td><td>21061-10</td><td></td></tr><tr><td>Quadro estereotáxico</td><td>Kopf</td><td>Modelo 930</td><td></td></tr><tr><td>Sistema de anestesia para isoflurano</td><td>Draeger</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Isoflurano</td><td>Pinça Abott</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Dumont #5</td><td>FST</td><td>11251-10</td><td></td></tr><tr><td>Pinça Dumont #7</td><td>FST</td><td>11271-30</td><td></td></tr><tr><td>Pinça Bipolar</td><td>Erbe</td><td>20195-501</td><td></td></tr><tr><td>Pinça Bipolar&nbsp;</td><td>Erbe&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; 20195-022</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Microdrill</td><td>FST&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; 18000-17 &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp;</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Porta-agulha</td><td>FST</td><td>12010-14</td><td></td></tr><tr><td>5-0 sutura de seda</td><td>Feuerstein, Suprama</td><td></td><td></td></tr><tr><td>7-0 sutura de seda</td><td>Feuerstein,Suprama</td><td></td><td></td></tr><tr><td>8-0 sutura de seda</td><td>Feuerstein, Suprama</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Câmara de Recuperação Veterinária</td><td>Peco Services</td><td>V1200</td><td></td></tr></tbody></table>

lateral crônica cranial janela preparação ativa in vivo observação após distal middle cerebral oclusão da artéria em ratos

Lateral Chronic Cranial Window Preparation Enables In Vivo Observation Following Distal Middle Cerebral Artery Occlusion in Mice

Isquemia cerebral focal (ou seja, acidente vascular cerebral isquémico) pode causar lesão cerebral principal, que conduz a uma perda grave da função neuronal e, consequentemente, a um hospedeiro de motor e deficiências cognitivas. Sua alta prevalência coloca um problema de saúde grave, como acidente vascular cerebral é uma das principais causas de incapacidade a longo prazo e de morte em todo o mundo 1. A recuperação da função neuronal é, na maioria dos casos, apenas parcial. Até agora, as opções de tratamento são muito limitadas, em particular devido à janela de tempo estreita para trombólise 2,3. Que determina os métodos para acelerar a recuperação de acidente vascular cerebral continua a ser um objectivo médico prime; No entanto, isto tem sido dificultado pela insuficiência de conhecimentos mecanísticos para o processo de recuperação. pesquisadores tempos experimentais frequentemente empregam modelos de roedores de isquémia cerebral focal. Para além da fase aguda, a investigação acidente vascular cerebral é cada vez mais centrada na fase sub-aguda e crónica após isquemia cerebral. A maioria dos pesquisadores AVC aplicar permanente ou tranSIENT oclusão da MCA em ratinhos ou ratos. Em pacientes, oclusões do MCA estão entre as causas mais frequentes de acidente vascular cerebral isquêmico 4. Além de oclusão proximal da MCA utilizando o modelo de filamento, oclusão cirúrgica do MCA distal é provavelmente o modelo mais utilizado na pesquisa acidente vascular cerebral experimental 5. Oclusão de um distal (à ramificação das artérias lenticulo-estriadas) MCA ramo normalmente poupa o estriado e afeta principalmente o neocórtex. oclusão do vaso pode ser permanente ou transitória. Alta reprodutibilidade do volume de lesão e as taxas de mortalidade muito baixas em relação ao resultado a longo prazo são as principais vantagens deste modelo. Aqui, demonstramos como realizar uma janela craniana (CW) preparação crônica lateral ao seio sagital e, posteriormente, como na cirurgia de induzir um acidente vascular cerebral distal debaixo da janela usando uma abordagem craniotomia. Esta abordagem pode ser aplicada para imagiologia sequencial de alterações agudas e crónicas após isquemia atravésepi-iluminação, confocal de varredura a laser, e de dois fótons de microscopia intravital.

A linha do tempo e os resultados representativos são mostrados nas Figuras 2 e 3. A preparação janela do crânio, com uma pequena janela lateral do crânio para o seio sagital superior (Figura 2 B, C, D) resulta em uma taxa de mortalidade e morbidade muito baixa quando realizada por um cirurgião experiente. Todos os 10 animais sobreviveram, e todos CW crónica pode ser usado para geração de imagens de alta qualidade, mesmo 28 dias após a ci...

oclusão cirúrgica de um ramo distal da artéria cerebral média (MCAo) é um modelo usado com freqüência em pesquisa acidente vascular cerebral experimental. Este manuscrito descreve a técnica básica de MCAo permanente, combinada com a inserção de uma janela craniana lateral, que oferece a oportunidade para microscopia intravital longitudinal em ratinhos.

Lateral Crônica Cranial Janela Preparação Ativa In Vivo Observação Após Distal Middle Cerebral Oclusão da Artéria em Ratos

Focal cerebral ischemia (i.e., ischemic stroke) may cause major brain injury, leading to a severe loss of neuronal function and consequently to a host of ...

O objetivo geral deste procedimento é a preparação de uma janela craniana lateral combinada com oclusão permanente da artéria cerebral média. Facilitar a microscopia intravital longitudinal em camundongos. Este método pode ajudar a investigar e responder a questões-chave no campo da pesquisa de isquemia cerebelar.A principal vantagem dessa técnica é que ela oferece imagens in vivo de alterações agudas e crônicas após o AVC. Comece administrando anestesia de acordo com um protocolo animal aprovado. Certifique-se de que um plano cirúrgico de anestesia foi alcançado administrando um estímulo de dor, como um beliscão no dedo do pé, e observando a ausência de uma reação.Em seguida, use um barbeador de roedores para remover o pelo do pescoço até os olhos. Fixe a cabeça do mouse em um quadro estereotáxico. Em seguida, cubra os olhos com pomada oftálmica para evitar a desidratação.Limpe a área raspada para remover todos os pelos e esterilize o couro cabeludo com três aplicações de etanol 74,1% e propranolol em tubo 10%. Usando um bisturi estéril, faça uma incisão na linha média do pescoço aos olhos. Em seguida, atravesse o retalho cutâneo com quatro suturas em tenda.Em seguida, raspe cuidadosamente o periósteo no lado esquerdo do crânio. E remova-o até o ponto em que o músculo temporal começa. Agora use uma micro broca para afinar o crânio na borda do retalho ósseo.Criar uma craniotomia frontoparietal de quatro milímetros de diâmetro. Aplique solução salina durante a perfuração para evitar lesões por calor. Uma vez perfurado, eleve o retalho ósseo com cânulas e remova-o com micro pinças.Irrigue a área com cuidado e extensivamente com solução salina. Misture a cola dental até obter a consistência adequada. Em seguida, aplique-o no osso ao redor da craniotomia.Coloque uma lamínula de seis milímetros de diâmetro sobre a cola preparada. E fixe-o com o resto da cola dental. A irrigação acelera o processo de cura e garante que a vedação seja estanque.Sonde a cola dental com uma pinça para garantir que esteja seca e dura. Depois que a cola cicatrizar, remova as suturas de tenda e feche a ferida com suturas de pele. Administre 0,5 mililitros de solução salina estéril por via subcutânea para equilíbrio de fluidos.Após a cirurgia, monitore o animal em uma gaiola de recuperação aquecida até se recuperar da anestesia. Certifique-se de que o animal esteja completamente recuperado antes de devolvê-lo a uma gaiola com outros animais. Sempre administre analgesia após a cirurgia.Aqui, 10 miligramas por mililitro de paracetamol são adicionados à água potável. Sempre forneça purê de ração animal em uma placa de Petri colocada no chão para simplificar a alimentação e evitar a perda de peso crítica após a cirurgia. A microscopia intravital pode ser realizada no primeiro dia após o preparo da janela craniana.Aplique anestesia com isoflurano de acordo com um protocolo aprovado. Fixe o animal em um suporte de cabeça e certifique-se de que o cone do nariz esteja bem encaixado. Abra a sutura da pele e limpe a janela com cotonetes e soro fisiológico estéril.Após 24 horas, a janela craniana deve ser preenchida com líquido cefalorraquidiano, o que permite a realização de exames de imagem. Realize o procedimento de oclusão da artéria cerebral média cinco dias após a preparação da janela craniana, quando a resposta imune ao procedimento tiver diminuído. Aqui, é mostrada uma visão geral após a craniotomia para indução de MCAO.A foto intraoperatória mostra os vasos após o primeiro e segundo contato bipolar. A ACM distal parece completamente ocluída. Esta imagem fornece uma visão geral final usando uma ampliação menor.Depois de induzir a anestesia cirúrgica com isoflurano como antes, raspe o pelo na área entre os olhos e a orelha, aplique pomada oftálmica em ambos os olhos e desinfete a pele e o pelo ao redor com solução alcoólica, como antes. Coloque o mouse em uma almofada de aquecimento controlada por feedback para manter a temperatura corporal. Coloque o animal na posição lateral e fixe o nariz na máscara de anestesia.Separe suavemente a pele da incisão feita para a preparação da janela craniana e identifique o músculo temporal por baixo. Em seguida, ajuste a energia do gerador de alta frequência e use o modo bipolar. Use uma pinça de eletrocoagulação para levantar cuidadosamente o músculo temporal do crânio, criando um retalho muscular sem remover totalmente o músculo.Em seguida, identifique a artéria cerebral média abaixo do crânio transparente na parte rostral da área temporal. Dorsal ao seio retro-orbital. Afine o crânio acima do ramo MCA com uma micro broca, enquanto irriga continuamente para evitar danos causados pelo calor.Em seguida, levante o osso e remova-o com uma micro pinça. Diminua a energia do gerador de alta frequência para três a cinco watts. Em seguida, aproxime-se da artéria por cima e toque-a suavemente com a pinça bipolar em ambos os lados sem levantar o vaso.Aguarde trinta segundos e, em seguida, toque suavemente a artéria com a ponta da pinça bipolar para garantir que o fluxo sanguíneo seja interrompido permanentemente. Após a oclusão da ACM, fixe o músculo temporal com um ou dois pontos na inserção do músculo para cobrir o defeito ósseo. Em seguida, suture a ferida e coloque o animal na gaiola aquecida até se recuperar.Esta RM foi realizada 24 horas após a cirurgia simulada e não mostra nenhum tecido cortical lesionado. Já esta RM, realizada 24 horas após a isquemia, retrata claramente a lesão isquêmica indicada por um asterisco, localizado abaixo da janela craniana crônica. Esta imagem mostra imagens epifluorescentes intravitais e imagens de dois fótons da vasculatura cortical para monitorar alterações na microcirculação.O volume do infarto, avaliado por ressonância magnética 24 e 96 horas após a isquemia, mostra um volume médio da lesão de 13,16 milímetros cúbicos em 24 horas e 12,2 milímetros cúbicos em 96 horas. Uma vez dominada, a preparação da janela craniana pode ser feita em cerca de 30 minutos. E o MCAO em cerca de 15 minutos.Após este procedimento, outros métodos, como ressonância magnética ou microscopia de fóton duplo, podem ser realizados para responder a perguntas adicionais. Essas novas técnicas permitem que os investigadores investiguem uma unidade neurovascular em nível molecular e celular. E mais particularmente, no cérebro vivo.

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Neurociência

Neste material de vídeo e suplementar, vamos mostrar um protocolo para a...

Imagem crônica de rato Visual Cortex usando uma preparação diluída crânio-

Microscopia intravital para seguir temporal e espacial eventos inflamatória e hemodinâmica na microcirculação pial.

Microscopia intravital da Microcirculação cérebro de camundongo usando uma janela fechada Cranial

O intraluminal cerebral média de oclusão da artéria modelo (MCAO) é o modelo mais freqüente dentre os modelos experimentais acidente vascular cerebral isquêmico. Aqui vamos demonstrar todo o modelo em detalhes com o guia de Laser Doppler fluxometria, e os resultados do seu representante.

Intraluminal artéria cerebral média Oclusão Model (MCAO) para Acidente Vascular Cerebral Isquêmico com Laser Doppler Fluxometria Orientação em Ratos

Este artigo descreve um método para a visualização de artérias cerebrais de rato através de uma janela craniana via craniectomia temporal, a fim de visualizar partes proximais da artéria cerebral média...

Utilizando uma janela craniana para Visualizar a artéria cerebral média Durante endotelina 1 Induzida por oclusão da artéria cerebral média

A fim de compreender a patofisiologia de acidente vascular cerebral, é importante o uso de modelos fiáveis. Este documento descreve um dos modelos de AVC mais utilizados em camundongos, denominado o meio modelo de oclusão da artéria cerebral (MCAo) (também denominado o filamento intraluminal ou modelo de sutura) com a reperfusão.

Abordagem cirúrgica para oclusão da artéria cerebral média e reperfusão induzida por acidente vascular cerebral em ratos

Apresentado aqui é um protocolo para a implantação de uma janela craniana crônica para a imagem longitudinal de células cerebrais em camundongos acordados e com a cabeça.

Implantação de uma janela craniana para imagem repetida em vivo em ratos acordados

Este protocolo demonstra um modelo único de acidente vascular cerebral em camundongo com um infarto de tamanho médio e uma excelente taxa de sobrevida. Esse modelo permite que os pesquisadores pré-clínicos do AVC estendam a duração da isquemia, usem camundongos envelhecidos e avaliem os resultados funcionais a longo prazo.

Modelo de Oclusão Transcraniana da Artéria Cerebral Média Modificada para Estudo de Resultados de Acidente Vascular Cerebral em Camundongos Idosos

Aqui, apresentamos um protocolo para estabelecer um modelo de oclusão da artéria cerebral média distal (dMCAO) por meio de eletrocoagulação transcraniana em camundongos C57BL/6J e avaliar o comportamento neurológico subsequente e as características histopatológicas.

Indução de AVC Isquêmico Agudo em Camundongos Usando a Técnica de Oclusão Distal da Artéria Média

Este protocolo descreve um método cirúrgico em duas fases para criar uma grande janela craniana revedável e preservadora da dura-máter em camundongos. Essa técnica permite registros eletrofisiológicos crônicos e multimodais a partir de redes transmissas profundas do cérebro, como a Rede de Modos Padrão, ao longo de várias semanas.

Protocolo cirúrgico para uma grande janela craniana reselável que permite registros eletrofisiológicos longitudinais e multimodais da rede de modo padrão do camundongo

O objetivo deste estudo foi estabelecer um método reprodutível para realizar uma craniectomia seguida de oclusão permanente e seletiva da artéria cerebral média em ratos, para aplicação em estudos experimentais de déficits de memória motora e espacial.

Oclusão Seletiva e Permanente da Artéria Cerebral Média em Ratos: Uma Abordagem Experimental para Estudar Déficits de Memória Motora e Espacial

Aprenda a preparar uma janela craniana lateral combinada com oclusão permanente da artéria cerebral média em camundongos para microscopia intravital longitudinal. Este método permite imagens in vivo de alterações agudas e crônicas após AVC.

Lateral Crônica Cranial Janela Preparação Ativa In Vivo Observação Após Distal Middle Cerebral Oclusão da Artéria em Ratos

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