Name: Uma abordagem fácil e eficiente para a produção de micelas reversível Disulfide Cross-linked (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-12-23T12:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 57 s
Description: Aprenda a sintetizar micelas reticuladas por dissulfeto para liberação direcionada de fármacos em terapia oncológica. Este método utiliza oxidação mediada por peróxido de hidrogênio para produção em larga escala.

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Os autores agradecem à Sra. Alisha Knudson pela ajuda editorial. Eles também gostariam de agradecer o apoio financeiro do NIH / NCI (3R01CA115483, para KSL), o Prêmio PRMRP do DoD (W81XWH-13-1-0490, para KSL), o NIH / NCI (1R01CA199668, para YL) e o NIH / NICHD (1R01HD086195, para YL).

declaração de ética: ratinhos nus atímicos fêmea (estirpe nu / nu), 6-8 semanas de idade, foram adquiridos e, em seguida, mantidos sob condições isentas de patogénios de acordo com as orientações da AAALAC e foram deixados a aclimatar durante pelo menos 4 dias antes de qualquer experimentos. Todos os experimentos com animais foram realizados em conformidade com as diretrizes institucionais e de acordo com o protocolo nº 07-13119 e nº 09-15584, aprovado pelo Uso de Animais e Comité Consultivo Cuidados Administrativo na Universidade da Califórnia, Davis. 1. Síntese de TD PEG 5K Cys 4 -Ebes 8 -CA 8 <ol><li> Em um balão de fundo redondo, dissolvem MeO-PEG 5 K-NH2 (2 g, 0,4 mmol) em 10-20 ml de dimetilformamida anidra (DMF) e arrefecer em gelo. </li><li> Em um copo de vidro, dissolver-se 3 equiv. de 1-hidroxi-6-cloro-benzotriazol (HOBt), 3 equiv. de N, N &#39;-diisopropilcarbodiimida (DIC), e 3 equiv. de (Fmoc) 2 Lys-OH em D anidroMF (10-15 ml). Agita-se durante 15-20 minutos numa placa de agitação magnética. </li><li> Adicionar a mistura ao balão de reacção que contém o MeO-PEG 5K -NH 2. Remover o banho de gelo e agita-se a mistura reaccional durante a noite à temperatura ambiente. </li><li> Confirmar a conclusão da reacção por cromatografia em camada fina (TLC), 16 e 17 de teste de Kaiser (uma cor amarela indica a ausência de livre NH2). Precipitar o produto polimérico 1 (MeO-PEG 5K-Lys (Fmoc-NH 2)), adicionando cerca de 200 ml de éter arrefecido com gelo para o frasco de reacção. Separa-se o polímero precipitado por centrifugação (6 min a 6000 xg e 4 ° C). <ol><li> Para executar TLC, manchar as amostras em placas de TLC de gel de sílica revestidas. Use diclorometano / metanol (9: 1) como a fase móvel. Observar pontos sob uma lâmpada UV depois de desenvolver as placas de TLC. Pode-se também utilizar reagente de coloração de ninidrina para visualizar locais de amina em uma placa quente. </li><li> para Kaiteste de Sor, coloque um pouco da amostra no tubo de vidro contendo o reagente de Kaiser. Aquecê-la a 100 ° C durante 5 min e olhar para a mudança de cor (se a cor da solução permanecer amarela, em seguida, a reacção está completa). </li></ol></li><li> Re-dissolve-se o produto no seio de DMF anidro (10-20 ml) e repetir a precipitação e centrifugação (ver passo 1.4). </li><li> Repetir o passo 1.5, e, em seguida lavar o precipitado de polímero três vezes com éter arrefecido com gelo. </li><li> Transferir o precipitado de polímero 1 a um balão de reacção limpo e ligar o balão a uma fonte de vácuo elevado para remover o éter residual. </li><li> Preparar e adicionar cerca de 20-30 mL de 20% (v / v) de 4-metilpiperidina no seio de DMF para um polímero intermediário. Agita-se até à dissolução completa. Executar a reacção durante 3 h. </li><li> Execute TLC 16 e teste de Kaiser (a cor azul confirma a presença de livre NH 2) 17 (veja o passo 1.4) para confirmar a completioN da reacção. Se a reacção está completa, proceder à precipitação éter, como mencionado para o produto de 1 (passos 1,4-1,6). </li><li> Seca-se o produto polimérico 2 (MeO-PEG 5K-Lys (NH2) 2) sob um vácuo. </li><li> Levar a cabo mais uma ronda de (Fmoc) 2-OH Lys-acoplamento no intermediário 2 (passos 1,1-1,7) para gerar o produto 3 (MeO-PEG 5K-Lys (Lys (NH-Fmoc) 2) 2). De proteger-(passos 1,8-1,10) os grupos Fmoc (4, MeO-PEG 5K-Lys (Lys (NH2) 2) 2) e pares (passos 1,1-1,7) o (Fmoc) Lis (Boc) -OH A gerar uma polilisina dendrítica da terceira geração (5, MeO-PEG 5k-Lys-Lys 2 - ((Fmoc) Lys (Boc)) 4) terminado com quatro grupos Boc e Fmoc sobre uma extremidade da cadeia PEG. </li><li> Transferir o polímero resultante intermediário 5 num frasco de reacção. em quantobalão de reacção eparate, preparar a 1: 1 (v / v) de ácido trifluoroacético (TFA) em diclorometano (DCM). Adicionar 15-20 mL de uma mistura 1: 1 de TFA / DCM (v / v) para o polímero intermediário 5. Agita-se a mistura até o polímero estar completamente dissolvido. Agita-se durante mais 3 horas. </li><li> Realizar TLC 16 e o teste de Kaiser (uma cor azul confirma a presença de NH livre 2) 17 (ver passo 1.4) para confirmar a conclusão da reacção. Se a reacção está completa, evapora-se a mistura de polímero-em-TFA / DCM com ar, até ser obtida uma solução viscosa. Proceder à precipitação éter, como mencionado para o produto 1 (passos 1,4-1,6). Seca-se o produto polimérico 6 (MeO-PEG 5k-Lys-Lys 2 - ((Fmoc) Lys (NH2)) 4) sob um vácuo. </li><li> Polímero de transferência intermédia 6 para um balão de reacção. Usar cerca de 40 ml de DMF anidro contendo 8 equiv. de N, N -diisopropylethylamine (DIEA) para dissolver o polímero intermediário 6. Em um copo de vidro, dissolver 12 equiv. de HOBt, 12 equiv. de DIC, e 12 equiv. de (Fmoc) Cys (Trt) -OH, em 20-25 ml de DMF anidro. Agitar durante 10-15 min, e, em seguida, adicionar a mistura de reacção para o balão de reacção contendo 6. Executar a reacção durante a noite. </li><li> Confirmar a conclusão da reacção com o TLC 16 e teste de Kaiser (veja o passo 1.4, uma cor amarela indica a ausência de livre NH 2) 17. Se a reacção está completa, proceder à precipitação éter, como mencionado para o produto de 1 (passo 1,4-1,6), para isolar o produto 7 (MeO-PEG-Lys-Lys 5K 2 - ((Fmoc) Lys - ((Fmoc) Cys (Trt))) 4. </li><li> Realizar-Fmoc de protecção no dia 7, como descrito na etapa 1.8, para se obter o produto 8 (PEG 5K-Lys-Lys 2 - (Lys (NH2) - (Cys (NH2) (Trt))) 4). Casal (Fmoc) PEG 2 -Suc-OH ( &quot;Ebes&quot; ligante, 24 equiv.) Num intermediário de acoplamento utilizando o procedimento descrito acima para o polímero HOBt / DIC-mediada para se obter o intermediário 9 (MeO-PEG 5K-Lys-Lys-Lys 2 4 - (Cys (Trt) ) 4 (Ebes (NH-Fmoc)) 8). </li><li> Realizar mais uma ronda de Fmoc desprotecção (passos 1,6-1,8) para obter intermediário 10 (MeO-PEG 5K-Lys-Lys-Lys 2 4 - (Cys (Trt)) 4 (Ebes (NH2)) 8). </li><li> Transferir o polímero intermediário 10 em um frasco de reacção e adicionar DMF anidro (cerca de 30-40 mL) para o dissolver. Num outro balão de reacção, dissolve-se 24 equiv. de CAOSu (preparado de acordo com o procedimento publicado anteriormente) em DMF anidro (20-30 ml) 18. Adicionar 48 equiv. de N, N-diisopropiletilamina e deixou-agita-se durante 10-15 min. Transferir o conteúdo para o balão de reacção que contém 10 e deixe correr a reacção overnight. </li><li> Confirmar a conclusão da reacção por TLC com 16 e o teste de Kaiser (ver passo 1.4; uma cor amarela indica a ausência de livre NH2) 17. Se a reacção está completa, proceder à precipitação éter, como mencionado para o produto de 1 (passos 1,4-1,6) para isolar o produto 11 (MeO-PEG 5K-Lys-Lys-Lys 2 4 - (Cys (Trt)) 4 -Ebes 8 -CA 8). Dialisar-o em água desionizada e liofilizar a amostra para se obter um pó branco. </li><li> Colocar o polímero intermediário 11 em um frasco de reacção. Preparar e adiciona-se 20 ml de TFA / 1,2-etanoditiol (EDT) / trietilsilano (TIS) / H 2 O (94 / 2,5 / 1 / 2,5, v / v) de mistura na solução de polímero. Agita-se a mistura até à dissolução completa. Executar a mistura reaccional durante 4 h. Confirmar a conclusão da reacção por TLC 16. </li><li> Sob o capô fume, soprando ar para dentro do polímero TFA / EDT / TIS / H 2O mistura até a solução se tornar viscosa. Proceda à precipitação éter, como mencionado para o produto de 1 (passos 1,4-1,6), para isolar o produto final, de 12 (PEG 4 5K Cys -Ebes 8 -CA 8). Dissolve-o em acetonitrilo e liofilizar-lo para se obter um pó branco. </li></ol> 2. Preparação de micelas de PTX-carregados <ol><li> Prepara-se uma PTX-carregado PEG 5K Cys -Ebes 4 8 8 -CA micela utilizando o método de evaporação do padrão. <ol><li> Dissolve-se 20 mg de TD com uma quantidade diferente de PTX (1-9 mg) em 1 ml de clorofórmio (CHCl 3). Remover o solvente utilizando um evaporador rotativo para se obter um filme de polímero homogéneo, seco. Reconstituir o filme com 1 ml de solução salina tamponada com fosfato (PBS) por vórtice, seguido de sonicação durante 30 min a 40 kHz, se necessário, para permitir a formação de micelas carregadas com fármaco. </li><li> Adicionar 6 ul de 3% (w / w) de H 2 O 2 (1 equiv. A Peee os grupos tiol) para oxidar os grupos tiol na TD. Usar a solução micelar para caracterização adicional uma vez que o nível de grupos tiol livres permanece a baixos valores de constantes, como indicado pelo teste 19 de Ellman. </li><li> Filtra-se a solução com um filtro de 0,22 uM para esterilizar a amostra. Analisar a quantidade de fármaco carregada nas micelas em um 20 sistema de HPLC depois de libertar a droga a partir das micelas através da adição de 9 vezes de acetonitrilo e realizando 10 minutos de sonicação. Usar uma coluna C18 para HPLC com acetonitrilo / água como fase móvel. </li><li> Calcula-se a carga de fármaco de acordo com a curva de calibração entre os valores de área de HPLC e as concentrações da droga de referência 11. NOTA: A eficiência de carga é definido como a proporção de fármaco carregados nas micelas para o conteúdo de medicamento inicial. </li></ol></li></ol> 3. Caracterizações de micelas <ol><li> Medir a distribuição do tamanho e dimensão da micelles com um instrumento de espalhamento dinâmico de luz (DLS) 29. Efectuar as medições à temperatura ambiente e manter a concentração de micelas a 1 mg / ml. NOTA: Para realizar a análise de tamanho de partícula, use PBS como em branco, e depois gravar o tamanho de partícula para amostras reais. Tome as leituras em triplicado para amostras, e depois calcular a média das leituras. </li><li> Use espectros de fluorescência para medir a concentração micelar crítica (CMC) de PEG-Cys 5K 4 -Ebes 8 -CA 8, antes e depois de reticulação com pireno como sonda fluorescente hidrofóbica, tal como descrito anteriormente 13,21. NOTA: Tipicamente, a concentração de micelas varia de 5 x 10 -7 a 5 x 10 -4 M. </li></ol> 4. Estabilidade de micelas de SDS com ou sem agentes redutores <ol><li> Preparar soluções stock de sulfato de dodecilo de sódio (SDS) a solução (7,5 mg / ml) e dissulfureto de micelas reticuladas (1,5 mg / ml) em PBS. Em seguida, ucantar as soluções de reserva, fazer uma mistura de solução em que a concentração final de SDS é de 2,5 mg / ml e a concentração de micela é de 1,0 mg / ml. </li><li> Medir a distribuição do tamanho e tamanho (tal como mencionado no passo 3.1) das soluções micelares, a intervalos de tempo predeterminados, com ou sem a presença de 10 mM de glutationa (GSH). </li></ol> Ensaio 5. A hemólise <ol><li> Avaliar o potencial hemolítico de micelas PTX-carregado, não-reticulada (PTX-NCMS) preparado de acordo com o procedimento previamente publicado em 11 e micelas reticuladas PTX-carregados (PTX-DCMs) utilizando sangue citratado fresco de ratinhos nus recolhido a partir da véu cauda. <ol><li> Recolher as células vermelhas do sangue por centrifugação da amostra de sangue (1,0 ml) a 1000 xg durante 10 min, lavagem três vezes com PBS, e em seguida, re-suspender as pelotas celulares com PBS a uma concentração final de 2%. </li></ol></li><li> Misturar 200 ul de suspensão de eritrócitos com concentrações diferentes (0,2 e 1,0mg / ml) de PTX-NCMs e PTX-DCMs, respectivamente, e incubar durante 4 horas a 37 ° C num agitador de incubador. </li><li> Centrifugar as misturas de micelas-eritrócitos a 3000 xg durante 5 min. Transferir 100 ul do sobrenadante de todas as amostras para uma placa de 96 poços. Medir a absorvância da hemoglobina livre no sobrenadante a 540 nm usando um leitor de microplacas. NOTA: As hemácias incubadas com Triton-100 (2%) e PBS são para ser utilizados como os controlos positivos e negativos, respectivamente. A hemólise por cento das hemácias é calculada com a seguinte fórmula: = hemólise de RBC (amostra OD - OD de controlo negativo) / (OD controlo positivo - controlo negativo OD) x 100%. </li></ol>

<ol><li>Zhang, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nanoparticles+in+medicine%3A+therapeutic+applications+and+developments%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Pharmacol.+Ther%22%5BJournal%5D)">Nanoparticles in medicine: therapeutic applications and developments.</a> Clin. Pharmacol. Ther. 83, 761-769 (2008).</li>
<li>Wang, A. Z., Langer, R., Farokhzad, O. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nanoparticle+Delivery+of+Cancer+Drugs%5BTitle%5D)+AND+%22Annu.+Rev.+Med%22%5BJournal%5D)">Nanoparticle Delivery of Cancer Drugs.</a> Annu. Rev. Med. 63, 185-198 (2012).</li>
<li>Iyer, A. K., Khaled, G., Fang, J., Maeda, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Exploiting+the+enhanced+permeability+and+retention+effect+for+tumor+targeting%5BTitle%5D)+AND+%22Drug+Disc.+Today+Targets%22%5BJournal%5D)">Exploiting the enhanced permeability and retention effect for tumor targeting.</a> Drug Disc. Today Targets. 11, 812-818 (2006).</li>
<li>Morachis, J. M., Mahmoud, E. A., Almutairi, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Physical+and+chemical+strategies+for+therapeutic+delivery+by+using+polymeric+nanoparticles%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmacol.+Rev%22%5BJournal%5D)">Physical and chemical strategies for therapeutic delivery by using polymeric nanoparticles.</a> Pharmacol. Rev. 64, 505-519 (2012).</li>
<li>Kamaly, N., Xiao, Z., Valencia, P. M., Radovic-Moreno, A. F., Farokhzad, O. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeted+polymeric+therapeutic+nanoparticles%3A+design%2C+development+and+clinical+translation%5BTitle%5D)+AND+%22Chem.+Soc.+Rev%22%5BJournal%5D)">Targeted polymeric therapeutic nanoparticles: design, development and clinical translation.</a> Chem. Soc. Rev. 41, 2971-3010 (2012).</li>
<li>Li, Y. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reversibly+stabilized+multifunctional+dextran+nanoparticles+efficiently+deliver+doxorubicin+into+the+nuclei+of+cancer+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Angew.+Chem.+Int.+Ed.+Engl%22%5BJournal%5D)">Reversibly stabilized multifunctional dextran nanoparticles efficiently deliver doxorubicin into the nuclei of cancer cells.</a> Angew. Chem. Int. Ed. Engl. 48, 9914-9918 (2009).</li>
<li>Miyata, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Block+catiomer+polyplexes+with+regulated+densities+of+charge+and+disulfide+cross-linking+directed+to+enhance+gene+expression%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Am.+Chem.+Soc%22%5BJournal%5D)">Block catiomer polyplexes with regulated densities of charge and disulfide cross-linking directed to enhance gene expression.</a> J. Am. Chem. Soc. 126, 2355-2361 (2004).</li>
<li>Chan, Y., Wong, T., Byrne, F., Kavallaris, M., Bulmus, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acid-labile+core+cross-linked+micelles+for+pH-triggered+release+of+antitumor+drugs%5BTitle%5D)+AND+%22Biomacromolecules%22%5BJournal%5D)">Acid-labile core cross-linked micelles for pH-triggered release of antitumor drugs.</a> Biomacromolecules. 9, 1826-1836 (2008).</li>
<li>Rijcken, C. J., Snel, C. J., Schiffelers, R. M., van Nostrum, C. F., Hennink, W. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hydrolysable+core-crosslinked+thermosensitive+polymeric+micelles%3A+synthesis%2C+characterisation+and+in+vivo+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Hydrolysable core-crosslinked thermosensitive polymeric micelles: synthesis, characterisation and in vivo studies.</a> Biomaterials. 28, 5581-5593 (2007).</li>
<li>Talelli, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Core-crosslinked+polymeric+micelles+with+controlled+release+of+covalently+entrapped+doxorubicin%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Core-crosslinked polymeric micelles with controlled release of covalently entrapped doxorubicin.</a> Biomaterials. 31, 7797-7804 (2010).</li>
<li>Xiao, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+self-assembling+nanoparticle+for+paclitaxel+delivery+in+ovarian+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">A self-assembling nanoparticle for paclitaxel delivery in ovarian cancer.</a> Biomaterials. 30, 6006-6016 (2009).</li>
<li>Li, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+size-tunable+nanocarrier+system+for+targeted+anticancer+drug+delivery%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Control.+Release%22%5BJournal%5D)">A novel size-tunable nanocarrier system for targeted anticancer drug delivery.</a> J. Control. Release. 144, 314-323 (2010).</li>
<li>Li, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Well-defined%2C+reversible+disulfide+cross-linked+micelles+for+on-demand+paclitaxel+delivery%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Well-defined, reversible disulfide cross-linked micelles for on-demand paclitaxel delivery.</a> Biomaterials. 32, 6633-6645 (2011).</li>
<li>Li, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Well-defined%2C+reversible+boronate+crosslinked+nanocarriers+for+targeted+drug+delivery+in+response+to+acidic+pH+values+and+cis-diols%5BTitle%5D)+AND+%22Angew.+Chem.+Int.+Ed.+Engl%22%5BJournal%5D)">Well-defined, reversible boronate crosslinked nanocarriers for targeted drug delivery in response to acidic pH values and cis-diols.</a> Angew. Chem. Int. Ed. Engl. 51, 2864-2869 (2012).</li>
<li>Li, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+smart+and+versatile+theranostic+nanomedicine+platform+based+on+nanoporphyrin%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Commun%22%5BJournal%5D)">A smart and versatile theranostic nanomedicine platform based on nanoporphyrin.</a> Nat. Commun. 5, (2014).</li>
<li>Belenki, B. G., Gankina, E. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Thin-Layer+chromatography+of+polymers%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Chromatogr.+A%22%5BJournal%5D)">Thin-Layer chromatography of polymers.</a> J. Chromatogr. A. 141, 13-90 (1977).</li>
<li>Kaiser, E., Colescott, R. L., Bossinger, C. D., Cook, P. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Color+test+for+detection+of+free+terminal+amino+groups+in+the+solid-phase+synthesis+of+peptides%5BTitle%5D)+AND+%22Anal.+Biochem%22%5BJournal%5D)">Color test for detection of free terminal amino groups in the solid-phase synthesis of peptides.</a> Anal. Biochem. 34, 595-598 (1970).</li>
<li>Pandey, P. S., Rai, R., Singh, R. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synthesis+of+cholic+acid-based+molecular+receptors%3A+head-to-head+cholaphanes%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Chem.+Soc.%2C+Perkin+Trans+1%22%5BJournal%5D)">Synthesis of cholic acid-based molecular receptors: head-to-head cholaphanes.</a> J. Chem. Soc., Perkin Trans 1. , 918-923 (2002).</li>
<li>Riddles, P. W., Blakeley, R. L., Zerner, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reassessment+of+Ellman%27s+reagent%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Enzymol%22%5BJournal%5D)">Reassessment of Ellman's reagent.</a> Methods Enzymol. 91, 49-60 (1983).</li>
<li>Ahuja, S., Rasmussen, H. Overview of HPLC method development for pharmaceuticals. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aAhuja%2C+S+%22HPLC+Method+Development+for+Pharmaceuticals%22">HPLC Method Development for Pharmaceuticals</a>. , Separation Science and Technology; 8. Elsevier Academic Press Inc. 1-11 (2007).</li>
<li>Li, Y., Pan, S., Zhang, W., Du, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+thermo-sensitive+core-shell+nanoparticles+for+targeted+paclitaxel+delivery%5BTitle%5D)+AND+%22Nanotechnology%22%5BJournal%5D)">Novel thermo-sensitive core-shell nanoparticles for targeted paclitaxel delivery.</a> Nanotechnology. 20 (6), 065104(2009).</li>
<li>Kato, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Disulfide+cross-linked+micelles+for+the+targeted+delivery+of+vincristine+to+B-cell+lymphoma%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Pharm%22%5BJournal%5D)">Disulfide cross-linked micelles for the targeted delivery of vincristine to B-cell lymphoma.</a> Mol. Pharm. 9, 1727-1735 (2012).</li>
<li>Lu, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulation+of+glutathione+synthesis%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Aspects+Med%22%5BJournal%5D)">Regulation of glutathione synthesis.</a> Mol. Aspects Med. 30, 42-59 (2009).</li>
<li>Xiao, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((%22OA02%22+peptide+facilitates+the+precise+targeting+of+paclitaxel-loaded+micellar+nanoparticles+to+ovarian+cancer+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">"OA02" peptide facilitates the precise targeting of paclitaxel-loaded micellar nanoparticles to ovarian cancer in vivo.</a> Cancer Res. 72, 2100-2110 (2012).</li>
<li>Koo, A. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Disulfide-cross-linked+PEG-poly%28amino+acid%29s+copolymer+micelles+for+glutathione-mediated+intracellular+drug+delivery%5BTitle%5D)+AND+%22Chem.+Commun%22%5BJournal%5D)">Disulfide-cross-linked PEG-poly(amino acid)s copolymer micelles for glutathione-mediated intracellular drug delivery.</a> Chem. Commun. 28, 6570-6572 (2008).</li>
<li>McLellan, L. I., Wolf, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glutathione+and+glutathione-dependent+enzymes+in+cancer+drug+resistance%5BTitle%5D)+AND+%22Drug.+Resist.+Update%22%5BJournal%5D)">Glutathione and glutathione-dependent enzymes in cancer drug resistance.</a> Drug. Resist. Update. 2, 153-164 (1999).</li>
<li>Karala, A. R., Lappi, A. K., Saaranen, M. J., Ruddock, L. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficient+peroxide-mediated+oxidative+refolding+of+a+protein+at+physiological+pH+and+implications+for+oxidative+folding+in+the+endoplasmic+reticulum%5BTitle%5D)+AND+%22Antioxid.+Redox+Signal%22%5BJournal%5D)">Efficient peroxide-mediated oxidative refolding of a protein at physiological pH and implications for oxidative folding in the endoplasmic reticulum.</a> Antioxid. Redox Signal. 11, 963-970 (2009).</li>
<li>Gabizon, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cancer+nanomedicines%3A+closing+the+translational+gap%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Cancer nanomedicines: closing the translational gap.</a> Lancet. 384, 2175-2176 (2014).</li>
<li>Nanotrac Nanotechnology Particle Size Measurement Solutions. , Available from:
 <a target="_blank" href="http://www.vahitech.com/Assets/Nano(US)Web.pdf">http://www.vahitech.com/Assets/Nano(US)Web.pdf</a> (2006).</li>
</ol>

Y. Li e K.S.L. são os inventores de uma patente pendente sobre sistemas de micelas reticuladas reversivelmente (pedido de patente dos EUA 61/485.774). K.S.L. é o cientista fundador da LamnoTherapeutics Inc., que planeja desenvolver os nanoterapêuticos descritos no manuscrito. Os demais autores declaram não haver interesses financeiros concorrentes.

Vários nanopartículas têm sido investigados por seu uso potencial na entrega da droga. doxorrubicina lipossomal e paclitaxel (PTX) -loaded de albumina de soro de nano-agregados humanos estão entre os Nanotherapeutics aprovados pela FDA para o tratamento do cancro. No entanto, embora clinicamente eficaz, ambos estes Nanotherapeutics são relativamente &quot;grande&quot; em tamanho, e que tendem a acumular-se no fígado e pulmões. As micelas poliméricas com tamanhos de partículas relativamente menores e capacidades de carga...

A nanotecnologia é um campo de fast-emergente que tem beneficiado um número de áreas biomédicas 1. Nanopartículas fornecer oportunidades para desenhar e ajustar as propriedades que não são viáveis ​​com outros tipos de agentes terapêuticos convencionais. Nano-transportadores aumentar a estabilidade dos medicamentos contra a biodegradação, prolongar o tempo de circulação da droga, superar problemas de solubilidade de drogas, e podem ser afinadas para a entrega de drogas específicas e para os agentes de imagem co-entrega de 1,2. sistemas de entrega baseados em nanopartículas promissoras em imagiologia e tratamento do câncer. Vasculaturas tumorais são permeável a macromoléculas e podem levar a uma acumulação preferencial de nanopartículas que circula nos locais de tumores por meio da permeabilidade aumentada e retenção (EPR) 3 efeito. Entre os vários nano-transportadores (por exemplo, lipos somas, hidrogeles, e micelas poliméricas) que estão a ser activamente prosseguidas como transportadores para drogas anti-cancro, micelas poliméricas têm ganho grande popularidade sobre o the última década 4,5. As micelas poliméricas são um sistema termodinâmico que, por administração intravenosa, potencialmente, pode ser diluído abaixo da concentração crítica de micelas (CMC), levando a sua dissociação em unimers. estratégias de cross-linking têm sido empregadas para minimizar a dissociação micelar em unimers. No entanto, as micelas excessivamente estabilizadas podem impedir o fármaco de libertação de nos locais alvo, reduzindo assim a eficácia terapêutica global. Várias abordagens químicas foram exploradas para fazer a ligação cruzada degradável em resposta ao redox ou a estímulos externos, tais como ligações dissulfureto redutível 6,7 e pH 8 clivável ou éster hidrolisável ligações 9,10. Descrevemos previamente a concepção e síntese de nanopartículas micelares que consiste em ácido eólico dendrítica (CA) e polietileno linear de blocos de glicol (PEG), copolímeros de referido como telodendrimers (TD) 15/11 </sup&gt;. Estes TDS são representados como PEG nK -CAy (onde n = peso molecular em quilodaltons (k), y = número de ácido eólico (CA) unidades). Eles são caracterizados pela sua pequena dimensão, longa vida de prateleira, e alta eficiência na drogas encapsulando tal como paclitaxel (PTX) e doxorrubicina (DOX) no núcleo hidrofóbico. Os blocos de construção da TD, tais como PEG, lisina, e CA, são biocompatíveis, e a presença de uma coroa de PEG pode conferir um carácter nanopartícula &quot;stealth&quot;, evitando a absorção não específica de nanopartículas micelares pelos sistemas reticuloendoteliais. polímeros lineares-dendrítica tiolada pode ser facilmente gerado através da introdução de cisteínas para a coluna vertebral de oligo-lisina dendrítica da nossa DT padrão. Este artigo apresenta um protocolo fácil para a produção de um sistema de entrega de droga micelar reversivelmente reticulado através da introdução de ligações cruzadas dissulfureto dentro do núcleo hidrofóbico de DT (Figura 1).

<table><tbody><tr><td>MeO-PEG5K-NH2</td><td>Rapp Polymere</td><td>125000-2</td><td></td></tr><tr><td>Fmoc-Lys(Fmoc)-OH</td><td>Aaptec</td><td>AFK107</td><td></td></tr><tr><td>Fmoc-Lys(Boc)-OH</td><td>Anaspec</td><td>AS-20132</td><td></td></tr><tr><td>Fmoc-Cys(Trt)-OH</td><td>Aapptec</td><td>AAC105</td><td></td></tr><tr><td>Dimetilformamida</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP1160-4</td><td></td></tr><tr><td>Éter etílico</td><td>Fisher Scientific</td><td>E134-20</td><td></td></tr><tr><td>N,N-Diisopropiletilamina</td><td>Sigma Aldrich</td><td>D125806</td><td></td></tr><tr><td>Ácido trifluoroacético</td><td>Sigma Aldrich</td><td>T6508</td><td>Corrosivo, manuseie com cuidado</td></tr><tr><td>4-metil piperidina</td><td>Alfa-Aesar</td><td>L-02709</td><td></td></tr><tr><td>Ligante Ebes</td><td>Anaspec</td><td>AS-61924</td><td></td></tr><tr><td>Ácido cólico</td><td>Sigma Aldrich</td><td>C1129</td><td></td></tr><tr><td>1,2-Ethanedithiol</td><td>Sigma Aldrich</td><td>02390</td><td>Punho interior da hotte. Luvas de alvejante após o uso.</td></tr><tr><td>Triisopropilsilano</td><td>Sigma Aldrich</td><td>233781</td><td></td></tr><tr><td>Clorofórmio (anidro)</td> <td>Sigma Aldrich</td><td>288306</td><td></td></tr><tr><td>Solução de peróxido de hidrogênio 30%</td> <td>Aaron Industries</td><td>NA</td><td></td></tr><tr><td>HoBt-Cl</td><td>Aaptec</td><td>CXZ096</td><td></td></tr><tr><td>DIC</td><td>Sigma Aldrich</td><td>D125407</td><td></td></tr><tr><td>Camundongos fêmeas atímicos nus (cepa Nu/Nu), 6&ndash; 8 semanas de idade</td><td>Harlan (Livermore, CA)</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

uma abordagem fácil e eficiente para a produção de micelas reversível disulfide cross-linked

A Facile and Efficient Approach for the Production of Reversible Disulfide Cross-linked Micelles

Nanomedicina é uma forma emergente da terapia que utiliza as propriedades únicas de partículas que são nanómetros em escala para aplicação biomédica. Melhorar a entrega da droga para maximizar os resultados terapêuticos e para reduzir os efeitos colaterais associados ao fármaco são alguns dos pilares da atual nanomedicina. As nanopartículas, em particular, têm encontrado uma ampla aplicação no tratamento do câncer. Nanopartículas que oferecem um alto grau de flexibilidade no desenho, aplicação e produção com base no microambiente do tumor são projetados para ser mais eficaz com tradução rápida para a prática clínica. O micelar nano-veículo polimérico é uma escolha popular para aplicações de entrega de drogas. Neste artigo, descreve-se um protocolo simples e eficaz para sintetizar, micelas reticuladas de dissulfureto carregadas com fármaco com base na auto-montagem de um copolímero anfifílico bem definida linear-dendrítica (telodendrimer, TD). TD é composta de polietileno glycol (PEG) como o segmento hidrofílico e um agrupamento de ácido eólico tiolado como a porção hidrofóbica por passos em anexo para formação de núcleo a um PEG terminado por amina usando química de péptidos à base de solução. drogas de quimioterapia, tais como paclitaxel (PTX), pode ser carregada utilizando um processo de evaporação de solvente padrão. O 2 a oxidação mediada foi previamente utilizado para formar dissulfeto ligações cruzadas intra-micelares de grupos tiol livres no TDs. No entanto, a reacção foi lento e não é viável para produção em larga escala. Recentemente, um método de oxidação de H 2 O 2 foi explorada como mediada por uma abordagem mais viável e eficiente, e que era 96 vezes mais rápido do que o método previamente relatado. Utilizando esta abordagem, 50 g de PTX-carregadas, nanopartículas reticuladas de dissulfureto ter sido produzido com sucesso, com distribuição de tamanho de partículas estreita e alta eficiência de carregamento de drogas. A estabilidade da solução de micelas resultante é analisada utilizando condições perturbadoras tais como co-incubação wom um dodecil sulfato de detergente, de sódio, com ou sem um agente redutor. As micelas, reticuladas de dissulfureto carregadas com fármaco demonstrou uma actividade menos hemolítica quando comparada com os seus homólogos não-reticulados.

Preparação e caracterização de, micelas Disulfide Cross-linked carregado com a droga Anfifílicos de polímero de PEG-Cys 5K 4 -Ebes -CA 8 8 é um polímero dendrítico, capaz de formar um sistema micelar dissulfureto reticulado para a entrega de drogas do cancro. Estruturalmente, que é definido como um oligómero dendrítica de ácidos eólicos (domínio hidrofóbico) ligadas a uma extremidade da molécula de ...

Para fornecer medicamentos contra o câncer a locais de tumor com alta especificidade e efeitos colaterais reduzidos, são necessários novos métodos baseados em nanopartículas. Aqui, descrevemos micelas reticuladas de dissulfeto que podem ser facilmente preparadas por oxidação mediada por peróxido de hidrogênio e são capazes de se dissociar eficientemente sob um ambiente tumoral redutor para liberar cargas úteis.

Uma abordagem fácil e eficiente para a produção de micelas reversível Disulfide Cross-linked

Nanomedicine is an emerging form of therapy that harnesses the unique properties of particles that are nanometers in scale for biomedical application. ...

O objetivo geral deste procedimento é fornecer um protocolo simples e eficaz para sintetizar micelas reticuladas de dissulfeto carregadas de drogas para administração direcionada de drogas. Este método pode ajudar a responder a perguntas no campo da nanomedicina. Por exemplo, como produzir efetivamente nanoformulações estáveis.A principal vantagem dessa técnica é que ela nos permite sintetizar facilmente micelas reticuladas de dissulfeto em larga escala, o que é extremamente desejável para estudos clínicos em pacientes. Para iniciar este procedimento, adicione dois gramas de monometil terminado polietilenoglicol monoamina a um balão de fundo redondo. Adicione dez mililitros de DMF anidro para dissolvê-lo.Frio no gelo. Adicionar três equivalentes de hidroxibenzotriazol, três equivalentes de CID e três equivalentes de lisina protegida com di-eth-moc a um balão de fundo redondo. Em seguida, adicione dez mililitros de DMF anidro.Mexa a mistura por 20 minutos em uma placa magnética. Em seguida, adicione a mistura ao balão de fundo redondo contendo polietilenoglicol com terminação monometila. Retirar o balão de fundo redondo do banho de gelo e agitar durante a noite à temperatura ambiente.Quando a agitação estiver concluída, confirme a conclusão da reação conforme detalhado no protocolo de texto. Adicione 200 mililitros de éter gelado ao balão de reação. Centrifugar a 6 000 x g durante seis minutos a quatro graus Celsius Para separar o polímero precipitado.Repita o processo de precipitação e centrifugação duas vezes, dissolvendo novamente o produto em 10 mililitros de DMF cada vez antes da precipitação. Em seguida, lave o polímero três vezes com éter gelado. Conecte o tubo a uma fonte de alto vácuo para remover o éter residual.Depois disso, adicione 20 mililitros de 20%4-metilpiperidina em DMF ao polímero. Mexa até que a dissolução esteja completa. Permita que a reação se divirta por três horas.Depois de confirmar a conclusão da reação, secar o produto polimérico. Agora, o polímero intermediário número dois sob vácuo e, em seguida, execute etapas adicionais de síntese de polímero, conforme descrito no protocolo de texto. Uma vez produzido o polímero intermediário número 10, transfira-o para um balão de reação.Adicione 30 mililitros de DMF anidro. Em um novo frasco, dissolver 24 equivalentes de ácido cólico ativado em 20 mililitros de DMF. Em seguida, adicione 48 equivalentes de N, N-Diisopropiletilamina.Mexa por 10 minutos. Depois de completa a agitação, transferir a mistura para o balão de reacção contendo o polímero intermédio número 10. Permita que a reação seja executada durante a noite.No dia seguinte, confirme a conclusão da reação e precipite o polímero intermediário número 11, conforme descrito no protocolo de texto. Em seguida, disque o polímero intermediário em água deionizada. Liofilize a amostra produzindo um pó branco.Após a preparação da micela, dissolva 20 miligramas de telodendrímero e cinco miligramas de PTX em um mililitro de clorofórmio. Remover o solvente com um evaporador rotativo para obter uma película homogénea de polímero seco. Reconstitua o filme com um mililitro de PBS por vórtice.Em seguida, sonicar por 30 minutos a 40 kilohertz. Adicione 3% de peróxido de hidrogênio para oxidar os grupos tióis no telodendrimmer. Execute etapas adicionais de preparação e verificação, conforme descrito no protocolo de texto.Após a conclusão da preparação da micela, meça o tamanho e a distribuição de tamanho das micelas com um instrumento dinâmico de dispersão de luz. Efectuar as medições à temperatura ambiente e manter a concentração micelar a um miligrama por mililitro. Em seguida, prepare uma solução estoque de 7,5 miligramas por mililitro de dodecil sulfato de sódio em PBS.Em seguida, prepare uma solução estoque de 1,5 miligrama por mililitro de micelas reticuladas de dissulfeto em PBS. Usando essas soluções de estoque, crie uma mistura na qual a concentração final de SDS seja de 2,5 miligramas por mililitro. E a concentração de micelas é de 1,0 miligramas por mililitro.Carregar a amostra e medir a dimensão e a distribuição da dimensão da solução micelar em intervalos de dois minutos. Depois de coletar sangue citrato fresco de camundongos nus, centrifugue uma amostra de sangue de um mililitro a 1.000 x g por 10 minutos para coletar glóbulos vermelhos. Lave-os três vezes com PBS e, em seguida, ressuspenda o pellet celular com PBS até uma concentração final de 2% Misture 200 microlitros de suspensão de eritrócitos com uma solução de 1,0 miligrama por mililitro de PTX NCMs.Em seguida, misture 200 microlitros de suspensão de eritrócitos com uma solução de 1,0 miligrama por mililitro de DCMs PTX. Incube essas misturas em um agitador de incubadora por quatro horas a 37 graus Celsius. Após a incubação completa, centrifugar as misturas a 3 000 x g durante cinco minutos.Transfira 100 microlitros do sobrenadante de cada amostra para uma placa de 96 poços. Depois disso, use um leitor de microplacas para medir a absorbância da hemoglobina livre a 540 nanômetros. Conforme medido pelo Teste de Ellman, a taxa de conversão de grupos tióis livres para ligações dissulfeto atingiu 85% após 48 horas de oxidação mediada por oxigênio.Aqui, um método de oxidação mediada por peróxido de hidrogênio é empregado como um método alternativo. A taxa de conversão chega a 88% em 30 minutos. O que é 96 vezes mais rápido do que a abordagem mediada por oxigênio.Usando essa abordagem mais eficiente, mais de 50 gramas de nanopartículas foram produzidas com um tamanho de partícula medido de 27 nanômetros com uma distribuição de tamanho estreita. A estabilidade de micelas reticuladas com PTX também é investigada em condições severas de ruptura de micelas. O tamanho das partículas das micelas permaneceu estável ao longo do tempo, indicando que elas permaneceram intactas.Após a introdução de GSH em uma concentração intracelular, o tamanho das micelas reticuladas de dissulfeto carregadas com drogas permanece intacto por 30 minutos e depois diminui abruptamente para um nanômetro. Isso significa a redução de um número crítico de ligações dissulfeto, um pré-requisito para a rápida dissociação das micelas. Os resultados representativos da atividade hemolítica das micelas carregadas com PTX são mostrados aqui.Os PTX NCMs têm uma contagem de lise de glóbulos vermelhos dependente da dose. No entanto, os DCMs PTX que possuem reticulação dissulfeto não mostram atividades hemolíticas observáveis. Uma vez dominada, esta técnica pode ser feita em outra se for executada corretamente.Ao tentar este procedimento, é importante lembrar de adicionar uma quantidade igual de peróxido de hidrogênio a 3% para a formação de dissulfeto. Após este procedimento, o ensaio de hemólise pode ser realizado para avaliar a compatibilidade sanguínea das micelas reticuladas com dissulfeto. Depois de assistir a este vídeo, você deve ter uma boa compreensão de como sintetizar efetivamente micelas reticuladas de dissulfeto carregadas de drogas.Não se esqueça de que alguns desses produtos químicos podem ser extremamente perigosos e precauções como o uso de equipamentos de proteção individual devem sempre ser tomadas durante a execução deste procedimento.

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Research

JoVE Journal

Biochemistry

Bioquímica

Um método para analisar a acessibilidade do solvente do grupo tiol de resíduos de cisteína...

Análise da acessibilidade de solvente de resíduos de cisteína em<em&gt; Milho rayado fino vírus</em&gt; Partículas semelhantes a vírus produzidas em<em&gt; Nicotiana benthamiana</em&gt; Plantas e cross-linking de peptídeos para VLP

Estudos biofísicos e bioquímicos das interações entre os domínios membrana-proteína embutidos enfrentar muitos desafios técnicos, a primeira das quais é a obtenção de material de estudo adequado. Este artigo descreve um protocolo para a produção e purificação de complexos estabilizados por dissulfureto transmembranares peptídicas que são adequadas para análise estrutural por ressonância solução magnética nuclear (RMN) e de outras aplicações analíticas.

Complexos de produção de transmembrana Disulfide-estabilizados Peptídicos para estudos estruturais

Uma técnica simples, robusta e escalável para funcionalizar e auto-montar macroscópicas filmes monocamada de nanopartículas-ligante em substratos sem modelo descrito neste protocolo.

Uma técnica para funcionalizar e auto-montar macroscópicas Nanopartículas-ligante monocamada Films em substratos sem Modelo

Este artigo descreve um processo de produção de nanopartículas poliméricas automontadas usando polimerização por dispersão mediada por luz visível. O uso de luz visível de baixa energia para controlar a polimerização permite a formação reprodutível de micelas semelhantes a vermes automontadas com alto teor de sólidos.

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Aqui nós apresentamos dois protocolos ultra rápidos para reconstituição das proteínas de membrana em fusogenic proteoliposomes e fusão de tais proteoliposomes com bilayers do lipid alvo para detergente livre entrega destas proteínas de membrana para a BICAMADA postfusion. A combinação dessas abordagens permite montagem rápida e facilmente controlada de sistemas complexos de membrana multi-componentes.

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O protocolo apresenta os parâmetros otimizados para a preparação de liposomos termosensíveis usando o dispositivo microfluido de microfluidos de micromixer herringbone escalonado. Isso também permite o coencapsulamento de doxorubicina e verde indocianina nos liposomos e a liberação fototérmica de doxorubicina para liberação controlada/desencadeada de drogas.

Produção microfluida de liposomos sensíveis à temperatura contendo lisolipóides

Aprenda a sintetizar micelas reticuladas por dissulfeto para liberação direcionada de fármacos em terapia oncológica. Este método utiliza oxidação mediada por peróxido de hidrogênio para produção em larga escala.

Uma abordagem fácil e eficiente para a produção de micelas reversível Disulfide Cross-linked

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