A confirmação da Isquemia Miocárdica e reperfusão em ratos usando Pad Superfície Eletrocardiografia

O objetivo geral deste procedimento é usar eletrocardiografia para confirmar uma isquemia e reperfusão miocárdica bem-sucedidas em camundongos. Este método pode ajudar a aumentar a consistência e a reprodutibilidade da cirurgia de isquemia e reperfusão. A principal vantagem dessa técnica é que ela permite avaliar o sucesso da isquemia e da reperfusão durante o procedimento, ao contrário de necessitar de uma análise pós-cirúrgica demorada.

Depois de preparar a almofada de ECG, coloque uma quantidade menor do que o tamanho de uma moeda de dez centavos de gel eletrolítico altamente condutor em cada um dos quatro eletrodos metálicos na almofada de ECG. Em seguida, pressione cada pata de um camundongo supino anestesiado em um pedaço de fita adesiva e prenda a fita a um eletrodo de ECG, tomando cuidado para que cada pata esteja em contato com o gel e o eletrodo. Em seguida, configure a máquina para que a forma de onda do ECG possa ser visualizada em tempo real, ajustando a resolução para levar em conta as diferenças de amplitude conforme necessário.

Se o pico da onda R ou o vale da onda Q estiver fora do quadro visual, ajuste a resolução até que toda a altura da forma de onda possa ser observada. Em seguida, limpe o bloco de ECG de ferramentas, cuidando para que o mouse fique parado e intocado e obtenha uma forma de onda de linha de base do ECG normal e saudável do animal. Para realizar a reperfusão de isquemia, comece removendo os pelos ao redor do local da cirurgia e desinfetando a área com soluções de betadina e álcool.

Em seguida, use um bisturi para fazer uma incisão vertical paralela ao esôfago e à traqueia, movendo suavemente os gânglios linfáticos para cada lado da incisão até que o tecido fino que cobre a traqueia fique exposto. Usando uma pinça, separe suavemente o tecido até que os anéis de cartilagem branca da traqueia fiquem visíveis. Em seguida, insira rapidamente o tubo de ventilação na boca em direção à garganta.

Quando a ponta do tubo estiver visível através da área exposta do pescoço, alinhe o tubo com o início da traqueia. Mexa suavemente o tubo de um lado para o outro enquanto aplica pressão para cima até que o tubo deslize para dentro da traqueia, conforme confirmado visualmente através do tecido translúcido. Quando o tubo estiver no lugar, use um laço de barbante para prender os dois dentes da frente do camundongo e prenda as pontas da corda na almofada de ECG para firmar a cabeça do animal e garantir que o tubo de ventilação não se mova durante a cirurgia.

Em seguida, conecte rapidamente o tubo de ventilação ao ventilador de roedores e ajuste as configurações de ventilação de acordo com o peso do animal. Cubra a traqueia exposta com uma gaze embebida em solução salina morna para evitar que o tecido seque. Em seguida, use um bisturi para fazer uma incisão vertical ao longo do lado esquerdo do esterno.

Usando uma pinça, separe suavemente a camada da fáscia da camada muscular, seguida de um corte cuidadoso das camadas musculares subjacentes sem danificar nenhum vaso sanguíneo visível. Use a pinça para puxar suavemente a terceira costela para cima. Em seguida, mantendo a pegada na costela com uma mão, use uma tesoura cirúrgica para cortar cuidadosamente o tecido intercostal entre a terceira e a quarta costela.

Quando os pulmões se retraírem, use a pinça para separar suavemente a fina camada de pericárdio ao redor do coração. Em seguida, mova as costelas para uma posição em que o coração fique visível entre as costelas. Para posicionar o coração de forma que a aurícula atrial esquerda fique facilmente visível, mova a pata esquerda inferior do mouse para que ela se sobreponha à pata direita inferior.

Localize a artéria coronária descendente anterior esquerda, ou LAD, abaixo da aurícula esquerda e insira rapidamente uma agulha de sutura cônica de seda 7-0 no miocárdio profundamente o suficiente para passar sob a DAE, mas não tão profundamente a ponto de penetrar na cavidade do ventrículo esquerdo. Segure a ligadura de sutura até que restem cerca de quatro centímetros de seda de sutura na extremidade livre e comece a dar um nó de sutura simples. Uma vez que a extremidade livre da seda de sutura tenha sido puxada através das alças para formar o nó, segure as extremidades livre e da agulha da seda de sutura com uma pinça e insira uma seção de aproximadamente um centímetro do tubo PE10 sob o nó formador no topo da superfície epicárdica.

Quando o tubo estiver no lugar, retorne a pata esquerda inferior ao seu eletrodo original e aperte o nó para que o tubo PE10 seja suturado ao coração. Libere todo o contato físico com o mouse para permitir que a forma de onda do ECG se estabilize por 10 segundos, verificando visualmente a forma de onda e registrando-a como o tempo de oclusão. Em seguida, se o ECG e as alterações na cor do miocárdio indicarem isquemia, dê um nó duplo na sutura ao redor do tubo PE10 e cubra a cavidade torácica aberta com gaze salina quente.

No final do período isquêmico, remova a gaze que cobre a cavidade torácica e visualize o coração. Corte a seda de sutura em cima do tubo PE10 e remova o tubo, seguido pela remoção suave da ligadura do miocárdio. Libere todo o contato físico com o mouse e permita que a forma de onda do ECG circule por 10 segundos, registrando a forma de onda como o tempo de reperfusão.

No ponto final experimental, ajuste a resolução para quaisquer alterações na amplitude, conforme necessário. Se a onda T mudar e o miocárdio voltar a ficar vermelho, indicando uma reperfusão bem-sucedida, suture o espaço intercostal com uma sutura de seda 5-0, enquanto aplica uma leve pressão no peito do camundongo para expelir qualquer excesso de ar que entrou na cavidade durante a cirurgia para fechar a cavidade torácica. Em seguida, suture as camadas musculares e a pele, permitindo que o camundongo se recupere totalmente em um ambiente de temperatura controlada constante com monitoramento.

Esta figura segue a progressão de um camundongo de uma classificação de linha de base até a reperfusão, com a primeira forma de onda exibindo um ritmo sinusal normal na linha de base registrada. A segunda forma de onda exibe o ECG um minuto após a ligadura ter sido amarrada e a artéria ficar ocluída, com um pico de onda T hiperagudo e elevado observado, em comparação com a linha de base, forma de onda pré-ligadura. A terceira forma de onda mostra uma elevação completa do segmento ST no ponto de tempo de cinco minutos, com a porção S do complexo não atingindo tão profundamente negativamente quanto na forma de onda da linha de base, antes de progredir para as ondas J e T.

Aos 20 minutos de isquemia, o intervalo QT se alargou e o segmento ST ainda está elevado, com ambas as seções permanecendo assim até a marca de 45 minutos. Após cinco minutos de reperfusão, evidências de ondas Q profundas e significativas começam a aparecer, e a onda T retorna à linha isoelétrica. Após 30 minutos, no entanto, as ondas Q negativas ainda permanecem e provavelmente são indicativas de danos permanentes e de que o tecido cardíaco moribundo está desviando as correntes elétricas ao redor da área danificada.

Além disso, a isquemia contínua e a progressão para lesão e infarto levam a uma projeção de onda T negativa aumentada que geralmente é permanente. Ao tentar este procedimento, é importante lembrar de obter um ECG de linha de base antes de fazer qualquer marca no animal. A análise de ECG pode ser aplicada para detectar quaisquer alterações elétricas ou anormalidades.

O coração pode ser processado posteriormente para análise de proteínas para investigar alterações proteômicas ou coloração de tecidos para investigar alterações proteômicas ou morfométricas. Depois de assistir a este vídeo, você deve ter uma boa compreensão de como usar a eletrocardiografia para confirmar o sucesso da isquemia e reperfusão miocárdica em um camundongo.