Name: A confirmação da Isquemia Miocárdica e reperfusão em ratos usando Pad Superfície Eletrocardiografia (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-11-24T14:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 23 s
Description: Aprenda a confirmar isquemia e reperfusão miocárdica em camundongos C57Bl/6 usando eletrocardiografia de superfície. Este método permite avaliação em tempo real durante o procedimento cirúrgico.

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Este trabalho foi apoiado por prêmios de Revisão de Mérito (BX002332 e BX000640) do Serviço de Pesquisa e Desenvolvimento de Laboratório Biomédico do Escritório de Pesquisa e Desenvolvimento de Assuntos de Veteranos, Institutos Nacionais de Saúde (R15HL129140) e fundos da conta de Pesquisa e Melhoria Institucional. O projeto é apoiado em parte pelo National Institutes of Health grant C06RR0306551.

Todos os procedimentos cirúrgicos realizados em animais devem ser realizadas de acordo com o Guia para o Cuidado e Uso de Animais de Laboratório 13 ou outras diretrizes éticas adequadas. Os protocolos devem ser aprovados pelo comitê de bem-estar animal na instituição adequada antes de prosseguir. 1. Preparação para o ECG NOTA: Antes de começar, don equipamento de protecção individual, incluindo luvas, óculos e um casaco de laboratório limpo ou bata descartável. <ol><li> Limpe a almofada de ECG usando um não-álcool e solução de descontaminação com base não-lixívia. Gentilmente usar uma tarefa delicada wipe para apagar o excesso de solução para garantir que o bloco de eletrodo não se danifique. </li><li> Se a almofada de ECG tem uma característica de aquecimento, usá-lo. camundongos anestesiados tendem a perder o calor do corpo rapidamente. Aquece-se a almofada para 40-42 ° C para manter a temperatura corporal normotérmica de 37 ° C durante toda a cirurgia 14. Monitorar temperamento corpoAture usando um termômetro retal. Ajustar a temperatura do rato conforme necessário para manter a temperatura do corpo ~ 37 ° C. </li><li> Como a maioria das toracotomias são executadas com o mouse deitado de costas (supino), garantir que a alternância é virado para a configuração &quot;supino&quot;. Muitas almofadas ECG tem uma função para alternar entre as posições prona e supina. Fracasso para selecionar a orientação correta pode resultar em deturpação de eventos eletrocardiográficos. </li><li> Anestesiar rato usando 5% de isoflurano inalado e 1 L / min de oxigénio. Uma vez rato é anestesiado, rato transferência para ECG almofada equipado com uma anestesia nariz-cone e reduzir isoflurano a 2% e 1 L / min de oxigénio. Confirmar a anestesia adequada, garantindo mouse não reagir quando o pé do mouse é beliscado com uma pinça. </li><li> Aplique uma camada fina de pomada lubrificante ocular sobre os olhos do rato para evitar ressecamento e danos à córnea, enquanto anestesiados. </li><li> Limpar as patas do rato com um lenço umedecido para remover todo o fundamento visívelque pode ser preso às patas ou pode interferir com a transmissão de impulsos eléctricos a partir das patas para a almofada de ECG. patas secos com um pano. </li><li> Aplique uma pequena quantidade (um pouco menor do que uma moeda de dez centavos USD) de gel de eletrólito altamente condutivo para cada um dos quatro eletrodos metálicos no teclado de ECG. Nota: Certifique-se de aplicar apenas uma pequena quantidade de gel como demasiado gel torna difícil para conter as patas para o bloco usando fita. Além disso, as patas são susceptíveis de deslizar para fora do sistema de retenção durante a cirurgia se eles estavam molhados antes de aplicar fita. </li><li> Com o mouse na posição supina, use fita adesiva médica clara para conter cada pata a seu eletrodo correspondente (Figura 1). Primeiro pressione cada pata ao seu pedaço de fita e, em seguida, aderir a fita para o pad ECG. Certifique-se de que cada pata é contido em contacto com o gel do electrólito e do eléctrodo. </li></ol> 2. Aquisição do ECG <ol><li> Dependendo do equipamento utilizado para a aquisição de ECG, configura a máquina de modo que a forma de onda do ECG podem ser visualizados em tempo real. Para registos de ECG, utilizando as configurações de monitorização fisiológicas em uma máquina de ecocardiografia, uma imagem em modo B vivo terá a forma de onda do ECG correndo ao longo da parte inferior da tela. Nota: Consulte guias individuais do usuário de máquina para determinar a melhor forma de configurar o equipamento. </li><li> Permitir a visualização em tempo real de forma de onda ECG, pressionando a tecla de modo B em uma máquina de ecocardiografia ou o equivalente em outros dispositivos de gravação de ECG. <ol><li> Ajuste a resolução para explicar as diferenças de amplitude. Se o pico da onda R ou a calha (vale) da onda Q estão fora da moldura visual, ajustar a resolução até que toda a altura da forma de onda pode ser observada. Nota: Isto pode ser feito na guia configurações fisiológicas em uma máquina de ecocardiografia. Clique no aumento ou diminuição setas até que toda a forma de onda é visível. </li></ol></li><li> Qualquer vez que uma imagem é para ser obtained, limpe a almofada ECG de ferramentas. Tocar o mouse durante a gravação de ECG com uma pinça ou os dedos vai perturbar a forma de onda. Certifique-se de que o mouse ainda intocado e está na plataforma de ECG antes de gravar qualquer ECGs. </li><li> Use &quot;record&quot; da máquina ou recurso &quot;loja&quot; antes de fazer qualquer incisões cirúrgicas no mouse. Esta imagem será utilizada como uma base para comparação mais tarde. </li></ol> 3. Procedimento cirúrgico e gravação de ECG <ol><li> Injectar rato anestesiado com analgésico (buprenorfina, 1,5 g, intraperitoneal) antes de começar. Os detalhes da isquemia / reperfusão, intervenção cirúrgica pode também ser encontrada em outros lugares 5. </li><li> Remover os pêlos ao redor do local da cirurgia quimicamente ou mecanicamente e desinfectar a área com uma solução de betadine. Use um bisturi para fazer uma incisão vertical paralelo ao esôfago e traquéia. Suavemente mover os nódulos linfáticos para cada lado da incisão até que o tecido fino que cobre a traqueia éexposto. Usando fórceps, suavemente separar o tecido até que os anéis de cartilagem branca da traqueia são visíveis. Nota: Nós usamos geralmente Nair loção remoção de pêlos. A loção é aplicada sobre o local cirúrgico para ~ 1 min. Nair é, então, cuidadosamente lavado com soro fisiológico ou água. Este método é preferido porque no nosso laboratório de alta resolução ecocardiografia (que pode detectar folículos pilosos) é realizada antes e após a cirurgia. No entanto, deve ser tomado cuidado para evitar áreas sensíveis, como os órgãos genitais, e, em seguida, lavar bem o Nair off para evitar queimaduras potenciais da pele. </li><li> remover rapidamente o nariz do rato a partir do nariz-cone e inserir tubos de ventilação na boca do rato e para a garganta. Quando a ponta do tubo de ventilação é visível através da área exposta do pescoço, alinhar o tubo com o início da traqueia. Gentilmente mexer lado do tubo para o outro enquanto aplica pressão para cima até os slides tubo na traqueia que podem ser confirmadas visualmente ttravés da traqueia translúcido. </li><li> Certifique-se de que o rato permanece anestesiado durante o procedimento de intubação. Pausa de intubação e retornar o mouse para o nariz-cone se ele começa a se mexer. </li><li> Usando um laço de corda, gancho dois dentes da frente do rato através do laço e prenda com fita a string termina à almofada ECG para firmar a cabeça do rato e garantir o tubo de ventilação não se move durante a cirurgia. anexar rapidamente a tubulação de ventilação para ventilação roedores e ajustar as configurações de ventilação de acordo com o peso do mouse. tubo de ventilação de fita no lugar. </li><li> Cubra traqueia exposta do rato com uma gaze embebida em solução salina quente para manter o tecido de secagem. </li><li> Adicione uma incisão vertical, utilizando um escalpelo ao longo do lado esquerdo do esterno. </li><li> Usando fórceps, suavemente separar a camada de fáscia a partir da camada muscular. Corte cuidadosamente as camadas musculares subjacentes sem cortar os vasos sanguíneos visíveis. </li><li> Utilizando uma pinça, pegue a terceira costela e puxepara cima delicadamente. Manter controle sobre a costela com uma mão e usar uma tesoura cirúrgica para cortar cuidadosamente o tecido intercostal entre a terceira ea quarta costela. Certifique-se de que os pulmões não estão danificados. Nota: Os pulmões irá retrair profundamente na cavidade torácica quase imediatamente após a cavidade torácica é perfurada pela incisão cirúrgica devido à perda de gradiente de pressão. Espere até que os pulmões têm retraído antes de continuar. </li><li> Use uma pinça para agarrar e suavemente separar a camada fina de pericárdio que circunda o coração. </li><li> Inserir manualmente afastadores ou utilizar uma pinça como afastadores de nervura para mover as nervuras para uma posição onde o coração é visível entre as nervuras. Nota: É prática comum para mover pata inferior esquerdo do rato de modo a que esta se sobreponha à pata direita inferior durante a colocação da ligadura. Isto ajuda a posicionar o coração, de modo que o apêndice atrial esquerda ou orelha, é facilmente visível durante a colocação da ligadura. Esteja ciente de que ECG válido waveforms não será obtido enquanto a pata esquerda inferior está desligado do eléctrodo. Por esta razão, é aconselhável para voltar a pata para o seu eléctrodo, após a ligadura de sutura é passado através do tecido do miocárdio, mas antes de um nó é apertada. </li><li> Localize o LAD visualmente, abaixo da aurícula esquerda. Rapidamente inserir um 7-0 seda afilado agulha de sutura no miocárdio profundamente o suficiente para passar debaixo da LAD, mas não tão profundo como para penetrar a cavidade do VE. Puxar a sutura através da ligadura até que haja cerca de 4 cm de seda de sutura à esquerda na (não-agulha) extremidade livre da sutura ligadura. </li><li> Começam a amarrar um nó de sutura simples. Uma vez que a extremidade livre da sutura de seda foi puxado através dos laços de modo a formar o nó, pausa. </li><li> Segurando ambas as extremidades livres e agulha da seda de sutura com uma pinça, insira uma seção cm ~ 1 da PE-10 tubos por baixo do nó formando e sobre a superfície do epicárdio. </li><li> Se pata esquerda do rato é atravessada, voltar a pata a seu propor eletrodo. Apertar nó de modo a que o tubo de PE-10 é suturado ao coração. Libere todo o contato físico com o mouse para permitir ECG a ser gravado. </li><li> Permitir onda de ECG para percorrer para ~ 10 seg. Verifique ECG onda visual e forma de onda registro como &quot;Tempo de oclusão&quot;. Se a onda T não aumenta em amplitude dentro de 1 min, reavaliar colocação da ligadura. <ol><li> Se a amplitude da onda T não aumentar, quer descartar o animal do estudo ou tentar corrigir a colocação da ligadura. </li></ol></li><li> verificar visualmente a cor do miocárdio para confirmar empalidecendo isquémica do LV. </li><li> Se alterações no ECG e alterações na cor do miocárdio indicam isquemia, nó duplo a sutura em torno do tubo PE-10. </li><li> Cubra a cavidade torácica aberta com gaze salina morna. </li><li> Ficha de ECG a cada 5-10 min durante a duração do período isquémico. </li></ol> 4. Confirmação de reperfusão Usando ECG <ol><li> Remover salina gaze covetocar a cavidade torácica e visualizar o coração. </li><li> Utilize uma lâmina para cortar a sutura de seda no topo do tubo de PE-10. Uma vez que a ligadura é cortado, remover a seção de tubo PE-10 e retire cuidadosamente a ligadura de sutura do miocárdio. </li><li> Libere todo o contato físico com o mouse e permitir que a forma de onda ECG ~ 10 segundos para percorrer. onda de registro como &quot;Time de reperfusão.&quot; Continuar a registar ondas de ECG a cada 5-10 min até o ponto de tempo experimental desejada seja atingida. </li><li> Ajustar a resolução para mudanças na amplitude, conforme necessário. Se a onda T não altera após a remoção do tubo de PE-10 e ligadura, reperfusão não foi confirmada. <ol><li> Se a onda T não muda após a remoção do tubo, ou descartar o animal do estudo ou tentar corrigir a colocação da ligadura. </li></ol></li><li> inspecionar visualmente miocárdio para confirmar adicionalmente reperfusão pelo retorno à cor vermelha. </li><li> Fechar cavidade torácica por sutura do espaço intercostal com um 5-0fio de seda ao aplicar pressão suave para o peito do rato para expelir o excesso de ar que entrou durante uma cirurgia. Então suturar as camadas musculares e, finalmente, a pele. Nota: A aplicação de pressão para a cavidade torácica pode não ser suficiente para evacuar a cavidade de caixa de ar em todos os ratinhos. Portanto, o método da seringa e da agulha de evacuação deve ser empregue para assegurar que todo o ar foi expulso. </li><li> Grave o último ECG antes de virar a anestesia inalatória fora e remover as patas do rato dos eletrodos. Aumentar o oxigênio a 2 L / min e manter a ventilação até que o mouse recupera a consciência. </li><li> Permitir mouse para recuperar em um ambiente controlado de temperatura constante, por exemplo, almofada de aquecimento ou incubadora quente, para evitar a variabilidade do enfarte. Tratar com buprenorfina rato 24 horas após a cirurgia e em seguida, se necessário, tal como indicado pela escala de rato careta. Nota: Procedimento de reperfusão também é discutida em detalhe por Xu et al 5. </li></ol>

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Os autores não têm nada a divulgar.

Usando alterações no ECG como um método complementar para confirmar isquemia do miocárdio e reperfusão assegura o posicionamento preciso da ligadura oclusão. Precisão da colocação da ligadura é fundamental para a redução da variabilidade dos dados entre os animais. O LAD em um coração de rato é uma artéria difíceis de visualizar. Portanto, completando palidez visual, com alterações eletrocardiográficas vai ajudar a garantir o correto posicionamento do dano tecidual ligadura e resultante. Uma...

A doença cardíaca continua a ser a principal causa de morte em todo o mundo 1,2. Não só é o ventrículo esquerdo (VE) da câmara mais muscular, responsável pelo bombeamento de sangue do coração para o corpo inteiro 3, é um comum local da lesão cardíaca pós-enfarte do miocárdio 4. morte do tecido ventricular esquerda muitas vezes resulta em insuficiência cardíaca sistólica. modelos animais de doença cardíaca são fundamentais para o avanço da pesquisa cardiovascular biomédica. A estirpe C57BL / 6 de camundongos têm sido uma escolha popular para modelos animais devido ao seu tempo de reprodução rápida, de baixo custo e facilidade de alterações genéticas. A maioria dos modelos cirúrgicos murinos para o estudo de doenças cardíacas envolvem a oclusão da LAD ramo da artéria coronária esquerda. A LAD é chamado às vezes à esquerda obtusa marginal 5,6. O LAD fornece sangue ao anterior do ventrículo esquerdo e as paredes ântero-lateral. estudos de oclusão LAD visam induzir infartos anteriores, às vezes estendendo-se into das regiões de parede inferior e lateral 7. Dois modelos que são usados ​​com freqüência para estudos de infarto do miocárdio incluem infarto do miocárdio oclusão crônica e lesão de isquemia / reperfusão do miocárdio. A oclusão crônica é criado por sutura cirúrgica ao redor e bloquear permanentemente o fluxo de sangue através do LAD. A lesão de isquemia / reperfusão é criado muito da mesma maneira única com um transiente, geralmente 30-60 min, período isquémico. Para alcançar a isquemia transiente, os laços de oclus de sutura em torno do LAD e um tubo de PE-10 pequeno que é colocado paralelamente à ADA na superfície do epicárdio do coração, seguido por um período de reperfusão em que a tubagem e a oclusão de sutura é retirado e o sangue é deixado fluir uma vez mais através da artéria e no miocárdio. A cirurgia de isquemia / reperfusão foi considerado clinicamente relevante devido à natureza da lesão de reperfusão em paralelo com o tratamento de enfartes do humanos, que inclui promangioplastia pt coronariana e implante de stent da artéria, ou cirurgia de revascularização. Tipicamente, durante estas cirurgias, isquemia do VE em um coração de rato é confirmada pela palidez visível da parede miocárdica. No entanto, simplesmente realizando as cirurgias em uma almofada de eletrocardiograma (ECG) em condições de monitoramento constante, mudanças visíveis pode ser observada na forma de onda ECG, confirmando assim isquemia e reperfusão do miocárdio mouse. Embora o coração de murídeo é semelhante ao coração humano em muitos aspectos, incluindo a sua estrutura de quatro câmaras, os corações também têm diferenças. Uma diferença óbvia é a frequência cardíaca média de repouso de camundongos adultos é de 600 - 700 batidas por minuto (bpm), enquanto que a dos humanos adultos é ~ 60-100 bpm 8,9. Além disso, em ratinhos, as ondas de repolarização J e t, frequentemente fundir-se com o QRS complexo despolarização fazendo uma clara do segmento ST difícil discernir 10. Para complicar o processo de electrocardiographicallY confirmando isquemia do miocárdio, é a elevação da onda T e do segmento ST, que são utilizados como marcadores para o diagnóstico de lesão de isquemia e enfarte do miocárdio em seres humanos, clinicamente referido como ST E levation m yocardial i nfarction ou IAM. Uma das principais diferenças entre as formas de onda humana e murina é que o S-onda é imediatamente seguido ser um J-ondas que transfere diretamente para uma onda T negativa. Durante a isquemia miocárdica aguda em ratos diminui a amplitude da onda S e é directamente seguida por uma J-onda anormal e uma onda T invertido 11. A onda T não parece representar uma parcela significativa da repolarização em ratos 11. Apesar de nomenclatura e rato vs. diferenças humanas, ECG confirmação da isquemia miocárdica murino e reperfusão é ainda viável e relativamente simples. Por uma questão de simplificação da interpretação da forma de onda, o segmento entre o SJT é referido como ST-SEGMENT aqui. EAMCEST orientações publicadas em 2013 recomendar um tempo paciente porta-para-balão inferior a 90 min 12 .Este significa que o período de tempo desde a identificação de oclusão da artéria coronária do paciente até que a artéria é reaberto deve ser inferior a 90 min. O coração batendo está trabalhando constantemente e, portanto, tem um alto metabolismo oxidativo e um alto nível de consumo de oxigênio 3. Para proporcionar esta, uma rede de capilares é acessível a cada um dos miócitos 3. Leva apenas um coração alguns batidas de esgotar seu oxigênio e nutrientes. Em uma janela de 90 minutos, uma região isquêmica do coração em um ser humano terá sido impedido de receber entre 5.400 e 9.000 coração bate pena de sangue rico em oxigênio. Nessa mesma janela de 90 minutos, um rato teria 54.000 para 63.000 batimentos cardíacos. Os pontos de tempo experimentais para a lesão de isquemia / reperfusão murino são tipicamente entre 30 e 60 min. A importância de desenvolvering um método complementar de confirmar isquemia do miocárdio e reperfusão num modelo murino tem profundas implicações sobre a consistência e reprodutibilidade dos dados em estudos de isquemia / reperfusão miocárdica. A prática corrente de se observar visualmente o coração por uma mudança na cor do tecido não é adequada como um stand-alone de diagnóstico. Além disso, a reperfusão após a remoção do tubo de sutura e não é garantida. Embora a artéria não está mais ligada off, a artéria pode ter danos sofridos durante o procedimento e pode tornar-se impossível de reperfusão. Seria benéfico para ter um registro de alterações eletrocardiográficas para confirmar reperfusão em vez de confiar em observações de palidez do miocárdio e rubor (cor vermelha). Corações que não mostram os marcadores de lesão de isquemia / reperfusão pode então ser rapidamente sinalizado e uma decisão sobre como proceder podem ser feitas pelos investigadores. Por último, o estabelecimento de um registro de ECG muda da linha de base em todo the períodos de isquemia e reperfusão permite aos investigadores continuam a monitorar o coração após a cirurgia inicial. Os investigadores atualmente perder de vista o coração, logo que a cirurgia está concluída. ECG é uma maneira simples para obter insights sobre as mudanças que ocorrem nas horas miocárdio dias após a cirurgia. ECG registrados em pontos de tempo após a cirurgia poderia revelar ondas Q de desenvolvimento tardio indicando continuação ou piora da morte do tecido. No entanto, para calibrar eficazmente novos ou agravamento marcadores eletrocardiográficos, um ECG de base devem estar disponíveis para comparação. Este protocolo irá demonstrar como preparar, obter e interpretar o ECG para confirmar isquemia e reperfusão do coração mouse usando 8 - do sexo masculino 12 semanas de idade C57BL / 6.

<table><tbody><tr><td>Vevo 1100</td><td>Fujifilm Visual Sonics</td><td></td><td>Máquina de Ecocardiografia Placa</td></tr><tr><td>de Manuseio de Mouse</td><td>Fujifilm Visual Sonics</td><td></td><td>Placa de ECG Aquecida</td></tr><tr><td>Signa-Gel&nbsp;</td><td></td><td></td><td>Gel Multi-Eletrodo Altamente Condutor</td></tr> <tr><td></td><td>Parker</td><td>15-25</td> Finalidade <td></td></tr><tr><td>Transpore de Eletrólito Fita Médica</td><td>3M</td><td>1527-0</td><td></td></tr><tr><td>PI-Spray II</td><td>Inovações Farmacêuticas</td><td>NDC 36-2013-25</td><td>Agente de limpeza para placa de ECG</td></tr><tr><td>C57Bl6 Camundongos</td><td>The Jackson Laboratory</td><td>000664</td><td>Macho, 8 - 12 semanas</td></tr><tr><td>Isotesia-Isoflurano</td><td>Henry Schein</td><td>NDC 1169-0500-1</td><td></td></tr><tr><td>Excel</td><td>Microsoft</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Systane Lubrificante Noturno Pomada para os Olhos</td><td>Alcon</td><td>65050935</td><td></td></tr><tr><td>7-0 Perma-Hand Silk Sutures</td><td>Ethicon</td><td>640.O32</td><td></td></tr><tr><td>5-0 Perma-Hand Silk Sutures</td><td>Ethicon</td><td>K809. Tesoura Cirúrgica O32</td><td></td></tr><tr><td></td><td>ROBOZ</td><td>RS-5881</td><td></td></tr><tr><td>Fórceps</td><td>Ferramentas de Ciência Fina</td><td>11052-10</td><td></td></tr><tr><td>Gaze</td><td>Bio Nuclear Diagnostics Inc</td><td>DIS-022B</td><td></td></tr><tr><td>Porta-Agulhas</td> Ferramentas de <td>Ciência Fina</td><td>12565-14</td><td></td></tr><tr><td>Buprenex CIII&nbsp;</td><td>Patterson Veterinary</td><td>0-891-9756</td><td>Analgésico de Cloridrato de Buprenorfina&nbsp;</td></tr><tr><td>Produtos Betadine</td><td>Purdue</td><td>67618-150-08</td><td></td></tr><tr><td>Nair</td><td>Church e Dwight Co.</td><td>NRSL-22339-05</td><td></td></tr></tbody></table>

a confirmação da isquemia miocárdica e reperfusão em ratos usando pad superfície eletrocardiografia

Confirmation of Myocardial Ischemia and Reperfusion Injury in Mice Using Surface Pad Electrocardiography

Muitos modelos animais foram estabelecidos para o estudo do remodelamento miocárdico e insuficiência cardíaca devido ao seu status como a causa número um de mortalidade em todo o mundo. Em humanos, uma oclusão patológica se forma em uma artéria coronária e a reperfusão dessa artéria ocluída é considerada essencial para manter a viabilidade do miocárdio em risco. Embora essencial para a recuperação miocárdica, a reperfusão do miocárdio isquêmico cria sua própria lesão tecidual. A resposta fisiológica e a cicatrização de uma lesão de isquemia/reperfusão são diferentes de uma lesão de oclusão crônica. A lesão de isquemia/reperfusão miocárdica vem ganhando reconhecimento como um modelo clinicamente relevante para estudos de infarto do miocárdio. Por esse motivo, modelos animais paralelos de isquemia/reperfusão são vitais para o avanço da base de conhecimento sobre lesão miocárdica. Normalmente, a isquemia do coração do camundongo após a oclusão da artéria coronária descendente anterior esquerda (DA) é confirmada pela palidez visível do miocárdio abaixo da oclusão (ligadura). No entanto, isso oferece apenas uma maneira subjetiva de confirmar a colocação correta ou consistente da ligadura, pois existem várias artérias principais que podem causar palidez em diferentes regiões do miocárdio. Um método de registro de alterações eletrocardiográficas para avaliar a colocação correta da ligadura e a isquemia resultante, bem como a reperfusão, para complementar a palidez miocárdica observada, ajudaria a produzir tamanhos consistentes de infarto em modelos de camundongos. Por sua vez, isso ajudaria a diminuir o número de ratos usados. Além disso, as alterações eletrocardiográficas podem continuar a ser registradas de forma não invasiva e dependente do tempo após a cirurgia. Este artigo demonstrará um método de confirmação eletrocardiográfica de isquemia e reperfusão miocárdica em tempo real.

Um ECG normal de murino é apresentada na Figura 2 com marcadores alfabéticos para eventos eléctricos P, Q, R, S, J e T. P representa a despolarização atrial inicial. QRS é a onda de despolarização ao longo dos ventrículos. J é repolarização precoce e T representa a repolarização heterogêneo também conhecida como recuperação de 11. Deve notar-se que muitos laboratórios não utilizar a nomenclatura J-ondas e não se referem à SJT do segmento como a do segmento ST ...

Durante a cirurgia de isquemia/reperfusão miocárdica murina, a colocação correta da ligadura ocluída é normalmente confirmada pela observação visível da palidez miocárdica. Aqui, um método de confirmação eletrocardiográfica de isquemia e reperfusão, para complementar a palidez miocárdica observada, é demonstrado em camundongos C57Bl/6 machos.

A confirmação da Isquemia Miocárdica e reperfusão em ratos usando Pad Superfície Eletrocardiografia

Many animal models have been established for the study of myocardial remodeling and heart failure due to its status as the number one cause of mortality ...

O objetivo geral deste procedimento é utilizar a eletrocardiografia para confirmar um episódio bem-sucedido de isquemia e reperfusão miocárdica em camundongos. Este método pode ajudar a aumentar a consistência e a reprodutibilidade da cirurgia de isquemia e reperfusão. A principal vantagem desta técnica é que ela permite avaliar o sucesso da isquemia e da reperfusão durante o procedimento, ao contrário da análise pós-cirúrgica demorada.Após preparar o suporte do ECG, aplique uma quantidade de gel eletrolítico altamente condutivo menor que o tamanho de uma moeda em cada um dos quatro eletrodos metálicos no suporte do ECG. Em seguida, pressione cada pata de um camundongo anestesiado em decúbito dorsal contra um pedaço de fita adesiva e fixe a fita a um eletrodo do ECG, tomando cuidado para que cada pata entre em contato com o gel e com o eletrodo. A seguir, configure o aparelho para que a onda do ECG possa ser visualizada em tempo real, ajustando a resolução conforme necessário para compensar as diferenças de amplitude.Se o pico da onda R ou a depressão da onda Q estiver fora do campo visual, ajuste a resolução até que toda a altura da forma de onda possa ser observada. Em seguida, limpe o ECG de ferramentas, tomando cuidado para que o mouse permaneça imóvel e inalterado, e obtenha uma forma de onda de referência do ECG normal e saudável do animal. Para realizar a isquemia e reperfusão, comece removendo os pelos ao redor do local cirúrgico e desinfetando a área com soluções de betadine e álcool.Em seguida, use um bisturi para fazer uma incisão vertical paralela ao esôfago e à traqueia, movendo suavemente os linfonodos para cada lado da incisão até que o tecido fino que recobre a traqueia seja exposto. Com pinça, separe cuidadosamente o tecido até que os anéis brancos de cartilagem da traqueia fiquem visíveis. Então, insira rapidamente o tubo de ventilação na boca em direção à garganta.Quando a ponta do tubo for visível através da área exposta do pescoço, alinhe o tubo com o início da traqueia. Mova suavemente o tubo de um lado para o outro enquanto aplica pressão para cima até que o tubo deslize para dentro da traqueia, conforme confirmado visualmente através do tecido translúcido. Quando o tubo estiver posicionado, use um laço de barbante para prender os dois dentes da frente do camundongo e fixe as pontas do barbante no suporte de ECG para estabilizar a cabeça do animal e garantir que o tubo de ventilação não se mova durante a cirurgia.Em seguida, prenda rapidamente o tubo de ventilação ao ventilador para roedores e ajuste as configurações de ventilação de acordo com o peso do animal. Cubra a traqueia exposta com uma gaze embebida em solução salina morna para evitar que o tecido seque. Em seguida, use um bisturi para fazer uma incisão vertical ao longo do lado esquerdo do esterno.Usando pin&ccedil;as, separe suavemente a camada de f&aacute;scia da camada muscular, seguido de um corte cuidadoso das camadas musculares subjacentes sem danificar nenhum vaso sangu&iacute;neo vis&iacute;vel. Use a pin&ccedil;a para puxar suavemente a terceira costela para cima. Em seguida, mantendo a pin&ccedil;a na costela com uma m&atilde;o, use tesoura cir&uacute;rgica para cortar cuidadosamente o tecido intercostal entre a terceira e a quarta costela.Quando os pulmões tiverem recuado, use a pinça para separar suavemente a fina camada de pericárdio que envolve o coração. Em seguida, posicione as costelas de forma que o coração fique visível entre elas. Para posicionar o coração de modo que a aurícula atrial esquerda fique facilmente visível, mova a pata inferior esquerda do camundongo, fazendo-a sobrepor-se à pata inferior direita.Localize a artéria coronária descendente anterior esquerda, ou DAE, sob o átrio esquerdo, e insira rapidamente uma agulha de sutura cônica de seda 7-0 no miocárdio profundamente o suficiente para passar sob a DAE, mas sem penetrar profundamente a ponto de atingir a cavidade do ventrículo esquerdo. Segure o ligadura de sutura até que haja cerca de quatro centímetros de seda de sutura restante na extremidade livre e comece a fazer um nó simples de sutura. Uma vez que a extremidade livre da seda de sutura tenha sido puxada através das voltas para formar o nó, segure ambas as extremidades — a livre e a da agulha — da seda de sutura com pinça e insira uma seção de aproximadamente um centímetro de tubo PE10 sob o nó em formação, posicionado sobre a superfície epicárdica.Quando o tubo estiver no lugar, retorne a pata traseira esquerda à sua posição original no eletrodo e aperte o nó para que o tubo PE10 seja suturado ao coração. Libere todo contato físico com o camundongo para permitir que a onda ECG se estabilize por 10 segundos, verificando visualmente a onda e registrando esse momento como o tempo de oclusão. Em seguida, se as alterações no ECG e na cor do miocárdio indicarem isquemia, faça um segundo nó na sutura ao redor do tubo PE10 e cubra a cavidade torácica aberta com gaze aquecida com solução salina.No final do período isquêmico, remova a gaze que cobre a cavidade torácica e visualize o coração. Corte a seda cirúrgica posicionada sobre o tubo de PE10 e remova o tubo, seguido pela remoção suave da ligadura do miocárdio. Libere todo contato físico com o camundongo e permita que a onda ECG complete um ciclo por 10 segundos, registrando a onda como o momento da reperfusão.No ponto final do experimento, ajuste a resolução conforme necessário para qualquer alteração na amplitude. Se a onda T mudar e o miocárdio retornar à cor vermelha, indicando uma reperfusão bem-sucedida, feche o espaço intercostal com sutura de seda 5-0, aplicando pressão suave sobre o tórax do camundongo para expelir qualquer ar em excesso que tenha entrado na cavidade durante a cirurgia, a fim de fechar a cavidade torácica. Em seguida, suture as camadas musculares e a pele, permitindo que o camundongo se recupere completamente em um ambiente com temperatura constante e controle, com monitoramento.Esta figura acompanha a evolução de um camundongo desde uma avaliação inicial até a reperfusão, sendo que o primeiro traçado mostra um ritmo sinusal normal no registro da linha de base. O segundo traçado exibe o ECG um minuto após o fechamento da ligadura e a oclusão da artéria, com um pico de onda T elevado e hiperagudo observado em comparação com o traçado da linha de base, pré-ligadura. O terceiro traçado mostra uma elevação completa do segmento ST no momento de cinco minutos, com a porção S do complexo não atingindo uma profundidade negativa tão acentuada quanto no traçado de linha de base, antes de progredir para as ondas J e T.Após 20 minutos de isquemia, o intervalo QT está alargado e o segmento ST ainda se encontra elevado, com ambas as alterações persistindo até o momento de 45 minutos. Após cinco minutos de reperfusão, surgem evidências de ondas Q profundas e significativas, e a onda T retorna à linha isoelétrica. Após 30 minutos, no entanto, as ondas Q negativas ainda permanecem e provavelmente indicam dano permanente, bem como o desvio das correntes elétricas ao redor da área danificada pelo tecido cardíaco em degeneração.Além disso, a isquemia contínua e a progressão para lesão e infarto levam a uma projeção acentuada da onda T negativa, que geralmente é permanente. Ao realizar este procedimento, é importante lembrar-se de obter um ECG de referência antes de fazer qualquer marcação no animal. A análise do ECG pode ser aplicada para detectar quaisquer alterações ou anormalidades elétricas.O coração pode ser posteriormente processado para análise proteica com o objetivo de investigar alterações proteômicas ou para coloração tecidual com o intuito de investigar alterações proteômicas ou morfométricas. Após assistir a este vídeo, você deverá ter uma boa compreensão de como utilizar a eletrocardiografia para confirmar isquemia e reperfusão miocárdicas bem-sucedidas em um camundongo.

confirmation-myocardial-ischemia-reperfusion-injury-mice-using

Research

JoVE Journal

Medicine

Medicina

Estimulação elétrica programada fornece a capacidade para determinar as propriedades de condução do coração, ea possibilidade de induzir e terminar arritmias cardíacas usando protocolos de estimulação diferentes. Usando um cateter transvenoso, gravações de eletrograma intracardíaco pode ser obtido em camundongos após programado protocolos de estimulação elétrica para identificar substratos arritmogênicos.

Estimulação elétrica programada em Ratos

Alta freqüência de ultra-som Doppler é uma nova tecnologia para avaliar a função miocárdica regional. Este trabalho apresenta primeira evidência demonstrando aplicabilidade desta plataforma de imagem versátil para a medida repetida de tensão do miocárdio, dp / dt, e regurgitação mitral na isquemia-reperfundidos coração (IR) murina.

De alta freqüência Ecocardiografia de alta resolução: primeira evidência de não-invasivos Medida repetida de Strain miocárdico, contratilidade, e regurgitação mitral no coração Isquemia-reperfundidos murino

O procedimento cirúrgico utilizado para induzir o enfarte do miocárdio experimental em ratos começa com toracotomia esquerda entre a terceira e quarta das nervuras, a fim de visualizar a superfície anterior do coração e do pulmão esquerdo. A artéria coronária esquerda é ligada, a caixa é fechada e o rato é deixado a recuperar-se espontaneamente.

Técnica modificada para ligação da artéria coronária em ratos

O trauma cirúrgico induz uma resposta inflamatória. As citocinas e ligandos endógenos são conhecidos para modular o tamanho do enfarte do miocárdio após isquemia e reperfusão. Apresentamos um modelo modificado fechado de tórax murino de isquemia e reperfusão utilizando pesos pendurados para minimizar os efeitos de toracotomia.

Um modelo fechado de tórax murino de isquemia do miocárdio e reperfusão

Nós introduzimos um método cirúrgico para induzir experimental de isquemia / reperfusão (I / R) prejuízo para simular o infarto do miocárdio (MI) em modelos de mouse que permite uma maior clareza no posicionamento da ligadura na artéria descendente anterior esquerda (LAD) para aumentar a reprodutibilidade de experimentos MI em camundongos.

Um modelo murino de isquemia-reperfusão, através da ligadura da artéria Descendente Anterior Esquerda

Sob anestesia adequada, o coração de camundongo foi exteriorizado através do espaço intercostal, e o infarto do miocárdio foi induzido com sucesso pela ligadura da artéria descendente anterior (DA) usando materiais prontamente disponíveis na maioria dos laboratórios.

Um Método Simples Modificado para Indução de Infarto do Miocárdio em Camundongos

Descrevemos um método simples e reprodutível que pode induzir infarto do miocárdio ou lesão de isquemia-reperfusão miocárdica em camundongos por ligadura precisa da artéria coronária descendente anterior esquerda através de micromanipulação.

Indução de Infarto do Miocárdio e Lesão de Isquemia-Reperfusão Miocárdica em Camundongos

O presente estudo demonstra um modelo animal altamente reprodutível de lesão aguda de isquemia e reperfusão miocárdica regional em coelhos, utilizando uma minitoracotomia esquerda para casos de sobrevida ou uma esternotomia mediana para casos de não sobrevida.

Modelo de Lesão de Isquemia e Reperfusão em Coelhos

O presente protocolo descreve uma visão paraesternal modificada do eixo longo para localização rápida e precisa da artéria descendente anterior. Essa abordagem foi projetada para ser mais simples e fácil de usar, facilitando o exame de mudanças dinâmicas na reserva de fluxo coronariano após isquemia-reperfusão miocárdica em camundongos.

Avaliações dinâmicas da reserva de fluxo coronariano após reperfusão de isquemia miocárdica em camundongos

Este artigo apresenta uma técnica única de tórax fechado para induzir lesão de isquemia-reperfusão miocárdica (IRI) em camundongos. O método apresentado permite que os camundongos respirem espontaneamente enquanto induzem remotamente a isquemia miocárdica. Isso fornece acesso ao animal para estudar os processos dinâmicos de isquemia e reperfusão in situ e em tempo real por meio de imagens não invasivas.

Oclusão LAD acionada remotamente usando um cateter de balão em camundongos que respiram espontaneamente

Aprenda a confirmar isquemia e reperfusão miocárdica em camundongos C57Bl/6 usando eletrocardiografia de superfície. Este método permite avaliação em tempo real durante o procedimento cirúrgico.

A confirmação da Isquemia Miocárdica e reperfusão em ratos usando Pad Superfície Eletrocardiografia

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