Um Modelo de Cardiologia remodela Através constrição da Aorta Abdominal em Ratos

O objetivo geral do procedimento cirúrgico é fornecer uma plataforma simples para estudar a hipertrofia, remodelação e disfunção miocárdica. Esse método pode ajudar a responder questões-chave no campo cardiovascular, como a sinalização envolvendo hipertrofia cardio e remodelamento. Bem como a descoberta de novos alvos terapêuticos na cardiopatia hipertensiva.

A principal vantagem dessa técnica é que ela é um método minimamente invasivo que requer técnicas cirúrgicas muito simples e, no entanto, os resultados são altamente reprodutíveis. As implicações dessas técnicas se estendem à nossa terapia de doenças cardíacas hipertensivas. Uma vez que a constrição da aorta abdominal induz sobrecarga de pressão e, eventualmente, leva à hipertrofia cardiovascular, remodelação e insuficiência cardíaca.

Para começar, prepare uma agulha de seringa de calibre 22 usando uma pedra de amolar para embotar a ponta. Em seguida, usando um alicate, plique a agulha em ângulo reto. Prepare os materiais cirúrgicos necessários, incluindo a gaiola de recuperação e autoclave os instrumentos cirúrgicos.

Mantenha os ratos em torno de 200 gramas e mantenha-os sob ciclos claro-escuro de 12 horas a uma temperatura controlada com livre acesso a comida e água. Coloque o rato em decúbito dorsal em uma plataforma de cirurgia com uma almofada de aquecimento para manter a temperatura corporal. Depile completamente a área cirúrgica para evitar a contaminação da ferida pelo contato com o pelo.

Em seguida, com betadina ou outro reagente de limpeza, esfregue o abdômen bem barbeado. Em seguida, usando um bisturi, faça uma incisão de dois centímetros ao longo da linha média do abdômen. Em seguida, usando solução salina normal, umedeça os órgãos abdominais e mantenha os órgãos úmidos durante a cirurgia.

Usando bolas de algodão, desloque cuidadosamente os órgãos digestivos para o lado para expor a veia cava inferior e a região peritoneal posterior. Em seguida, identifique a aorta abdominal que fica justaposta e geralmente à esquerda da veia cava inferior. Agora, com uma pinça, perfure o peritônio para descobrir os vasos abaixo.

Isole suavemente a aorta abdominal adjacente às artérias renais e passe uma sutura de seda 4/0 de oito centímetros de comprimento sob o vaso entre as origens das artérias renais direita e esquerda. Faça um nó duplo solto com a sutura e deixe um laço de três milímetros de diâmetro. Em seguida, coloque a agulha embotada e dobrada de calibre 22 dentro do laço.

Aperte o nó ao redor da aorta e da agulha e, em seguida, remova imediatamente a agulha para obter uma constrição de 0,7 milímetro de diâmetro. Com suturas 6/0 feche a cavidade abdominal. Em seguida, use suturas simples interrompidas para fechar as incisões musculares e cutâneas.

Use tintura de iodo para esfregar o local da cirurgia para prevenir infecções. Para evitar a dor pós-cirúrgica, trate o animal com paracetamol e observe atentamente o animal até que ele recupere a consciência suficiente, conforme indicado pela livre circulação e ingestão de alimentos, e mantenha a decúbito esternal. Com 10 semanas de pós-operatório, pese o rato.

Depois de anestesiar o animal e confirmar a profundidade da anestesia, coloque o rato em uma bandeja de metal. Agora faça uma incisão de cinco centímetros na região torácica ao redor da linha média do processo xifóide. Usando uma pinça afiada, perfure o diafragma.

Em seguida, com uma tesoura, corte e remova a caixa torácica ao longo das linhas hemiclaviculares em ambos os lados para expor o coração. Extirpar cuidadosamente o coração ao longo das bordas cardíacas e vasculares. Em seguida, remova suavemente o coração sem agarrar o tecido.

Monte o coração em um aparelho de perfusão de Langendorff modificado amarrando o tronco aórtico à agulha de perfusão. Em seguida, use o tampão de Krebs para perfundir o coração e lavar o sangue. Pese o coração e calcule a relação peso-coração / peso corporal.

Em seguida, usando uma máscara, coloque o órgão em 4% de paraformaldeído e fixe-o no gelo durante a noite. Depois de fixar o tecido cardíaco, coloque-o em um dispositivo de corte de tecido, corte-o em fatias de dois milímetros de espessura e coloque as seções em um de incorporação. Após a incorporação de parafina e seccionamento adicional de acordo com o protocolo de texto, desparafinize as lâminas colocando-as em um tanque com xileno por 30 minutos.

Em seguida, reidratar o tecido numa série de álcool diluído sequencialmente, seguida de água destilada. Em seguida, use uma solução vermelha de picrosirius adequada para cobrir completamente as seções de tecido e incubar por uma hora. Em seguida, use uma solução de ácido acético a 0,5% para enxaguar as lâminas duas vezes.

E enxágue as amostras duas vezes em álcool absoluto. Seque as amostras ao ar e monte-as em resina sintética com uma lamínula. Em seguida, use luz visível sob um microscópio com ampliação de 200X para obter imagens das lâminas.

Finalmente, calcule a porcentagem de zona vermelha positiva de picrosirius sobre a área total que indica a extensão da fibrose. Como mostrado aqui, o volume cardíaco aumentou após a cirurgia de constrição da aorta abdominal. Como demonstrado por uma maior relação peso cardíaco/peso corporal, que é um indicador de hipertrofia cardíaca.

Usando a coloração picrosirius red, o miocárdio fibrótico com conteúdo aumentado de colágeno pode ser distinguido das áreas normais. Conforme demonstrado nessas amostras coradas, a fibrose cardíaca aumentou após a cirurgia de constrição da aorta abdominal em comparação com os controles. Uma vez dominada, a cirurgia pode ser feita em 30 minutos se for realizada corretamente.

Após este procedimento, outros métodos, como a ecocardiografia, podem ser realizados para responder a perguntas adicionais sobre a função cardíaca. Após seu desenvolvimento, essa técnica abriu caminho para pesquisadores no campo da cardiopatia hipertensiva explorarem os mecanismos que envolvem cardiohipertrofia, remodelação e falha. Depois de assistir a este vídeo, você deve ter uma boa compreensão de como realizar a constrição da aorta abdominal para induzir cardio-hipertrofia e remodelamento miocárdico em ratos.