Transiente Artéria Cerebral Média Oclusão Modelo de AVC neonatal em ratos P10

O AVC neonatal é uma causa significativa de lesão cerebral precoce, exigindo um modelo translacional com padrões consistentes de lesão focal e alta reprodutibilidade para permitir o estudo. Este estudo descreve o procedimento cirúrgico detalhado para a criação de uma lesão de isquemia-reperfusão focal unilateral não hemorrágica em roedores equivalentes a termo.

O objetivo geral da oclusão transitória da artéria cerebral média em ratos neonatais é fornecer um modelo translacional de AVC em neonatos a termo. Este método pode ajudar a responder a questões-chave no campo da lesão cerebral isquêmica neonatal, entendendo os mecanismos de lesão e reparo no cérebro em desenvolvimento e como podemos modificá-los com diferentes estratégias terapêuticas. A principal vantagem dessa técnica é que ela fornece um modelo fisiologicamente preciso de AVC isquêmico arterial focal em neonatos e também inclui um componente de reperfusão, que é uma parte importante da progressão da lesão em neonatos humanos.

A demonstração visual desse modelo é fundamental, porque as etapas dessa cirurgia podem ser muito difíceis de aprender. As representações bidimensionais da anatomia arterial nem sempre demonstram adequadamente a natureza complexa da ramificação 3-D no rato. Comece pesando o filhote para garantir que ele esteja entre 19 e 21 gramas.

Depois de anestesiar o filhote com isoflurano inalado de acordo com os protocolos aprovados, certifique-se de que não haja resposta a um beliscão no pé. Mantenha a temperatura da superfície corporal com o uso de uma almofada de aquecimento durante a fase cirúrgica. Prenda o animal em decúbito dorsal com fita adesiva nas regiões dos ombros.

Use cotonetes estéreis para esfregar a área cervical anterior com etanol a 70%, seguido por um cotonete de solução de iodopovidona. Em seguida, infiltre localmente 0,25% de bupivacaína no local da incisão planejada. Em seguida, enquanto trabalha com um estereoscópio, faça uma incisão cervical anterior de cinco a sete milímetros na linha média para expor a artéria carótida comum.

Coloque dois a quatro afastadores para manter a cavidade aberta e a artéria exposta. Em seguida, localize a artéria carótida interna, a artéria occipital e a artéria carótida externa. Remova o tecido conjuntivo e a gordura das artérias para obter uma visão clara.

Depois de cortar 1,5 centímetros de fio de sutura trançado de seda 6-0, destrance a sutura, puxando fios simples. Certifique-se de que os fios individuais estejam limpos e não desgastados. Enquanto segura o fio de sutura dentro de uma pinça de 45 graus, varra a pinça em um arco sob a ACI para que as pontas surjam entre a ACI e a OA. Em seguida, pegue a ponta do fio de sutura e puxe-o para que a extremidade seja de fácil acesso.

Solte o fio da pinça e retire a pinça de baixo do ICA, invertendo o movimento anterior. Amarre uma ligadura temporária ao redor do ICA na base mais próxima de onde ele se separa do CCA. Retraia cuidadosamente a ACI lateralmente e, em seguida, use um clipe para prender o fio retrátil ao excesso de pele próximo à região da axila no lado oposto à incisão.

Certifique-se de que o fio retrátil esteja esticado o suficiente para interromper o fluxo sanguíneo antes de prosseguir para a próxima etapa. A artéria deve ser plana e pálida. Use uma pinça de 45 graus para segurar outro fio de sutura não trançado e enrole-o sob e ao redor da ACI como antes.

Posicione este fio lateralmente ao fio de retração. Em seguida, corte uma arteriotomia de 0,2 milímetro no meio do caminho entre as ligaduras amarradas e desamarradas, errando mais perto da ligadura amarrada. Agora, usando uma régua métrica, meça 10 milímetros de sutura de náilon revestida de silicone como sutura de oclusão.

Corte a sutura com uma permissão extra de dois a três milímetros para remoção durante a reperfusão. Segure a sutura de oclusão com uma pinça de 45 graus e use uma pinça reta para criar uma curva, marcando o ponto de parada do avanço. Introduza a sutura de oclusão na arteriotomia, apontando-a paralelamente à ECA e em direção à cabeça.

Avance suavemente a sutura até que a dobra seja alcançada. Em seguida, use a mecha posicionada lateralmente à fita de retração para amarrar uma ligadura temporária para prender a sutura da oclusão. Remova o clipe retrator e, em seguida, apare os fios de ambas as ligaduras temporárias, deixando o fio que será usado para remover o nó mais longo do que o fio usado para apertá-lo.

Remova os afastadores e feche a cavidade usando seda trançada 6-0 para criar três ou quatro suturas interrompidas. Remova o filhote da anestesia e coloque-o em uma almofada de aquecimento em ar ambiente. Monitore o filhote até que ele recupere a consciência suficiente para manter a decúbito esternal e certifique-se de que ele esteja totalmente recuperado antes de devolvê-lo à barragem.

Durante a oclusão, a ressonância magnética ponderada em difusão pode ser usada para verificar a indução apropriada da lesão. Essas imagens mostram lesão isquêmica contínua, indicada pela seta, detectada por DW-MRI durante MCAO transitória. Aproximadamente duas horas e 50 minutos após a oclusão da ACM, prepare os materiais cirúrgicos e, em seguida, inicie o procedimento de reperfusão anestesiando como antes.

Remova as suturas interrompidas e localize a junção, que é marcada pelas duas ligaduras e pela extremidade da cauda da sutura de oclusão. Desamarre cuidadosamente o nó mais lateral da ligadura temporária puxando o fio mais longo e remova o fio de sutura da cavidade. Exatamente três horas após a oclusão da ACM, retire lentamente a sutura de oclusão da artéria.

Não deve haver resistência. Use uma pinça para aplicar pressão na arteriotomia e, em seguida, desamarre cuidadosamente o nó medial para restaurar o fluxo sanguíneo. Depois de remover o fio de sutura do corpo, aplique um agente hemostático na arteriotomia para parar o sangramento.

O retorno da forma original da artéria e da cor vermelha confirma que o fluxo sanguíneo da ACI foi restaurado. Remova os afastadores e feche a cavidade usando seda trançada 6-0 para criar três ou quatro suturas interrompidas. Remova o filhote da anestesia e deixe-o se recuperar com monitoramento como antes antes de devolvê-lo à gaiola doméstica.

Inspecione os filhotes diariamente por cinco dias. Registre seus pesos e inspecione os locais da incisão de perto para uma cicatrização adequada. Essas seções cerebrais coronais coradas com violeta cresil de 50 mícrons posteriores a anteriores colhidas de animais P-38 demonstram lesões bastante graves após um TMCAO de três horas em P-10.

A seta indica formação de cisto ipsilateral e redução do volume cortical e estriado. O orifício redondo no lado esquerdo representa um identificador de hemisfério contralateral. Ao tentar este procedimento, é importante lembrar que, embora este procedimento seja conceitualmente simples, o sucesso e o domínio podem levar horas de otimização e prática.

Uma vez dominada, a oclusão pode ser concluída em menos de 10 minutos, enquanto a reperfusão pode ser concluída em menos de cinco minutos.