Name: tratados com Cefoperazone Rato Modelo de clinicamente relevante Clostridium difficile R20291 Strain (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-12-10T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 51 s
Description: Aprenda a implementar o modelo de infecção por Clostridioides difficile em camundongos tratados com cefoperazona usando a cepa R20291. Este protocolo detalhado permite monitorar a progressão clínica, enumerar bactérias e avaliar alterações histopatológicas.

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Os autores gostariam de agradecer a Trevor Lawley, do Wellcome Trust Sanger Institute, pelos esporos de C. difficile R20291, e a James S. Guy, da Faculdade de Medicina Veterinária da Universidade Estadual da Carolina do Norte, pelas células Vero, ambos utilizados neste manuscrito. A histopatologia animal foi realizada no LCCC Animal Histopathology Core Facility da Universidade da Carolina do Norte em Chapel Hill, com assistência especial de Traci Raley e Amanda Brown. O LCCC Animal Histopathology Core é apoiado em parte por um NCI Center Core Support Grant (2P30CA016086-40) para o UNC Lineberger Comprehensive Cancer Center. Também gostaríamos de agradecer a Vincent Young, Anna Seekatz, Jhansi Leslie e Cassie Schumacher pelas discussões úteis sobre o protocolo de ensaio de citotoxicidade de células Vero. O JAW é financiado pelo Prêmio Ruth L. Kirschstein do Serviço Nacional de Pesquisa Treinamento em Pesquisa T32OD011130 pelo NIH. O CMT é financiado pelo prêmio de desenvolvimento de carreira em metabolômica K01GM109236 pelo NIGMS do NIH.

<ol><li>Antibiotic Resistance Threats in the United States. , U.S.D.o.H.a.H. Services. Available from: 
 <a target="_blank" href="http://www.cdc.gov/drugresistance/pdf/ar-threats-2013-508.pdf">http://www.cdc.gov/drugresistance/pdf/ar-threats-2013-508.pdf</a> (2013).</li>
<li>Lessa, F. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Burden+of+Clostridium+difficile+Infection+in+the+United+States%5BTitle%5D)+AND+%22New+England+Journal+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Burden of Clostridium difficile Infection in the United States.</a> New England Journal of Medicine. 372, 825-834 (2015).</li>
<li>Gerding, D. N., Lessa, F. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+epidemiology+of+Clostridium+difficile+infection+inside+and+outside+health+care+institutions%5BTitle%5D)+AND+%22Infect+Dis+Clin+North+Am%22%5BJournal%5D)">The epidemiology of Clostridium difficile infection inside and outside health care institutions.</a> Infect Dis Clin North Am. 29, 37-50 (2015).</li>
<li>Dubberke, E. R., Olsen, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Burden+of+Clostridium+difficile+on+the+healthcare+system%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Infect+Dis%22%5BJournal%5D)">Burden of Clostridium difficile on the healthcare system.</a> Clin Infect Dis. 55, Suppl 2 88-92 (2012).</li>
<li>Kociolek, L. K., Gerding, D. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Breakthroughs+in+the+treatment+and+prevention+of+Clostridium+difficile+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Gastroenterol+Hepatol%22%5BJournal%5D)">Breakthroughs in the treatment and prevention of Clostridium difficile infection.</a> Nat Rev Gastroenterol Hepatol. , (2016).</li>
<li>Kelly, C. P., LaMont, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clostridium+difficile--more+difficult+than+ever%5BTitle%5D)+AND+%22N+Engl+J+Med%22%5BJournal%5D)">Clostridium difficile--more difficult than ever.</a> N Engl J Med. 359, 1932-1940 (2008).</li>
<li>Louie, T. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fidaxomicin+versus+vancomycin+for+Clostridium+difficile+infection%5BTitle%5D)+AND+%22N+Engl+J+Med%22%5BJournal%5D)">Fidaxomicin versus vancomycin for Clostridium difficile infection.</a> N Engl J Med. 364, 422-431 (2011).</li>
<li>Bartlett, J. G., Onderdonk, A. B., Cisneros, R. L., Kasper, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clindamycin-associated+colitis+due+to+a+toxin-producing+species+of+Clostridium+in+hamsters%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+infectious+diseases%22%5BJournal%5D)">Clindamycin-associated colitis due to a toxin-producing species of Clostridium in hamsters.</a> The Journal of infectious diseases. 136, 701-705 (1977).</li>
<li>Kelly, M. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improving+the+reproducibility+of+the+NAP1%2FB1%2F027+epidemic+strain+R20291+in+the+hamster+model+of+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Anaerobe%22%5BJournal%5D)">Improving the reproducibility of the NAP1/B1/027 epidemic strain R20291 in the hamster model of infection.</a> Anaerobe. , (2016).</li>
<li>Kuehne, S. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Importance+of+toxin+A%2C+toxin+B%2C+and+CDT+in+virulence+of+an+epidemic+Clostridium+difficile+strain%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+infectious+diseases%22%5BJournal%5D)">Importance of toxin A, toxin B, and CDT in virulence of an epidemic Clostridium difficile strain.</a> The Journal of infectious diseases. 209, 83-86 (2014).</li>
<li>Bartlett, J. G., Onderdonk, A. B., Cisneros, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clindamycin-associated+colitis+in+hamsters%3A+protection+with+vancomycin%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Clindamycin-associated colitis in hamsters: protection with vancomycin.</a> Gastroenterology. 73, 772-776 (1977).</li>
<li>Chen, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+mouse+model+of+Clostridium+difficile-associated+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">A mouse model of Clostridium difficile-associated disease.</a> Gastroenterology. 135, 1984-1992 (2008).</li>
<li>Lawley, T. D., Young, V. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Murine+models+to+study+Clostridium+difficile+infection+and+transmission%5BTitle%5D)+AND+%22Anaerobe%22%5BJournal%5D)">Murine models to study Clostridium difficile infection and transmission.</a> Anaerobe. 24, 94-97 (2013).</li>
<li>Best, E. L., Freeman, J., Wilcox, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Models+for+the+study+of+Clostridium+difficile+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Gut+Microbes%22%5BJournal%5D)">Models for the study of Clostridium difficile infection.</a> Gut Microbes. 3, 145-167 (2012).</li>
<li>Reeves, A. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+interplay+between+microbiome+dynamics+and+pathogen+dynamics+in+a+murine+model+of+Clostridium+difficile+Infection%5BTitle%5D)+AND+%22Gut+Microbes%22%5BJournal%5D)">The interplay between microbiome dynamics and pathogen dynamics in a murine model of Clostridium difficile Infection.</a> Gut Microbes. 2, 145-158 (2014).</li>
<li>Owens, R. C., Donskey, C. J., Gaynes, R. P., Loo, V. G., Muto, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antimicrobial-associated+risk+factors+for+Clostridium+difficile+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Infect+Dis%22%5BJournal%5D)">Antimicrobial-associated risk factors for Clostridium difficile infection.</a> Clin Infect Dis. 46, Suppl 1 19-31 (2008).</li>
<li>Theriot, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cefoperazone-treated+mice+as+an+experimental+platform+to+assess+differential+virulence+of+Clostridium+difficile+strains%5BTitle%5D)+AND+%22Gut+Microbes%22%5BJournal%5D)">Cefoperazone-treated mice as an experimental platform to assess differential virulence of Clostridium difficile strains.</a> Gut Microbes. 2, 326-334 (2011).</li>
<li>Martin, J. S., Monaghan, T. M., Wilcox, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clostridium+difficile+infection%3A+epidemiology%2C+diagnosis+and+understanding+transmission%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Gastroenterol+Hepatol%22%5BJournal%5D)">Clostridium difficile infection: epidemiology, diagnosis and understanding transmission.</a> Nat Rev Gastroenterol Hepatol. , (2016).</li>
<li>Connor, J. R., Johnson, S., Gerding, D. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clostridium+difficile+infection+caused+by+the+epidemic+BI%2FNAP1%2F027+strain%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Clostridium difficile infection caused by the epidemic BI/NAP1/027 strain.</a> Gastroenterology. 136, 1913-1924 (2009).</li>
<li>He, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Emergence+and+global+spread+of+epidemic+healthcare-associated+Clostridium+difficile%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Genet%22%5BJournal%5D)">Emergence and global spread of epidemic healthcare-associated Clostridium difficile.</a> Nat Genet. 45, 109-113 (2013).</li>
<li>Perez, J., Springthorpe, V. S., Sattar, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clospore%3A+a+liquid+medium+for+producing+high+titers+of+semi-purified+spores+of+Clostridium+difficile%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+AOAC+International%22%5BJournal%5D)">Clospore: a liquid medium for producing high titers of semi-purified spores of Clostridium difficile.</a> Journal of AOAC International. 94, 618-626 (2011).</li>
<li>Sorg, J. A., Dineen, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Laboratory+maintenance+of+Clostridium+difficile%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Protoc+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Laboratory maintenance of Clostridium difficile.</a> Curr Protoc Microbiol. , Chapter 9, Unit9A.1 (2009).</li>
<li>Edwards, A. N., Suarez, J. M., McBride, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Culturing+and+maintaining+Clostridium+difficile+in+an+anaerobic+environment%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+visualized+experiments+%3A+JoVE%22%5BJournal%5D)">Culturing and maintaining Clostridium difficile in an anaerobic environment.</a> Journal of visualized experiments : JoVE. , e50787(2013).</li>
<li>George, W. L., Sutter, V. L., Citron, D., Finegold, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Selective+and+differential+medium+for+isolation+of+Clostridium+difficile%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Selective and differential medium for isolation of Clostridium difficile.</a> J Clin Microbiol. 9, 214-219 (1979).</li>
<li>Knoblaugh, S., Randolph-Habecker, J., Rath, S. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aKnoblaugh%2C+S+%22Comparative+Anatomy+and+Histology%22">Comparative Anatomy and Histology</a>. Dintzis, S. M. , Academic Press. 15-40 (2012).</li>
<li>Ammerman, N. C., Beier-Sexton, M., Azad, A. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Growth+and+maintenance+of+Vero+cell+lines%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Protoc+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Growth and maintenance of Vero cell lines.</a> Curr Protoc Microbiol. , Appendix 4, Appendix 4E (2008).</li>
<li>Clostridium difficile Toxin/Antitoxin Kit Cat No.T5000. , TECHLAB. Available from: 
 <a target="_blank" href="http://www.techlab.com/wp-content/uploads/2013/06/t5000isert_rev_0307.pdf">http://www.techlab.com/wp-content/uploads/2013/06/t5000isert_rev_0307.pdf</a> (2007).</li>
<li>Theriot, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antibiotic-induced+shifts+in+the+mouse+gut+microbiome+and+metabolome+increase+susceptibility+to+Clostridium+difficile+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Antibiotic-induced shifts in the mouse gut microbiome and metabolome increase susceptibility to Clostridium difficile infection.</a> Nat Commun. 5, 3114(2014).</li>
<li>Koenigsknecht, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dynamics+and+establishment+of+Clostridium+difficile+infection+in+the+murine+gastrointestinal+tract%5BTitle%5D)+AND+%22Infect+Immun%22%5BJournal%5D)">Dynamics and establishment of Clostridium difficile infection in the murine gastrointestinal tract.</a> Infect Immun. 83, 934-941 (2015).</li>
<li>Theriot, C., Bowman, A., Young, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antibiotic-Induced+Alterations+of+the+Gut+Microbiota+Alter+Secondary+Bile+Acid+Production+and+Allow+for+Clostridium+difficile+Spore+Germination+and+Outgrowth+in+the+Large+Intestine%5BTitle%5D)+AND+%22mSphere%22%5BJournal%5D)">Antibiotic-Induced Alterations of the Gut Microbiota Alter Secondary Bile Acid Production and Allow for Clostridium difficile Spore Germination and Outgrowth in the Large Intestine.</a> mSphere. 1, 00045(2016).</li>
<li>Xiao, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+catalog+of+the+mouse+gut+metagenome%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+biotechnology%22%5BJournal%5D)">A catalog of the mouse gut metagenome.</a> Nature biotechnology. 33, 1103-1108 (2015).</li>
<li>Leslie, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Persistence+and+toxin+production+by+Clostridium+difficile+within+human+intestinal+organoids+result+in+disruption+of+epithelial+paracellular+barrier+function%5BTitle%5D)+AND+%22Infect+Immun%22%5BJournal%5D)">Persistence and toxin production by Clostridium difficile within human intestinal organoids result in disruption of epithelial paracellular barrier function.</a> Infect Immun. 83, 138-145 (2015).</li>
<li>Stabler, R. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+genome+and+phenotypic+analysis+of+Clostridium+difficile+027+strains+provides+insight+into+the+evolution+of+a+hypervirulent+bacterium%5BTitle%5D)+AND+%22Genome+Biol%22%5BJournal%5D)">Comparative genome and phenotypic analysis of Clostridium difficile 027 strains provides insight into the evolution of a hypervirulent bacterium.</a> Genome Biol. 10, 102(2009).</li>
<li>Valiente, E., Dawson, L. F., Cairns, M. D., Stabler, R. A., Wren, B. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Emergence+of+new+PCR+ribotypes+from+the+hypervirulent+Clostridium+difficile+027+lineage%5BTitle%5D)+AND+%22J+Med+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Emergence of new PCR ribotypes from the hypervirulent Clostridium difficile 027 lineage.</a> J Med Microbiol. 61, 49-56 (2012).</li>
</ol>

Os autores não têm nada a divulgar neste momento.

Este protocolo caracteriza o curso clínico, incluindo perda de peso, colonização bacteriana, citotoxicidade de toxinas e alterações histopatológicas no trato gastrointestinal, de camundongos tratados com antibióticos desafiados com esporos de C. difficile R20291. Existem várias etapas críticas dentro do protocolo em que a atenção aos detalhes é essencial. O cálculo preciso do inóculo de esporos de C. difficile é crítico. Este cálculo é baseado na enumeração original de estoque de esporos de C. diffi...

Clostridium difficile é um anaeróbio,, bacilo formador de esporos gram-positivo que causa diarreia com risco de vida 1. Infecção por C. difficile (CDI) está associada com aumento da morbidade e mortalidade humana e resulta em mais de US $ 4,8 bilhões em custos de saúde por ano 1-4. Em 2013, os Centros de Controle e Prevenção de Doenças categorizados C. difficile como um risco de resistência a antibióticos urgente, indicando que ele representa uma ameaça urgente de saúde pública 1. Atualmente, o tratamento antibiótico com vancomicina e metronidazol são considerados o padrão de cuidado para CDI 5. Infelizmente, a recorrência de CDI após o sucesso do tratamento com antibióticos é elevada, ocorrendo em 20 - 30% dos pacientes 2,5-7. Portanto, a descoberta de novas terapias contra este agente patogénico entérico é necessário. Para avaliar terapêuticas contra a C. difficile, um modelo animal de uma aproximação da doença humana em ACestirpe linically relevante é necessária. Inicialmente, os postulados de Koch foram estabelecidos para C. difficile em 1977 usando um modelo de hamster sírio tratados com clindamicina 8. Este modelo ainda é utilizado hoje para investigar os efeitos de toxinas C. difficile na patogênese 9,10. No entanto, CDI no modelo de hamster resulta em altas taxas de mortalidade e não harmoniza as manifestações de doenças crónicas insidiosas que pode ser visto em humanos com CDI 10,11. Com base na acessibilidade e reagente disponibilidade de plataformas de murino em pesquisa, um modelo de mouse CDI é relevante. Em 2008, um modelo de ratinho robusta de CDI foi estabelecida tratando ratos com um cocktail de antibióticos em água potável (canamicina, a gentamicina, a colistina, metronidazol e a vancomicina) durante 3 dias, seguido de uma injecção intraperitoneal de 12 de clindamicina. Este ratos rendido suscetíveis a colite CDI e grave. Dependerdendo da dose de inoculo administrada, uma gama de sinais clínicos e letalidade pode ser observada usando este modelo. Desde essa altura, vários regimes de antibióticos que têm sido investigados alterar a microbiota intestinal murino, diminuindo a resistência à colonização ponto em que o C. difficile pode colonizar o tracto gastrointestinal (revisto em Best et al. E Lawley &amp; Young) 13,14. Mais recentemente, um amplo espectro de cefalosporina, cefoperazona, dada na água de beber durante 5 ou 10 dias reprodutível torna camundongos suscetíveis ao CDI 15. Uma vez que a administração de cefalosporinas de terceira geração estão associados com um risco aumentado de CDI em seres humanos, o uso do modelo de cefoperazona reflecte com mais precisão da doença 16 de ocorrência natural. Ratinhos susceptíveis a C. difficile tratados com cefoperazona foram desafiados com ambos os esporos de C. difficile e células vegetativas de uma variedade de estirpes que varia em clínicarelevância e virulência 17. Apesar de alguns dos estudos originais utilizando C. difficile células vegetativas como a forma infecciosa, esporos de C. difficile são considerados o principal modo de transmissão 18. Na última década, C. difficile R20291, um NAP1 / BI / 027 tensão, surgiu, causando epidemias de CDI 19,20. Procurou-se determinar o curso clínico da doença quando os ratos tratados com cefoperazona foram desafiados com a estirpe de C. difficile clinicamente relevante e geneticamente-tratável, R20291. Este protocolo detalha o curso clínico, incluindo perda de peso, a colonização bacteriana, toxina da citotoxicidade, e alterações histopatológicas no tracto gastrointestinal dos ratinhos infectados com esporos de C. difficile R20291. Em geral, este modelo de rato revela-se uma plataforma experimental para o CDI aproximação doença humana. Este modelo de ratinho caracterizado pode assim ser utilizada para avaliar os efeitosde novas terapêuticas no melhoramento da doença clínica e no restabelecimento da colonização da resistência contra a C. difficile.

<table><tbody><tr><td>#62 Perisept Desinfetante Desinfetante Esporidial&nbsp;</td><td>SSS Navigator</td><td>48027</td><td>Este produto exigirá diluição conforme recomendado pelo fabricante</td></tr><tr><td>0.22 &mu; m filtro</td><td>Fisherbrand</td><td>09-720-3</td><td>Alternativa à placa de filtro para amostras individuais testadas no Vero Cell Assay</td></tr><tr><td>0,25% Tripsina-EDTA</td><td>Gibco</td><td>25200-056</td><td>Precisa ser aquecido em banho-maria a 37 &deg; C antes de usar</td></tr><tr><td>0,4% Trypan Blue</td><td>Gibco</td><td>15250-061</td><td></td></tr><tr><td>1% Peniciilina/Estreptomicina</td><td>Gibco</td><td>15070-063</td><td></td></tr><tr><td>10% inativado por calor FBS</td><td>Gibco</td><td>16140-071</td><td>Precisa ser aquecido em banho-maria a 37 &deg; C antes de usar</td></tr><tr><td>seringa de plástico de 1 ml&nbsp;</td><td>BD Medical Supplies</td><td>309628</td><td></td></tr><tr><td>1x PBS</td><td>Gibco</td><td>10010-023</td><td></td></tr><tr><td>2 ml Micro Centrífuga Tampa de Rosca</td><td>Corning</td><td>430917</td><td></td></tr><tr><td>96 poços placa de fundo plano de cultura de células</td><td>Costar Corning</td><td>CL3595</td><td></td></tr><tr><td>96 placa de filtro de 96 poços</td><td>Millipore</td><td>MSGVS2210</td><td></td></tr><tr><td>Selo Adesivo</td><td>ThermoScientific</td><td>AB-0558</td><td></td></tr><tr><td>Bacto Agar</td><td>Becton Dickinson</td><td>214010</td><td>Parte das placas TCCFA (veja abaixo)</td></tr><tr><td>Bacto Proteose Peptone</td><td>Becton Dickinson</td><td>211684</td><td>Parte das placas TCCFA (veja abaixo)</td></tr><tr><td>Cefoperazone</td><td>MP Bioworks</td><td>199695</td><td></td></tr><tr><td>Cefoxitina</td><td>Sigma</td><td>C47856</td><td>Parte das placas TCCFA (veja abaixo)</td></tr><tr><td>Kit de antitoxina Clostridium difficile</td><td>Tech Labs</td><td>T5000</td><td>Usado como controle para o Ensaio de Células Vero</td></tr><tr><td>Clostridium difficile Lista A</td><td>Lista Laboratórios Biológicos</td><td>152C</td><td>Controle positivo para Ensaio de Células Vero</td></tr><tr><td>D-cicloserina</td><td>Sigma</td><td>C6880</td><td>Parte das placas TCCFA (veja abaixo)</td></tr> <tr><td>Água Destilada</td><td>Gibco</td><td>15230</td><td></td></tr><tr><td>DMEM 1x Mídia</td><td>Gibco</td><td>11965-092</td><td>Precisa ser aquecido em banho-maria a 37 &deg; C antes do uso</td></tr><tr><td></td><td>Frutose Fisher</td><td>L95500</td><td>Parte das placas TCCFA (veja abaixo)</td></tr><tr><td>Hemocitômetro</td><td>Bright-Line, Sigma</td><td>Z359629</td><td></td></tr><tr><td>KH2PO4</td><td>Fisher</td><td>P285-500</td><td>Parte das placas TCCFA (veja abaixo)</td></tr><tr><td>MgSO4 (anidro)</td><td>Sigma</td><td>M2643</td><td>Parte das placas TCCFA (veja abaixo)</td></tr><tr><td>Millex-GS 0.22 &mu; Filtro M</td><td>Millex-GS</td><td>SLGS033SS</td><td>para placas TCCFA&nbsp;</td></tr><tr><td>Na2HPO4</td><td>Sigma</td><td>S-0876</td><td>Parte das placas TCCFA (veja abaixo)</td></tr><tr><td>NaCl</td><td>Fisher</td><td>S640-3</td><td>Parte das placas TCCFA (veja abaixo)</td></tr><tr><td>Lâmina de bisturi descartável número 10</td><td>Miltex, Inc</td><td>4-410</td><td></td></tr><tr><td>Placas PCR</td><td>Fisherbrand</td><td>14230244</td><td></td></tr><tr><td>Placa de Petri de plástico</td><td>Kord-Valmark Marca</td><td>2900</td><td></td></tr><tr><td>Espalhador de células em forma de L de plástico estéril</td><td>Fisherbrand</td><td>14-665-230</td><td></td></tr><tr><td>Seringa Stepper</td><td>Dymax Corporation</td><td>T15469</td><td></td></tr><tr><td>Taurocolato</td><td>Sigma</td><td>T4009</td><td>Parte das placas TCCFA (veja abaixo)</td></tr><tr><td>Água destilada ultrapura</td><td>Invitrogen</td><td>10977-015</td><td></td></tr><tr><td>C57BL/6J Ratos</td><td>The Jackson Laboratory</td><td>664</td><td>Os ratos devem ter de 5 a 8 semanas de idade</td></tr><tr><td>Microscópio de luz Olympus BX43F</td><td>Câmera Olympus Life Science</td><td></td><td></td></tr><tr><td>DP27</td><td>Olympus Life Science</td><td></td><td></td></tr><tr><td>cellSens Dimension software&nbsp;</td><td>Soluções Olympus para ciências da vida</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

tratados com cefoperazone rato modelo de clinicamente relevante<em&gt; clostridium difficile</em&gt; r20291 strain

Cefoperazone-treated Mouse Model of Clinically-relevant Clostridium difficile Strain R20291

Clostridium difficile é um patógeno entérico anaeróbio, gram-positivo, formador de esporos, que está associado ao aumento da morbidade e mortalidade e, consequentemente, representa uma ameaça urgente à saúde pública. A recorrência de uma infecção por C. difficile (CDI) após o tratamento bem-sucedido com antibióticos é alta, ocorrendo em 20-30% dos pacientes, necessitando da descoberta de novas terapêuticas contra esse patógeno. Os modelos animais atuais de CDI resultam em altas taxas de mortalidade e, portanto, não se aproximam das manifestações crônicas e insidiosas da doença observadas em humanos com CDI. Para avaliar a terapêutica contra C. difficile, é necessário um modelo de camundongo que se aproxime da doença humana utilizando uma cepa clinicamente relevante. Este protocolo descreve o modelo de camundongo cefoperazone de CDI usando uma cepa clinicamente relevante e geneticamente tratável, R20291. Técnicas para monitoramento clínico de doenças, enumeração bacteriana de C. difficile, citotoxicidade de toxinas e alterações histopatológicas em todo o CDI em um modelo de camundongo são detalhadas no protocolo. Em comparação com outros modelos de camundongos de CDI, este modelo não é uniformemente letal na dose administrada, permitindo a observação de um curso clínico prolongado de infecção concordante com a doença humana. Portanto, este modelo de camundongo cefoperazona de CDI prova ser uma plataforma experimental valiosa para avaliar os efeitos de novas terapêuticas na melhora da doença clínica e na restauração da resistência à colonização contra C. difficile.

Durante um estudo representativo, com 5 semanas de idade C57BL / 6 murganhos WT foram pré-tratados com cefoperazona na sua água de beber (0,5 mg / ml) durante 5 dias e deixados a 2 dias lavar com água de beber. Os ratinhos foram desafiados com 10 5 esporos de C. difficile R20291 através de sonda oral no dia 0 (Figura 1A). Os ratinhos foram monitorizados para a perda de peso e sinais clínicos (letargia, inapetência, diarréia e postura arqueada) do CDI ...

Este protocolo descreve o modelo do rato cefoperazona de infecção por Clostridium difficile (CDI), utilizando uma estirpe clinicamente relevante e geneticamente-tratável, R20291. Ênfase na monitorização clínica da doença, C. difficile enumeração bacteriana, a citotoxicidade de toxinas, e alterações histopatológicas em todo CDI em um modelo de rato estão detalhadas no protocolo.

tratados com Cefoperazone Rato Modelo de clinicamente relevante<em&gt; Clostridium difficile</em&gt; R20291 Strain

Clostridium difficile is an anaerobic, gram-positive, spore-forming enteric pathogen that is associated with increasing morbidity and mortality and ...

O objetivo geral deste protocolo é fornecer um guia passo a passo para implementar o modelo murino de infecção por Clostridium difficile com cefoperazone, com ênfase especial no monitoramento da doença clínica, enumeração de bactérias, citotoxicidade de toxinas e alterações histopatológicas após o desafio. Este protocolo detalhado ajudará pesquisadores a executar com precisão um modelo murino de infecção por Clostridium difficile, o que é essencial para o estudo da patogênese dessa bactéria e para a avaliação de novas terapias. A principal vantagem do uso desse modelo murino é que a exposição a um único antibiótico durante cinco dias torna os camundongos susceptíveis à colonização por C. difficile e a um curso clínico prolongado de infecção, semelhante à doença humana.Para começar, pegue a cepa estoque de C.difficile de interesse e vortex. Em uma cabine de fluxo laminar, dilua o estoque em água estéril em um tubo com tampa rosqueada até uma concentração de dez elevado à quinta esporos por 25 microlitros. Rotule a mistura como inóculo de esporos e coloque o tubo em um banho-maria a 65 graus Celsius por 20 minutos.Em seguida, na cabine de fluxo laminar, pipete 50 microlitros do inócu

cefoperazone-treated-mouse-model-clinically-relevant-clostridium

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Imunologia e Infecção

Fonte: Winston, J. A., et al. Modelo de camundongo tratado com cefoperazona da cepa clinicamente relevante de Clostridium difficile R20291.  J. Vis. Exp. (2016)Este vídeo demonstra o procedimento para inocular camundongos pré-tratados com antibióticos com esporos de Clostridium difficile para estabelecer um modelo murino de infecção para estudar patogênese e respostas do hospedeiro.

Estabelecendo um modelo camundongo para infecção por Clostridium difficile

Fonte: Winston, J. A. et al. Modelo de camundongo tratado com cefoperazona da cepa clinicamente relevante de Clostridium difficile R20291. J. Vis. Exp. (2016)Este vídeo demonstra a quantificação de Clostridium difficile em amostras fecais de um modelo de camundongo infectado usando técnicas de cultivo seletivo. Ele descreve os procedimentos para coleta de amostras, processamento anaeróbico, diluição serial e enumeração de colônias para avaliar a colonização bacteriana e as interações...

Quantificação de Clostridium difficile em Amostras Fecais de um Modelo de Camundongo Infectado

Citrobacter infecção rodentium fornece um modelo útil para o estudo de infecções bacterianas entéricas, bem como resposta imune do hospedeiro e colite em ratos. Este protocolo descreve a medição da integridade da barreira, a carga de patógenos e danos histológicos permitindo a caracterização completa de agentes patogénicos e de acolhimento contribuições para colite infecciosa murino.

O<em&gt; Citrobacter rodentium</em&gt; Modelo de Rato: Contribuições Estudar patógeno e hospedeiro para Colite Infecciosa

De imagem multi-modalidade é uma abordagem útil para estudar a colonização bacteriana em modelos de animais pequenos. Este protocolo descreve a infecção de camundongos com...

4D Multimodalidade de imagens de<em&gt; Citrobacter rodentium</em&gt; Infecções em Ratos

A capacidade de modelar infecções do trato urinário (ITU) é crucial para poder entender a patogênese bacteriana e gerar o desenvolvimento de novas terapêuticas. O objetivo deste trabalho é demonstrar modelos de camundongos de ITU experimental e ITU associada a cateter que recapitulam e predizem achados observados em humanos.

Criação e Caracterização da UTI e CAUTI em um modelo de rato

A eficácia dos antibióticos é mais comumente determinada pela realização de estudos cinéticos de morte e medição de unidades formadoras de colônias (UFCs). Ao integrar a microscopia eletrônica de varredura (MEV) com esses métodos padrão, podemos distinguir os efeitos farmacológicos do tratamento entre diferentes antibióticos.

Protocolo para Caracterizar as Alterações Morfológicas<em&gt; Clostridium difficile</em&gt; Em resposta ao tratamento antibiótico

Aqui, descrevemos um método para induzir a meningite meningocócica através de uma via intracisternal de infecção em camundongos adultos. Apresentamos um protocolo passo a passo de infecção meningocócica desde a preparação do inóculo para a infecção intracisternal; registre então a sobrevivência animal e avalie as cargas bacterianas em tecidos do murine.

Indução meningocócica meningite sorogrupo C em camundongos via parto intracisternal

Um modelo de camundongos de uropatogenic E. coli (UPEC) inoculação transuretral para estabelecer reservatórios de bexiga intracelular latente e subsequente exposição à bexiga a G. vaginalis para induzir a UTI UPEC recorrente é demonstrado. Também são demonstradas a enumeração de bactérias, citologia urinária, e fixação e processamento in situ bexiga para a varredura de microscopia eletrônica.

Infecção recorrente do trato urinário de Escherichia coli desencadeada por gardnerella vaginalis exposição bexiga em camundongos

Aqui, apresentamos um protocolo para estabelecer o modelo de camundongo com colite induzida por sódio com sulfato de dextrano livre de germes induzido por antibióticos para investigar o papel da microbiota intestinal na regulação dos efeitos positivos do Bacillus cereus na colite.

Investigando os efeitos aliviadores da administração de Bacillus cereus na colite por meio da modulação da microbiota intestinal

O parto prematuro (parto &lt; 37 semanas) é um problema de saúde global urgente com opções de prevenção e tratamento abaixo do ideal. Apresentamos um modelo de camundongo de parto prematuro induzido por infecção bacteriana vaginal ascendente e descrevemos como analisar a morbidade e mortalidade neonatal resultante.

Modelagem de infecção vaginal ascendente, parto prematuro e morbidade neonatal em camundongos

Este protocolo descreve as etapas necessárias para a colonização de camundongos com pks+ Escherichia coli em condições não inflamatórias, bem como métodos não invasivos para validação da colonização e avaliação da expansão de pks+ E. coli nas fezes.

Colonização com Escherichia coli de Murine pks+ Escherichia coli sob condições não inflamatórias

Aprenda a implementar o modelo de infecção por Clostridioides difficile em camundongos tratados com cefoperazona usando a cepa R20291. Este protocolo detalhado permite monitorar a progressão clínica, enumerar bactérias e avaliar alterações histopatológicas.

tratados com Cefoperazone Rato Modelo de clinicamente relevante

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