Examinando Assembleia proteosoma com recombinante Archaea proteasomas e não desnaturante PAGE: The Case for uma abordagem combinada

Este protocolo usa tanto co-expressão de subunidades e subunidade postlysis mistura para um exame mais aprofundado do conjunto proteassoma recombinante.

O objetivo geral deste experimento é analisar a montagem de um complexo multiproteico, como o proteassoma, usando subunidades recombinantes e eletroforese em gel de poliacrilamida não desnaturante, ou PAGE. Este método pode ajudar a responder a questões-chave no campo do proteassoma, como quais espécies intermediárias são encontradas ao longo da via de montagem desse complexo de proteínas. A principal vantagem dessa técnica é que ela permite a triagem rápida da montagem por duas abordagens paralelas, permitindo a detecção de intermediários dentro e fora da via. Este procedimento começa com a expressão bacteriana conforme descrito no protocolo de texto. Para realizar a lise bacteriana, descongele o palete de células induzidas co-expressando a combinação desejada de subunidades de proteassoma, em gelo por cinco minutos. Depois de descongelado, ressuspenda o palete em 600 microlitros de Lysis Buffer.Incubate a suspensão a 30