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DOI: 10.3791/54880-v
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Este protocolo apresenta um método para a recuperação morfológica dos neurónios durante patched registos electrofisiolicos utilizando biocitina de enchimento e de pós-processamento subsequente imuno-histoquímica. Mostramos que as seções encheu-biocitina grossas que estavam manchados e lamínulas pode ser restained com um segundo dia de anticorpos primários ou meses mais tarde.
O objetivo deste protocolo é apresentar um método eficiente para identificar neurônios corrigidos durante registros eletrofisiológicos usando biocitina e imunocoloração para recuperação da morfologia antes da recoloração com anticorpos específicos para determinar a identidade neuroquímica. Portanto, este método descreve um passo importante necessário para estudar a diversidade na estrutura e função neuronal. Isso é essencial para entender seu papel nas redes cerebrais.
A principal vantagem de usar técnicas de processamento sequencial é que ela elimina a perda de dados devido à incapacidade de recuperar a morfologia. Portanto, isso também ajuda a orientar os marcadores neuroquímicos a serem testados nessas células. Embora este método seja descrito para recuperação morfológica de células em seções espessas, ele também pode ser aplicado a seções finas e em amostras previamente coradas e montadas.
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