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Low-Density hipocampo Cultura Neuron primária
Low-Density hipocampo Cultura Neuron primária
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JoVE Journal Neuroscience
Low-Density Primary Hippocampal Neuron Culture

Low-Density hipocampo Cultura Neuron primária

Full Text
21,844 Views
17:46 min
April 18, 2017

DOI: 10.3791/55000-v

Reiko T. Roppongi*1,2, Kevin P. Champagne-Jorgensen*1,2, Tabrez J. Siddiqui1,2

1Department of Physiology and Pathophysiology,University of Manitoba, 2Kleysen Institute for Advanced Medicine,Health Sciences Centre

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Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Overview

This article describes a protocol for culturing low-density primary hippocampal neurons on glass coverslips over a glial monolayer. This method allows for high-resolution optical imaging and functional assays of mature neurons.

Key Study Components

Area of Science

  • Neuroscience
  • Cell Biology
  • Neurobiology

Background

  • Primary hippocampal neurons are crucial for studying neuronal function.
  • Low-density cultures reduce contamination from glial cells.
  • High purity cultures are essential for accurate imaging and functional assays.
  • This protocol aids in the adaptation of new researchers to complex procedures.

Purpose of Study

  • To provide a reliable method for culturing hippocampal neurons.
  • To facilitate high-resolution imaging of neuronal activity.
  • To enable functional assays of mature neurons in culture.

Methods Used

  • Culture of glial cells to support neuron growth.
  • Preparation and coating of glass coverslips.
  • Isolation and preparation of hippocampal neurons.
  • Use of paraffin wax beads to separate neuron and glial layers.

Main Results

  • Successful growth of low-density primary hippocampal neurons.
  • High purity of neuronal cultures with minimal glial contamination.
  • Neurons are suitable for high-resolution imaging techniques.
  • Functional assays demonstrate the viability of cultured neurons.

Conclusions

  • This protocol enables effective culturing of hippocampal neurons.
  • It supports high-resolution imaging and functional studies.
  • The method is accessible for new researchers in the field.

Frequently Asked Questions

What is the main advantage of this culturing method?
The main advantage is the ability to culture neurons at low densities with minimal glial contamination, which is ideal for imaging and functional assays.
Who developed this protocol?
This protocol was originally published by Dr. Gary Bunker and his colleagues.
What are the key components required for this protocol?
The key components include glial cell culture, preparation of coverslips, and isolation of hippocampal neurons.
How does this method support high-resolution imaging?
By culturing neurons at low densities, it reduces interference from glial cells, allowing for clearer imaging results.
Is this protocol suitable for new researchers?
Yes, the protocol is designed to be accessible and includes detailed steps to guide new researchers.

Este artigo descreve o protocolo para a cultura de baixa densidade neurónios do hipocampo primárias que crescem em lamelas de vidro invertida sobre uma monocamada de células gliais. As camadas neuronais e gliais são separados por contas de cera de parafina. Os neurónios cultivados por este método são adequados para imagiologia óptica de alta resolução e ensaios funcionais.

Este protocolo foi originalmente publicado pelo Dr. Gary Bunker e seus colegas, e eles permitem a longa densidade e a cultura de alta pureza dos neurônios do hipocampo de carga embrionária, suspendendo os neurônios sobre uma camada mais fixa da glia. Este resultado está entre os perigos de nossos outros resultados cruciais do hipocampo, porque permite que os neurônios cresçam em baixas densidades com poucas células gliais contaminantes. Este resultado é, portanto, ideal para imagens de alta resolução e ativos funcionais de tipografia e neurônios maduros em cultura.

A pós-maturação deste protocolo deve acelerar a adaptação por uma nova vida, pois existem vários estados-chave durante o procedimento que são difíceis de descrever, por isso leva você junto. Este protocolo consiste em três populações independentes que são necessárias para a cultura de neurônios primários de alta qualidade. Esses processos incluem cultura de células gliais, criação e revestimento de lamínulas e preparação de células nervosas do hipocampo.

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