Name: Um modelo de tumor de murino de bexiga ortotópico e Tumor Detection System (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-01-12T15:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 23 s
Description: Aprenda a gerar tumores ortotópicos de bexiga não invasivos em camundongos C57BL/6J usando células MB49 PSA. Este método não cirúrgico facilita o monitoramento do crescimento tumoral e a avaliação de terapias intravesicais inovadoras.

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Este trabalho foi financiado por uma bolsa do Conselho Nacional de Pesquisa Médica de Cingapura (NMRC/CIRG/1335/2012) concedida ao Professor Kesavan Esuvaranathan.

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<li>Chade, D. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Histopathological+characterization+of+a+syngeneic+orthotopic+murine+bladder+cancer+model%5BTitle%5D)+AND+%22Int+Braz+J+Urol%22%5BJournal%5D)">Histopathological characterization of a syngeneic orthotopic murine bladder cancer model.</a> Int Braz J Urol. 34, 220-226 (2008).</li>
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<li>Tham, S. M., Ng, K. H., Pook, S. H., Esuvaranathan, K., Mahendran, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumor+and+Microenvironment+Modification+during+Progression+of+Murine+Orthotopic+Bladder+Cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Dev+Immunol%22%5BJournal%5D)">Tumor and Microenvironment Modification during Progression of Murine Orthotopic Bladder Cancer.</a> Clin Dev Immunol. , 865684(2011).</li>
<li>Chin, J., Kadhim, S., Garcia, B., Kim, Y. S., Karlik, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Magnetic+resonance+imaging+for+detecting+and+treatment+monitoring+of+orthotopic+murine+bladder+tumor+implants%5BTitle%5D)+AND+%22J+Urol%22%5BJournal%5D)">Magnetic resonance imaging for detecting and treatment monitoring of orthotopic murine bladder tumor implants.</a> J Urol. 145, 1297-1301 (1991).</li>
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<li>Jurczok, A., Fornara, P., Soling, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bioluminescence+imaging+to+monitor+bladder+cancer+cell+adhesion+in+vivo%3A+a+new+approach+to+optimize+a+syngeneic%2C+orthotopic%2C+murine+bladder+cancer+model%5BTitle%5D)+AND+%22BJU+Int%22%5BJournal%5D)">Bioluminescence imaging to monitor bladder cancer cell adhesion in vivo: a new approach to optimize a syngeneic, orthotopic, murine bladder cancer model.</a> BJU Int. 101, 120-124 (2008).</li>
<li>Newton, M. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anti-interleukin-10R1+monoclonal+antibody+in+combination+with+bacillus+Calmette--Guerin+is+protective+against+bladder+cancer+metastasis+in+a+murine+orthotopic+tumour+model+and+demonstrates+systemic+specific+anti-tumour+immunity%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Exp+Immunol%22%5BJournal%5D)">Anti-interleukin-10R1 monoclonal antibody in combination with bacillus Calmette--Guerin is protective against bladder cancer metastasis in a murine orthotopic tumour model and demonstrates systemic specific anti-tumour immunity.</a> Clin Exp Immunol. 177, 261-268 (2014).</li>
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<li>Coralli, C., Cemazar, M., Kanthou, C., Tozer, G. M., Dachs, G. U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Limitations+of+the+reporter+green+fluorescent+protein+under+simulated+tumor+conditions%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Limitations of the reporter green fluorescent protein under simulated tumor conditions.</a> Cancer Res. 61, 4784-4790 (2001).</li>
<li>Biot, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preexisting+BCG-specific+T+cells+improve+intravesical+immunotherapy+for+bladder+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Transl+Med%22%5BJournal%5D)">Preexisting BCG-specific T cells improve intravesical immunotherapy for bladder cancer.</a> Sci Transl Med. 4 (137), 137ra172(2012).</li>
<li>Swirski, F. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+near-infrared+cell+tracker+reagent+for+multiscopic+in+vivo+imaging+and+quantification+of+leukocyte+immune+responses%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">A near-infrared cell tracker reagent for multiscopic in vivo imaging and quantification of leukocyte immune responses.</a> PLoS One. 2, 1075(2007).</li>
<li>Jozwicki, W., Brozyna, A. A., Siekiera, J., Slominski, A. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Frequency+of+CD4%2BCD25%2BFoxp3%2B+cells+in+peripheral+blood+in+relation+to+urinary+bladder+cancer+malignancy+indicators+before+and+after+surgical+removal%5BTitle%5D)+AND+%22Oncotarget%22%5BJournal%5D)">Frequency of CD4+CD25+Foxp3+ cells in peripheral blood in relation to urinary bladder cancer malignancy indicators before and after surgical removal.</a> Oncotarget. , (2016).</li>
<li>Walk, E. L., McLaughlin, S. L., Weed, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-frequency+Ultrasound+Imaging+of+Mouse+Cervical+Lymph+Nodes%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">High-frequency Ultrasound Imaging of Mouse Cervical Lymph Nodes.</a> J Vis Exp. , e52718(2015).</li>
<li>Rooks, V., Beecken, W. D., Iordanescu, I., Taylor, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sonographic+evaluation+of+orthotopic+bladder+tumors+in+mice+treated+with+TNP-470%2C+an+angiogenic+inhibitor%5BTitle%5D)+AND+%22Academic+radiology%22%5BJournal%5D)">Sonographic evaluation of orthotopic bladder tumors in mice treated with TNP-470, an angiogenic inhibitor.</a> Academic radiology. 8, 121-127 (2001).</li>
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<li>Dykman, L. A., Bogatyrev, V. A., Khlebtsov, B. N., Khlebtsov, N. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+protein+assay+based+on+colloidal+gold+conjugates+with+trypsin%5BTitle%5D)+AND+%22Anal+Biochem%22%5BJournal%5D)">A protein assay based on colloidal gold conjugates with trypsin.</a> Anal Biochem. 341, 16-21 (2005).</li>
<li>Shi, H. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Joint+enhancement+strategy+applied+in+ECL+biosensor+based+on+closed+bipolar+electrodes+for+the+detection+of+PSA%5BTitle%5D)+AND+%22Talanta%22%5BJournal%5D)">Joint enhancement strategy applied in ECL biosensor based on closed bipolar electrodes for the detection of PSA.</a> Talanta. 154, 169-174 (2016).</li>
<li>Ma, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electrochemiluminescent+immunosensing+of+prostate-specific+antigen+based+on+silver+nanoparticles-doped+Pb+%28II%29+metal-organic+framework%5BTitle%5D)+AND+%22Biosensors+%26+bioelectronics%22%5BJournal%5D)">Electrochemiluminescent immunosensing of prostate-specific antigen based on silver nanoparticles-doped Pb (II) metal-organic framework.</a> Biosensors & bioelectronics. 79, 379-385 (2016).</li>
<li>Kavosi, B., Salimi, A., Hallaj, R., Moradi, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ultrasensitive+electrochemical+immunosensor+for+PSA+biomarker+detection+in+prostate+cancer+cells+using+gold+nanoparticles%2FPAMAM+dendrimer+loaded+with+enzyme+linked+aptamer+as+integrated+triple+signal+amplification+strategy%5BTitle%5D)+AND+%22Biosensors+%26+bioelectronics%22%5BJournal%5D)">Ultrasensitive electrochemical immunosensor for PSA biomarker detection in prostate cancer cells using gold nanoparticles/PAMAM dendrimer loaded with enzyme linked aptamer as integrated triple signal amplification strategy.</a> Biosensors & bioelectronics. 74, 915-923 (2015).</li>
<li>Lu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cross-species+comparison+of+orthologous+gene+expression+in+human+bladder+cancer+and+carcinogen-induced+rodent+models%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Transl+Res%22%5BJournal%5D)">Cross-species comparison of orthologous gene expression in human bladder cancer and carcinogen-induced rodent models.</a> Am J Transl Res. 3, 8-27 (2010).</li>
<li>Gong, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Establishment+of+a+Novel+Bladder+Cancer+Xenograft+Model+in+Humanized+Immunodeficient+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22Cellular+physiology+and+biochemistry+%3A+international+journal+of+experimental+cellular+physiology%2C+biochemistry%2C+and+pharmacology%22%5BJournal%5D)">Establishment of a Novel Bladder Cancer Xenograft Model in Humanized Immunodeficient Mice.</a> Cellular physiology and biochemistry : international journal of experimental cellular physiology, biochemistry, and pharmacology. 37, 1355-1368 (2015).</li>
</ol>

Os autores não têm nada a divulgar.

Os passos mais críticos no protocolo são: 1) manter com sucesso a tumorigenicidade da linha celular; 2) assegurando a secreção PSA mensurável antes da implantação de células tumorais em camundongos; 3) a geração de uma suspensão de uma única célula para o implante, de modo a reduzir a variação no tamanho do tumor; e 4) células instilar a uma velocidade lenta para evitar o refluxo vesico-ureteral, resultando na implantação de células de tumor no rim. Após passagem prolongada in vitro,</em...

O objetivo deste método é gerar tumores de bexiga murino ortotópico e monitorar os tumores implantados mais exacta possível, de modo que os ratos sem a implantação do tumor não são pensados ​​para ter sido curado a análise de ponto final. Em geral, o método mostrado irá reduzir a necessidade de grandes números de ratinhos para análise experimental e assegurar uma maior precisão na determinação dos resultados terapêuticos. O desenvolvimento de um modelo ortotópico de câncer é importante, como células tumorais implantando subcutânea não recapitular o ambiente da doença clínica ou permitir o desenvolvimento de estratégias terapêuticas. A arquitectura da bexiga permite a instilação de terapias do cancro da bexiga directamente na bexiga com efeitos sistémicos mínimos. Assim, os modelos animais que recapitulam neste ambiente, tais como um modelo ortotópico, são importantes para avaliar novas terapias. As conclusões tiradas a partir de qualquer experimental set-up são dependenT sobre as limitações do modelo. Diversas técnicas têm sido desenvolvidas para a produção de tumores da bexiga ortotópico em murganhos. Estes dependem danificar a camada de glicosaminoglicano da bexiga, permitindo que as células tumorais a ser implantado. As técnicas utilizadas incluem a electrocauterização, o que resulta em um único ponto de dano na parede da bexiga, conduzindo ao desenvolvimento de tumores em um local na bexiga 1,2. No entanto, a taxa de sucesso da implantação do tumor usando electrocauterização é dependente do operador variando de 10 - 90%, e inclui o risco de que a parede da bexiga será perfurado, levando a desenvolver tumores na cavidade peritoneal. Cauterização química é realizada utilizando nitrato de prata, que danifica a parede da bexiga 3. Da mesma forma, o ácido foi utilizado para danificar a parede da bexiga 4. A tripsina também tem sido utilizado para danificar a bexiga, bem 5. Estes métodos podem resultar no desenvolvimento de mais de um tumor na bexiga.Além disso, existe o perigo de danos graves para a bexiga se os produtos químicos são deixados em contacto com a parede da bexiga por muito tempo. O método desenvolvido por Ninalga et ai. utiliza o poli-L-lisina carregada positivamente (PLL) 6 moléculas para o revestimento da parede da bexiga; isso permite que as células tumorais carregadas negativamente para furar a camada de glicosaminoglicanos da bexiga. Este método resulta geralmente em mais do que um tumor em desenvolvimento na bexiga, mas a implantação do tumor é a 80 - 100% 4,7. Tecnicamente, é também o processo mais fácil de executar. Para assegurar que os tumores que se desenvolvem são bastante uniforme em tamanho, é importante que as células tumorais não são agrupados em grandes aglomerados antes do implante. A fim de avaliar a eficácia terapêutica, é melhor para realizar este estudo em ratos com tumores bastante de tamanho semelhante. Assim, um sistema de detecção de boa que pode quantificar o tamanho do tumor logo após o implante é importante. Várias estratégias têm a abelhaN utilizado para avaliar tumores. Estes incluem a imagiologia por ressonância magnética (MRI) de 8-10, de fluorescência 11, bioluminescência 12,13, ultra-sons 14, e ensaio imunoabsorvente ligado a enzima (ELISA) 15,16. Enquanto ressonância magnética e ultra-som não requerem modificações de células tumorais, existe uma necessidade de equipamentos e agentes de contraste para ressonância magnética sensíveis. Os ensaios fluorescence-, luminescence-, e baseado em ELISA exigir a modificação das células tumorais para expressar proteínas marcadoras que podem ser detectados por estes métodos. Para luminescência, um substrato é necessária para a detecção da actividade de luciferase; Assim, existe um passo adicional e aumento de custo. Ambos luminescência e fluorescência requerem equipamento especializado. Para produzir fluorescência, proteína fluorescente verde (GFP) ciclização, a qual é catalisada por oxigénio molecular, é necessária. Assim, a expressão GFP pode ser variável dentro de uma massa tumoral dependendo do acesso ao oxigênio, tornando este um marcador pouco fiável <sup&gt; 17. Modificação da linha de células de cancro da bexiga murino MB49 a secretar próstata humana Specific Antigen (PSA) 15,16 como um marcador substituto é outra estratégia. Esses marcadores também fornecem um meio alternativo de confirmar a presença do tumor no final da experiência, tornando-os uma alternativa à imuno-histoquímica. Este estudo relata o método PLL de implantação do tumor ortotópico e apresenta uma comparação de sistemas de detecção de tumor, isto é, ELISA, a fluorescência, e ultra-sonografia.

<table><tbody><tr><td>Células MB49-PSA</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>ref (Wu QH, 2004)</td></tr><tr><td>RPMI 1640 media</td><td>HyClone</td><td>SH30027.01&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Meio de Eagle Modificado de Dulbecco (DMEM)</td><td>Biowest</td><td>L0102</td><td></td></tr><tr><td>Soro Fetal Bovino (FBS) Sul-Americano</td><td>Biowest</td><td>S1810</td><td></td></tr><tr><td>Soro Fetal Bovino (FBS) Sul-Americano, Premium</td><td>Biowest</td><td>S181B</td><td></td></tr><tr><td>Soro Fetal Bovino (FBS)</td><td>HyClone</td><td>SH30088.03&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>L-glutamina</td><td>Biowest</td><td>X0550</td><td></td></tr><tr><td>Penicilina-Estreptomicina</td><td>Biowest</td><td>L0022</td><td></td></tr><tr><td>Higromicina B</td><td>Invitrogen</td><td>10687-010</td><td></td></tr><tr><td>PSA livre (Humano) Kit ELISA</td><td>Abnova</td><td>KA0209</td><td></td></tr><tr><td>Reagente TRIzol para extração de RNA&nbsp;</td><td>Kit</td><td>de</td> Transcrição Reversa de cDNA de Alta Capacidade Ambion 15596026 <td></td></tr><tr><td>com Inibidor de RNase</td><td>Applied Biosystems</td><td>4374967</td><td></td></tr><tr><td>TaqMan Universal PCR Master Mix</td><td>Applied Biosystems</td><td>4304437</td><td></td></tr><tr><td>TaqMan Ensaio de Expressão Gênica - Mouse Actb</td><td>Applied Biosystems</td><td>4331182</td><td>Mm00607939_s1</td></tr><tr><td>TaqMan Ensaio de Expressão Gênica &ndash; Humanos KLK3</td><td>Applied Biosystems</td><td>4331182</td><td>Hs00426859_g1</td></tr><tr><td>camundongos fêmeas C57BL / 6J</td><td>In Vivos</td><td></td><td>4 - 6 semanas de</td></tr><tr><td>idade Anestesia (75 mg / kg de cetamina e 1 mg / kg de medetomidina)</td> Farmácia <td>local</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Medicamento de reversão (1 mg / kg de atipamezol)</td> <td>Farmácia</td><td></td><td></td>local</tr><tr><td>Perfurador de orelha</td><td>Microscopia eletrônica Ciências</td><td>72893-01</td><td></td></tr><tr><td>Solução Hartmann's ou Composto de lactato de sódio</td><td>B Braun</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Pomada oftálmica - Pomada lubrificante ocular estéril Duratears</td><td>Alcon</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Heat pack - Aquecedores de mãos HotHands</td> Cateter Introcan Certo IV <td>Heatmax Inc</td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td>B Braun</td><td>4251300</td><td>24 G x 3/4&Prime;</td></tr><tr><td>Geléia lubrificante Aquagel</td> Solução de poli-L-lisina <td>para farmácia</td><td></td><td></td>local</tr><tr><td>, 0,01%,</td> <td>Sigma</td><td>P4707</td><td></td></tr><tr><td>cOmplete, Mini, Inibidor de Protease sem EDTA Cocktail</td><td>Roche</td><td>4693159001</td><td></td></tr><tr><td>Quantichrom Creatinine Assay Systems</td><td></td><td>DICT-50&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Corante fluorescente - VivoTrack 680</td><td>Perkin Elmer</td><td>NEV12000&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Solução de transição de tecido congelado RNAlater-ICE</td><td>Ambion</td><td>4427575</td><td></td></tr><tr><td>Nome</td><td>Empresa</td><td>Número de catálogo</td><td>Comentários</td></tr><tr><td>Equipamento e software</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>7500 Sistema de PCR em tempo real</td><td>aplicado Software Biosystems</td><td></td><td></td></tr><tr><td>7500 v2.3</td><td>Applied Biosystems</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Metabolic Cage</td><td>Tecniplast&nbsp;</td><td>Rack tipo vertical para 12 gaiolas</td><td></td></tr><tr><td>BD FACSCanto I system&nbsp;</td><td>BD Biosciences</td><td></td><td></td></tr><tr><td>BD FACSSutenssoftware de imagem v7</td><td>BD Biosciences</td><td></td><td></td></tr><tr><td>IVIS SpectrumCT in vivo sistema de imagem&nbsp;</td><td>Caliper Life Sciences&nbsp;</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Software de Imagem Viva v3.1</td><td>Caliper Life Sciences&nbsp;</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Sistema de imagem Vevo 2100</td><td>VisualSonics&nbsp;</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

um modelo de tumor de murino de bexiga ortotópico e tumor detection system

A Murine Orthotopic Bladder Tumor Model and Tumor Detection System

Este protocolo descreve a geração de tumores da bexiga em ratos C57BL / 6J ratinhos fêmea, utilizando a linha celular de cancro da bexiga de murino MB49, que foi modificado para secretar humano Antigénio Específico da Próstata (PSA), e o procedimento para a confirmação da implantação do tumor. Em resumo, os ratos são anestesiados usando drogas injectáveis ​​e são feitos para colocar na posição dorsal. A urina é desocupado da bexiga e 50 ul de poli-L-lisina (PLL) é instilada lentamente a uma taxa de 10 mL / 20 s utilizando um cateter de 24 g IV. É deixado na bexiga durante 20 minutos por tapando o cateter. O cateter é retirado e PLL é desocupado por uma leve pressão sobre a bexiga. Isto é seguido por instilação da linha celular de cancro da bexiga de murino (1 x 10 5 células / 50 ul) a uma taxa de 10 mL / 20 s. O cateter é tapado para evitar a evacuação prematura. Após 1 h, os ratinhos são reavivado com uma droga inversão, e a bexiga está desocupado. A taxa de instilação lenta é importante,uma vez que reduz o refluxo vesico-ureteral, o que pode causar tumores a ocorrer no tracto urinário superior e nos rins. A linha de células deve ser bem re-suspensa para reduzir a aglutinação de células, como esta pode levar à tamanhos irregulares após a implantação do tumor. Esta técnica induz tumores com alta eficiência. O crescimento do tumor é monitorizado pela secreção urinária PSA. monitorização PSA marcador é mais fiável do que o ultra-som ou de imagem de fluorescência para a detecção da presença de tumores na bexiga. Os tumores em ratinhos geralmente atingem um tamanho máximo que afeta negativamente a saúde em cerca de 3-4 semanas, se deixados sem tratamento. Ao monitorizar o crescimento do tumor, é possível diferenciar os ratinhos que estavam curados do que aqueles que não foram implantadas com sucesso com tumores. Com a análise de ponto final, apenas, o último pode ser assumida por engano ter sido curado por terapia.

a secreção de PSA a partir de células MB49 foi encontrada a variar com o meio de crescimento. MB49-PSA é cultivada em meio DMEM, porque isto resulta em aumento da secreção de PSA (Figura 1A). A fim de determinar a sensibilidade do PSA ELISA e PCR em tempo real, os diferentes números de MB49-secretoras de PSA células foram misturadas com células parentais MB49. PSA ELISA detecta um mínimo de 1 x 10 5 células secretoras de PSA / 1 x 10 6 células <stro...

Este protocolo descreve a geração de tumores da bexiga ortotópico de murídeo em Ratinhos C57BL / 6J e a monitorização do crescimento do tumor.

Um modelo de tumor de murino de bexiga ortotópico e Tumor Detection System

This protocol describes the generation of bladder tumors in female C57BL/6J mice using the murine bladder cancer cell line MB49, which has been modified ...

O objetivo geral deste método não cirúrgico é produzir de forma consistente tumores ortotópicos na bexiga não invasores do músculo em camundongos, que possam ser facilmente monitorados para a avaliação de terapias intravesicais. Este método pode ajudar a responder perguntas fundamentais na área do câncer de bexiga, como a avaliação de novas terapias intravesicais.A principal vantagem dessa técnica é que é fácil implantar tumores em camundongos e monitorar seu crescimento, o que ajuda a determinar com precisão as respostas às terapias. Um dia antes da implantação, quando as células estiverem com cerca de 80% de confluência, faça o repique das células tumorais MB49 PSA em meio DMEM completo com uma divisão de um para dois. No dia do procedimento, colete e conte as células, certificando-se de que estejam suficientemente saudáveis.Misture volumes iguais de suspensão celular e Azul de Tripano a 4% e conte as células vivas coradas em azul utilizando um hemocitômetro. As células devem apresentar viabilidade de pelo menos 80%. Em seguida, re-suspenda as células a dois milhões por mililitro em um tubo cônico de 15 mililitros e lave-as três vezes em DMEM.Em seguida, mantenha-os refrigerados até o momento da injeção. Uma vez que um camundongo fêmea tenha sido anestesiado, forneça hidratação por meio de uma injeção intraperitoneal de Solução de Ringer Lactato a 1 mililitro por 10 gramas de peso corporal. Repita este procedimento a cada uma ou duas horas durante a anestesia.Em seguida, aplique pomada oftálmica estéril em ambos os olhos e reaplique conforme necessário. Então, posicione o camundongo em decúbito dorsal sobre toalhas de papel sobre uma almofada aquecida para manter a temperatura corporal. A seguir, fixe as patas traseiras com fita adesiva.Agora, aplique pressão suave na região abdominal inferior e colete a urina em um tubo de 1,5 mililitro para medir o nível basal de PSA urinário. Em seguida, prepare uma seringa de um mililitro com PLL estéril e acople um cateter intravenoso de calibre 24 com o estilote da agulha removido. Aplique lubrificante na ponta do cateter.Em seguida, insira o cateter na uretra e, utilizando pin&ccedil;as, direcione-o at&eacute; a bexiga. Pare quando for sentida resist&ecirc;ncia. Ent&atilde;o, ejetar lentamente 50 microlitros de PLL a uma taxa de 10 microlitros a cada 20 segundos para evitar refluxo vesicoureteral.Agora, deixe o cateter na bexiga por 20 minutos, com um obturador para evitar o escoamento. Após 20 minutos, remova o cateter e esvazie a bexiga de qualquer conteúdo, pressionando suavemente a região abdominal inferior. Em seguida, usando uma seringa de um mililitro, aspire quaisquer resíduos remanescentes do cateter.Agora, misture bem as células MB49 PSA por pipetagem e carregue-as em uma seringa de 1 mL. Acople o cateter e lubrifique-o como antes. Insira o cateter na bexiga como anteriormente.E comece injetando as células, com uma ejeção gradual de 10 microlitros a cada 20 segundos. Em seguida, aguarde uma hora. Após uma hora, remova o cateter e esvazie a bexiga de qualquer conteúdo.Em seguida, solte o camundongo, posicione-o em decúbito ventral e reanime-o com uma injeção de atipamezol. Agora, monitore o camundongo até que ele recupere a decúbito esternal e, então, devolva-o à sua gaiola de origem. Verificou-se que a secreção de PSA pelas células MB49 varia com o meio de crescimento.O meio DMEM é utilizado porque resultou na maior secreção de PSA. Para determinar a sensibilidade do ELISA de PSA, diferentes quantidades de células MB49 secretoras de PSA foram misturadas com células parentais MB49. O ensaio detectou pelo menos 100.000 células secretoras de PSA por milhão de células.O método de implante tumoral por PLL resulta no desenvolvimento de múltiplos tumores na bexiga. Coletas de urina durante a noite utilizando gaiolas metabólicas e amostras de urina pontuais podem ser usadas para medir PSA por ELISA. Para todos os estudos com animais, o peso dos camundongos foi registrado como medida de saúde.Além disso, o PSA urinário é monitorado semanalmente como uma medida do crescimento tumoral. Diferentes terapias foram utilizadas em cada camundongo, resultando em tamanhos tumorais distintos. Duas semanas após o implante, as bexigas foram coletadas e processadas.Os tamanhos dos tumores variaram, e as medidas de PSA previram isso. Após assistir a este vídeo, você deverá ter uma boa compreensão de como produzir tumores ortotópicos na bexiga de camundongos e monitorar seu crescimento. Uma vez dominada, essa técnica pode ser realizada em duas horas por camundongo.Ao realizar este procedimento, é importante lembrar-se de garantir que as células sejam misturadas antes da implantação e de efetuar a implantação em um ritmo lento. Após este procedimento, outros métodos, como análise citométrica de fluxo de Uvm ou ELISA, podem ser realizados para investigar a ativação imune pós-terapia.

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Research

JoVE Journal

Cancer Research

Pesquisa sobre o Câncer

Tumores de bexiga são estabelecidos em camundongos fêmeas, de uma forma minimamente invasiva através de cateterismo, cauterização local, ea adesão posterior de células de carcinoma aos locais queimar.

Um modelo ortotópico de câncer de bexiga murino

Estabelecer um modelo de tumor de bexiga ortotópico para avaliar os efeitos antitumorais de sarna intravesical entregue e acompanhamento do crescimento tumoral por ultra-som e de imagem de bioluminescência.

Um modelo de tumor de bexiga ortotópico e Avaliação de Tratamento de sarna intravesical

Neste vídeo, descrevemos o transplante ortotópico de organoides tumorais de bexiga cultivados para a bexiga murina para estudar o papel do ambiente do órgão no desenvolvimento de tumores.

Modelo de Organoide de Tumor de Bexiga: Um Método para Transplante Ortotópico de Organoides de Bexiga para Bexiga Murina Receptora

Neste vídeo, descrevemos o procedimento intravesical de entrega de células cancerígenas na bexiga de um modelo de camundongo. Esse procedimento ajuda a gerar um modelo de tumor ortotópico de bexiga que pode ser usado para desenvolver estratégias terapêuticas.

Modelagem de tumor ortotópico de bexiga em modelo de camundongo: um procedimento para administração intravesical de células cancerígenas na bexiga murina

Implantação de células cancerosas para o órgão de origem pode servir como um modelo pré-clínico útil para avaliar novas terapias. Células de carcinoma da bexiga MB49 pode ser cultivada no interior da bexiga, após a instilação intravesical. Este protocolo demonstra a cateterização da bexiga do rato com a finalidade de implantação do tumor e entrega adenoviral.

Um modelo de cancro da bexiga para Ortotópico Gene Estudos de entrega

A técnica criada para inocular xenografts ortotópico de câncer de bexiga invasivo primário requer laparotomia e mobilização da bexiga. Este procedimento inflige morbidade significativa nos ratinhos, é tecnicamente difícil e demorado. Por isso, desenvolvemos um de alta precisão, a abordagem percutânea utilizando a orientação do ultra-som.

Minimamente Invasiva Estabelecimento de murino ortotópico bexiga Xenoenxertos

Tumores de bexiga murino são induzidas com carcinógeno nitrosamina N-butyl-N-(4-hydroxybutyl) (BBN). Geração de tumor de bexiga é heterogênea; Portanto, uma avaliação correcta da carga do tumor é necessária antes de randomização para tratamento experimental. Aqui nós apresentamos um protocolo de MRI, rápido e confiável para avaliar o estágio e o tamanho do tumor.

Ressonância magnética avaliação dos tumores de bexiga murino induzida por substância cancerígena

Este protocolo fornece medidas experimentais detalhadas para estabelecer uma cultura in vitro tridimensional de organoides tumorais da bexiga derivados do câncer de bexiga induzido pelo cancerígeno. Métodos culturais, incluindo passaging, engenharia genética e transplante ortotópico de organoides tumorais são descritos.

Cultura, Manipulação e Transplante Ortotópico de Organoides tumorais da bexiga de camundongo

Para esclarecer o processo de várias etapas de difusão peritoneal de carcinoma dos ovários, o presente estudo apresenta um modelo experimental murino de desenvolvimento do tumor original e metástases através de inoculação peritoneal ortotópico com essas células tumorais.

Murino Experimental Modelo de desenvolvimento do tumor original e Peritoneal Metástase<em&gt; via</em&gt; Ortotópico injetar células do ovário Carcinoma

Nós descrevemos um método que utiliza a irradiação periférica direcionada para induzir comportamento à fadiga, como em ratos. A dose de irradiação não letal selecionado leva a uma redução de uma semana em atividade de execução roda voluntária.

Um mouse modelo de fadiga induzida por irradiação periférica

Aprenda a gerar tumores ortotópicos de bexiga não invasivos em camundongos C57BL/6J usando células MB49 PSA. Este método não cirúrgico facilita o monitoramento do crescimento tumoral e a avaliação de terapias intravesicais inovadoras.

Um modelo de tumor de murino de bexiga ortotópico e Tumor Detection System

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