Um método para avaliar Inseticida Eficácia contra Bed Bug, Cimex lectularius, Ovos e primeiros estádios
15 de março de 2017
avaliações de inseticidas são muitas vezes alvo contra insetos adultos, em vez de estágios imaturos. Aqui, apresentamos um protocolo para avaliar inseticidas contra ovos de percevejos com uma comparação à primeira fase de percevejos de ninfa. Estes protocolos pode ser modificada para outros insetos para avaliar a eficácia do inseticida nas fases da vida não-adultos.
O objetivo geral deste experimento é avaliar a eficácia dos inseticidas na morte de ovos de percevejos e primeiros instares. Este método pode ajudar a responder a questões-chave no campo da entomologia, como os efeitos de ensaios toxicológicos em ovos de percevejos e pequenas ninfas. A principal vantagem desta técnica é que ela é projetada para tratar um estágio de vida difícil do inseto com inseticidas, particularmente o estágio do ovo.
Para começar o experimento, retire de cinco a 10 percevejos fêmeas adultas bem alimentadas de uma colônia e coloque as fêmeas em uma placa de Petri com papel de filtro. Prepare 10 réplicas para garantir que haverá ovos suficientes para o ensaio de inseticida. Verifique os pratos todos os dias para ver se as fêmeas botaram ovos.
Depois que as fêmeas botarem ovos, retire-as da placa de Petri e coloque-as em novas placas de Petri com um novo papel de filtro diariamente. Registre os dados nas placas de Petri antigas e novas. Deixe os ovos envelhecerem quatro a cinco dias antes de iniciar o ensaio.
Depois que os ovos envelhecerem adequadamente, remova os ovos de percevejos suavemente dos papéis de filtro usando uma pinça de ponta macia. Raspe suavemente o fundo do ovo preso ao papel de filtro usando a pinça e, em seguida, pegue o ovo com cuidado, sem aplicar muita pressão para evitar jogar os ovos de percevejos. Coloque os ovos de percevejos removidos em seus respectivos grupos dentro das placas de Petri de plástico.
Esfregue o fundo de cada placa de Petri do lado de fora com uma folha de amaciante para limitar a eletricidade estática do arremesso de ovos de percevejos. Em seguida, prepare diluições seriadas de inseticidas para obter uma faixa de cinco concentrações diferentes e uma solução de controle com água da torneira apenas para um volume de 20 mL. Pegue tubos de centrífuga de 50 mL pré-cortados na linha de mL e, em seguida, corte a malha fina em quadrados grandes o suficiente para caber na tampa.
Aparafuse a malha firmemente, eliminando quaisquer solavancos nos tubos da centrífuga usando a tampa do tubo da centrífuga. Em seguida, usando um pincel, coloque um grupo de ovos de percevejos na malha dentro de um tubo de centrífuga. Mergulhe o grupo de ovos de percevejos dentro do tubo de centrífuga cortado em uma concentração de inseticida por cinco segundos.
Remova o tubo de centrífuga da solução inseticida. Coloque o tubo de centrífuga diretamente sobre o tecido laboritório para secar a malha com os ovos dentro. Após a secagem, retirar o grupo de ovos do tubo de centrifugação com um pincel pequeno de cerdas finas e colocá-los numa placa de Petri limpa com papel de filtro limpo.
Registre a mortalidade dos ovos por 14 dias para garantir que todos os ovos tenham tido tempo suficiente para eclodir. Corrigir a mortalidade no tratamento controle usando a fórmula de Abbott. Insira a mortalidade registrada com as concentrações correspondentes no software de análise para calcular os valores de CL50.
Separe um grupo de cinco percevejos machos adultos e cinco fêmeas adultas alimentados no dia anterior e coloque-os em uma placa de Petri com papel de filtro. Permita que os percevejos adultos acasalem e ponham ovos por oito dias. Em seguida, remova os adultos das placas de Petri e permita que os ovos eclodam nos primeiros instares dentro das placas de Petri.
Colete os primeiros ínstares não alimentados da mesma idade usando um pincel e coloque-os em novas placas de Petri limpas até o ensaio do inseticida. Pipet alíquotas de 150 microlitros de cada uma das cinco diluições preparadas anteriormente de inseticida e água para o grupo de controle em papéis de filtro individuais. Distribua uniformemente o inseticida aplicando gotículas ao redor de toda a borda e centro do papel de filtro.
Coloque os papéis de filtro tratados individualmente em cima de painéis de cartão duro. Solte grupos de primeiros ínstares nos papéis de filtro individuais enquanto ainda estiverem molhados com inseticida e cubra os primeiros ínstares com o fundo de uma placa de Petri invertida e coloque um peso em cima da placa de Petri para evitar que os percevejos do primeiro ínstar escapem. Registre a mortalidade de percevejos de primeiro ínstar após 24 horas de exposição a todas as concentrações de inseticidas.
Corrigir a mortalidade no tratamento controle usando a fórmula de Abbott. Insira a mortalidade e as concentrações registradas no software de análise para calcular os valores de CL50. A resposta percentual ou mortalidade de ovos de percevejos da cepa Harlin a cinco concentrações diferentes de metocloprid beta-ciflutrina aumentou à medida que a dose aumentava.
A mortalidade atingiu 100% na maior concentração testada. Depois de assistir a este vídeo, você deve ter uma melhor compreensão de como avaliar a eficácia do inseticida contra ovos de percevejos e primeiros ínstares.
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Visão Geral
Este estudo apresenta um protocolo para avaliar a eficácia de inseticidas contra ovos e primeiras ninfas de percevejos. O método visa abordar os desafios de avaliar a eficácia dos inseticidas em estágios de vida não adultos, que são frequentemente negligenciados em avaliações tradicionais.
Componentes Principais do Estudo
Área da Ciência
- Entomologia
- Eficácia de inseticidas
- Estágios de vida dos insetos
Contexto
- Avaliações de inseticidas geralmente se concentram em insetos adultos.
- Estágios imaturos, como ovos e ninfas, são cruciais para o controle de pragas.
- Entender os efeitos dos inseticidas nesses estágios pode melhorar as estratégias de manejo de pragas.
- Este estudo fornece um método adaptado para avaliar inseticidas em ovos de percevejos.
Objetivo do Estudo
- Avaliar a eficácia de inseticidas em ovos e primeiras ninfas de percevejos.
- Desenvolver um protocolo que possa ser adaptado para outras espécies de insetos.
- Aprimorar o conhecimento na área de entomologia sobre os impactos dos inseticidas em estágios não adultos.
Métodos Utilizados
- Coletar 5 a 10 fêmeas adultas de percevejos bem alimentadas e acasaladas.
- Colocar as fêmeas em uma placa de Petri com papel filtro.
- Preparar 10 réplicas para garantir produção suficiente de ovos.
- Monitorar as placas diariamente para postura de ovos.
Principais Resultados
- O protocolo avalia com sucesso a eficácia do inseticida em ovos de percevejos.
- Primeira ninfa também foi avaliada para comparar a suscetibilidade.
- Os resultados indicam a importância de direcionar estágios imaturos no controle de pragas.
- Este método pode ser adaptado para outras espécies de insetos.
Conclusões
- Avaliar inseticidas em estágios não adultos é crítico para um gerenciamento eficaz de pragas.
- O estudo fornece um protocolo valioso para pesquisas futuras.
- Estudos adicionais são necessários para explorar as implicações para outras pragas de insetos.
Perguntas Frequentes
Executive Industry Relevance
Evaluating insecticide efficacy across all life stages, including eggs and early instars, is critical for comprehensive pest control strategies in biopharma and public health R&D. This method enables quantitative assessment of toxicological impact on immature bed bug stages, supporting target validation and mechanistic de-risking in vector control programs. By generating concentration-response data and LC50 values for non-adult life stages, the approach improves predictive confidence in early-stage discovery and portfolio prioritization for novel insecticidal compounds.
Strategic Applications in Biopharma R&D
Early Discovery & Target Validation
- Scientific Value: Enables interrogation of insecticidal mechanisms across vulnerable life stages, clarifying target engagement in eggs and first instars.
- Operational Value: Supports biological de-risking by confirming activity where traditional adult-focused assays may fail.
- Predictive Value: Enhances target confidence through stage-specific efficacy profiling, informing go/no-go decisions in lead identification.
Screening & Assay Development
- Scientific Value: Produces standardized, reproducible concentration-response curves for quantifying LC50 in bed bug eggs and first instars.
- Operational Value: Enables scalable, high-throughput preparation of insecticide dilutions and exposure protocols using dip and contact assays.
- Assay Readiness: Generates quantitative mortality outputs suitable for compound screening and structure-activity relationship analysis.
Translational & Preclinical Research
- Scientific Value: Supports disease-relevant system modeling by evaluating efficacy in early life stages that contribute to population resilience.
- Operational Value: Ensures translational continuity from discovery through preclinical validation by capturing full lifecycle susceptibility.
- Risk-Adjusted Advancement: Informs preclinical go/no-go decisions by revealing stage-specific resistance or tolerance patterns.
Pipeline & Workflow Integration
The method integrates into the discovery continuum from early target validation through lead identification and preclinical evaluation, particularly for vector control and public health insecticide development.
- Discovery Biology: Supports hypothesis testing of insecticidal mechanisms by enabling efficacy assessment in non-adult life stages often missed in standard screens.
- Screening: Delivers assay readiness through standardized dipping and contact protocols that yield reproducible, quantitative mortality data.
- Analytics: Provides LC50 calculations and concentration-response modeling that allow cross-compound comparison and potency ranking.
- Translational Research: Connects early-stage findings to preclinical continuity by addressing efficacy across the bed bug lifecycle, a key factor in resistance management.
- Enterprise Reuse: Establishes a reusable platform for evaluating novel insecticidal compounds against difficult-to-treat life stages, reducing redundant assay development.
Operational & Enterprise Impact
- Scientific Value: Increases predictive confidence by revealing stage-specific susceptibility and reducing mechanistic ambiguity in insecticide action.
- Operational Value: Delivers standardized, reproducible protocols for egg and first instar assays, minimizing variability across laboratories.
- Strategic Value: Improves capital efficiency by enabling early de-risking of compounds that fail against immature stages, preventing late-stage failure.
- Portfolio Impact: Supports risk-adjusted prioritization by identifying compounds with broad lifecycle activity, enhancing advancement decisions.
Implementation Considerations
- Requires expertise in entomological handling, insect rearing, and micro-manipulation of eggs and early instars.
- Dependent on precise dilution preparation, exposure timing, and environmental controls to ensure assay validity.
- Necessitates standardized mortality scoring and correction using Abbott's formula for control-adjusted analysis.
- Involves adaptation considerations when extending the protocol to other insect species with differing egg morphology or instar behavior.
- Practical limitations include the labor-intensive nature of egg collection, aging, and individual handling, which may constrain throughput without automation.
