Name: Monitoramento de Astrocyte de reatividade e proliferação in Vitro sob condições isquêmicas (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-10-21T13:00:00.000+00:00
Duration: 15 min 8 s
Description: Aprenda a isolar astrocitos primários de cortices de ratos para estudar reatividade e proliferação celular sob condições de privação de oxigênio e glicose. Este método permite investigar respostas astrocitárias em modelos de AVC isquêmico.

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Os autores querem agradecer Paola López Pieraldi pela assistência técnica. A.H.M é grato para o 8G12MD007600 de subsídios e U54-NS083924 que suporte esta publicação. Agradecemos a subvenção de NIH-NIMHD-G12-MD007583 para o suporte de instalação. D.E.R.A. é grato para a bolsa fornecida pelo NIHNIGMS-R25GM110513. Estamos gratos pelo uso da área comum de instrumentação e a ajuda do Dr. Priscila Sanabria para o uso da instalação de imagem óptico do programa RCMI por conceder G12MD007583. Além disso, queremos agradecer seu papel proeminente em filmagem e edição do protocolo visual Jose Padilla.

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Os autores não têm nada para divulgar.

Este protocolo descreve o isolamento de astrócitos de córtices de rato. Neste método, é fundamental para diminuir a contaminação com outros tipos celulares como fibroblasto, oligodendrócitos e micróglia. Para reduzir o número de micróglia, várias medidas podem ser tomadas: mudando a mídia, orbital tremendo e tratamentos químicos. Uma vez que a pureza da cultura é confirmada por imunofluorescência usando marcadores celulares seletivas ou para os contaminantes mais proeminentes de célula, experiências podem ser executadas....

Traço é definido como "uma aguda disfunção neurológica de origem vascular com súbito ou rápido desenvolvimento de sintomas e sinais, correspondentes à participação de áreas focais no cérebro"1,2. Existem dois tipos de AVC: isquêmico e hemorrágico. Quando a disfunção vascular é causada por um aneurisma ou uma avaria arteriovenosa, acompanhado pelo enfraquecimento com posterior ruptura de uma artéria, este é denominado acidente vascular cerebral hemorrágico3 que, na maioria dos casos, leva à morte. Quando um trombo ou um êmbolo obstrui o fluxo sanguíneo, causando uma temporária privação de oxigênio e glicose para uma região do cérebro, é chamado de acidente vascular cerebral isquêmico4. Falha para nutrir as células ao redor da área afetada ou núcleo isquêmico leva a um desequilíbrio homeostático e metabólico, disfunção energética, morte neuronal e inflamação5, que pode induzir a uma deficiência ao longo da vida para pacientes6.
Acidente vascular cerebral isquêmico é uma lesão multifatorial, envolvendo vários tipos de células que reagem e exercem seus efeitos nos pontos de tempo diferentes. Muitas interações criam um ambiente difícil para estudar o comportamento de células individuais. Então, como é que estudamos o contributo de um tipo de célula específica em um ambiente tão complexo? Um modelo aceito em vitro de isquemia consiste em expor as células à privação de oxigênio e glicose (OGH), durante um determinado período, seguido da restauração das células para um ambiente normoxic. Este sistema simula um acidente vascular cerebral isquêmico seguido de reperfusão de sangue. Neste método, as células ou tecidos são expostos a uma mídia livre de glicose em um ambiente purificado de oxigênio, utilizando uma câmara especializada hipóxica. O tempo de incubação OGH pode variar de alguns minutos até 24 h, dependendo da hipótese de que quer ser testado. Estudos têm mostrado que, dependendo da época do OGH e normoxic ambiente, fenótipos específicos do curso (ou seja, aguda ou subcrónica) pode ser alcançado. Primários isolados astrócitos, expostos a OGH com posterior restauração às condições normoxic, é um modelo de celular bem estudado para imitar o traço in-vitro7. Usando OGH é possível revelar os mecanismos moleculares independentes de células isoladas em um ambiente semelhante ao curso.
À medida que aumenta nosso conhecimento da biologia de astrocyte, tornou-se evidente que eles são cruciais para manter as sinapses e sustentar de reparação, desenvolvimento e plasticidade neural8. Em condições normais, astrócitos liberar e respondem às citocinas, quimiocinas, factores de crescimento e gliotransmitters, mantendo o equilíbrio metabólico e homeostase dentro sinapses5,9. Em neuroinflammation aguda, tais como acidente vascular cerebral isquêmico, estas células podem tornar-se reativa, mostrar uma superexpressão de longo prazo de Glial fibrilar ácida proteína (GFAP) e mostrar hipertrofia em sua morfologia5,10, 11 , 12. como o infarto isquêmico se desenvolve, a homeostase fornecida por astrócitos torna-se afetado, em relação a captação de glutamato normal, metabolismo energético, troca de moléculas ativas e antioxidante atividade13.
Reativados astrócitos proliferam em torno do tecido de infarto enquanto leucócitos migram para o lesado área14. Hamartomas proliferação pode ser medida usando marcadores como antígeno nuclear de proliferação celular (PCNA), Ki67 e bromodeoxyuridine (BrdU)15. Esta resposta proliferativa é gerada de forma dependente do tempo e ajuda a formar a cicatriz glial, uma matriz de astrócitos reativos irreversivelmente ao longo do parênquima do local danificado após uma lesão de9. Uma das funções iniciais desta cicatriz é limitar o extravasamento de células imunes dessa área. No entanto, estudos têm mostrado que a cicatriz se torna um impedimento físico para axônios estender, como eles liberam moléculas inibindo o crescimento axonal e criar uma barreira física, impedindo que os axônios estendendo-se ao redor da área lesada16. No entanto, há evidências científicas mostrando que após uma lesão na medula espinhal, impedir completamente a formação de cicatriz glial pode prejudicar a regeneração de axônios17. Assim, o contexto no qual é medida a resposta hamartomas específica, deve ser considerado em cima do quadro da lesão estudada.
A metodologia apresentada pode ser aplicada para estudar a função individualizada de astrócitos após privação de glicose oxigênio e ele pode ser modificado dependendo as perguntas que o investigador quer responder. Por exemplo, além da alteração morfológica e os marcadores expressados em momentos diferentes do OGH, os sobrenadantes de astrócitos expostos a OGH podem ser mais analisados para identificar fatores solúveis liberados por essas células, ou usado como uma mídia condicionada para avaliar sua efeito em outras células do cérebro. Esta abordagem permite estudos sobre reatividade astrocyte que poderia levar a elucidação dos fatores que governam e modulam sua resposta em um cenário acidente vascular cerebral isquêmico.

<table><tbody><tr><td>Instrumentos para Cirurgia - Etapa 1</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Tesoura de operação 5,5"</td><td>Roboz Company</td><td>RS-6812</td><td>Ferramentas usadas para decapitar os ratos.</td></tr><tr><td>Pinça curva 7" &nbsp;</td><td>Roboz Company</td><td>RS-5271</td><td>Segura a pele do rato enquanto o crânio é removido.</td></tr><tr><td>Tesoura de micro-dissecação 4" &nbsp;</td><td>Roboz Company</td><td>RS-5882</td><td>Corta tanto a pele quanto o crânio do rato.</td></tr><tr><td>Pinça de micro-dissecação 4" angulada, fina e afiada&nbsp;</td><td>Roboz Company</td><td>RS-5095</td><td>Segura a pele do rato enquanto o crânio é removido.</td></tr><tr><td>Pinça de micro-dissecação 4" ligeiramente curvada 0.8</td><td>Roboz Company</td><td>RS-5135</td><td>Ferramenta usada para separar córtices.</td></tr><tr><td>Pinças de microdissecação</td><td>Roboz Company</td><td>RS-4972</td><td>Peelings meninges cerebrais.</td></tr><tr><td>Microscópio de dissecção</td><td>Olympus</td><td>SZX16</td><td>Importante para remover a meninge dos córtices.</td></tr><tr><td>Preparação DMEM - etapa 2</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Dulbecco' s Águia Modificada' s Medium (DMEM)</td><td>GibCo. Empresa</td><td>11995-065</td><td>Suporta o crescimento de células.</td></tr><tr><td>Bicarbonato de sódio</td><td>Sigma-Aldrich Company</td><td>S7277</td><td>Suplemento para meios de cultura de células.</td></tr><tr><td>Soro fetal bovino (FBS)</td><td>GibCo. Empresa</td><td>10437-010</td><td>Suplemento de soro para cultura de células.</td></tr><tr><td>Penicilina-estreptomicina&nbsp;</td><td>GibCo. Empresa</td><td>15140-148</td><td>Inibe o crescimento de bactérias na cultura de células.</td></tr><tr><td>Sistema de filtro 1L com poro de 0,22um</td><td>Corning</td><td>431098</td><td></td></tr><tr><td>Cultura de astrócitos - passo 3</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Pipetas serológicas 5mL</td><td>VWR</td><td>89130-896</td><td>Para pipetar DMEM para recipientes com células.</td></tr><tr><td>Pipetas serológicas 10mL</td><td>VWR</td><td>89130-898</td><td>Para pipetar DMEM para recipientes com células.</td></tr><tr><td>Pipetas serológicas 25mL</td><td>VWR</td><td>89130-900</td><td>Para pipetar DMEM para recipientes com células.</td></tr><tr><td>Tubo cônico centrífugo 15mL</td><td>Santa Cruz Biotechnology</td><td>sc-200250</td><td></td></tr><tr><td>Tubo de trava segura 1,5mL</td><td>Eppendorf</td><td>022363204</td><td></td></tr><tr><td>Pontas de barreira 200 uL</td><td>Santa Cruz Biotechnology</td><td>sc-201725</td><td></td></tr><tr><td>Pontas de barreira 1 mL</td><td>Santa Cruz Biotechnology</td><td>sc-201727</td><td></td></tr><tr><td>Saco laranja de risco biológico 14 x 19"</td><td>VWR</td><td>14220-048</td><td></td></tr>placas <tr><td>de Petri de 60mm</td><td>Falcon</td><td>351007</td><td></td></tr><tr><td>Almofadas de gaze estéreis</td><td>Honeywell Safety</td><td>89133-086</td><td></td></tr><tr><td>Stomacher 80 Biomaster</td><td>Sewar Lab System</td><td>030010019</td><td>Triturar o tecido cerebral.</td></tr><tr><td>Sacos Estéreis para Liquidificador Stomacher 80</td> Sistema <td>de Laboratório Sewar</td><td>BA6040</td><td>Saco estéril para o homogeneizador de células stomacher.</td></tr><tr><td>Beaker 400mL</td><td>Pyrex</td><td>1000</td><td></td></tr><tr><td>Peneira de dissociação de células estéreis, malha #60&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich Company</td><td>S1020</td><td>Para obter uma suspensão uniforme de célula única.</td></tr><tr><td>Peneira de dissociação de células estéreis, malha #100</td><td>Sigma-Aldrich Company</td><td>S3895</td><td>Para obter uma suspensão uniforme de célula única.</td></tr><tr><td>Microscópio de fase invertida</td><td>Nikon</td><td>Eclypse Ti-S</td><td>Verifique as células quanto a contaminação ou crescimento celular anormal.</td></tr><tr><td>Frascos estéreis de 75 cm2</td><td>Falcon</td><td>353136</td><td></td></tr><tr><td>Placa multipoços</td><td>Falcon</td><td>353046</td><td></td></tr><tr><td>Micro óculos de cobertura (lamínulas), 18 mm, redondos</td><td>VWR</td><td>48380-046</td><td></td></tr><tr><td>Bright-Line Hemacitômetro</td><td>Sigma-Aldrich Company</td><td>Z359629</td><td></td></tr><tr><td>Pipetas</td><td>Pasteur Fisher Scientific</td><td>13-678-20D</td><td></td></tr><tr><td>Álcool etílico&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich Company</td><td>E7023</td><td></td></tr><tr><td>Cloridrato de éster metílico de L-leucina 98% (LME)</td><td>Sigma-Aldrich Company</td><td>L1002</td><td>Promove a eliminação de células da microglia no cultivo de astrócitos corticais primários.</td></tr><tr><td>Citosina &beta;-D-arabinofuranosídeo (Ara-C)</td><td>Sigma-Aldrich Company</td><td>C1768</td><td></td></tr><tr><td>Bromidrato de poli-D-lisina, peso mol 70.000-150.000</td><td>Sigma-Aldrich Company</td><td>P0899</td><td></td></tr><tr><td>Tripsina/EDTA</td><td>GibCo. Empresa</td><td>15400-054</td><td></td></tr><tr><td>Trypan Blue</td><td>Sigma-Aldrich Company</td><td>T8154</td><td></td></tr><tr><td>Tampão fosfato salina (PBS) comprimidos</td><td>Calbiochem</td><td>524650</td><td></td></tr><tr><td>Água Estéril</td><td>Sigma-Aldrich Company</td><td>W3500</td><td></td></tr><tr><td>&nbsp; Preparação do meio OGD - passo 5</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Tubo cónico da centrífuga 50 mL</td><td>VWR</td><td>89039-658</td><td></td></tr><tr><td>Dulbecco' s Águia modificada' s glicose livre média</td><td>Sigma-Aldrich Company</td><td>D5030</td><td>Suporta o crescimento de células.</td></tr><tr><td>Bicarbonato de sódio</td><td>Sigma-Aldrich Company</td><td>S7277</td><td>Suplemento para meios de cultura de células.</td></tr><tr><td>Penicilina-estreptomicina&nbsp;</td><td>GibCo. Empresa</td><td>15140-148</td><td>Inibe o crescimento de bactérias na cultura de células.</td></tr><tr><td>200mM&nbsp; L-glutamina&nbsp;</td><td>GibCo. Empresa</td><td>25030-081</td><td>Aminoácido que complementa o crescimento das células.</td></tr><tr><td>Pastilhas de tampão de fósforo salina (PBS)</td><td>Calbiochem</td><td>524650</td><td></td></tr><tr><td>Sistema de Filtro 50mL com poro de 0.22um</td> Tubo cônico de centrífuga <td>Corning</td><td>430320</td><td></td></tr><tr><td>50 mL</td><td>VWR</td><td>89039-658</td><td></td></tr><tr><td>Medidor de Fluxo Único&nbsp;</td><td>Billups-Rothenberg</td><td>SMF3001</td><td>Meça o fluxo de gás na purga de oxigênio.</td></tr><tr><td>Câmara de Incubadora de Hipóxia&nbsp;</td><td>StemCell</td><td>27310</td><td>Gera um ambiente hipóxico para a cultura de células.</td></tr><tr><td>Medidor de Oxigénio Dissolvido Rastreável</td><td>VWR</td><td>21800-022</td><td></td></tr><tr><td>95% N2/ 5% CO2 Mistura</td><td>de Gás Linde</td><td></td><td>Purga o ambiente de oxigénio.</td></tr><tr><td><forte>primário imunofluorescência de astrócitos - etapa 6</forte></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Comprimidos de tampão fosfato salino (PBS)</td><td>Calbiochem</td><td>524650</td><td></td></tr><tr><td>Solução de formalina Tampão neutro 10%</td> Solução <td>de HT501128</td> <td>Sigma-Aldrich</td><td>usada para fixar células.</td></tr><tr><td>Metanol&nbsp;</td><td>Fisher</td><td>A4544</td><td>Solução usada para fixar células.</td></tr><tr><td>Surfactante não iônico (Triton X-100)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T8787</td><td></td></tr><tr><td>Soro fetal bovino (FBS)</td><td>GibCo. Empresa</td><td>10437-010</td><td>Suplemento de soro para cultura de células.</td></tr><tr><td>Sinalização Celular</td> <td>Anti-NeuN</td><td>24307</td><td>Detecta neurônios maduros, serve para validar a cultura astrocítica.</td></tr><tr><td>Sinalização Celular</td> <td>Anti-PCNA</td><td>2586</td><td>Detecta células em proliferação.</td></tr><tr><td>Iodeto de propídio (PI)</td><td>Sigma-Aldrich Company</td><td>P4170</td><td>Coloração por apoptose.</td></tr><tr><td>Anti-Olig1</td><td>Abcam</td><td>AB68105</td><td>Detecta oligodendrócitos maduros.</td></tr><tr><td>Anti-IBA1+</td><td>Wako</td><td>016-20001</td><td>Detecta células microgliais.</td></tr><tr><td>Anti-GFAP conjugado com Cy3&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich Company</td><td>C9205</td><td>Detecta astrócitos reativos nas células tratadas.</td></tr><tr><td>Alexa Fluor 488</td><td>Molecular Probe Life Technology</td><td>A1101</td><td>Anticorpo secundário anti-camundongo.</td></tr><tr><td>Alexa Fluor 555</td><td>Molecular Probe Life Technology</td><td>A21428</td><td>Anticorpo Secundário Anti-Coelho.</td></tr><tr><td>4',6'-diamidino-2-fenilindol (DAPI)</td><td>Sigma-Aldrich Company</td><td>D9542</td><td>Coloração nuclear.</td></tr><tr><td>Microscópio confocal</td><td>Olympus</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

monitoramento de astrocyte de reatividade e proliferação in vitro sob condições isquêmicas

Monitoring Astrocyte Reactivity and Proliferation in Vitro Under Ischemic-Like Conditions

Acidente vascular cerebral isquêmico é uma lesão complexa do cérebro causada por um trombo ou êmbolo obstruindo o fluxo sanguíneo para partes do cérebro. Isto leva à privação de oxigênio e glicose, o que faz com que a falha de energia e morte neuronal. Depois de um insulto isquêmico, astrócitos tornar-se reativa e proliferam em torno do local da lesão, como ela se desenvolve. Sob esse cenário, é difícil estudar a contribuição específica dos astrócitos, a região do cérebro exposto à isquemia. Portanto, este artigo apresenta uma metodologia para estudar a reatividade astrocyte primária e proliferação sob um modelo in vitro de um ambiente, como isquemia, chamado de privação de oxigênio glicose (OGH). Astrócitos foram isolados a partir de dia 1-4-velhos ratos Neonatais e o número de células hamartomas específico foi avaliada utilizando marcador seletivo de astrocyte gliais de proteína ácida fibrilar (GFAP) e coloração nuclear. O período em que astrócitos estão sujeitos à condição de OGH pode ser personalizado, bem como a percentagem de oxigênio que estão expostos. Essa flexibilidade permite aos cientistas caracterizar a duração do estado isquêmico, como em diferentes grupos de células in vitro. Este artigo discute os prazos de OGH que induzem a reatividade astrocyte, morfologia hipertrófica e proliferação, como medido por imunofluorescência usando Proliferating Cell Nuclear Antigen (PCNA). Além de proliferação, astrócitos passam por energia e estresse oxidativo e respondem a OGH pela liberação de fatores solúveis no meio de célula. Este meio pode ser coletado e utilizado para analisar os efeitos das moléculas lançados por astrócitos em culturas neuronal preliminares sem interação célula a célula. Em resumo, este modelo de cultura celular primária pode ser usado com eficiência para entender o papel dos astrócitos isolados após lesão.

Uma das principais preocupações da cultura hamartomas primária é a presença de outras células, como neurônios, oligodendrócitos, micróglia e fibroblastos. Na Figura 1, células isoladas de córtices rato tinham alterações de mídia a cada 3 dias em foram ou não tratada ou tratada com adicionado LME para 1 h. 24 horas mais tarde, as células foram immunostained para GFAP e counterstained com DAPI. Células não tratadas mostraram uma média de 39% não-GFAP células po...

Acidente vascular cerebral isquêmico é um evento complexo, no qual a contribuição específica dos astrócitos à região afetada do cérebro exposto a privação de oxigênio glicose (OGH) é difícil de estudar. Este artigo apresenta uma metodologia para obter isolados astrócitos e estudar sua reatividade e proliferação em condições OGH.

Monitoramento de Astrocyte de reatividade e proliferação in Vitro sob condições isquêmicas

Ischemic stroke is a complex brain injury caused by a thrombus or embolus obstructing blood flow to parts of the brain. This leads to deprivation of ...

O protocolo a seguir tem como objetivo demonstrar o isolamento de astrócitos primários a partir dos cérebros de filhotes de ratos para realização da privação de oxigênio e glicose, ou OGD. A exposição de astrócitos purificados a um ambiente privado de oxigênio e glicose é um modelo que nos permite testar a reação a algumas das condições encontradas nos acidentes vasculares isquêmicos. Alterações metodológicas após a exposição à privação de oxigênio e glicose podem ser observadas e medidas utilizando marcadores seletivos de astrócitos, como a GFAP.Em resumo, essas células isoladas expostas a condições semelhantes às isquêmicas podem ser utilizadas para testar novos caminhos ativados em condições hipóxicas e outras drogas que protegem contra o acidente vascular cerebral isquêmico. Nesta parte do protocolo, astrócitos serão isolados dos córtices de filhotes de ratos. O objetivo deste procedimento é obter uma cultura primária de células astrocíticas para realizar experimentos de privação de oxigênio e glicose.Os materiais para este procedimento são os seguintes: autoclave todos os materiais antes de utilizá-los neste procedimento. Exponha a cabine a pelo menos 20 minutos de luz UV ante

monitoring-astrocyte-reactivity-proliferation-vitro-under-ischemic

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Neurociência

Este artigo descreve um protocolo de romance e de reagente conjunto projetado para a medição sensível de efeitos neurotóxicos de compostos e tratamentos em co-culturas de neurônios e astrócitos usando análise de conteúdo de alta. Resultados demonstram que a análise de conteúdo de alta tecnologia representa um romance empolgante para a avaliação de neurotoxicidade.

A Neuronal e astrocitária Ensaio Co-Cultura de Análise de Conteúdo de Alta de neurotoxicidade

Os astrócitos têm sido reconhecidos como células versáteis que participam em processos biológicos fundamentais, que são essenciais para o desenvolvimento do cérebro e função normais, e reparação do sistema nervoso central. Aqui apresenta-se um processo rápido de obtenção de culturas de astrócitos de rato puros para estudar a biologia desta classe importante de centrais células do sistema nervoso.

Isolamento e Cultura de astrócitos corticais de rato

Descrevemos aqui uma adaptação de protocolos utilizados para induzir plasticidade homeostático em neurónios para o estudo da plasticidade dos receptores acoplados à proteína G astrocíticos. Recentemente usado para examinar as mudanças no grupo I astrocitário mGluRs em ratos juvenis, o método pode ser aplicado para medir o dimensionamento de vários GPCRs astrocitárias, em tecidos de camundongos adultos in situ e in vivo, e para obter uma melhor apreciação da sensibilidade dos receptores...

Induzir Plasticidade de astrocítica Receptores de Manipulação de Neuronal queima de moeda

Astrócitos fenotipicamente selvagens e células-tronco neurais colhidas de camundongos modificados com alelos oncogênicos condicionais floxed e transformados por meio de recombinação viral mediada por Cre podem ser usados para modelar a patogênese do astrocitoma in vitro e in vivo por injeção ortotópica de células transformadas em cérebros de irmãos de ninhada singênicos e imunocompetentes.

Modelagem astrocitoma Patogênese In Vitro E In Vivo Usando Cortical astrócitos ou células-tronco neurais de condicional, Geneticamente Modificadas Ratos

Os astrócitos no SNC mudam suas propriedades funcionais e estruturais em resposta a estímulos nocivos. Este relato apresenta um protocolo para avaliação da morfologia tridimensional de astrócitos em condições de doença ou após intervenções terapêuticas.

Protocolo para tridimensional confocal morfométrica Análise de astrócitos

Os astrócitos são um dos principais intervenientes mais importantes no sistema nervoso central (SNC). Aqui, nós estamos relatando um método prático de protocolo de cultura de astrócitos do hipocampo sexuado, a fim de estudar os mecanismos subjacentes a função de astrócitos em filhotes recém-nascidos do sexo masculino e feminino após isquemia in-vitro.

As diferenças sexuais no mouse do hipocampo astrócitos após<em&gt; In-Vitro</em&gt; Isquemia

A manutenção da cobertura da barreira hematoencefálica é fundamental para a homeostase do sistema nervoso central. Este protocolo descreve técnicas in vitro para delinear os processos fundamentais e patológicos que modulam a cobertura da barreira hematoencefálica.

Ensaios In Vitro para Avaliar Formação e Perturbação de Embarque de Barreira de Sangue-Cérebro

O protocolo AWESAM descrito aqui é ideal para o cultivo de astrócitos murino em isolamento de outras células do cérebro de forma rápida, simples e barato. Astrócitos AWESAM exposição espontânea Ca2 + sinalização, morfologia e gene expressão perfis semelhantes de astrócitos na vivo.

Cultivo In Vivo-gosto murino astrócitos usando o protocolo AWESAM rápida, simples e barato

Aqui, apresentamos uma abordagem simples usando meios de cultura específicos que permitem o estabelecimento de culturas enriquecidas com neurônios e astrócitos, ou culturas neuron-glia do córtex embrionário, com alto rendimento e reprodutibilidade.

Um modelo de cultura celular para estudar o papel das interações neurônio-glia na isquemia

Aqui descrevemos um protocolo que facilita a diferenciação de células-tronco pluripotentes induzidas por humanos em astrócitos funcionais específicos do prosencéfalo. Isso permite investigações sobre o papel das células gliais na patogênese de distúrbios do neurodesenvolvimento, como a Síndrome do X Frágil, e modelagem de outros distúrbios cerebrais.

Geração e caracterização de astrócitos derivados de células-tronco pluripotentes induzidas por humanos sem ribonucleoproteína mensageira X frágil

Esse protocolo oferece um método integrado que inclui entrega viral, implantação de optrodo, indução fototrombótica, registro simultâneo da atividade de astrócitos e neurais, e estimulação optogenética de astrócitos. Esse método integrado visa fornecer investigação simultânea da relação astrócito-neurônio nos estágios agudo a crônico do AVC isquêmico.

Um Método Integrado para Modelagem de AVC Fototrombótico e Registro In Vivo de Optrode da Atividade Neuronal e Astrocítica em Ratos Comportando-se

Aprenda a isolar astrocitos primários de cortices de ratos para estudar reatividade e proliferação celular sob condições de privação de oxigênio e glicose. Este método permite investigar respostas astrocitárias em modelos de AVC isquêmico.

Monitoramento de Astrocyte de reatividade e proliferação in Vitro sob condições isquêmicas

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