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Análise de proteínas Cap-ligação em células humanas expostas a condições de oxigênio fisiológicos
Análise de proteínas Cap-ligação em células humanas expostas a condições de oxigênio fisiológicos
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JoVE Journal Genetics
Analysis of Cap-binding Proteins in Human Cells Exposed to Physiological Oxygen Conditions

Análise de proteínas Cap-ligação em células humanas expostas a condições de oxigênio fisiológicos

Full Text
8,302 Views
10:40 min
December 28, 2016

DOI: 10.3791/55112-v

Sara Timpano*1, Gaelan Melanson*1, Sonia L. Evagelou1, Brianna D. Guild1, Erin J. Specker1, James Uniacke1

1Department of Molecular and Cellular Biology,University of Guelph

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Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Aqui, apresentamos protocolos de cultura de células humanas para analisar os fatores de iniciação da tradução que se ligam à tampa 5' do mRNA durante condições fisiológicas de oxigênio. Este método utiliza um análogo de tampa m7GTP ligado à agarose e é adequado para investigar fatores de ligação de tampas e seus parceiros de interação.

O objetivo geral deste experimento é capturar proteínas de ligação à tampa em condições de baixo oxigênio. Este método utiliza um análogo de sete cápsulas de metil-guanosina ligado à agarose para investigar os fatores de ligação à tampa e seus parceiros de interação. Este método ajudará a responder a questões-chave no campo da síntese de proteínas, como a identificação de novos fatores regulados pelo oxigênio envolvidos na tradução dependente da tampa.

A principal vantagem dessa técnica é que as células são mantidas em uma estação de trabalho de hipóxia até o ponto de lise. As implicações dessa técnica se estendem à terapia do câncer porque as células cancerígenas dentro de um tumor são expostas a níveis muito baixos de oxigênio e o controle translacional desempenha um papel fundamental na progressão do tumor. Tivemos a ideia desse método pela primeira vez quando lemos uma publicação recente dos colegas de Corona relatando que a oxigenação do tecido está realmente mais próxima do que chamamos de hipóxia do que da normaxia em que as células são rotineiramente cultivadas.

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