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DOI: 10.3791/55112-v
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Aqui, apresentamos protocolos de cultura de células humanas para analisar os fatores de iniciação da tradução que se ligam à tampa 5' do mRNA durante condições fisiológicas de oxigênio. Este método utiliza um análogo de tampa m7GTP ligado à agarose e é adequado para investigar fatores de ligação de tampas e seus parceiros de interação.
O objetivo geral deste experimento é capturar proteínas de ligação à tampa em condições de baixo oxigênio. Este método utiliza um análogo de sete cápsulas de metil-guanosina ligado à agarose para investigar os fatores de ligação à tampa e seus parceiros de interação. Este método ajudará a responder a questões-chave no campo da síntese de proteínas, como a identificação de novos fatores regulados pelo oxigênio envolvidos na tradução dependente da tampa.
A principal vantagem dessa técnica é que as células são mantidas em uma estação de trabalho de hipóxia até o ponto de lise. As implicações dessa técnica se estendem à terapia do câncer porque as células cancerígenas dentro de um tumor são expostas a níveis muito baixos de oxigênio e o controle translacional desempenha um papel fundamental na progressão do tumor. Tivemos a ideia desse método pela primeira vez quando lemos uma publicação recente dos colegas de Corona relatando que a oxigenação do tecido está realmente mais próxima do que chamamos de hipóxia do que da normaxia em que as células são rotineiramente cultivadas.
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