Name: Produção e Administração de Therapeutic-tronco mesenquimais / celular estromal (MSC) Spheroids condicionadas em culturas 3-D Sob Condições Xeno-livres (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-03-18T13:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 5 s
Description: Aprenda a produzir e administrar esferoides de células-tronco mesenquimais em condições livres de xeno para terapia regenerativa. Este método melhora a retenção e funcionalidade celular em aplicações clínicas.

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Este trabalho foi financiado em parte por P40RR17447 de doação do Instituto Nacional de Saúde e RP150637 de premiação do Instituto de Pesquisa e Prevenção do Câncer do Texas. Gostaríamos de agradecer ao Dr. Darwin J. Prockop por seu apoio ao projeto.

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Os autores declaram não ter interesses financeiros concorrentes.

O MSC ideal para uso em algumas aplicações de pesquisa e clínicos devem ser altamente activado para maximizar o seu benefício, e, preferencialmente, preparados em condições XF quimicamente definidos para minimizar a entrega de antígenos potenciais de componentes do meio xenogï¿½icas como FBS. Nos protocolos descritos aqui, têm demonstrado que os métodos para 1) activar as MSCs em cultura 3D por formação de esferóides, 2) atingir a activação 3D das MSCs em condições XF, 3) avaliar os níveis de activação de MSCs de esferó...

-Tronco mesenquimais / células do estroma (CTM) têm mostrado grande potencial para várias abordagens de medicina regenerativa. MSCs foram inicialmente isolado como um componente do estroma de medula óssea, mas uma vez que foram obtidos a partir de numerosos outros tecidos adultos, incluindo o tecido adiposo 1, 2, 3. Curiosamente, o método de isolamento principal abraça a propriedade notável de MSCs de aderir firmemente ao plástico de cultura de tecidos na presença de soro fetal de bovino (FBS). Embora esta técnica de isolamento tradicional permite a expansão fácil e rápida das MSCs em bidimensional cultura (2D), é também muito artificial e ignora significado do ambiente nativo tridimensional (3D), conduzindo a potencial perda de importantes características celular 4, 5 , 6. Por conseguinte, o estudo das MSCs em culturas 3D, quesão mais fisiológica do que as culturas 2D tradicionais, surgiu na pesquisa &quot;perdidos / diminuídas&quot; características MSC. Além disso, grande interesse tem aumentado para identificar as condições (XF) livre de xeno química definida para a cultura MSC e ativação, e, assim, tornar as células mais favorável para aplicações clínicas. Muitos estudos têm sido publicados demonstrando a cultura 3D de MSCs, tanto em biomateriais e como agregados esféricos ou esferóides. MSCs em biomateriais foram inicialmente concebidos para abordagens de engenharia de tecidos para substituir tecidos danificados com andaimes de células-semeado, enquanto culturas esferóides de MSCs foram vistos como uma maneira de entender o comportamento MSC in vivo após a administração das células para terapias em ensaios pré-clínicos ou clínicos 4, 5, 7. Curiosamente, MSCs formulário esferóides espontaneamente quando a adesão ao plástico de cultura de tecidos não é permitido8, 9, 10. Tradicionalmente, a agregação de células foi facilitada por métodos balão rotativo ou técnicas de sobreposição de líquidos, os métodos utilizados inicialmente na biologia do cancro nos esforços para tentar imitar o microambiente do tumor. Mais recentemente, métodos adicionais vieram à tona que demonstram a agregação de células em placas de cultura pré-revestidas com produtos químicos específicos para evitar a célula-a-plástico aderência 4, 5, 6. Um dos métodos mais simples e mais económica de produção esferóides MSC é a cultura deles em gotas de suspensão, uma técnica que foi usado frequentemente para produzir corpos embrióides a partir de células estaminais embrionárias. Com pendurado técnica de cultura gota, a adesão de células ao plástico de cultura de tecidos é evitada suspendendo as células numa gota de meio no lado inferior de uma tampa do prato de cultura de tecidos e permitindo que a gravidade para facilitar AGGREG célulação no ápice da gota. O tamanho do esferóide pode ser facilmente manipulada alterando a concentração de células ou o volume da gota, fazendo culturas de suspensão gota particularmente fácil de controlar. Os primeiros estudos sobre a cultura 3D de MSCs demonstraram diferenças radicais nas características das células em 3D, em comparação com os seus homólogos 2D 6, 8, 9. Ao mesmo tempo, relatórios demonstraram que os efeitos benéficos de MSCs in vivo confiou na sua capacidade de se tornar activado por estímulos micro-ambientais e, em resposta, para produzir anti-inflamatória e imunomodulatória Factores 11. Interessantemente, muitos destes factores, tais como a prostaglandina E2 (PGE2), necrose tumoral gene estimulada por factor de 6 (TSG6), e factor de crescimento de hepatócitos (HGF) foi produzido em quantidades muito maiores por esferóides MSC do que as MSCs 2D tradicionais, abrindo o caminho para a ideia deutilizando culturas 3D para activar as células 8, 12, 13. Além disso, a activação de genes em culturas 3D apareceu recapitular mecanismos, pelo menos em parte, da activação das células após injecção em ratinhos 12. Ao activar as MSCs antes da sua utilização nas experiências, os efeitos das células poderia ser prolongada e mais proeminente como o efeito MSC tradicional in vivo é frequentemente adiada e transiente, e pode ser descrito como &quot;bater e correr&quot;. Durante os últimos anos, estudos funcionais importantes que utilizam esferóides MSC demonstraram que eles podem suprimir as respostas inflamatórias e modular a imunidade in vivo, influenciando as células efectoras, tais como macrófagos, células dendríticas, neutrófilos e células T fazendo esferóides de forma atraente de MSCs imunizadas 2 , 3. Além disso, a produção de moléculas de anti-cancro, tais como interleukin-24 (IL-24) e de necrose tumoral relacionado com o factor de indução de apoptose ligando (TRAIL), são aumentados em culturas em 3D de MSC em relação a monocamada MSCs, um fenómeno que pode ser explorada para terapias direcionadas 8, 10, 14. À medida que a cultura MSC tradicional necessário não apenas a utilização de plástico de cultura de tecidos, mas também de FBS, um outro obstáculo para fazer esferóides MSC mais favorável para utilização clínica tiveram que ser superados. Para enfrentar este obstáculo, que recentemente mostrou a formação de esferóides MSC em condições específicas XF química definida e estabeleceu que os esferóides MSC resultantes foram ativados para produzirem as mesmas moléculas anti-inflamatórias e anti-câncer como os esferóides gerados em condições com FBS 14. Aqui, estes resultados são apresentados em vários protocolos detalhados que demonstram a geração de MSCs pré-activada em culturas 3D usando XFmeios de comunicação. Além disso, os protocolos são apresentados que descrevem modos eficazes para avaliar os níveis de activação das MSCs no que diz respeito aos seus efeitos anti-inflamatório, imunomoduladores e anti-cancro, em conjunto com um método prático para entregar os esferóides intactas em ratos.

<table><tbody><tr><td>MEM-&alfa; (mínimo essencial médio alfa)</td><td>ThermoFisher/Gibco</td><td>12561049; 12561056; 12561072</td><td>meio essencial mínimo para a preparação de meio de crescimento MSC (CCM)</td></tr><tr><td>FBS (soro fetal bovino), premium select</td><td>Atlanta Biologicals</td><td>S11595; S11510; S11550; S11595-24</td><td>componente de meio de cultura completo para todos os tipos de células</td></tr><tr><td>L-glutamina</td><td>ThermoFisher/Gibco</td><td>25030081; 25030149; 25030164</td><td>componente de meio de cultura completo para todos os tipos de células</td></tr><tr><td>Penicilina/Estreptomicina</td><td>ThermoFisher/Gibco</td><td>15070063</td><td>componente de meio de cultura completo para todos os tipos de células</td></tr><tr><td>Unidades de Filtro de Esterilização, 0.22 &micro; m Membrana PES</td><td>MilliporeSigma</td><td>SCGPU01RE; SCGPU02RE; SCGPU05RE; SCGPU10RE; SCGPU11RE</td><td>meio de esterilização</td></tr><tr><td>150 mm placa de cultura de células</td><td>Nunc</td><td>D8554&nbsp; Cultura de células SIGMA</td><td></td></tr><tr><td>Incubadora umidificada de CO2 com camisa de água Thermo Fisher</td><td></td><td>Modelo 3110</td><td>Incubação de células cultivadas</td></tr><tr><td>MCSs de passagem precoce</td><td>Centro de preparação e distribuição de células-tronco adultas no Texas A& M Centro de Ciências da Saúde Faculdade de Medicina Instituto de Medicina Regenerativa da Scott & Preparação de</td><td>NA</td> branco <td>de culturas 2D e 3D de MSCs</td></tr><tr><td>banho-maria</td><td>VWR</td><td>89501-468</td><td>aquecendo meios para 37 &graus; C</td></tr><tr><td>Pipetas</td><td>Eppendorf</td><td>492000904</td><td>manuseio manual de líquidos</td></tr><tr><td>Pipete-Aid</td><td>Drummond Scientific Company</td><td>4-000-300</td><td>manuseio de pipetas serológicas estéreis</td></tr><tr><td>Costar pipeta sorológica estéril (5, 10, 25 e 50 ml)</td><td>Corning</td><td>4487; 4101; 4251; 4490</td><td>manuseio de líquidos</td></tr><tr><td>PBS (solução salina tamponada com fosfato), pH 7,4</td><td>ThermoFisher/Gibco</td><td>10010023; 10010072; 10010031; 10010049</td><td>processamento de cultura de células</td></tr><tr><td>Solução de tripsina/EDTA a 0,25%</td><td>ThermoFisher/Gibco</td><td>25200056; 25200072; 25200114 levantamento de</td><td>células aderentes e dispersão de agregados celulares</td></tr><tr><td>Tubo cônico de 15 ml</td><td>Centrifugação</td><td>de células 352097</td><td>Corning/BD Falcon</td></tr><tr><td>Tubo cônico de 50 ml</td><td>Centrifugação de células</td><td>de 352098</td><td>Corning/BD Falcon</td></tr><tr><td>Centrífuga refrigerada Eppendor</td><td>Eppendorf/Fisher Scientific</td><td>Modelo 5810R</td> hemocitômetro <td>de centrifugação de células</td></tr><tr><td></td><td>Fisher Scientific</td><td>26716</td><td>contagem de células</td></tr><tr><td>tripano azul</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T8154 SIGMA</td><td>exclusão de células mortas durante a contagem de células no hemacitômetro</td></tr><tr><td>Meio MSC xenolivre definido-1 (XFM-1)</td><td>ThermoFisher/Gibco</td><td>A1067501</td><td>Meio livre de xeno especificamente formulado para o crescimento e expansão de células-tronco mesenquimais humanas</td></tr><tr><td>Meio MSC xenolivre definido-2 (XFM-2)</td><td>Tecnologias de Células-Tronco</td><td>5420</td><td>Meio definido, livre de xeno para células-tronco mesenquimais humanas</td></tr><tr><td>HSA (Albumina sérica humana)</td><td>Gemini</td><td>800-120</td><td>Componente de mídia MSC livre de xeno</td></tr><tr><td>rHSA (albumina sérica humana recombinante)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A9731&nbsp; SIGMA</td><td>Componente de mídia MSC livre de xeno</td></tr><tr><td>Isolamento total de RNA Mini Kit</td><td>Qiagen</td><td>74104</td><td>Extração total de RNA</td></tr><tr><td>Qiashredder</td><td>Qiagen</td><td>79654</td><td>Homogeneização da amostra antes da extração total de RNA</td></tr><tr><td>Conjunto DNase livre de RNAse&nbsp;</td><td>Qiagen</td><td>79254</td><td>Eliminação de DNA na coluna durante a extração total de RNA</td></tr><tr><td>&beta;-mercaptoetanol&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M6250&nbsp; Inibição de RNAs por ALDRICH</td><td>em tampão RLT</td></tr><tr><td>Vortex</td><td>VWR</td><td>97043-562</td><td>amostra de mistura</td></tr><tr><td>Espectrofotômetro</td><td>Biorad</td><td>NA</td><td>Concentração e qualidade de RNA</td></tr><tr><td>Kit de transcrição reversa de cDNA de alta capacidade</td><td>ThermoFisher/Applied Biosystems</td><td>4368814</td><td>transcrição de RNA total em cDNA</td></tr><tr><td>Ensaios de expressão gênica</td><td>ThermoFisher/Applied Biosystems</td><td>varia a</td><td>combinação de primer/sonda para PCR em tempo real</td></tr><tr><td>Fast Universal PCR Master Mix</td><td>ThermoFisher/Applied Biosystems</td><td>4352042; 4364103; 4366073; 4367846</td><td>master mix para reação de PCR em tempo</td></tr><tr><td>real Sistema de PCR em tempo real (ABI Prism 7900 HT Sequence Detection System)</td><td>ABI Prizm</td><td>NA</td><td>PCR em tempo real</td></tr><tr><td>Tubo de centrífuga de 1,5 ml</td><td>Eppendorf</td><td>22364111</td><td>centrifugação celular, coleta e armazenamento de amostras</td></tr> <tr><td>(-80 &deg; C) freezer</td><td>Thermo Fisher</td><td>Modelo Thermo Forma 8695</td><td>armazenamento de amostras</td></tr><tr><td>PGE2 (Prostaglandina E2) Kit ELISA</td><td>R& D Sistemas</td><td>KGE004B</td><td>estimativa da concentração de citocinas na amostra</td></tr><tr><td>DMEM (Dulbecco' s meio Eagle modificado)</td><td>ThermoFisher/Gibco</td><td>10566-016; 10566-024; 10566-032 meios de</td><td>cultura de macrófagos</td></tr><tr><td>J774 macrófagos de camundongo</td><td>ATCC</td><td>TIB-67</td><td>linha celular de macrófagos de camundongo</td></tr><tr><td>Placa de 12 poços</td><td>Corning</td><td>3513</td><td>in vitro estimulação de macrófagos</td></tr><tr><td>LPS (lipopolissacarídeo)</td><td>Sigma-aldrich</td><td>L4130</td><td>in vitro estimulação de macrófagos</td></tr><tr><td>Mouse TNF-a Kit ELISA R</td><td>& D Systems</td><td>MTA00B</td><td>estimativa da concentração de citocinas na amostra</td></tr><tr><td>de kit ELISA de IL-10 (interleucina 10) de camundongo</td><td>R& D Systems</td><td>M1000B</td><td>estimativa da concentração de citocinas na amostra</td></tr><tr><td>RPMI-1640 meio</td><td>ThermoFisher/Gibco</td><td>11875-085</td><td>meios de cultura de esplenócitos</td></tr><tr><td>BALB/c camundongos The</td><td>Jackson Laboratory</td><td>651</td><td>in vivo entrega de esferóides; preparação de esplenócitos</td></tr><tr><td>Anti-Mouse CD3e Grau Funcional Purificado</td><td>eBioscience</td><td>145-2C11</td><td>in vitro estimulação de esplenócitos</td></tr><tr><td>70 &mu; m coador&nbsp;</td><td>Corning</td><td>352350</td><td>Preparação de esplenócitos</td></tr><tr><td>Solução de lise de glóbulos vermelhos (1x)</td><td>Affymetrix eBioscience</td><td>00-4333</td><td>remoção de glóbulos vermelhos durante o isolamento de esplenócitos</td></tr><tr><td>Camundongo IFN-&#947; (interferão gama) kit ELISA</td><td>R& D Systems</td><td>MIF 00</td><td>estimativa da concentração de citocinas na amostra</td></tr><tr><td>de células de câncer de próstata LNCaP&nbsp;</td><td>ATCC</td><td>CRL-1740</td><td>estuda o efeito das MSCs 3D em linhagens de células cancerígenas in vitro</td></tr><tr><td>kit de ensaio de proliferação celular baseado em DNA</td><td>ThermoFisher</td><td>C7026</td><td>medição do número de células com base no conteúdo de DNA</td></tr><tr><td>NaCl</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S5150</td><td>componente do reagente de lise</td></tr><tr><td>EDTA (ácido etilenodiaminotetracético)</td><td>ThermoFisher</td><td>FERR1021</td><td>quelante de cálcio, componente do reagente de lise</td></tr><tr><td>Rnase A</td><td>Qiagen</td><td>19101</td><td>Degradação do RNA para medição do leitor de</td></tr><tr><td>microplacas multimodo baseado em filtro</td> de DNA <td>A Tecnologia BMG</td><td>Ensaios</td> de <td>microplacas (ELISA, quantificação celular, etc.)</td></tr><tr><td>HBSS (solução salina balanceada Hanks), sem cálcio, sem magnésio, sem vermelho de fenol</td><td>ThermoFisher/Gibco</td><td>14175079</td><td>ressupensões de esferoides MSC antes de injeções in vivo</td></tr><tr><td>Isoflurano</td><td>MWI Vet Supply</td><td>502017</td><td>Anestesia para injeções in vivo</td></tr><tr><td>Oxigênio, gás comprimido</td><td>Praxair</td><td>NA</td><td>Para uso com isoflurano</td></tr><tr><td>Gabinete Thermo Forma BSL-2</td><td>Thermo Fisher</td><td>Modelo 1385</td><td>Cultura de células estéreis</td></tr><tr><td>Segurança Cateter IV/estilete de agulha, 20 G, 1 polegada</td><td>Terumo</td><td>SR*FNP2025</td><td>Entrega de shperoids na cavidade peritoneal</td></tr><tr><td>Pontas de micropipeta estéreis</td><td>Eppendorf</td><td>varia</td><td>o manuseio de líquidos/células</td></tr></tbody></table>

produção e administração de therapeutic-tronco mesenquimais / celular estromal (msc) spheroids condicionadas em culturas 3-d sob condições xeno-livres

Production and Administration of Therapeutic Mesenchymal Stem/Stromal Cell (MSC) Spheroids Primed in 3-D Cultures Under Xeno-free Conditions

-Tronco mesenquimais / células do estroma (MSCs) são uma grande promessa em bioengenharia e medicina regenerativa. MSCs podem ser isoladas a partir de vários tecidos adultos através da sua forte aderência ao plástico da cultura de tecidos e, em seguida, ainda mais expandidas in vitro, mais comumente utilizando soro fetal de bovino (FBS). Uma vez que as MSCs de FBS pode causar a tornar-se imunogénico, a sua presença nas culturas de MSC limita ambas as aplicações clínicas e experimentais das células. (XF) media Portanto, estudos que empregam química definida livre de xeno para culturas MSC são extremamente valiosos. Muitos efeitos benéficos do MSC têm sido atribuídos à sua capacidade para regular a inflamação e imunidade, principalmente através da secreção de factores imunomoduladores tais como necrose tumoral gene estimulada por factor de 6 (TSG6) e prostaglandina E2 (PGE2). No entanto, MSCs requer ativação para produzir esses fatores e uma vez que o efeito de MSCs é muitas vezes transitória, grande interesse surgiu para descobrir maneiras de pré-activação das células prior para a sua utilização, eliminando assim o tempo de atraso para a activação in vivo. Aqui nós apresentamos protocolos para ativar de forma eficiente ou MSCs principais em três dimensões culturas (3D) sob condições XF quimicamente definidos e para administrar esses MSCs pré-activado in vivo. Especificamente, nós primeira descrevem métodos para gerar MSC esférica micro-tecidos ou &quot;esferóides&quot; em gotas de suspensão utilizando meio XF e demonstrar como as esferas e meio condicionado (CM) pode ser colhida para várias aplicações. Em segundo lugar, vamos descrever telas de expressão do gene e testes funcionais in vitro para avaliar rapidamente o nível de activação MSC em esferóides, enfatizando o potencial anti-inflamatório e anti-cancro das células. Em terceiro lugar, descreve-se um novo método para injectar esferóides MSC intactas dentro da cavidade peritoneal do rato in vivo para testes de eficácia. No geral, os protocolos aqui superar grandes desafios de obtenção de MSCs pré-activado sob química definida XF concondições e proporcionar um sistema flexível para administrar esferóides MSC para as terapias.

No trabalho atual, penduradas culturas gota foram empregadas para gerar micro-tecidos esféricas compactas ou &quot;esferóides&quot; de MSCs activado nas condições XF. O roteiro de investigação na Figura 1 mostra que MSCs são encorajados a auto-montar em esferóides quando suspensas em pendurar gotas durante 72 horas, após o que os esferóides, ou o CM carregado com fatores terapêuticos derivados da esfera, pode ser recolhida e potencialmente utilizado em ambos pesquisa e a...

O potencial terapêutico das células-tronco/estromais mesenquimais (MSCs) está bem documentado, no entanto, o melhor método de preparação das células para os pacientes permanece controverso. Aqui, comunicamos protocolos para gerar e administrar com eficiência agregados esféricos terapêuticos ou 'esferoides' de MSCs preparados em condições livres de xeno para aplicações experimentais e clínicas.

Produção e Administração de Therapeutic-tronco mesenquimais / celular estromal (MSC) Spheroids condicionadas em culturas 3-D Sob Condições Xeno-livres

Mesenchymal stem/stromal cells (MSCs) hold great promise in bioengineering and regenerative medicine. MSCs can be isolated from multiple adult tissues via ...

O objetivo geral desses experimentos é gerar e injetar de forma eficiente agregados esféricos terapêuticos, ou esferoides, de células-tronco mesenquimais/estromais, ou CSMs, previamente condicionadas em condições livres de componentes xenógenos para aplicações experimentais e clínicas. Esses métodos podem ajudar a superar grandes barreiras no campo da terapia com CSMs, como a baixa retenção celular, sobrevivência e funcionalidade, frequentemente observadas após o transplante de células dispersas e em condições adversas comumente associadas à lesão tecidual.A principal vantagem desses procedimentos é que os esferoides de CMM podem ser preparados, primados e injetados na ausência de produtos animais imunogênicos, como o soro bovino fetal (FBS), o que atualmente limita algumas aplicações clínicas dessas células e também pode dificultar a interpretação de alguns dados pré-clínicos. Embora esse mecanismo seja potencialmente muito benéfico para mediar a eficácia baseada em CMM, ele também pode ser utilizado para compreender o reparo tecidual mediado por CMM e também como outras formulações de meio podem alterar o perfil terapêutico do genex plus. A demonstração desses procedimentos será

production-administration-therapeutic-mesenchymal-stemstromal-cell

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Biologia do Desenvolvimento

Este protocolo descreve o isolamento ea subsequente expansão de células mesenquimais estromais e as células endoteliais que formam colônias sem o uso de animais soro autólogo para gerar pares para fins de transplante experimental.

Isolamento e animais de Expansão de soro livre de cordão umbilical humano Derivado células mesenquimais estromais (MSCs) e endoteliais Células Progenitoras Colony Forming (ECFCs)

A cultura de células estromais mesenquimais humanas (hMSCs) com soro autólogo, reduz os riscos de rejeição por material de xenogénico e outros efeitos negativos. Também permite a recuperação de um subconjunto de células progenitoras mesodérmica, que pode fornecer as hMSCs frescos. Incorporação hMSCs em um coágulo de fibrina autóloga permite fácil manuseio e implantação cirúrgica eficaz.

Estromais mesenquimais cultura de células e Entrega em condições autólogas: Uma abordagem inteligente para aplicações ortopédicas

Aqui, nós apresentamos protocolos de cultivo de esferoides da pilha do ligamento periodontal humano (PDL) por películas do quitosana. A cultura de esferoides celulares tridimensionais (3D) fornece uma alternativa ao sistema convencional da cultura do poliestireno da cultura do tecido (TCPs).

Formação de esferóides da célula do ligamento periodontal humano em filmes de quitosana

Aqui, apresentamos um protocolo para produzir um grande número de exossomos de grau GMP a partir de células-tronco mesenquimais do líquido sinovial usando um biorreator 3D.

Preparação em larga escala de exossomos derivados de células-tronco mesenquimais do líquido sinovial por cultura de biorreator 3D

Aqui, descrevemos a produção em larga escala de esferoides esferoides de células-tronco derivados de adiposos (ASC) usando um sistema automatizado de pipetização para semear a suspensão celular, garantindo assim a homogeneidade do tamanho e forma de spheroid. Estes esferoides ASC podem ser usados como blocos de construção para abordagens de bioimpressão 3D.

Produção automatizada em larga escala de esferoides de células-tronco derivados de adiposo para bioimpressão 3D

Apresentamos aqui um protocolo para colheita de células aderentes de frascos multicamadas de forma semi-automatizada fechada usando um sistema de centrifugação em contrafluxo. Este protocolo pode ser aplicado para a colheita de células aderentes e em suspensão de outras plataformas de expansão celular com poucas modificações nas etapas existentes.

Processamento de células-tronco mesenquimais humanas para aplicações clínicas usando um fluxo de trabalho semi-automatizado fechado

Os produtos xenogênicos (químicos ou derivados de animais) introduzidos nas etapas de preparação/manipulação da terapia celular estão associados a um risco aumentado de reatividade imunológica e transmissão patogênica em pacientes hospedeiros. Aqui, um método completo livre de xenogênicos para o isolamento e expansão in vitro de células-tronco derivadas de tecido adiposo humano é descrito.

Isolamento e cultura de células-tronco derivadas de tecido adiposo humano com um método inovador livre de xenogênicos para terapia humana

Um protocolo é descrito para a produção de células dependentes de ancoragem por microtransportadores-microbioretores como potenciais terapias baseadas em células. Focando em um caso de uso da síndrome de desconforto respiratório agudo, o rendimento celular comparável e a expressão gênica favorável em relação às condições de processo baseadas em frascos são ilustrados. Esse protocolo é extensível para outras células dependentes da ancoragem e indicações de alvo.

Produção baseada em microbioreadores de células estromais mesenquimatosais dependentes de ancoragem, preparadas para a síndrome aguda de desconforto respiratório

Descreve-se aqui métodos para a dissecação de tecidos fetais e maternas de placenta humana, seguido por isolamento e expansão de células estaminais mesenquimais / estroma (MSC) a partir desses tecidos.

Isolamento e expansão de CTM / células estromais derivadas de placenta humana Tissue

Um método para a criação de Drosophila melanogaster sob condições axénicas e gnotobióticos é apresentada. embriões voam são dechorionated em hipoclorito de sódio, transferidos assepticamente à dieta estéril, e criados em recipientes fechados. Inoculando dieta e embriões com bactérias leva a associações gnotobióticos e presença de bactérias é confirmada por plaqueamento de corpo inteiro de Drosophila homogeneizados.

Elevando a mosca da fruta<em&gt; Drosophila melanogaster</em&gt; Sob axênicas e gnotobióticos Condições

Aprenda a produzir e administrar esferoides de células-tronco mesenquimais em condições livres de xeno para terapia regenerativa. Este método melhora a retenção e funcionalidade celular em aplicações clínicas.

Produção e Administração de Therapeutic-tronco mesenquimais / celular estromal (MSC) Spheroids condicionadas em culturas 3-D Sob Condições Xeno-livres (Vídeo) | JoVE Journal

Produção e Administração de Therapeutic-tronco mesenquimais / celular estromal (MSC) Spheroids condicionadas em culturas 3-D Sob Condições Xeno-livres

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