Diagnóstico de romance em artroplastia de revisão: implante Sonication e reação em cadeia da polimerase Multiplex

O objetivo geral dos procedimentos descritos com aspiração articular, reação em cadeia da polimerase multiplex e sonicação é fornecer resultados microbiológicos rápidos e confiáveis aos cirurgiões ortopédicos em casos de suspeita de infecção articular periprotética. Este método pode ajudar a responder a questões-chave no campo diagnóstico e terapêutico da infecção articular periprotética, como achados precoces de patógenos e, portanto, tratamento direcionado precoce. A principal vantagem dessas técnicas é a entrega de resultados imediatos.

Pode acelerar o diagnóstico diferencial em casos de suspeita de infecção articular periprotética. Posicione o paciente em decúbito dorsal em uma cama de exame. Se o joelho for perfurado, coloque um rolo de joelho sob o joelho do paciente para que o joelho fique em uma posição ligeiramente flexionada.

Use aparadores elétricos para encurtar os pelos do corpo densos ou longos. Em seguida, prepare a mesa de instrumentos e o vestido para a cirurgia de acordo com o protocolo de texto. Em seguida, use um desinfetante de pele para lavar bem a pele do paciente no local da punção.

Com um campo estéril fenestrado, cubra o local da punção. Em seguida, identifique o local da punção através do caimento. Usando uma lâmina de bisturi pontiaguda, faça uma pequena incisão na pele no local da incisão.

Encaixe a cânula no luer-slip da seringa. Em seguida, insira a cânula através da incisão da facada. No recesso superior da articulação do joelho, aponte para um ângulo dorsal e medial de 45 graus em direção ao recesso, abaixo do pólo superior da patela, e insira a agulha a uma profundidade de aproximadamente 5 cm.

Aspire o fluido articular puxando o pistão da seringa. Para evitar a formação de hematomas, aplique um curativo, seguido de um curativo na incisão da facada. Use desinfetante alcoólico para desinfetar a membrana de um frasco de hemocultura pediátrico.

Em seguida, coloque uma cânula nova na seringa e injete 1 a 3 mL de fluido articular aspirado no frasco. Misture por agitação suave ou rotação. Para preparar uma amostra de aspirado de articulação nativa, remova a cânula da seringa.

Em seguida, abra um tubo de coleta de sangue sem aditivos e injete 1 mL de aspirado no tubo de coleta. Recoloque e feche a tampa para análise de PCR. Transfira 1 a 4 mL do aspirado articular para um tubo de coleta de sangue contendo EDTA para contagem e diferenciação celular.

Descongele o tubo master mix colocando-o em temperatura ambiente. Transferir 180 ml da amostra recolhida para o tubo de amostra. Feche o tubo de amostra com a tampa do tubo de amostra que contém a proteína quinase K e um gene de controle interno para o controle de qualidade de todo o fluxo de trabalho.

No cockpit, abra o software operacional tocando no botão Novo teste no canto inferior esquerdo. Use a tela sensível ao toque para inserir os dados do paciente ou uma amostra ID.To selecione a amostra no menu suspenso, primeiro escolha Cartucho ITI, depois Ortopedia como modo de aplicação e, finalmente, selecione Fluido sinovial ou Fluido de sonicação como tipo de amostra. Em seguida, pressione o botão Iniciar.

Digitalize o código de barras na parte inferior do tubo de amostra. Em seguida, insira o tubo de amostra no lisador. Em seguida, selecione a amostra na tela do cockpit para desbloquear o tubo de amostra do Lysator.

Em seguida, remova o sample tubo do Lisator e feche a tampa superior do Lysator. Transfira o sample tubo para o sample slot do tubo do cartucho de PCR. Em seguida, insira o tubo de mistura principal descongelado no slot de mistura principal do cartucho de PCR.

Siga as instruções no monitor do cockpit para escanear o cartucho de PCR com a mistura principal e o tubo de amostra. Insira o cartucho de PCR no slot de cartucho indicado do analisador. Na tela sensível ao toque do cockpit no canto inferior esquerdo, escolha Testes ativos e escolha o ID de amostra correto para exibir os resultados do teste.

Salve os resultados na memória da máquina e imprima ou exporte para referência futura. Converse com seu microbiologista e informe-o sobre os detalhes do caso, para que ele esteja preparado para analisar as amostras prontamente. Sob uma bancada de trabalho de fluxo de ar laminar, abra o recipiente de plástico, segurando a prótese explantada da sala de cirurgia e adicione solução estéril de cloreto de sódio a 0,9% até que o corpo estranho explantado seja coberto em pelo menos 80% Feche o recipiente de plástico.

Em seguida, agite ou agite bem o recipiente de plástico por 30 segundos. Transfira o recipiente de plástico para o banho de sonicação. Em seguida, verifique o nível do fluido no banho.

Sonicar a amostra por cinco minutos, com uma frequência de 40 mais ou menos 2 kilohertz e uma densidade de potência de 0,22 mais ou menos 0,04 watts por centímetro quadrado. Em seguida, agite ou vortex completamente a amostra por 30 segundos. Dentro da bancada de fluxo laminar, colete 50 mL do fluido de sonicação e transfira-o para um tubo estéril antes de selar hermeticamente o tubo.

Para criar um fluido de sonicação concentrado, centrifugue o tubo a 4200 vezes G por 10 minutos, deixando um volume residual de 10 mL, use a pipeta para descartar o sobrenadante restante. Ressuspenda o pellet pipetando e vortexando. Inocular cada balão de meios de cultura adequados com 0,5 ml de líquido de sonicação concentrado.

Inocule o frasco de hemocultura pediátrica com 2 mL de fluido de sonicação concentrado, conforme demonstrado anteriormente neste vídeo. Em seguida, transfira 1 mL de fluido de sonicação concentrado para um tubo estéril sem aditivos para análise de PCR. Transferir os meios de cultura inoculados para a incubadora.

Incube as culturas por 14 dias e verifique o crescimento diariamente. A presença de uma infecção articular periprotética foi considerada comprovada quando um critério maior ou pelo menos três dos cinco critérios menores estavam presentes. Os principais critérios incluem a presença de uma fístula ou a detecção de um patógeno em duas amostras microbiológicas separadas.

Critérios menores incluem contagem de células positiva ou diferenciação celular positiva no aspirado articular, PCR positiva e velocidade de sedimentação em amostras de sangue, histologia positiva nas amostras de tecido ou detecção de um patógeno em apenas uma amostra microbiológica. Os resultados aqui mostraram uma sensibilidade moderada para o diagnóstico de PCR do fluido de sonicação e aspirado articular, mas uma especificidade muito forte de 100%Sempre que a PCR mostrou um achado positivo no aspirado articular ou no fluido de sonicação, o mesmo patógeno foi detectado posteriormente em uma das culturas microbiológicas convencionais. A PCR das diferentes amostras de casos não infecciosos não mostrou resultados falso-positivos.

Seis dos 16 patógenos verdadeiros nas amostras de fluido de sonicação e cinco dos 13 patógenos da cultura de fluido articular foram perdidos pela detecção de PCR. Os diagnósticos combinados de PCR de ambos os materiais, aspirado articular e fluido de sonicação identificaram 12 dos 18 casos de infecção corretamente. Depois de assistir a este vídeo, você deve ter uma boa compreensão de como melhorar seu caminho de diagnóstico na infecção articular periprotética.

Você pode ver como microbiologistas e cirurgiões ortopédicos devem trabalhar juntos para melhorar o diagnóstico diferencial da melhor maneira possível. Se realizado corretamente, você terá resultados clinicamente valiosos da PCR multiplex baseada em cartucho dentro de cinco horas após a aspiração articular. Ao tentar este procedimento, é importante lembrar de trabalhar estéril durante todo o processo.

Não se esqueça de que trabalhar com amostras de tecido humano ou amostras microbiológicas pode ser extremamente perigoso. Todas as precauções, como equipamentos de proteção individual, devem sempre ser tomadas durante a execução deste procedimento.