Diagnóstico de romance em artroplastia de revisão: implante Sonication e reação em cadeia da polimerase Multiplex

O objetivo geral dos procedimentos descritos com aspiração articular, reação em cadeia da polimerase multiplex e sonicação é fornecer resultados microbiológicos rápidos e confiáveis aos cirurgiões ortopédicos em casos suspeitos de infecção peri-prótese articular. Este método pode ajudar a responder perguntas fundamentais no campo diagnóstico e terapêutico da infecção peri-prótese articular, como a detecção precoce de patógenos e, consequentemente, o início precoce de um tratamento direcionado. A principal vantagem dessas técnicas é a obtenção de resultados imediatos.

Isso pode acelerar o diagnóstico diferencial em casos suspeitos de infecção articular próstética. Posicione o paciente em posição supina sobre uma maca de exame. Se o joelho for puncionado, coloque um rolo sob o joelho do paciente para que o joelho fique em posição levemente flexionada.

Use tesouras elétricas para encurtar pelos corporais densos ou longos. Em seguida, prepare a mesa de instrumentos e vista-se para a cirurgia de acordo com o protocolo descrito no texto. Depois, use um desinfetante para pele para lavar completamente a pele do paciente no local da punção.

Com um campo estéril fenestrado, cubra o local da punção. Em seguida, identifique o local da punção através do campo. Usando uma lâmina de bisturi pontiaguda, faça uma pequena incisão perfurante através da pele no local da incisão.

Conecte a cânula ao encaixe luer-slip da seringa. Em seguida, insira a cânula através da incisão puntura. No recesso superior da articulação do joelho, direcione em um ângulo de 45 graus dorsal e medial em direção ao recesso, abaixo do polo superior da patela, e insira a agulha a uma profundidade de aproximadamente 5 cm.

Aspire o líquido articular puxando o êmbolo da seringa. Para prevenir a formação de hematomas, aplique um curativo, seguido por uma atadura na incisão. Use um desinfetante alcoólico para desinfetar a membrana de um frasco de cultura de sangue pediátrica.

Em seguida, coloque uma cânula nova na seringa e injete 1 a 3 mL do líquido articular aspirado no frasco. Misture com agitação suave ou rotação. Para preparar uma amostra nativa de aspirado articular, remova a cânula da seringa.

Em seguida, abra um tubo de coleta de sangue sem aditivos e injete 1 mL do aspirado no tubo de coleta. Substitua e feche bem a tampa para análise de PCR. Transfira de 1 a 4 mL do aspirado articular para um tubo de coleta de sangue contendo EDTA para contagem e diferenciação celular.

Descongele o tubo do mix mestre deixando-o em temperatura ambiente. Transfira 180 mcL do espécime coletado para o tubo de amostra. Feche o tubo de amostra com a tampa do tubo que contém a proteína quinase K e um gene controle interno para o controle de qualidade de todo o fluxo de trabalho.

No cockpit, abra o software operacional tocando o botão Novo Teste no canto inferior esquerdo. Use a tela sensível ao toque para inserir os dados do paciente ou um ID da amostra. Para selecionar o espécime no menu suspenso, primeiro escolha Cartucho ITI, depois Ortopedia como modo de aplicação e, finalmente, selecione Líquido Sinovial ou Líquido de Sonicação como tipo de amostra. Em seguida, pressione o botão Iniciar.

Leia o código de barras na parte inferior do tubo de amostra. Em seguida, insira o tubo de amostra no Lysator. Depois, selecione a amostra na tela do painel para destravar o tubo de amostra do Lysator.

Em seguida, remova o tubo da amostra do Lysator e feche a tampa superior do Lysator. Transfira o tubo da amostra para o compartimento do tubo de amostra no cartucho de PCR. Em seguida, insira o tubo do mix mestre descongelado no compartimento do mix mestre do cartucho de PCR.

Siga as instruções no monitor do painel para escanear o cartucho de PCR com a mistura mestra e o tubo da amostra. Insira o cartucho de PCR no compartimento indicado do analisador. Na tela sensível ao toque do painel, no canto inferior esquerdo, escolha Testes Ativos e, em seguida, selecione o ID da amostra correto para exibir os resultados do teste.

Salve os resultados na memória da máquina e imprima ou exporte para referência futura. Fale com seu microbiologista e informe-o sobre os detalhes do caso, para que ele esteja preparado para analisar as amostras prontamente. Em uma bancada de fluxo laminar, abra o recipiente plástico contendo a prótese explantada proveniente do centro cirúrgico e adicione solução estéril de cloreto de sódio 0,9% até que o corpo estranho explantado esteja coberto em pelo menos 80%. Feche o recipiente plástico.

Em seguida, agite vigorosamente o recipiente plástico ou o mexa por 30 segundos. Transfira o recipiente plástico para o banho de ultrassom. Depois, verifique o nível do fluido no banho.

Sonicar a amostra durante cinco minutos, com uma frequência de 40 mais ou menos 2 quilohertz e uma densidade de potência de 0,22 mais ou menos 0,04 watts por centímetro quadrado. Em seguida, agitar ou vórtex a amostra completamente por 30 segundos. Dentro da bancada de fluxo laminar, coletar 50 mL do fluido de sonicação e transferi-lo para um tubo estéril antes de fechar o tubo hermeticamente.

Para criar um fluido de sonicação concentrado, centrifugue o tubo a 4200 ×g por 10 minutos, deixando um volume residual de 10 mL; use a pipeta para descartar o sobrenadante remanescente. Re-suspenda o pellet por meio de pipetagem e vortex. Inocule cada frasco de meio de cultura apropriado com 0,5 mL do fluido de sonicação concentrado.

Inocule o frasco pediátrico de hemocultura com 2 mL do fluido concentrado de sonicação, conforme demonstrado anteriormente neste vídeo. Em seguida, transfira 1 mL do fluido concentrado de sonicação para um tubo estéril sem aditivos, para análise por PCR. Transfira o meio de cultura inoculado para a incubadora.

Incube as culturas por 14 dias e verifique o crescimento diariamente. Considerou-se confirmada a presença de infecção articular periprotética quando um critério maior ou pelo menos três dos cinco critérios menores estivessem presentes. Os critérios maiores incluem a presença de uma fístula ou a detecção de um patógeno em duas amostras microbiológicas separadas.

Os critérios menores incluem contagem celular positiva ou diferenciação celular positiva no líquido articular aspirado, proteína C reativa (CRP) e taxa de sedimentação globular positivas em amostras sanguíneas, histologia positiva nas amostras de tecido ou detecção de um patógeno em apenas uma amostra microbiológica. Os resultados aqui demonstraram sensibilidade moderada para o diagnóstico por PCR em fluido de sonicação e no líquido articular aspirado, mas uma especificidade muito alta de 100%. Sempre que a PCR apresentou resultado positivo no líquido articular aspirado ou no fluido de sonicação, o mesmo patógeno foi detectado posteriormente em uma das culturas microbiológicas convencionais. A PCR realizada nas diferentes amostras de casos sem infecção não mostrou resultados falsos-positivos.

Six dos 16 patógenos verdadeiros nas amostras de fluido de sonicação e cinco dos 13 patógenos do cultivo de fluido articular foram perdidos pela detecção por PCR. O diagnóstico combinado por PCR de ambos os materiais, o aspirado articular e o fluido de sonicação, identificou corretamente 12 dos 18 casos de infecção. Após assistir a este vídeo, você deverá ter uma boa compreensão de como melhorar seu caminho diagnóstico na infecção de articulação próstética periprotética.

Pode-se observar como microbiologistas e cirurgiões ortopédicos precisam trabalhar em estreita colaboração para aprimorar os diagnósticos diferenciais, bem como possível. Se realizado corretamente, você obterá resultados clinicamente valiosos do PCR multiplex baseado em cartucho dentro de cinco horas após a artropunção. Ao realizar este procedimento, é importante lembrar-se de trabalhar com técnica estéril durante todo o processo.

Não se esqueça de que o trabalho com espécimes de tecidos humanos ou espécimes microbiológ游戏副本 pode ser extremamente perigoso. Todas as precauções, como o uso de equipamentos de proteção pessoal, devem sempre ser tomadas ao realizar este procedimento.