Name: Lesão por esmagamento aórtico murino: um eficiente In Vivo Modelo de proliferação de células musculares lisas e função endotelial (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-06-11T14:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 14 s
Description: Aprenda a criar um modelo de lesão por esmagamento aórtico em camundongos C57BL/6 para avaliar simultaneamente a proliferação de células musculares lisas vasculares e a reendoteliação. Este método permite estudar mecanismos de reestenose após intervenções cardiovasculares.

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Agradecemos a Hsia Ru-ching PhD, do Centro de Microscopia Eletrônica da Faculdade de Medicina da Universidade de Maryland, pelo seu suporte técnico no processamento das amostras de microscopia eletrônica de varredura.

Declaração de Ética: os protocolos para manejo de animais foram aprovados pelo Comitê Institucional de Cuidados e Uso Animal (IACUC) da Universidade de Maryland (número de protocolo 0416009) e conduzido de acordo com os padrões AAALAC-International. 1. Procedimento cirúrgico <ol><li> Técnica anestésica <ol><li> Esterilize todos os instrumentos utilizados na cirurgia de sobrevivência com esterilização a vapor a 121 ° C durante 30 min. </li><li> Induzamos a anestesia através de um tanque de indução com 100% de O2 e 2.5% de isoflurano administrado por vaporizador de precisão. Após a indução, interrompa o isoflurano e lave a câmara com O 2 . Manter anestesia com 1,5-2% de isoflurano através da máscara facial e 1 L / min O 2 por inalação. </li><li> Anexe a câmara de indução e a máscara facial a um agente de tratamento de carvão para adsorção de gás residual para proteger o pessoal. Assegurar um plano anestésico adequado por demonstraçãoQue não há resposta a estímulos nocivos (pitada de dedo do pé). </li><li> Crie um campo operacional consistindo em uma bandeja cirúrgica com almofada isotérmica para fornecer suporte térmico durante a cirurgia. Uma almofada isotérmica adicional proporcionará suporte térmico aos animais em sua gaiola de recuperação. </li></ol></li><li> Preparação Animal <ol><li> Realize a seguinte investigação sobre ratinhos C57BL / 6 machos de 10 a 12 semanas de idade. </li><li> Remova o cabelo na superfície abdominal ventral do animal do esterno para a região inguinal com um agente depilatório ou uma cortadora elétrica com uma lâmina número 40. <ol><li> Em caso de agente depilatório, aplique este composto na área cirúrgica por 2-3 min e depois remova-o com algodão. Utilizamos um composto comercialmente disponível de hidróxido de cálcio e hidróxido de sódio. </li></ol></li><li> Prepare a área sobre o ombro com 70% de álcool e injete subcutaneamente carprofen (5 mg / kg) com uma agulha de calibre 25 ou menor. esteO tratamento proporcionará analgesia pós-operatória para o animal. </li><li> Transfira o animal para o campo cirúrgico e posicione-se em recumbência dorsal. </li><li> Prepare o local cirúrgico esfregando 8-12% providone-iodo com um aplicador de algodão limpo ou uma gaze de algodão. Em seguida, enxágue a pele duas vezes com 70% de álcool. </li><li> Coloque o lubrificante ocular em ambos os olhos para reduzir a incidência de dessecação da córnea. Cubra o local cirúrgico com uma cobertura estéril. </li></ol></li><li> Técnica Operativa <ol><li> Faça uma mediana da incisão da laparotomia abdominal com aproximadamente 2-2,5 cm de comprimento com um bisturi começando imediatamente caudal no processo de xifóide e estendendo-se para a pélvis. </li><li> Mobilize o intestino delgado e o duodeno e reflita lateralmente à direita. Enrole uma tira de algodão estéril gasteado e embebido com solução salina estéril para injeção para permitir a embalagem das vísceras para melhorar a exposição. </li><li> Com o intestino delgado mobilizado para o lado direito doAbdômen, exponha o retroperitoneum e expõe a aorta abdominal da veia renal esquerda à bifurcação aórtica ( Figura 1 ). </li><li> Com um aplicador de ponta de algodão estéril, entregue 30 tritões consecutivos, cada cinco segundos de duração. </li><li> Remova a embalagem e permita que as vísceras voltem à sua posição nativa. </li><li> Faixa da fáscia com uma sutura de monofilamento absorvente 4-0 (polydioxanona). A pele é fechada com uma sutura de monofilamento não absorvível de 6-0 (nylon). </li></ol></li><li> Assistência de recuperação e pós-procedimento <ol><li> Após o procedimento, coloque o animal em uma gaiola de recuperação com roupa de cama limpa em uma almofada isotérmica para continuar o suporte térmico até que o animal possa se mexer normalmente. Não deixe o animal desacompanhado até demonstrar a capacidade de manter a decúbito esternal. </li><li> Monitore o animal a cada hora pelas primeiras 4 h após a cirurgia. Uma vez que o animal está ambulante normalmente retorna i<html> T para a sala de criação atribuída. O animal não será alojado na companhia de outro animal até que ele tenha se recuperado completamente. </li><li> Monitore o animal duas vezes ao dia durante as primeiras 72 h após a cirurgia e pelo menos 3 vezes por semana a partir de então. O monitoramento inclui a pesagem do animal três vezes por semana. </li><li> Administrar carpofen (5 mg / kg) por via subcutânea duas vezes ao dia durante as primeiras 72 h após a cirurgia. </li></ol></li></ol> 2. Procurement of Tissue <ol><li> Método de Eutanásia <ol><li> Eutanize os animais em pontos de tempo predeterminados. </li><li> Induzamos a anestesia através de um tanque de indução com 100% de O2 e 2.5% de isoflurano administrado por vaporizador de precisão. <ol><li> Para estudar a integridade do endotélio, administre o corante azul Evans para o animal. NOTA: Evans Blue é um corante azo com carga negativa com alta afinidade de ligação para a albumina e só pode manchar os vasos sanguíneos na ausência de um endotélio intactoS = &quot;xref&quot;&gt; 6. </li><li> Para estudos de integridade endotelial, no momento da eutanásia, perfusar os animais com 5 mL de 0,3% de corante Evans Blue seguido por 5 mL de PBS a pressão fisiológica durante 5 min. O animal é mantido em um plano cirúrgico de anestesia durante o procedimento de perfusão. </li></ol></li><li> Depois de atingir um plano anestésico profundo, abra o baú com esternotomia. Faça uma laceração no átrio direito para permitir a drenagem do sangue do animal e o acesso ao ventrículo esquerdo seja acessado com uma agulha 21 G e injete solução salina tamponada com fosfato (PBS) até que o efluente do átrio direito seja limpo. </li><li> Após a perfusão com PBS, entre no abdômen através de uma incisão na linha média. </li><li> Mais uma vez, mobilize o intestino delgado para o lado direito do abdômen, expondo a aorta da infra-renal, dissecando a aorta dos tecidos adjacentes e extrale-a da veia renal esquerda para a bifurcação aórtica. </li><li> Armazene a aorta excisada em um paraformald a 4%Solução de eído até o processamento do tecido. <ol><li> Para estudos de integridade endotelial, abra a aorta longitudinalmente e fixe-a para uma folha de cera expondo a totalidade da superfície luminal 6 . Realizar uma avaliação qualitativa da integridade endotelial pelo grau de coloração com corante Evans Blue 6 . </li><li> Para outros ensaios histológicos, separe a aorta transversalmente e incorpore-a em compostos óptimos de temperatura de corte (OCT) conforme ditado pelo método histológico a ser utilizado 7 . </li></ol></li></ol></li></ol>

<ol><li>Carmeliet, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanisms+of+angiogenesis+and+arteriogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Med%22%5BJournal%5D)">Mechanisms of angiogenesis and arteriogenesis.</a> Nat Med. 6 (4), 389-395 (2000).</li>
<li>Carmeliet, P., Moons, L., Collen, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+models+of+angiogenesis%2C+arterial+stenosis%2C+atherosclerosis+and+hemostasis%5BTitle%5D)+AND+%22Cardiovasc+Res%22%5BJournal%5D)">Mouse models of angiogenesis, arterial stenosis, atherosclerosis and hemostasis.</a> Cardiovasc Res. 39 (1), 8-33 (1998).</li>
<li>Baker, A. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heparanase+Alters+Arterial+Structure%2C+Mechanics%2C+and+Repair+Following+Endovascular+Stenting+in+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Res%22%5BJournal%5D)">Heparanase Alters Arterial Structure, Mechanics, and Repair Following Endovascular Stenting in Mice.</a> Circ Res. 104 (3), 380-387 (2009).</li>
<li>Petrov, L., Laurila, H., Hayry, P., Vamvakopoulos, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+mouse+model+of+aortic+angioplasty+for+genomic+studies+of+neointimal+hyperplasia%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vasc+Res%22%5BJournal%5D)">A mouse model of aortic angioplasty for genomic studies of neointimal hyperplasia.</a> J Vasc Res. 42 (4), 292-300 (2005).</li>
<li>Li, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vascular+smooth+muscle+cells+of+recipient+origin+mediate+intimal+expansion+after+aortic+allotransplantation+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Path%22%5BJournal%5D)">Vascular smooth muscle cells of recipient origin mediate intimal expansion after aortic allotransplantation in mice.</a> Am J Path. 158 (6), 1943-1947 (2001).</li>
<li>Radu, M., Chernoff, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+in+vivo+assay+to+test+blood+vessel+permeability%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">An in vivo assay to test blood vessel permeability.</a> J Vis Exp. (73), e50062(2013).</li>
<li>Turbett, G. R., Sellner, L. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+use+of+optimal+cutting+temperature+compound+can+inhibit+amplification+by+polymerase+chain+reaction%5BTitle%5D)+AND+%22Diagn+Mol+Pathol%22%5BJournal%5D)">The use of optimal cutting temperature compound can inhibit amplification by polymerase chain reaction.</a> Diagn Mol Pathol. 6 (5), 298-303 (1997).</li>
<li>Puchtler, H., Waldrop, F. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((On+the+mechanism+of+Verhoeff%27s+elastica+stain%3A+a+convenient+stain+for+myelin+sheaths%5BTitle%5D)+AND+%22Histochem%22%5BJournal%5D)">On the mechanism of Verhoeff's elastica stain: a convenient stain for myelin sheaths.</a> Histochem. 62 (3), 233-247 (1979).</li>
<li>Salic, A., Mitchison, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+chemical+method+for+fast+and+sensitive+detection+of+DNA+synthesis+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">A chemical method for fast and sensitive detection of DNA synthesis in vivo.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 105 (7), 2415-2420 (2008).</li>
<li>Nelson, P. R., Yamamura, S., Mureebe, L., Itoh, H., Kent, K. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Smooth+muscle+cell+migration+and+proliferation+are+mediated+by+distinct+phases+of+activation+of+the+intracellular+messenger+mitogen-activated+protein+kinase%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vasc+Surg%22%5BJournal%5D)">Smooth muscle cell migration and proliferation are mediated by distinct phases of activation of the intracellular messenger mitogen-activated protein kinase.</a> J Vasc Surg. 27 (1), 117-125 (1998).</li>
<li>Rzucidlo, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Signaling+pathways+regulating+vascular+smooth+muscle+cell+differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22Vascular%22%5BJournal%5D)">Signaling pathways regulating vascular smooth muscle cell differentiation.</a> Vascular. 17, Suppl 1. S15-S20 (2009).</li>
<li>Aoki, T., Sumii, T., Mori, T., Wang, X., Lo, E. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blood-brain+barrier+disruption+and+matrix+metalloproteinase-9+expression+during+reperfusion+injury%3A+mechanical+versus+embolic+focal+ischemia+in+spontaneously+hypertensive+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Blood-brain barrier disruption and matrix metalloproteinase-9 expression during reperfusion injury: mechanical versus embolic focal ischemia in spontaneously hypertensive rats.</a> Stroke. 33 (11), 2711-2717 (2002).</li>
<li>Yu, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MARCKS+Signaling+Differentially+Regulates+Vascular+Smooth+Muscle+and+Endothelial+Cell+Proliferation+through+a+KIS-%2C+p27kip1-+Dependent+Mechanism%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">MARCKS Signaling Differentially Regulates Vascular Smooth Muscle and Endothelial Cell Proliferation through a KIS-, p27kip1- Dependent Mechanism.</a> PLoS One. 10 (11), e0141397(2015).</li>
<li>Banai, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rabbit+ear+model+of+injury-induced+arterial+smooth-muscle+cell-proliferation+-+kinetics%2C+reproducibility%2C+and+implications%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Res%22%5BJournal%5D)">Rabbit ear model of injury-induced arterial smooth-muscle cell-proliferation - kinetics, reproducibility, and implications.</a> Circ Res. 69 (3), 748-756 (1991).</li>
</ol>

Este trabalho foi financiado pelo Prêmio de Desenvolvimento de Carreira do Departamento de Assistentes de Veteranos (1IK2BX001553-01) (TSM) e a bolsa de estudos EJ Wylie da Cura Vascular (TSM).

Caracterizamos os efeitos de um modelo de lesão aórtica murina que resulta em hiperplasia mediana e disfunção da barreira endotelial. O destacamento parcial da CE ao longo da íntima da aorta acompanhou a perda do contato celular e o aumento das protrusões celulares. Correspondentemente, a função de barreira endotelial foi significativamente prejudicada, o que estimulou as vias de sinalização sensíveis aos mitógenos, levando à proliferação de VSMCs e engrossamento da parede vascular. Os pontos fortes deste modelo é que é...

Restenosis Após procedimentos cardiovasculares (cirurgia de bypass, angioplastia ou stent) é um problema significativo que reduz a durabilidade desses procedimentos. Todos os procedimentos de revascularização estão repletos de reestenose. As estratégias atuais para prevenir a reestenose (stents de libertação de fármaco e balões revestidos de drogas) inibem a célula muscular muscular lisa vascular (VSMC) e a proliferação de células endoteliais (EC). Conseqüentemente, essas intervenções impedem a reestenose mediada por VSMC, mas também impedem a regeneração do endotélio. Sem um endotélio intacto, os pacientes devem estar em potentes agentes antiplaquetários para diminuir o risco de trombose in situ no risco de complicações hemorrágicas. Uma terapia ideal inibiria a proliferação de VSMC enquanto promovia a regeneração do endotélio. Assim, há uma necessidade de estudar simultaneamente a proliferação de VSMC e a função de barreira endotelial i n vivo . Atualmente, existemModelos de reestenose de mouse de al mouse 1 . Estes modelos incluem ligadura de carótida e lesão de fio arterial femoral 2 . Os modelos aórticos incluem posicionamento do stent 3 , lesão do balão 4 e aloenxerto aórtico 5 . Todos os modelos atuais são limitados. A ligação da carótida gera uma lesão neointimal mediada pelo fluxo e não possui lesão endotelial. Além disso, as artérias carotídeas e femorais têm muitas vezes menos camadas celulares que os vasos humanos, limitando seu valor de translação. A aorta do mouse, com aproximadamente 1,3 mm de diâmetro, é o único vaso que se aproxima de uma artéria humana (coronária) clinicamente relevante (3). Apesar do potencial de tradução dos modelos aórticos murinos da doença, os modelos atuais têm limitações. Esses modelos exigem habilidades micro-cirúrgicas avançadas e equipamentos especializados, como balões de angioplastia e stents. Aqui, apresentamosUma técnica nova e reprodutível para induzir simultaneamente a proliferação de VSMC e interromper a função de barreira endotelial.

<table><tbody><tr><td>Lubrificante ocular</td><td>Dechra</td><td>17033-211-38</td><td>Agentes farmacêuticos</td></tr><tr><td>Isoflurano</td><td>VetOne</td><td>502017</td><td>Agentes farmacêuticos</td></tr><tr><td>Carprofeno</td><td>Zoetis</td><td>26357</td><td>Agentes farmacêuticos</td></tr><tr><td>Vaporizador de precisão</td><td>Summit Medical</td><td>10675</td><td>Material cirúrgico</td></tr><tr><td>Limpador de carvão</td><td>Bickford Inc.</td><td>80120</td><td>Suprimentos cirúrgicos</td></tr><tr><td>Almofada isotérmica</td><td>Harvard Apparatus</td><td>50-7053-R</td><td>Suprimentos cirúrgicos</td></tr><tr><td>Aplicador estéril com ponta de algodão</td><td>Fisher Scientific</td><td>23-400-124</td><td>Suprimentos cirúrgicos</td></tr><tr><td>4-0 sutura de monofilamento absorvível&nbsp;</td><td>Ethicon, Inc</td><td>J310</td><td>Suprimentos cirúrgicos</td></tr><tr><td>5-0 sutura monofilamentar não absorvível</td><td>Ethicon,Inc</td><td>1666</td><td>Suprimentos cirúrgicos</td></tr><tr><td>21-gauge x 1 polegada agulha</td><td>BD Biosciences</td><td>305165</td><td>Suprimentos cirúrgicos</td></tr><tr><td>25-gauge x 1 polegada&nbsp; agulha</td><td>BD Biosciences</td><td>305125</td><td>Suprimentos cirúrgicos</td></tr><tr><td>Esterilizador seco</td><td>Cellpoint&nbsp;</td><td>7770</td><td>Material cirúrgico</td></tr><tr><td>Tesoura fina</td><td>Ferramentas de ciências finas</td><td>14058-09</td><td>Instrumentos cirúrgicos</td></tr><tr><td>Pinça Adson</td><td>Ferramentas de ciências finas</td><td>11006-12</td><td>Instrumentos cirúrgicos</td></tr><tr><td>Dumont # 5 pinça fina</td><td>Ferramentas de ciências finas</td><td>11254-20</td><td>Instrumentos</td></tr><tr><td>cirúrgicos Tesoura de mola Vannas 3 mm de ponta</td><td>Ferramentas de ciências finas</td><td>15000-00</td><td>Instrumentos cirúrgicos</td></tr><tr><td>Agulha Driver</td> Ferramentas <td>Fine Science</td><td>91201-13</td><td>Instrumentos cirúrgicos</td></tr><tr><td>Cabo de bisturi #4</td><td>Fine Science Tools</td><td>10004-13</td><td>Instrumentos</td></tr><tr><td>cirúrgicos Lâminas de bisturi #10</td><td>Fine Science Tools</td><td>10010-00</td><td>Instrumentos cirúrgicos</td></tr><tr><td>PBS&nbsp;</td><td>Reagentes Lonza</td><td>17-516F</td><td>para processamento de tecidos</td></tr><tr><td>Evans Blue</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>E2129</td><td>Reagentes para processamento</td></tr><tr><td>de tecidos Paraformaldeído</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P6148</td><td>Reagentes para processamento de tecidos</td></tr><tr><td>Cera de modelagem</td><td>Bego</td><td>40001</td><td>Reagentes para processamento de tecidos</td></tr><tr><td>Composto OCT</td><td>Tissue-Tek Sakura</td><td>4583</td><td>Reagentes para processamento de tecidos</td></tr><tr><td>Solução de hematoxilina de Mayer</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>MHS16</td><td>Reagentes para análise imunohistológica</td></tr><tr><td>Solução de Eosina Y alcoólica;</td><td>Reagentes Sigma-Aldrich</td><td>HT110316</td><td>para análise imuno-histológica</td></tr><tr><td>Kit de coloração de elastina</td><td>Reagentes Sigma-Aldrich</td><td>HT25A</td><td>para análise imuno-histológica</td></tr><tr><td>Click-it Edu Alexa-488 Kit de imagem</td><td>Invitrogen</td><td>C10337</td><td>Reagentes para análise imuno-histológica</td></tr><tr><td>Anti-Erk1/2 Anticorpo</td><td>Tecnologia de Sinalização Celular</td><td>4695</td><td>Reagentes para imuno-histológico análise</td></tr><tr><td>Anticorpo anti-fosfo-Erk1/2</td><td>Tecnologia de sinalização celular</td><td>4370</td><td>Reagentes para análise imuno-histológica</td></tr><tr><td>Anticorpo anti-p27kip1</td><td>Tecnologia de sinalização celular</td><td>3698</td><td>Reagentes para análise imuno-histológica</td></tr><tr><td>Ácido tricloroacético</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T9159</td><td>Reagentes para análise imuno-histológica</td></tr></tbody></table>

lesão por esmagamento aórtico murino: um eficiente<em&gt; in vivo</em&gt; modelo de proliferação de células musculares lisas e função endotelial

Murine Aortic Crush Injury: An Efficient In Vivo Model of Smooth Muscle Cell Proliferation and Endothelial Function

A reconstrução arterial, seja a cirurgia de angioplastia ou de derivação, envolve trauma iatrogênico causando ruptura endotelial e proliferação de células musculares lisas vasculares (VSMC). Modelos murinos comuns estudam pequenos vasos como as artérias carótida e femoral. Aqui, descrevemos um sistema in vivo no qual tanto a proliferação de VSMC quanto a função de barreira endotelial podem ser avaliadas simultaneamente em um vaso grande. Estudamos a resposta aórtica infra-renal a lesão em camundongos C57BL / 6. A aorta foi ferida da veia renal esquerda para a bifurcação aórtica por 30 esmagamentos transmurais de 5 segundos de duração com um aplicador com ponta de algodão. As alterações morfológicas foram avaliadas com histologia convencional. A espessura da parede da aorta foi medida a partir da superfície luminal para adventitia. A integração de EdU e a coloração de contadores com DAPI e alfa-actina foram utilizadas para demonstrar a proliferação de VSMC. A ativação de ERK1 / 2, um conhecido moderador da formação de hiperplasia intimal, foi dissuadidoExtraído pela análise Western Blot. O efeito da inflamação foi determinado por imuno-histoquímica para células B, células T e macrófagos . As seções de face do endotélio foram visualizadas com microscopia eletrônica de varredura (SEM). A função de barreira endotelial foi determinada com coloração Evans Blue. A lesão transmural resultou em espessamento da parede aórtica. Esta lesão induziu a proliferação de VSMC, mais proeminente aos 3 dias após a lesão e a ativação precoce de ERK1 / 2 e diminuiu a expressão de p7 kip1. A lesão não resultou em aumento da infiltração de células B, células T ou macrófagos na parede do vaso. A lesão causou desnudação de células endoteliais parciais e perda de contato célula-célula. A lesão resultou em perda significativa da função de barreira endotelial, que retornou à linha de base após sete dias. O modelo de ferimento aórtico transmural transmural murino fornece um sistema eficiente para estudar simultaneamente a proliferação de VSMC e a função de barreira endotelial em um vaso grande.

As secções transversais da aorta embutidas em OCT foram seccionadas e coradas com hematoxilina e eosina, em seguida, foram coradas com mancha Verhoeff-Van Gieson (VVG) para identificar a lâmina elástica interna e externa 7 . Os danos causados ​​por esmagamento induziram o espessamento da parede aórtica em comparação com os aortas de animais tratados com procedimento simulado (laparotomia e mobilização do intestino delgado sozinho). A espessura da parede, avaliada ...

Restenosis após procedimentos cardiovasculares (cirurgia de bypass, angioplastia ou stent) é um problema significativo que reduz a durabilidade desses procedimentos. Uma terapia ideal inibiria a proliferação de células musculares lisas (VSMC) enquanto promovia a regeneração do endotélio. Descrevemos um modelo para avaliação simultânea da proliferação de VSMC e função endotelial in vivo.

Lesão por esmagamento aórtico murino: um eficiente<em&gt; In Vivo</em&gt; Modelo de proliferação de células musculares lisas e função endotelial

Arterial reconstruction, whether angioplasty or bypass surgery, involves iatrogenic trauma causing endothelial disruption and vascular smooth muscle cell ...

O objetivo geral deste procedimento é criar um modelo animal que permita a avaliação simultânea da proliferação de células musculares lisas vasculares e da reendotelialização. Este método pode ajudar a responder perguntas fundamentais na área da biologia vascular, como qual é o mecanismo da restenose após intervenções vasculares? Esta técnica permite a avaliação simultânea in vivo da proliferação de células musculares lisas vasculares e da reendotelialização.Ambos os eventos-chave potencializam ou atenuam a restenose após intervenções vasculares. O procedimento será demonstrado pelo Dr. Dan Yu, pesquisador pós-doutorando do meu laboratório. Após confirmar a ausência de resposta ao aperto no dedo do pé, remova os pelos do abdômen ventral de um camundongo macho C57BL/6 anestesiado, com idade entre 10 e 12 semanas, da região esternal até a região inguinal.A seguir, desinfete a área do ombro com etanol 70% e use uma agulha de 25 fios ou menor para administrar uma analgesia apropriada. Em seguida, posicione o animal em posição supina sobre uma bandeja cirúrgica aquecida por um tapete isotérmico. Limpe o local cirúrgico com betadine ou clorexidina e enxágue com álcool.Repita ambos os pas

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Biologia

Nós demonstramos um modelo de ligadura arterial novel no músculo spinotrapezius murino, incluindo um procedimento passo-a-passo e uma descrição da instrumentação necessária. Descrevemos a cirurgia e avaliação dos resultados relevantes referentes à remodelação da rede vascular e vasodilatação funcional usando microscopia intravital e confocal.

Modelo Spinotrapezius murino para avaliar o impacto da ligadura arteriolar em função microvascular e Remodelação

Um modelo de implante de stent na artéria carótida do rato é descrito. Comparado com outros métodos similares, este procedimento é muito rápido, simples e acessível, oferecendo a possibilidade de estudar em uma forma conveniente a reação da parede vascular para diferentes stents farmacológicos e os mecanismos moleculares de reestenose.

Um modelo murino de implante de stent na artéria carótida para o Estudo da reestenose

Modificações histológicas e bioquímicas após aneurisma endograft exclusão ainda não são claras. Descreve-se um novo modelo de implantação de endoprótese em aneurisma murino. Através da análise de trombo com e sem circulação persistente interface de fluxo de sangue, e nova avaliação biomateriais endovascular, este modelo vai ajudar a entender melhor endovascular pathobiology exclusão do aneurisma.

Um novo modelo murino de reparação endovascular de aneurisma da aorta

A compreensão dos mecanismos celulares e moleculares da re-endotelização após lesão desnudamento arterial é de suma importância na prevenção de trombose e restenose das artérias. Aqui nós descrevemos um protocolo de lesão desnudamento arterial reprodutível da aorta abdominal infra-renal. O procedimento foi desenvolvido para investigar os mecanismos subjacentes que regulam a regeneração endotelial usando modelos do rato.

Reprodutível Arterial Desnudamento Lesão por aorta abdominal infrarrenal fixação num modelo murino

Protocolos para o estudo da aorta murino embrionária e perinatal usando na vivo clonal análise e mapeamento de destino, explantes aórtica e isolado músculo liso, células são detalhadas aqui. Essas diversas abordagens facilitam a investigação sobre a morfogênese da aorta no normal desenvolvimento embrionária e perinatal e a patogênese na doença.

Usando In Vivo e tecido e célula explante abordagens para estudar a morfogênese e a patogênese da Aorta embrionária e Perinatal

Este artigo demonstra um modelo murino para estudar o desenvolvimento de hiperplasia myointimal (MH) após lesão aórtica balão.

Lesão baseada no balão para induzir a hiperplasia Myointimal da Aorta Abdominal de Mouse

Este artigo descreve uma metodologia detalhada de usando uma borracha de silicone radiopaco à base de chumbo para perfundir vasculatura murino para quantificação do diâmetro da aorta em um modelo do rato de aneurisma da aorta e dissecação.

Análise quantitativa de Micro-CT de Aortopathy em um modelo do rato de β-aminopropionitrile-induzida de aneurisma da aorta e dissecação

Aqui, apresentamos um protocolo de transplante heterotópico da aorta em camundongos usando a técnica de manguito não sutura em um modelo de urina cervical. Este modelo pode ser usado para estudar a patologia subjacente da vasculopatia aloenxerto crônica (CAV) e pode ajudar a avaliar novos agentes terapêuticos, a fim de evitar a sua formação.

Murine Modelo de Transplante de Aorta Cervical usando uma técnica de manguito não sutura modificada

Nós descrevemos um protocolo cirúrgico para induzir consistentemente aneurismas aórticos torácicos de descida robustos nos ratos. O procedimento envolve a toracotomia esquerda, a exposição da aorta torácica e a colocação de uma esponja embebida em elastase pancreática suína na parede aórtica.

Modelo cirúrgico murino de elastase tópica induzida por aneurisma de aorta torácica descendente

O presente protocolo descreve um método cirúrgico padronizado para a indução de aneurismas carotídeos em modelo murino por meio de uma única operação cirúrgica.

Um modelo murino de formação de aneurisma carotídeo

Aqui apresentamos um modelo murino para anastomose da artéria femoral, oferecendo aos pesquisadores um modelo animal valioso para estudar e simular a estenose da anastomose vascular. Esse desenvolvimento é crucial para avançar nossa compreensão da fisiopatologia subjacente a essa condição e facilitar pesquisas mais precisas e eficazes sobre doenças vasculares.

Desenvolvimento de um modelo murino para estenose anastomótica da artéria femoral

Aprenda a criar um modelo de lesão por esmagamento aórtico em camundongos C57BL/6 para avaliar simultaneamente a proliferação de células musculares lisas vasculares e a reendoteliação. Este método permite estudar mecanismos de reestenose após intervenções cardiovasculares.

Lesão por esmagamento aórtico murino: um eficiente In Vivo Modelo de proliferação de células musculares lisas e função endotelial (Vídeo) | JoVE Journal

Lesão por esmagamento aórtico murino: um eficiente

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