Entrega Intraductal ao Coelho glândula mamária

Aqui, descrevemos uma técnica para a entrega localizada de reagentes na glândula mamária de coelho por meio de uma injeção intraductal. Além disso, descrevemos um protocolo para visualização e confirmação da entrega por ultrassonografia de alta resolução de agentes de contraste.

O objetivo geral deste procedimento é fornecer soluções aquosas ao ducto mamário do coelho e visualizar a entrega intraductal por meio de imagens de ultrassom. Este método pode ajudar a responder a questões-chave no campo da biologia da mama, como a forma como a terapêutica interage de maneira diferente com o ambiente ductal mamário em comparação com outros locais de administração. A principal vantagem dessa técnica é que o reagente de contraste de imagem ou qualquer potencial terapêutico a ser avaliado pode ser administrado localmente no tecido onde surgem as lesões mamárias.

Demonstrando a técnica estará Amelia Clark, técnica do meu laboratório. Para iniciar este procedimento, raspe cuidadosamente o abdômen caudal de um coelho anestesiado na área ao redor do terceiro e quarto pares de inguinais. Com a maior parte dos pelos removidos, aplique o creme depilatório nas áreas depiladas e 10 minutos após a aplicação, remova o creme usando uma toalha de papel úmida umedecida com água morna.

Em seguida, limpe a área com compressas de gaze embebidas em álcool para limpar o local da injeção. Coloque o coelho em seu dorso em uma calha em forma de V forrada com manta de água morna recirculante em uma almofada absorvente. Para preparar o agente de contraste, reconstitua-o de acordo com as instruções do fabricante.

Em seguida, agite suavemente o frasco para misturar. O agente de contraste usado aqui é estável à temperatura ambiente por quatro a seis horas após a reconstituição. Neste procedimento, localize o terceiro e o quarto pares de inguinais a serem injetadas.

Em seguida, coloque 0,2 mililitros de solução salina estéril 0,9 em uma seringa de tuberculina luer lock de um mililitro com uma agulha de calibre 22. Descarte a agulha de calibre 22 assim que a solução salina estiver na seringa e substitua-a por uma agulha estéril de calibre 25. Em seguida, limpe suavemente a área com álcool isopropílico 85% em uma almofada de guaze.

Com o bisel da agulha para cima e a seringa paralela ao corpo do animal, insira a agulha na lateral do teto e injete lentamente 0,1 a 0,2 mililitros de soro fisiológico para permitir uma melhor visualização das aberturas ductais. Em seguida, coloque 0,2 mililitros de solução injetável em uma seringa de tuberculina luer lock de um mililitro. Segure a tetina suavemente com o polegar e o indicador e levante-a ligeiramente para a injeção intraductal.

Mantendo a posição levantada da tetina, canule cuidadosamente o duto de interesse usando uma agulha de ponta romba de calibre 25. Após a canulação, gire suavemente a seringa luer lock no cubo da agulha de infusão de ponta romba até que esteja travada no lugar. Levante a tetina e injete a solução lentamente para minimizar os danos potenciais causados por fluidos que se movem rapidamente dentro do duto.

Agora aplique uma quantidade generosa de gel de ultrassom centrifugado na pele da área de interesse. Certifique-se de que não haja bolhas no gel, pois elas comprometerão a qualidade da imagem. Em seguida, defina a profundidade da imagem para seis milímetros.

Coloque o transdutor de 21 megahertz em contato com o gel e escaneie a área de interesse no modo B. Observe o meio de contraste na região digitalizada, incluindo a abertura ductal e em todo o ducto para confirmar o sucesso da administração intraductal. Em seguida, capture e salve a imagem.

Remova o gel de ultrassom da pele do animal com compressas de gaze. Em seguida, inspecione o local da injeção e certifique-se de que não há sinais de trauma na região do teto ou no tecido circundante. O inchaço na área ao redor do teto provavelmente indica uma injeção de almofada de gordura mamária em vez de uma injeção intraductal bem-sucedida.

O reagente de contraste é localizado imediatamente após o parto e é visualizado 30 minutos após o parto e 45 minutos após o parto. A persistência do reagente no interior do ducto mamário permite a visualização durante toda a duração desse processo. Esta imagem mostra a aparência externa após a injeção intraductal de 0,2 mililitros de solução de azul de Evans.

Ao abrir a pele, o azul de Evans permite a visualização de toda a árvore ductal mamária e confirma a estrutura ductal intacta. E esta imagem mostra todo o espécime de montagem de uma região da glândula mamária inguinal após fixação e coloração com alúmen carmim. Uma vez dominada, essa técnica pode ser feita em aproximadamente 15 minutos, excluindo o tempo necessário para permitir que a anestesia faça efeito.

Ao tentar este procedimento, é importante lembrar de levantar o teto para endireitar os ductos durante o parto intraductal. Siga sempre as diretrizes de bem-estar animal de sua instituição. Após este procedimento, outros métodos, como imagens avançadas ou análises de tecidos de endpoint, como um lizo ou imuno-histoquímica, podem ser realizados para responder a perguntas adicionais sobre a farmacodinâmica ou alterações morfológicas no nível do tecido induzidas pela administração do agente terapêutico.

Após seu desenvolvimento, essa técnica abre caminho para pesquisadores em biologia mamária explorarem a entrega de agentes de imagem, bem como terapêuticas no ducto mamário no futuro. Depois de assistir a este vídeo, você deve ter uma boa compreensão de como realizar o parto intraductal na glândula mamária de coelho.