Name: Entrega Intraductal ao Coelho glândula mamária (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-03-09T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 30 s
Description: Aprenda a técnica de injeção intraductal na glândula mamária de coelhos para entrega localizada de agentes terapêuticos, com visualização por ultrassom de alta resolução. Este método permite estudar a interação de fármacos com o tecido mamário in vivo.

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Os autores reconhecem o apoio de uma Bolsa Translacional de Pesquisa do Câncer de Mama (14-60-26-BROC para AB) da Breast Cancer Research Foundation e da American Association for Cancer Research.

Procedimentos usando indivíduos animais foram aprovados pelo Comitê de Cuidado e Uso Institucional Animal da Universidade do Texas em Austin. 1. Pré-operatório Preparação <ol><li> Registe o peso do corpo de cada coelho. Tal como acontece com todos os estudos pré-clínicos, monitorar os pesos dos animais regularmente para avaliar a toxicidade potencial. </li><li> Antes de se anestesiar o coelho, encher um tubo de 50 mL cónico com gel de ultra-sons comercialmente disponível e de centrifugação a 500 xg durante 30 s; não deve haver bolhas visíveis no gel após a conclusão da centrifugação. </li><li> Administrar glicopirrolato por via subcutânea numa dose de 0,1 mg / kg e acepromazina por via intramuscular numa dose de 0,75 mg / kg. Aguarde 15-20 minutos para o sedativo para entrar em vigor durante o acompanhamento de sinais e comportamentos vitais. NOTA: O glicopirrolato é um agente anti-colinérgico que impede bradicardia e reduz respiratórias e secreções gastrointestinais. Acepromazina é um sedativo que serve como um premedicatipor anestesia. </li><li> Administrar 35 mg / kg de cetamina e 5 mg / kg de xilazina por via subcutânea como um anestésico. No entanto, como o operador torna-se mais experiente e pode realizar a entrega intraductal mais rapidamente, diminuir as doses de droga a 15 mg / kg de cetamina e 3 mg / kg de xilazina por via subcutânea; isto irá diminuir o tempo de anestesia e o tempo necessário para o animal a recuperar da anestesia. </li><li> Verificar e documentar a frequência cardíaca, SPO 2, temperatura, frequência respiratória, e cor membrana mucosa a cada 15 minutos. Aplique lubrificante olho em ambos os olhos. NOTA: Apenas pessoal que tenha recebido uma formação adequada e tenham sido aprovados pelo IACUC da sua instituição deve administrar ou controlar a anestesia. A utilização de um monitor de anestesia veterinária pode auxiliar na aquisição de sinais vitais, é recomendada. O monitor de anestesia veterinária, no entanto, não substitui a necessidade de verificar manualmente o animal a cada 15 minutos. Veja as instruções do fabricante fou o uso adequado de um monitor de veterinária. </li><li> Verifique se o início da anestesia por uma pitada toe suave; o coelho deve ser não-responsivo antes de continuar. </li><li> Cuidadosamente raspar o abdome caudal do coelho na área em torno do terceiro e quarto pares de tetas inguinais. </li><li> Com a maioria dos cabelos removidos, aplicar um creme de depilação over-the-counter à área rapada. Retire o creme de 10 min após a aplicação usar toalhas de papel húmidas molhadas com água morna. NOTA: pele de coelho é muito frágil / sensível. O creme de depilação deve ser usado para não mais do que 10 min. De facto, é mais seguro para tentar um &quot;ponto de teste&quot; em 5 min e apenas deixar no local já não se teste indica um tempo mais longo é necessário período. </li><li> Limpe a área com compressas de gaze embebido em álcool para limpar o local da injeção. </li><li> Coloque o coelho no seu dorso em uma calha em forma de v forrada com um cobertor água morna recirculação e uma almofada absorvente. </li></ol> 2. Preparation do agente de contraste <ol><li> Reconstituir o reagente não-alvo de contraste de acordo com as instruções do fabricante. Pipeta cima e para baixo suavemente para misturar. NOTA: O agente de contraste utilizado na presente protocolo é estável à temperatura ambiente durante 4-6 h depois da reconstituição. Agite suavemente o frasco entre cada recuperação. NOTA: O volume da solução requerida irá depender do número de condutas a ser injectada. O coelho tem aberturas 4 ductais por tetina, e 0,2 mL de solução é suficiente para preencher uma árvore ductal de um adulto coelho branco da Nova Zelândia (Oryctolaguscuniculus). Assim, um volume total de 0,8 mL pode ser entregue a uma glândula mamaria. </li></ol> 3. Entrega Intraductal <ol><li> Localize as tetas apropriadas a serem injetados; os 3º e 4º pares de tetas inguinais são recomendados, pois eles são facilmente visualizados quando o animal é posicionado sobre seu dorso. </li><li> Carga 0,2 ml de solução salina estéril 0,9% emuma seringa de tuberculina de 1 ml de Luer-lock com uma agulha 22 G. Descarte a agulha G 22 uma vez que a solução salina é na seringa e substituí-lo com uma agulha de calibre 25 estéril. Limpe cuidadosamente a área com 85% de álcool isopropílico em uma gaze. </li><li> Com o bisel da agulha para cima e a seringa paralela ao corpo do animal, inserir o bisel da agulha para o lado da tetina e injectar lentamente 0,1-0,2 mL de solução salina; isso vai permitir uma melhor visualização das aberturas ductal. </li><li> Carregar 0,2 ml de solução de injecção para uma seringa de tuberculina de 1 ml de bloqueio Luer. </li><li> Segure a tetina suavemente com o polegar eo dedo indicador e levante-o ligeiramente para posicioná-la para a injeção intraductal; uma lupa de ocular wearable pode ajudar a visualizar as aberturas ductal. </li><li> Enquanto se mantém a posição elevada do teto, canular cuidadosamente a conduta de interesse usando uma agulha de ponta romba 25 G. </li><li> Após punção, gire suavemente a seringa Luer-lock no cubo da franco-tagulha da infusão ip até travar no lugar. </li><li> Levantar a tetina e injectar a solução lentamente para minimizar o dano potencial causado pelo movimento rápido do fluido no interior da conduta; em nenhum momento deve haver resistência ao injetar a solução. </li></ol> 4. Ecografia <ol><li> Aplique uma quantidade generosa de gel de ultra-som centrifugado para a pele da área de interesse. Certifique-se de que não existem bolhas no gel, como estes irão comprometer a qualidade da imagem. </li><li> Defina a profundidade da imagem a 6 mm. Posicionar o transdutor de 21 MHz em contacto com o gel e digitalizar a área de interesse em modo-B. Observar o meio de contraste na região digitalizada, inclusive a abertura ductal e ao longo da conduta. NOTA: Estas definições foram desenvolvidos para uso com uma máquina de ultra-som fotoacústica específico. Consulte a tabela de materiais para mais detalhes. Pode ser necessário ajustar a potência de transmissão e a profundidade da imagem de outros sistemas de imagem para optimizar mamáriavisualização glândula. </li><li> Remover o gel de ultra-som da pele do animal com uma almofada de gaze. </li></ol> 5. Cuidados no pós-operatório <ol><li> Observar o local da injecção: não deve haver sinais de trauma para a região da tetina ou para o tecido circundante, e inchaço na área circundante da tetina provavelmente indica uma injecção de almofada de gordura mamaria em vez de uma injecção intraductal bem sucedida. </li><li> Coloque o coelho numa posição esternal. Se necessário, dar 0,2 mg / kg de ioimbina por via intravenosa na veia marginal da orelha; isto irá reverter o efeito da xilazina e permitir que o animal a recuperar mais rapidamente da anestesia. </li><li> Monitorar o coelho a cada 15 min durante todo o período de recuperação até que o animal está alerta, ágil e mantém uma posição esternal. NOTA: Este procedimento não deve resultar em danos nos tecidos ou inchaço. Se vermelhidão ou inchaço são observados, administrar uma dose de meloxicam de 0,1-0,2 mg / kg, PO, uma vez que o animal é alerta e capazde tomar a medicação por via oral. Entre em contato com o pessoal veterinário da instituição para obter mais orientações. </li></ol>

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<li>Sanders, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Natural+History+Of+Low-Grade+Ductal+Carcinoma+In+Situ+Of+The+Breast+In+Women+Treated+By+Biopsy+Only+Revealed+Over+30+Years+Of+Long-Term+Follow-Up%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer%22%5BJournal%5D)">The Natural History Of Low-Grade Ductal Carcinoma In Situ Of The Breast In Women Treated By Biopsy Only Revealed Over 30 Years Of Long-Term Follow-Up.</a> Cancer. 103 (12), 2481-2484 (2005).</li>
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</ol>

Os autores não têm nada a divulgar.

Este método de entrega intraductal para a glândula mamaria de coelho pode ser utilizada para reagentes de contraste para ultrassons e muitas outras soluções aquosas, incluindo corantes vitais e terapêutica. Estudos anteriores demonstraram a entrega intraductal de hormônios 17, 18, 19. Em modelos de roedores, a entrega intraductal de ácidos nucleicos 8, quimioterápicos 6,</sup...

<html> A entrega intraductal de agentes terapêuticos tem sido estudada em modelos de roedores e em início de carreira testes em humanos 3, 4, 5, 6, 11, 12. A Fase I recente estudo demonstrou a segurança ea viabilidade de carboplatina intraductal ou intraductal doxorrubicina lipossomal peguilada em mulheres que aguardam mastectomia para o tratamento de câncer invasivo 2. Protocolos anteriores para entrega intraductal foram desenvolvidos para rato e mamárias de ratos glândulas 6, 7, 8, 9. Para fins de investigação, as injecções de células de tumor intraductal e a entrega de vector lentiviral de oncogenes também foram realizados em modelos de roedoresref &quot;&gt; 13, 14, 15, 16. No entanto, um ideal em modelo vivo do processo de entrega intraductal deve permitir o desenvolvimento de novas classes de compostos terapêuticos e facilitar a avaliação pré-clínica. diferenças anatômicas entre roedores e humanos têm complicado a tradução destes estudos. Ao contrário dos ratos, em que cada conduta termina a uma tetina separada, da mama humano consiste de 5 a 9 ductais sistemas independentes, cada um com uma abertura separada terminando na tetina. Coelho glândulas mamárias abrigar quatro sistemas ductais independentes, cada um separadamente, acessível através de um de quatro orifícios em uma única tetina. Um modelo de coelho corresponda melhor a anatomia humana e permite o estudo da entrega da droga intraductal em um contexto mais relevante. Aqui, usamos duas técnicas para avaliar a prestação intraductal. A co-administração de umcorante vital permite a visualização através da pele e fornece uma confirmação simples e rápida do método. Para algumas aplicações, o mapeamento de resolução mais elevado dos ductos podem ser preferidos. Nós apresentamos aqui um protocolo para ultra-sonografia das condutas através da entrega intraductal de um reagente não-alvo contraste.

<table><tbody><tr><td>Reagente de contraste não direcionado MicroMarker</td><td>VisualSonics</td><td>VS-11694</td><td></td></tr><tr><td>Luer Lock 1 mL Seringas</td><td>BD</td><td>309628</td><td></td></tr><tr><td>Glicopirrolato 0,2 mg/mL</td><td>Wedgewood Compounding Pharmacy</td><td>GLYCOP-INJ013VC</td><td>Prazo de validade de 6 meses, o fornecimento pode ser limitado.&nbsp;</td></tr><tr><td>Sulfato de atropina 0,5 mg / mL</td><td>Animal Health International</td><td>15320764</td><td>Se o glicopirrolato não estiver disponível. Não deve ser combinado com glicopirrolato.</td></tr><tr><td>Cetamina HCL 100 mg/mL</td><td>Animal Health International</td><td>21250699</td><td><a href="http://www.animalhealthinternational.com/">http://www.animalhealthinternational.com/</a></td></tr><tr><td>Acepromazina 10 mg/mL</td><td>Animal Health International</td><td>17640541</td><td></td></tr><tr><td>Xilazina 20 mg/mL</td><td>Animal Health International</td><td>20101547</td><td></td></tr><tr><td>Ioimbina 0,2 mg/mL</td><td>Animal Health International</td><td>14588965</td><td></td></tr><tr><td>Creme Depilatório</td><td>Veet</td><td></td><td>Solução para pele sensível. Disponível em revendedores locais.</td></tr><tr><td>Agulhas de infusão de ponta romba</td><td>Sai Infusion Technology</td><td>B14-50</td><td><a href="http://www.sai-infusion.com/collections/blunt-needles">http://www.sai-infusion.com/collections/blunt-needles</a></td></tr><tr><td>Oxímetro de pulso veterinário</td><td>EdanUSA</td><td>VE-H100B</td><td><a href="http://www.edanusa.com/Product/VE-H100B-Veterinary-Pulse-Oximeter.html">http://www.edanusa.com/Product/ VE-H100B-Veterinary-Pulse-Oximeter.html< / a></td></tr><tr><td>Bomba de Água Quente</td><td>Gaymar</td><td>TP700</td><td></td></tr><tr><td>Manta de Água Quente</td><td>Animal Health International</td><td>21232696</td><td>Maxi-Therm Lite Almofadas de Aquecimento</td></tr><tr><td>Sistema de Ultrassom</td><td>VisualSonics</td><td>Vevo 2100</td><td></td></tr></tbody></table>

entrega intraductal ao coelho glândula mamária

Intraductal Delivery to the Rabbit Mammary Gland

Intraductais tratamentos localizados para o cancro da mama oferecem vantagens potenciais, incluindo a entrega eficiente para o tumor e reduziu a toxicidade sistémica e efeitos adversos 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7. No entanto, vários desafios permanecem antes que esses tratamentos podem ser aplicados de forma mais ampla. O desenvolvimento e validação de terapêuticas intraductais em um modelo animal apropriado facilitar o desenvolvimento de estratégias terapêuticas intraductais para os pacientes. Enquanto a glândula mamaria do rato tem sido amplamente utilizada como um sistema modelo de desenvolvimento mamário e a tumorigénese, a anatomia é distinta da glândula humano. Um modelo animal maior, tal como o coelho, pode servir como modelo para uma melhor estrutura de glândula mamaria e no desenvolvimento terapêutico intraductal. em cOntrast para ratos, em que dez árvores ductal são espacialmente distribuídos ao longo do eixo do corpo, cada uma terminando em uma teta separada, a glândula mamária de coelho mais se assemelha a glândula humana, com vários sistemas sobrepostos ductal que a saída através de aberturas separadas em uma teta. Aqui, apresentamos métodos minimamente invasivos para a entrega de reagentes diretamente no ducto mamário coelho e para visualização do próprio parto com a ultra-sonografia de alta resolução.

Aqui, mostra-se que a entrega de reagentes intraductal contraste com as condutas mamarias de um coelho pode ser alcançado sem trauma para o tecido (Figura 2). Em coelhos, quatro sistemas ductais separadas convergem para uma tetina e, assim, podem ser acedidos individualmente e fotografada utilizando este método. aberturas ductal individuais são facilmente visualizado; Observe a marcação de uma segunda abertura ductal adjacente à conduta canulada na Figura 2B</str...

Aqui, descrevemos uma técnica para a entrega localizada de reagentes na glândula mamária de coelho por meio de uma injeção intraductal. Além disso, descrevemos um protocolo para visualização e confirmação da entrega por ultrassonografia de alta resolução de agentes de contraste.

Entrega Intraductal ao Coelho glândula mamária

Localized intraductal treatments for breast cancer offer potential advantages, including efficient delivery to the tumor and reduced systemic toxicity and ...

O objetivo geral deste procedimento é administrar soluções aquosas ao ducto mamário do coelho e visualizar a administração intraductal por meio de imagem ultrassonográfica. Este método pode ajudar a responder perguntas fundamentais na área da biologia mamária, como, por exemplo, como os terapêuticos interagem de maneira diferente com o ambiente ductal mamário em comparação com outros locais de administração. A principal vantagem desta técnica é que o agente de contraste para imagem ou qualquer terapêutico potencial a ser avaliado pode ser administrado localmente no tecido onde surgem lesões mamárias.Demonstrará a técnica Amelia Clark, uma técnica do meu laboratório. Para iniciar este procedimento, depile cuidadosamente a região caudal do abdômen de um coelho anestesiado na área ao redor do terceiro e quarto par de tetas inguinais. Após a remoção da maior parte dos pelos, aplique o creme depilatório nas áreas depiladas e, 10 minutos após a aplicação, remova o creme utilizando uma toalha de papel úmida umedecida com água morna.Em seguida, limpe a área com compressas de gaze embebidas em álcool para higienizar o local da injeção. Coloque o coelho em decúbito dorsal em uma calha em for

intraductal-delivery-to-the-rabbit-mammary-gland

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Bioengenharia

Este vídeo descreve uma técnica de injeção intraductal em que administramos uma mistura de injeção nos dutos das glândulas mamárias de camundongos.

Injeção intraductal: Aplicação da mistura de injeção nos ductos da glândula mamária do camundongo

Neste vídeo, descrevemos uma técnica de administração de uma solução de interesse no ducto mamário de um coelho e confirmamos a entrega por ultrassom de alta resolução de agentes de contraste.

Injeção intraductal em coelhos: entrega localizada de solução de interesse na glândula mamária de coelho

Este vídeo descreve a técnica de transferência de embriões para o oviduto de uma coelha receptora por meio de laparoscopia. Permite a remodelação embrionária em coelhos durante sua migração através do oviduto, eventualmente ajudando na implantação bem-sucedida. Esta técnica também pode ser usada para embriões armazenados com boa eficiência.

Transferência de embriões para coelhos: um procedimento para transferência de embriões guiada por laparoscopia para oviduto de modelo de coelho fêmea receptora ovulante

Um protocolo para a entrega intraductal não-invasivo de reagentes aquosas para a glândula mamaria do rato está descrito. O método aproveita injecção localizada nos mamilos das glândulas mamárias destinadas especificamente ductos mamários. Esta técnica é adaptável para uma variedade de compostos, incluindo o siRNA, agentes quimioterapêuticos e moléculas pequenas.

Injeção Intraductal para localizada Drug Delivery ao Rato glândula mamária

Este artigo descreve e demonstra a administração de vacinas intranasais e a coleta de leite de coelhos lactadores (Oryctolagus cuniculus) como forma de avaliar a imunidade mucosa em um modelo translacionalmente apropriado de imunização materna.

Imunização Intranasal e Coleta de Leite em Estudos de Imunização Materna em Coelhos Brancos da Nova Zelândia (Oryctolagus cuniculus)

Um método de injeção intradutal de reagentes para uma solução ablativa à base de etanol para a árvore ductal mamária do camundongo para a imagem in vivo e prevenção do câncer de mama é descrito. A injeção diretamente na abertura do mamilo permite atingir células epiteliais mamárias com danos colaterais mínimos.

Entrega intraduto e visualização de raios-X da solução ablativa baseada em etanol para prevenção e tratamento local do câncer de mama em modelos de camundongos

Um procedimento para a entrega de uma solução química ablativa à árvore ductal mamária de ratos para tratamento preventivo guiado por imagem do câncer de mama é descrito. As células epiteliais mamárias podem ser alvo de dano tecidual colateral mínimo por meio de canulação diretamente na abertura do mamilo e infusão intraductal de uma solução ablativa à base de etanol a 70%.

Visualização de Raios-X do Tratamento Ablativo Intraductal à Base de Etanol para Prevenção do Câncer de Mama em Modelos de Rato

O presente protocolo descreve a injeção intraductal de vetores virais via teto para entregar genes de interesse nas células epiteliais mamárias.

In vivo Entrega de Genes em Células Epiteliais Mamárias de Camundongos Através de Injeção Intraductal Mamária

Este protocolo apresenta um procedimento para infusão guiada por imagem no sistema da árvore ductal da glândula mamária de coelho. Demonstramos a infusão controlada de uma solução ablativa à base de etanol contendo agente de contraste de raios-X em todas as aberturas dos tetos por fluoroscopia em tempo real.

Visualização de raios-X de infusão ablativa intraductal à base de etanol para prevenção do câncer de mama em modelos de coelhos

Este protocolo descreve uma abordagem escalável de triagem intraductal CRISPR, permitindo estudos paralelos in vivo de eliminação e ativação genética na glândula mamária do camundongo.

Triagem In Vivo Paralela da Eliminação e Ativação Gênica na Glândula Mamária do Camundongo

Aprenda a técnica de injeção intraductal na glândula mamária de coelhos para entrega localizada de agentes terapêuticos, com visualização por ultrassom de alta resolução. Este método permite estudar a interação de fármacos com o tecido mamário in vivo.

Entrega Intraductal ao Coelho glândula mamária

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