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JoVE Journal Biology
Isolation of Intact Mitochondria from Skeletal Muscle by Differential Centrifugation for High-resolution Respirometry Measurements

Isolamento de mitocôndrias intactas de Músculo Esquelético por centrifugação diferencial para medições Respirometria de alta resolução

Full Text
19,098 Views
10:25 min
March 8, 2017

DOI: 10.3791/55251-v

Siamak Djafarzadeh1, Stephan Mathias Jakob1

1Department of Intensive Care Medicine,Inselspital, Bern University Hospital

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Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Overview

This article describes a method for isolating skeletal muscle mitochondria from a pig's quadriceps muscle using differential centrifugation. The respiratory rates of mitochondrial respiratory chain complexes I, II, and IV are then measured using high-resolution respirometry.

Key Study Components

Area of Science

  • Neuroscience
  • Biology
  • Mitochondrial bioenergetics

Background

  • Mitochondrial dysfunction is linked to various diseases.
  • Understanding mitochondrial function is crucial for addressing neurological diseases, sepsis, and age-related disorders.
  • The isolation of mitochondria helps eliminate cytologic factors that may interfere with analysis.
  • This technique enhances the accuracy of mitochondrial function assessments.

Purpose of Study

  • To isolate skeletal muscle mitochondria for functional analysis.
  • To determine the respiratory rates of mitochondrial respiratory chain complexes.
  • To contribute to the understanding of mitochondrial-related diseases.

Methods Used

  • Isolation of mitochondria from skeletal muscle using differential centrifugation.
  • Measurement of respiratory rates of mitochondrial complexes I, II, and IV.
  • Use of high-resolution respirometry for accurate assessment.
  • Preparation of muscle samples by mincing into small pieces.

Main Results

  • Successful isolation of mitochondria from skeletal muscle.
  • Determination of respiratory rates for mitochondrial complexes.
  • Insights into mitochondrial function related to various diseases.
  • Demonstration of the method's effectiveness in a laboratory setting.

Conclusions

  • The method provides a reliable way to study mitochondrial function.
  • It aids in understanding the role of mitochondria in health and disease.
  • Future research can build on these findings to explore mitochondrial dysfunction.

Frequently Asked Questions

What is the main goal of this procedure?
The main goal is to isolate skeletal muscle mitochondria and determine their respiratory rates.
Why is it important to isolate mitochondria?
Isolating mitochondria helps eliminate cytologic factors that can interfere with functional analysis.
What diseases are associated with mitochondrial dysfunction?
Mitochondrial dysfunction is linked to neurological diseases, sepsis, and age-related disorders.
How are the muscle samples prepared?
Muscle samples are minced into small pieces before isolation.
What techniques are used to measure respiratory rates?
High-resolution respirometry is used to measure the respiratory rates of mitochondrial complexes.
Who demonstrates the procedure?
The procedure is demonstrated by Sandra Nansoz, a technician from the laboratory.

Aqui, uma amostra de músculo quadríceps é retirada de um porco anestesiado e as mitocôndrias são isoladas por centrifugação diferencial. Em seguida, as frequências respiratórias dos complexos I, II e IV da cadeia respiratória mitocondrial são determinadas por meio de respirometria de alta resolução.

O objetivo geral deste procedimento é isolar as mitocôndrias do músculo esquelético por centrifugação diferencial e determinar as taxas respiratórias dos complexos da cadeia respiratória mitocondrial I, II e IV. Este método pode ajudar a responder a questões-chave no campo bioenergético mitocondrial, como doenças e síndromes associadas à disfunção mitocondrial, como diversas doenças neurológicas, sepse e distúrbios relacionados à idade. A principal vantagem desta técnica é a ausência da maioria dos fatores citológicos na preparação mitocondrial isolada, o que pode interferir na análise das funções mitocondriais. Demonstrando o procedimento estará Sandra Nansoz, a técnica do meu laboratório.

Para iniciar este procedimento, obtenha um copo de amostras de músculo esquelético, conforme descrito no protocolo de texto. Coloque o copo em um balde de gelo. Usando uma tesoura fina, pique o músculo em pedaços de um a dois milímetros de tamanho.

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