Name: -Nervo poupadores Mid-obstrução uretral (Nemo) em fêmeas pequenos roedores (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-04-25T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 42 s
Description: Aprenda a criar obstrução uretral parcial em roedores fêmeas com técnica cirúrgica que poupa a inervação vesical. Este método minimiza a morbidade animal e permite avaliar padrões de expressão gênica.

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O trabalho foi financiado por uma bolsa operacional do CHIR (DJB).

O protocolo experimental seguinte foi aprovado pelo comitê de cuidados com os animais da instituição. 1. Nemo em ratas <ol><li> Preparação <ol><li> Colocar um rato fêmea Sprague-Dawley pesando cerca de 200 g sob anestesia de isoflurano a 3%, peso do animal, e barbear e desinfectar a área pré-púbica 3 vezes utilizando uma limpeza cirúrgica iodo. </li><li> Em uma almofada de aquecimento, fita membros posteriores e cauda para baixo e cateterização da bexiga com um angiocateter de calibre 20, que também é delicadamente gravada para baixo para evitar o deslizamento. </li></ol></li><li> dissecação <ol><li> Usar um bisturi para efectuar uma incisão na pele 8 milímetros longitudinal a partir da sínfise púbica palpável para o meato uretral. Levantar a pele de ambos os lados para facilitar o fechamento da ferida mais tarde. </li><li> Dissecar sem rodeios para identificar a uretra stent espalhando longitudinal com tesoura fina. Coloque ganchos pele fina auto-retenção para melhorar a exposiçãoda uretra. </li><li> Executar alguma suave longitudinal espalhamento utilizando tesouras curvas dorsal para a uretra, para desenvolver o plano entre a uretra e da vagina. Então, sem rodeios passar uma sutura de seda 4-0 atrás da uretra e preparar o duplo lance do nó de um cirurgião. </li></ol></li><li> Obstrução uretral parcial <ol><li> Remover o angiocateter, colocar uma haste de metal 0,9 milímetros paralela à uretra, e, em seguida, apertar o nó em torno da uretra e do metal da haste, de modo que o último ainda facilmente desliza para fora a partir daí. </li><li> Fixar o nó com mais 3 lances usando tensão suave antes de retirar a haste. Cortar o fio de sutura termina cerca de 3 mm long, ou 4 mm se libertação posterior de obstrução faz parte da experiência. </li></ol></li><li> fechamento da ferida <ol><li> Aproximar as glândulas uretrais usando um ponto único enterrado de absorvível trançado sutura 4-0. </li><li> Feche a pele com um ponto colchão horizontal enterrado usando o mesmo sut absorvívelUre. Nota: Embora possa parecer pouco convencional usar uma sutura absorvível para um ponto de penetração cutânea, não encontramos complicações como infecções da ferida e que a remoção da sutura pode ser evitada. </li></ol></li><li> Após o cuidado <ol><li> Injectar buprenorfina 0,1 mg / kg subcutaneamente antes de colocar o rato numa gaiola de recuperação. </li><li> Oferecer alguma dieta macia da recuperação para as primeiras 24 h ao único rato alojado. Após este período, animais de casa novamente nos mesmos pares que antes do procedimento desde que eles estão indo bem e pertencem ao mesmo grupo de tratamento. </li><li> Verifique diariamente os ratos quanto ao tamanho da bexiga e ao bem-estar geral; Registrar seu peso pelo menos uma vez por semana. </li></ol></li></ol> 2. NeMO em Ratos Femininos <ol><li> Preparação <ol><li> Coloque um rato C57bl / 6 fêmea pesando cerca de 18 g e proceda como detalhado no passo 1.1.1. </li><li> Proceder conforme detalhado no passo 1.1.2, exceto usar umiocatheter. </li></ol></li><li> dissecação <ol><li> Usar um bisturi para fazer uma incisão na pele de seis milímetros longitudinal a partir da sínfise púbica palpável para o meato uretral. </li><li> Dissecar sem rodeios para identificar a uretra stent espalhando longitudinal com tesoura fina. Levantar o feixe neuro-vasculares execução ventralmente na uretra por dissecção romba análogo. </li><li> Executar alguma suave longitudinal espalhamento utilizando tesouras curvas dorsal para a uretra, para desenvolver o plano entre a uretra e da vagina. Então, sem rodeios passar uma sutura 5-0 não absorvível trançado atrás da uretra e preparar o duplo lance do nó de um cirurgião. </li></ol></li><li> Obstrução uretral parcial <ol><li> Ligue o angiocateter com uma seringa de 1 ml e injectar 0,1 ml de solução salina normal para a bexiga. </li><li> Coloque uma cânula de calibre 26, paralela à uretra. Aperte levemente o nó em torno da uretra e cânula enquanto puxa de volta o angiocaº. </li><li> Fixar o nó com mais 3 lances usando tensão suave antes de retirar a cânula. </li><li> Teste para a urina que aparece no meato mediante uma pressão suave sobre a bexiga do animal; afrouxar o laço se incapaz de expressar urina. Caso contrário, o corte da sutura termina cerca de 3 mm long. </li></ol></li><li> fechamento da ferida <ol><li> Feche a pele com um ponto colchão horizontal enterrado usando uma sutura absorvível 5-0 trançado. </li></ol></li><li> após o cuidado <ol><li> Injectar 0,1 mg / kg de buprenorfina por via subcutânea, antes de colocar o rato em uma gaiola de recuperação. </li><li> Oferecer alguma dieta de recuperação suave para as primeiras 48 h para o mouse Alojado única. Após este período, animais da casa novamente nos mesmos grupos que antes do procedimento, desde que estão fazendo bem e pertencem ao mesmo grupo de tratamento. NOTA: Os ratos com uma palpável distendido bexiga 24 h após o procedimento que não anulará quando manuseado são over-obstruída e vai morrer dentro do next 1 - 2 dias a menos que levado de volta sob anestesia para a remoção da ligadura obstructivo. </li><li> Verificar os ratinhos diariamente para o tamanho da bexiga e bem-estar geral; registar o seu peso pelo menos semanalmente. </li></ol></li></ol>

<ol><li>Andersson, K. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Storage+and+voiding+symptoms%3A+pathophysiologic+aspects%5BTitle%5D)+AND+%22Urology%22%5BJournal%5D)">Storage and voiding symptoms: pathophysiologic aspects.</a> Urology. 62 (5), 3-10 (2003).</li>
<li>Boyle, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+prevalence+of+lower+urinary+tract+symptoms+in+men+and+women+in+four+centres.+The+UrEpik+study%5BTitle%5D)+AND+%22BJU+Int%22%5BJournal%5D)">The prevalence of lower urinary tract symptoms in men and women in four centres. The UrEpik study.</a> BJU Int. 92 (4), 409-414 (2003).</li>
<li>Coyne, K. S., Wein, A., Nicholson, S., Kvasz, M., Chen, C. I., Milsom, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Economic+burden+of+urgency+urinary+incontinence+in+the+United+States%3A+a+systematic+review%5BTitle%5D)+AND+%22J+Manag+Care+Pharm%22%5BJournal%5D)">Economic burden of urgency urinary incontinence in the United States: a systematic review.</a> J Manag Care Pharm. 20 (2), 130-140 (2014).</li>
<li>Buttyan, R., Chen, M. W., Levin, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+bladder+outlet+obstruction+and+molecular+insights+into+the+basis+for+the+development+of+bladder+dysfunction%5BTitle%5D)+AND+%22Eur.+Urol%22%5BJournal%5D)">Animal models of bladder outlet obstruction and molecular insights into the basis for the development of bladder dysfunction.</a> Eur. Urol. 32 (Suppl 1), 32-39 (1997).</li>
<li>Mattiasson, A., Uvelius, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Changes+in+contractile+properties+in+hypertrophic+rat+urinary+bladder%5BTitle%5D)+AND+%22J+Urol%22%5BJournal%5D)">Changes in contractile properties in hypertrophic rat urinary bladder.</a> J Urol. 128 (6), 1340-1342 (1982).</li>
<li>Chang, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alteration+of+the+PKC-mediated+signaling+pathway+for+smooth+muscle+contraction+in+obstruction-induced+hypertrophy+of+the+urinary+bladder%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Invest%22%5BJournal%5D)">Alteration of the PKC-mediated signaling pathway for smooth muscle contraction in obstruction-induced hypertrophy of the urinary bladder.</a> Lab Invest. 89 (7), 823-832 (2009).</li>
<li>Moore, J. A., Brading, A. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+porcine+model+of+bladder+outlet+obstruction+incorporating+radio-telemetered+cystometry%5BTitle%5D)+AND+%22BJU+Int%22%5BJournal%5D)">A porcine model of bladder outlet obstruction incorporating radio-telemetered cystometry.</a> BJU Int. 100 (5), 1192-1193 (2007).</li>
<li>Beamon, C. R., Mazar, C., Salkini, M. W., Phull, H. S., Comiter, C. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effect+of+sildenafil+citrate+on+bladder+outlet+obstruction%3A+a+mouse+model%5BTitle%5D)+AND+%22BJU+Inte%22%5BJournal%5D)">The effect of sildenafil citrate on bladder outlet obstruction: a mouse model.</a> BJU Inte. 104 (2), 252-256 (2009).</li>
<li>Pandita, R. K., Fujiwara, M., Alm, P., Andersson, K. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cystometric+evaluation+of+bladder+function+in+non-anesthetized+mice+with+and+without+bladder+outlet+obstruction%5BTitle%5D)+AND+%22J+Urol%22%5BJournal%5D)">Cystometric evaluation of bladder function in non-anesthetized mice with and without bladder outlet obstruction.</a> J Urol. 164 (4), 1385-1389 (2000).</li>
<li>Kang, Y. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Early+Sequential+Changes+in+Bladder+Function+after+Partial+Bladder+Outlet+Obstruction+in+Awake+Sprague-Dawley+Rats%3A+Focus+on+the+Decompensated+Bladder%5BTitle%5D)+AND+%22Korean+J+Urol%22%5BJournal%5D)">Early Sequential Changes in Bladder Function after Partial Bladder Outlet Obstruction in Awake Sprague-Dawley Rats: Focus on the Decompensated Bladder.</a> Korean J Urol. 52 (12), 835-837 (2011).</li>
<li>Schroeder, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protective+effect+of+an+oral+endothelin+converting+enzyme+inhibitor+on+rat+detrusor+function+after+outlet+obstruction%5BTitle%5D)+AND+%22J+Urol%22%5BJournal%5D)">Protective effect of an oral endothelin converting enzyme inhibitor on rat detrusor function after outlet obstruction.</a> J Urol. 172 (3), 1171-1174 (2004).</li>
<li>Sidler, M., Aitken, K., Jiang, J., Bijos, D., Bägli, D. <a target="_blank" href="http://www.jurology.com/article/S0022-5347(16)01357-4/abstract">"sometimes a sham is just a sham" - why the rodent model of partial bladder outlet obstruction needs adjustment.</a> J Urol. 195 (4), e379(2016).</li>
<li>Jin, L. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Persistent+detrusor+overactivity+in+rats+after+relief+of+partial+urethral+obstruction%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Regul.+Integr.+Comp.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Persistent detrusor overactivity in rats after relief of partial urethral obstruction.</a> Am. J. Physiol. Regul. Integr. Comp. Physiol. 301 (4), R896-R904 (2011).</li>
</ol>

Os autores não têm nada a divulgar.

A mortalidade dos animais é uma das principais preocupações do modelo tradicional de pBOO na uretra proximal, em 15% ou mais em muitos relatórios 10, 11, 13. Nemo parece ter mortalidade mínima quando aplicado em ratos fêmeas. obstrução uretral proximal em murganhos é tecnicamente mais exigente do que em ratos e, portanto, ainda mais propensos a complicações. Utilizando uma cânula de calibre 26 como um espaço re...

Parcial obstrução da saída da bexiga (pBOO) tem uma prevalência elevada e pode resultar em disfunção da bexiga grave 1; o espectro varia de malformações congénitas, tais como válvulas de uretra posterior ou hypospadias, mais de estreitamento uretral adquiridos a hiperplasia benigna da próstata. O último que afecta mais de 30% dos homens de sessenta anos e mais velhos 2. Grande fardo paciente e os custos de saúde associados com imensas pBOO justificar o esforço de investigação considerável colocar em estudar a remodelação da bexiga em resposta à resistência aumentada saída 3. De 2006 até 2015, mais de 220 PubMed indexados artigos foram publicados sobre o efeito de pBOO na bexiga urinária. Embora os modelos animais para pBOO Elaboraram-se várias espécies, tais como 4 a 5 de rato, o coelho 6, 7 porco, e compue 8, 9, sem dúvida, o modelo animal mais habitualmente utilizada, porém, são ratos do sexo feminino submetidos a obstrução parcial da uretra proximal; acesso ao abdómen dos animais, exteriorizante da bexiga, e dissecção em torno do pescoço da bexiga são inevitáveis ​​com esta técnica obstrução uretral proximal tradicional. Variabilidade no grau de obstrução e a mortalidade dos animais são apenas alguns dos problemas associados com este procedimento 10, 11; mostrou-se que em animais de engano operados, dissecção em torno da uretra proximal leva a alterações fisiológicas que se correlacionam com perda de fibras nervosas no colo da bexiga 12. Esta descoberta indica que o modelo animal pBOO mais utilizada, a qual envolve o acesso a uretra proximal em roedores do sexo feminino, conduz a uma lesão desnervação com alterações estruturais e funcionais associadas da bexiga, afectandofarsa e animais obstruídas. Por conseguinte, foi necessário um método alternativo evitar lesões desnervação. O nosso laboratório desenvolvidos e avaliada uma abordagem obstrução médio-uretral poupadores de Nervo (nemo), eficaz na indução de alterações associadas à obstrução esperada na bexiga, tais como aumento da massa do órgão e urina residual, enquanto que os animais operados de forma simulada foram indistinguíveis dos animais de controlo não operados . Além disso, o esfíncter uretral estriado permaneceu intacta como ela se encontra próximo do limite de dissecção. Além disso, a variabilidade no aumento induzido por obstrução em massa da bexiga foi significativamente menor do que na obstrução uretral proximal tradicional e a mortalidade dos animais foi zero. Nós também aplicado com sucesso nemo em ratinhos fêmea com uma mortalidade inferior a 10% nos animais obstruídos, enquanto que todos os modelos pBOO para ratinhos descritos até à data foram associadas com uma mortalidade de cerca de 50%. Estudar remodelação da bexiga no contexto de pBOO em ratos irá beneficiar de applicabildade de todo o espectro de modificações transgénicos. Dissecando em torno do meio da uretra em roedores do sexo feminino não induz as alterações estruturais ou funcionais indesejáveis ​​e de confusão na bexiga urinária observado no modelo de obstrução proximal tradicional. No entanto, a indução de uma obstrução parcial no nível médio-uretral ainda induz a hipertrofia da bexiga e aumento da urina residual, como esperado a partir de um modelo animal para pBOO. Importante, realizando nemo em ratinhos abre investigação de remodelação da bexiga em pBOO a métodos transgénicos, que são praticamente inexistentes em roedores maiores.

<table><tbody><tr><td>Rato fêmea</td><td>Rato de Dawley Charles-River Canada</td><td>(Crl:SD); Código da cepa: 400</td><td>cerca de 200 g</td></tr><tr><td>Vaporizador de isoflorano</td><td>Benson medical industries inc.</td><td>Isoflurano TEC III; código do produto: 53-T3ISO&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Isoflorano</td><td>Fresenius Kabi Saúde Animal</td><td>Isoflorano; código do produto CP0406V2</td><td>&nbsp; Frasco de 250 mL</td></tr><tr><td>Bisturi descartável</td><td>Ted Pella, Inc.</td><td># 15 Bisturis estéreis de aço inoxidável; número de catálogo 549-9-15S</td><td></td></tr><tr><td>Pinça de microscopia</td><td>Ted Pella, Inc.</td><td>Pinça de Microscopia Aesculap, Finepoint, 115mm; número do produto 5443</td><td></td></tr><tr><td>Pinça Adson</td><td>Ted Pella, Inc.</td><td>Pinça de Dissecção Aesculap Adson, Curva, 120mm; número do produto 5002-9</td><td></td></tr><tr><td>Tesoura cirúrgica curva</td><td>Ted Pella, Inc.</td><td>Tesoura Cirúrgica, Curva, S/S, 105mm; número de catálogo 1376</td><td></td></tr><tr><td>0,9 mm haste de metal inox</td><td>goodfellow.com</td><td>Aço Inoxidável - AISI 316L Diâmetro do fio:0,9mm; código de encomenda 911-684-65</td><td></td></tr><tr><td>Ganchos de pele - auto-fabricados em aço inox</td><td>goodfellow.com</td><td>Aço Inoxidável - AISI 316L Diâmetro do fio:0,9mm; código de encomenda 911-684-65</td><td></td></tr><tr><td>4-0 Sutura de seda</td><td>esutures.com</td><td>4-0 Sofsilk preto 98" fio; número do produto LS640</td><td></td></tr><tr><td>5-0 Vicry sutura</td><td>esutures.com</td><td>5-0 Vicryl não tingido 27" RB-1 taper; número do produto J213H</td><td></td></tr><tr><td>Porta-agulha</td><td>Medsupplier.com</td><td>Integra Miltex Carb-N-Sert Baumgartner Porta-agulhas - 5 1/2"; código do produto SKU NEE4484-8-40TC SKU NEE4484-8-40TC SKU NEE4484-8-40TC&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Temgesic (Buprenorfina)</td> <td>primeiro suprimento veterinário</td><td>Buprenex 0.3MG/ml em amperes; item #075701</td><td></td></tr><tr><td>Seringa de 1 mL com agulha de 27 G</td><td>Fisher Scientific</td><td>BD&nbsp; Seringa Tuberculina, BD 309623</td><td></td></tr><tr><td>20 G Angiocath</td><td>Fisher Scientific</td><td>Andwin Scientific&nbsp; ANGIOCATH 20 GA; Nº de catálogo. </td><td></td>NC9561906</tr><tr><td>Dieta de recuperação</td><td>clearh2o</td><td>DietGel 31M; 72-08-5022</td><td></td></tr><tr><td>C57Bl / 6 camundongos fêmeas</td><td>Charles-River Canada</td><td>C57BL / 6 Mouse (C57BL / 6NCrI); Código da cepa: 027</td><td>cerca de 18 g</td></tr><tr><td>24 G angiocath</td><td>Fisher Scientific</td><td>Hanna Pharmaceutical Supply Co., Inc.&nbsp;IV CATH ANGIOCATH 24GX3/4IN; Nº de catálogo. </td><td></td>NC9814340</tr><tr><td>5-0 Ethibond</td><td>esutures.com</td><td>5-0 Ethibond verde 30" RB-1 cone; número do produto X550H</td><td></td></tr><tr><td>26 G agulha de seringa</td> Agulha de seringa <td>Sigma-Aldrich</td><td>BD Precisionglide, Calibre 26; z192392</td><td></td></tr><tr><td>Solução salina normal</td><td>Baxter</td><td>0,9% Cloreto de sódio injetável, USP, 100 mL MINI-BAG; código do produto 2B0043</td><td></td></tr></tbody></table>

-nervo poupadores mid-obstrução uretral (nemo) em fêmeas pequenos roedores

Nerve-sparing Mid-urethral Obstruction (NeMO) in Female Small Rodents

obstrução da saída da bexiga parcial (pBOO) tem alta prevalência, causas carga paciente significativa, e os custos de saúde imensos. O modelo animal mais comum para investigar remodelação da bexiga em pBOO são roedores do sexo feminino submetidos a obstrução parcial na uretra proximal. Variabilidade no grau de obstrução e a mortalidade dos animais são os principais preocupações com obstrução proximal. Além disso, dissecando em torno da uretra proximal e do colo da bexiga compromete inervação da bexiga. Nós desenvolvemos um modelo de obstrução mid-uretral poupadores de nervo (Nemo) para pBOO evitando as desvantagens do modelo tradicional. Nós nos aproximamos da uretra apenas inferior à sínfise púbica, o que evitou a necessidade de laparotomia, bem como para dissecção nesta área; Também, o esfíncter uretral estriado permaneceu intacta. Foi realizada nemo em ratos Sprague-Dawley do sexo feminino (12 obstruções, 6 animais sham), bem como em ratinhos fêmea C57 / BL6 (20 obstruçãos, 18 animais sham). Depois de duas semanas, avaliamos a função da bexiga, a massa da bexiga, e massa corporal. Nós não tivemos mortalidade entre ratas obstructed- ou operados por simulação; tal como descrito para o proximal tradicional pBOO-método, que amarrado a sutura em torno da uretra proximal e uma haste de metal colocado temporariamente 0,9 milímetros. Nemo induziu um aumento de 85% em massa da bexiga após duas semanas, o volume médio de urina residual foi de 0,4 mL em ratos parcialmente obstruída enquanto apenas 0,03 ml em animais sham. Em ratinhos, foram testados 3 tamanhos de cânulas que colocados ao longo da uretra quando atar o fio de sutura. Descobrimos que a utilização de uma cânula de calibre 27 resultou em mais de mortalidade dos animais 50%; colocação da cânula de calibre 25 não deu a resposta desejada no aumento da massa da bexiga; utilizando uma cânula de calibre 26, produziu resultados favoráveis ​​com a mortalidade mínima dos animais (1/8) ainda um aumento significativo de 2 vezes em massa da bexiga.

-Nervo poupadores Mid-obstrução uretral (Nemo) em ratas Mortalidade Foi realizada uma obstrução mid-uretral em mais de 40 ratas tão longe e não tinha mortalidades. massa da bexiga Média massa bexiga relativa (bexi...

modelagem tradicional de obstrução da saída da bexiga parcial em roedores é cheio com a mortalidade dos animais. Uma lesão desnervação de dissecção em torno da uretra proximal e do colo da bexiga também é de grande preocupação. Nós desenvolvido e avaliado um modelo de obstrução mid-uretral segura e confiável, evitando as deficiências do modelo tradicional.

-Nervo poupadores Mid-obstrução uretral (Nemo) em fêmeas pequenos roedores

Partial bladder outlet obstruction (pBOO) has a high prevalence, causes significant patient burden, and immense health care costs. The most common animal ...

O objetivo geral desta técnica é cirurgicamente criar uma obstrução parcial da saída da bexiga em roedores fêmeas pequenos, preservando a inervação da saída da bexiga, com baixa morbidade animal, praticamente nenhuma mortalidade e pouca variabilidade no grau de obstrução. Este método pode ajudar a responder perguntas fundamentais sobre o remodelamento da bexiga induzido pela obstrução, como, por exemplo, quais são os padrões de expressão gênica e as alterações epigenéticas associadas à obstrução da saída? As principais vantagens desta técnica são sua confiabilidade e o fato de evitar a necessidade de dissecação ao redor do colo da bexiga, preservando assim a inervação da saída da bexiga.A implicação desta técnica estende-se à terapia da obstrução da bexiga, pois a fase após o alívio e a recuperação pode ser avaliada de maneira reprodutível. A recuperação da obstrução da bexiga é imprevisível em humanos. Com o uso desta técnica, a obstrução pode ser removida, permitindo a avaliação das respostas celulares e teciduais associadas à recuperação da obstrução.Desenvolvemos este método ao observar que a obstrução tradicional, mais proximal, estava associada a disfunção e displasia vesicais significativas indesejáveis, após dissecações simuladas sem obstrução cirúrgica real. Comece colocando uma rata fêmea de 200 gramas sobre uma almofada aquecida e fixe as patas e a cauda com fita adesiva. Em seguida, realize a desinfecção e coloque toalhas estéreis sem cobrir o abdômen inferior.Em seguida, utilize um angiocateter de calibre 20 para cateterizar a bexiga e fixe o cateter com fita adesiva. A seguir, sob um microscópio estereoscópico, use um bisturi para fazer uma incisão longitudinal de oito milímetros na pele, partindo da sínfise púbica palpável em direção ao meato uretral. Retire a pele em ambos os lados da incisão para facilitar o fechamento posterior e use tesoura fina para realizar uma dissecação romba com afastamento longitudinal, a fim de identificar a uretra atrofiada.Posicione ganchos finos de retenção cutânea para melhorar a exposição da uretra e use uma dissecação romba análoga para elevar o feixe neurovascular que corre ventralmente. Com tesoura curva e alargamento longitudinal suave, desenvolva o plano entre a uretra e a vagina, dorsalmente à uretra. Agora, passe rombamente uma sutura de seda 4-0 por trás da uretra e prepare o duplo laço do nó cirúrgico.Em seguida, remova o angiocateter e posicione uma haste metálica de 0,9 milímetro paralela à uretra. Aperte o nó ao redor da uretra e da haste metálica, de modo que a haste ainda possa deslizar facilmente, e fixe o nó com mais três laços suaves. Após o último laço, remova a haste e corte as pontas do fio a cerca de três a quatro milímetros de comprimento, utilizando um ponto simples variado de fio absorvível trançado 4-0, para aproximar as glândulas parauretrais.Em seguida, feche a pele com um ponto horizontal em alça variado, utilizando o mesmo fio absorvível, e injete a analgesia apropriada. Para obstrução uretral média com preservação nervosa, ou NeMO em camundongos, posicione um camundongo fêmea C-57 black-6 de 18 gramas sobre uma manta térmica em posição supina e fixe as patas com fita adesiva. Em seguida, desinfete e coloque campos estéreis sem cobrir o abdômen inferior.Em seguida, sob microscópio estereoscópico, canule a bexiga com um angiocateter de calibre 24 e fixe o cateter com fita adesiva. Sob microscópio estereoscópico, use um bisturi para fazer uma incisão longitudinal de seis milímetros na pele, da sínfise púbica palpável em direção ao meato uretral. Em seguida, realize uma dissecação romba com tesoura fina para identificar a uretra atrofiada.Usando uma dissecação longitudinal suave, dorsal à uretra, desenvolva o plano entre a uretra e a vagina. Em seguida, passe rombamente uma sutura torcida não absorvível 5-0 por trás da uretra e prepare o duplo laço do nó cirúrgico. Agora, conecte uma seringa de um mililitro ao angiocateter e injete 0,1 mililitros de solução salina normal na bexiga.Quando todo o soro fisiológico tiver sido administrado, use o nó para fixar suavemente uma cânula de 26 gauge, paralela à uretra, enquanto retira o angiocateter. Fixe o nó com mais três laços suaves, seguidos da remoção da cânula, e aplique pressão suave sobre a bexiga para verificar o aparecimento de urina no meato. Corte as extremidades do fio cirúrgico a cerca de três milímetros.Em seguida, utilize um fio absorvível trançado 5-0 para fechar a pele com pontos horizontais em alforreia variados e injete a analgesia apropriada antes de colocar o camundongo em uma gaiola de recuperação. A razão média relativa entre a bexiga e a massa corporal em ratos submetidos ao procedimento simulado NeMO é de 0,33% duas semanas após o procedimento, enquanto para os ratos com obstrução, é de 0,6%, um aumento de 85% na massa relativa da bexiga nesses animais. Ratos submetidos ao procedimento simulado NeMO exibem praticamente nenhuma urina residual que possa ser aspirada por punção da bexiga no momento da coleta do órgão.Animais obstruídos, por contrato, demonstram um volume médio significativamente maior de urina residual, de 0,42 mililitros. No geral, a mortalidade de camundongos em animais submetidos a procedimento simulado e operados com NeMO aumenta à medida que o tamanho da cânula de posicionamento diminui. Além disso, o uso de uma cânula de 25 gauge não aumenta efetivamente a razão entre a massa da bexiga e a massa corporal em camundongos, enquanto o uso de uma cânula de 26 gauge resulta em um aumento superior a duas vezes na massa relativa da bexiga.Quando um espaçador de calibre 27 é aplicado, observa-se um aumento superior a 60% na massa relativa da bexiga duas semanas após o procedimento. Além disso, a obstrução parcial da saída da bexiga com cânula de calibre 25 ou 26 ao longo da uretra não afeta o volume residual de urina durante o período experimental de duas semanas. Embora animais com espaçador de calibre 27 demonstrem um aumento médio de três vezes no volume residual de urina, em comparação com seus pares submetidos a procedimento simulado.Após alguma prática, ambos os procedimentos NeMO e NeMO simulado podem ser concluídos em 10 a 15 minutos. Ao realizar o NeMO em camundongos, é importante lembrar-se de descartar a possibilidade de uma obstrução completa, expressando suavemente um pouco de urina antes de fechar o animal. Após este procedimento, outros métodos, como a inclusão de animais simulados proximais, podem ser realizados para responder perguntas adicionais sobre a contribuição relativa ou associação de estímulos neurogênicos locais na saída que resultam em disfunção vesical, displasia e desregulação gênica.Espera-se que esta técnica abra caminho para pesquisadores na área da miopatia obstrutiva da bexiga explorarem como as interrupções anatômicas e neurogênicas da saída da bexiga contribuem para o desenvolvimento e a recuperação da obstrução do fluxo urinário.

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Research

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Medicine

Medicina

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