Minimamente Invasiva transversal aórtica constrição em Ratos

O objetivo geral deste procedimento é induzir a hipertrofia ventricular esquerda por meio da constrição do arco aórtico transverso com um procedimento cirúrgico simples que não requer ventilação artificial. Este método pode ajudar a responder questões-chave no campo da cardiologia sobre remodelamento miocárdico, hipertrofia cardíaca, apoptose e fibrose e as condições de sobrecarga de pressão do ventrículo esquerdo. A principal vantagem dessa técnica é que ela conserva os fundamentos da constrição aórtica transversa regular, eliminando a necessidade de um ventilador e intubação traqueal.

Antes de iniciar o procedimento, use um porta-agulha para curvar as pontas de duas a quatro agulhas de calibre 30 e monte as agulhas em aplicadores de algodão individuais. Em seguida, embote uma agulha de calibre 27 e use o porta-agulha para dobrar a ponta em 90 graus. Em seguida, alise a ponta em uma superfície dura para fazer um espaçador de 0,4 milímetro.

Depois de confirmar o nível apropriado de sedação por falta de resposta ao beliscão do dedo do pé, aplique pomada nos olhos do animal e coloque o camundongo em uma almofada de aquecimento aquecida a 37 graus Celsius na posição supina. Prenda os membros à almofada de aquecimento com fita cirúrgica. Em seguida, desinfete a pele com três lenços consecutivos de álcool e solução de iodopovidona e coloque uma cortina estéril com um campo de operação exposto sobre o animal.

Para iniciar o procedimento de ligadura, use um bisturi estéril para abrir a pele na posição da linha média do pescoço e do tórax. Em seguida, sob um microscópio de dissecação, use uma tesoura romba para separar suavemente os tecidos conjuntivos e puxar a glândula tireoide em direção à cabeça. Usando as agulhas curvas, separe a camada muscular da traqueia na linha média, em direção a ambos os lados do animal e use a tesoura romba para cortar o esterno aproximadamente cinco milímetros até a segunda costela.

Abra a incisão com uma pinça curva e use uma agulha curva para separar os lobos do timo e a parede torácica inferior. O arco aórtico transverso e duas artérias carótidas serão claramente visíveis neste ponto. Coloque a agulha curva sob o arco e use a ponta para fazer uma perfuração entre a parede do vaso e o tecido conjuntivo do outro lado.

Use a agulha para colocar uma sutura de monofilamento 6-0 sob o arco aórtico e coloque o espaçador previamente preparado na alça. Fixe a sutura no lugar com um nó duplo e remova suavemente o espaçador. Depois de confirmar uma constrição bem-sucedida do nó, corte as extremidades da sutura e use uma sutura de seda 6-0 para fechar a parede torácica com um padrão de sutura simples interrompido, seguido pelo fechamento da pele com uma sutura monofilamentar 6-0 em um padrão de sutura contínua.

Em seguida, aplique solução de iodopovidona no local da sutura e coloque o animal em uma gaiola pré-aquecida para recuperação e monitoramento pós-operatório. Após uma semana, aplique o gel do eletrodo nas patas do animal experimental e prenda-as a uma almofada de aquecimento aquecida a 37 graus Celsius com eletrodos. Em seguida, aplique gel de ultrassom no peito do mouse e selecione o modo B em um sistema de ultrassom de alta frequência.

Usando uma sonda MS550D de 40 megahertz, localize o ventrículo esquerdo. Em seguida, no modo M, meça a espessura da parede sistólica e diastólica. Retorne ao modo B para localizar a artéria carótida comum esquerda antes do ponto de ramificação e use o doppler pulsado e colorido para avaliar o fluxo, armazenando as imagens para análise posterior, conforme apropriado.

Incline a plataforma de manuseio de animais para a extrema esquerda de modo que o mouse fique na posição de decúbito esquerdo e coloque a sonda em um deslocamento de 30 graus de uma posição paralela à cabeça na posição paraesternal. Manipule os torques x e y para encontrar o arco aórtico e localize a constrição usando o modo doppler colorido para tornar o local da constrição mais visível. Usando ondas pulsadas e doppler colorido, meça a velocidade de pico do fluxo no ponto em que o sangue está fluindo entre as duas artérias carótidas que se ramificam do arco aórtico.

Em seguida, permita que o animal se recupere em uma almofada de aquecimento na posição de bruços com monitoramento até que esteja totalmente recuperado. A constrição aórtica transversa minimamente invasiva, ou MTAC, produz de forma confiável sobrecarga de pressão ventricular esquerda em camundongos ligados com uma aorta transversal contraída claramente visível e uma velocidade de pico de fluxo aumentada através do local de constrição. Em comparação, o animal operado simulado não demonstra constrição aparente com uma velocidade normal de pico de fluxo.

Como consequência da ligadura, a velocidade do fluxo é significativamente aumentada na artéria carótida direita, e a pressão pode se acumular na aorta ascendente e no coração, para produzir hipertrofia ventricular esquerda, reduzindo significativamente o fluxo na artéria carótida comum esquerda. No entanto, um fluxo sanguíneo quase idêntico é observado nas artérias carótidas direita e esquerda no camundongo operado de forma simulada. Os parâmetros relacionados à hipertrofia resultantes são prontamente observados nos corações significativamente aumentados e deformados de camundongos ligados ao MTAC e sua sobrevida global reduzida.

Essas mudanças são observadas ainda mais no nível celular, incluindo um aumento do tamanho das células do músculo cardíaco e fibrose nos camundongos MTAC, em comparação com animais não ligados. Uma vez dominada, essa técnica pode ser concluída em cinco a dez minutos, se for executada corretamente. Ao tentar este procedimento, é importante lembrar de ter cuidado para não danificar os vasos.

Depois de assistir a este vídeo, você deve ter uma boa compreensão de como induzir a hipertrofia ventricular esquerda por meio da constrição transversa do arco aórtico, usando um procedimento cirúrgico simples que não requer ventilação artificial.