Avaliando o efeito de substâncias químicas ambientais em Honey Bee Desenvolvimento do indivíduo para Colony Nível

O objetivo geral deste experimento é avaliar como os resíduos de pesticidas no ambiente afetam as abelhas individuais na condição natural das colônias de colmeias. A principal vantagem desse método é que ele pesquisa os efeitos de pesticidas ou outros contaminantes de interesse tanto nas abelhas individuais quanto em colônias inteiras. A demonstração visual deste método é crítica, pois a manipulação das pupas é difícil porque são frágeis.

Demonstrando o procedimento estará Ko Chong-Yu, um estudante de doutorado do meu laboratório. Antes do experimento, alimente cada colônia com um litro de xarope de 50% de açúcar. Reabasteça o reservatório de alimentos semanalmente, uma colônia saudável terá nove quadros de favos de abelha e uma rainha botando ovos.

Para começar, localize a rainha na colônia e substitua pelo menos um quadro em seu lado da colônia por um quadro vazio. Em seguida, insira os excludentes da rainha para isolar a rainha em uma seção de quatro quadros contendo pelo menos um quadro vazio. No dia seguinte, verifique se há ovos recém-postos nas molduras e separe os ovos da rainha por 72 horas.

Em seguida, remova essas armações, escove as abelhas operárias e prepare-se para tratar as larvas nas células da ninhada. Para cada tratamento, cubra 50 larvas de um dia selecionadas aleatoriamente no quadro com lâminas transparentes. Prenda os slides com tachinhas e, em seguida, faça as informações de identificação nos slides com marcador permanente.

Agora, usando BLD aquecido a 35 graus Celsius, faça diferentes concentrações de tratamento PPN variando de 0,1 a 100 partes por milhão em volumes de 100 mL. Nos próximos três dias, trate os grupos de células de cria. Para tratar as larvas, descubra-as e adicione 10 microlitros da solução PPN BLD a cada célula de cria.

Repita o tratamento no dia seguinte usando 10 microlitros de solução de tratamento e repita o tratamento no terceiro dia usando 20 microlitros de solução de tratamento. Após o terceiro tratamento, deixe-os se desenvolver na colônia No projeto experimental, replique cada grupo de tratamento quatro vezes usando colônias diferentes. No sétimo dia, inspecione as larvas tratadas com PPN, registre as taxas de mortalidade e limitação nos grupos de tratamento.

No dia 13, registre a taxa de eclosão de cada grupo de tratamento. Primeiro, remova a cera de abelha das células de cria tampadas. Em seguida, remova as pupas usando uma pinça com ponta para segurá-las levemente e puxe-as com cuidado.

Ao remover as pupas, use a pegada entre a cabeça e o tórax e retire as pupas com muito cuidado. Será necessário praticar muitas vezes para obter uma taxa de sobrevivência de pelo menos 90% antes de executar o experimento. Transfira as pupas para 24 placas de cultura de tecidos revestidas com duas camadas de tecido de laboratório.

Certifique-se de observar qualquer dano na mortalidade que ocorra durante a transferência. Mantenha as placas de cultura a 34 graus Celsius com 70% de umidade relativa até a emergência. Nos próximos oito dias, registre a taxa de eclosão.

Configure como antes com uma colônia saudável de nove quadros, onde a rainha é limitada a uma seção de quatro quadros contendo pelo menos um quadro vazio. Chame a seção de quatro quadros de parte A e a seção de cinco quadros de parte B.Be certifique-se de que os excludentes da rainha dividam a colônia completamente para que a rainha não possa se mover entre as seções. Essa divisão é vital para a coleta de grupos de larvas de um dia.

No dia seguinte, rotule um grupo de 100 células de cria com ovos recém-postos como antes. Este é o grupo um, devolva-o à parte A por três dias. Dois dias depois, transfira a rainha para a parte B para botar ovos.

No dia seguinte, rotule 100 ovos recém-postos na parte B como grupo dois e devolva a seção para a parte B na colônia. Depois de mais dois dias, mova a rainha de volta para a parte A. Agora repita o processo para formar outro grupo e continue trocando a rainha entre a parte A e a parte B a cada três dias até que nove grupos de ovos de um dia tenham sido atribuídos em intervalos de três dias. Durante os primeiros cinco dias de desenvolvimento, pontue a taxa de eclosão de cada grupo marcado de células de cria.

Após 11 dias de desenvolvimento, comece a registrar o número de células de cria tampadas em cada grupo. No dia 13 do experimento, trate a colônia com xarope de açúcar a 50% contendo PPN a 10 ou 100 partes por milhão. Carregue uma caixa de alimentação com um litro de tratamento e conecte-a à colônia.

O grupo um é um controle não tratado, pois essas células agora devem ser tampadas. A partir do dia 17, registre a taxa de eclosão de cada grupo. Para fazer isso, transfira as larvas conforme demonstrado anteriormente para uma placa de 24 poços, depois incube a placa e depois registre a taxa de eclosão.

Após 49 dias, os dados de eclosão de todos os nove grupos devem ser conhecidos. Células de cria individuais foram tratadas conforme descrito com PPN BLD. O efeito negativo do agrotóxico sobre as abelhas na fase larval foi facilmente observado e dependente da dosagem.

Esses efeitos incluíram melanização e deformação das asas. Para simular colônias de abelhas melíferas sofrendo de resíduos ambientais de PPN, colônias inteiras foram alimentadas com xarope de PPN. O grupo um é um controle, pois essas abelhas se desenvolveram para adultos antes do tratamento.

Os grupos dois e três foram inicialmente efetuados no estágio de larva, e os grupos quatro a nove foram inicialmente efetuados como ovos. Alterações na eclosão, capeamento, eclosão e deformidades ocorreram com os tratamentos PPN. 100 partes por milhão de PPN foi mais eficaz do que 10 partes por milhão, exceto na taxa de eclosão.

Além disso, após os tratamentos, muitas pupas morreram com cutículas pretas ou por não emergirem. No tratamento com 100 ppm PPN, as células tampadas foram destruídas e as pupas lesadas foram removidas da colônia. Uma vez dominado, o procedimento de tratamento da colônia pode ser feito em cerca de um mês, e a manipulação diária da pupa pode ser concluída em cerca de duas horas.

Ao tentar este procedimento, é importante lembrar de verificar regularmente a condição de sua colônia e tornar-se bem treinado no manuseio de pupas antes de realizar um experimento. Não se esqueça de que trabalhar com abelhas pode ser perigoso devido a alergias ao veneno de abelha. Precauções como usar roupas de proteção devem sempre ser tomadas durante a execução deste procedimento.