Name: Avaliando o efeito de substâncias químicas ambientais em Honey Bee Desenvolvimento do indivíduo para Colony Nível (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-04-01T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 39 s
Description: Aprenda a avaliar os efeitos de resíduos de pesticidas em abelhas Apis mellifera em nível individual e de colônia. Este método demonstra visualmente o impacto toxicológico no desenvolvimento larval e saúde do enxame.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Esta pesquisa foi apoiada por Grant 105AS-13.2.3-BQ-B1 do Bureau of Animal e Inspeção de Saúde de Plantas e Quarentena, o Conselho de Agricultura, Yuan Executivo e Grant 103-2313-B-197-002-MY3 do Ministério da Ciência e Tecnologia (MOST).

1. Preparações <ol><li> Adicione 1 L de 50% de xarope de açúcar. Dissolve-se 1 kg de sacarose em 1 L de ddH 2 O. </li><li> Preparar a soluo de piriproxifeno (PPN) em BLD. Adicione 1,1 L de solução de estoque de 10000 ppm PPN e diluir 100 mL de solução de PPN em 1 L esterilizados ddH 2 O. Armazenar a 4 ° C. </li><li> Dilui-se a solução estoque PPN para concentrações finais de 0,1, 1, 10 e 100 mg / kg (ppm) no BLD para a experiência seguinte. </li><li> Faça PPN-xarope (para o nível de colônia). Dilui-se a estoque PPN para concentrações finais de 10 e 100 ppm em 50% de xarope de açúcar para a experiência seguinte. </li><li> Mel criação de abelha. Nota: Aqui, a localização experimental é o apiário Universidade Nacional Ilan (NIU), Yi-Lan City, Taiwan; (Coordenadas GPS: N24.747278, E121.746200). <ol><li> Verificar mel de abelha (Apis mellifera L.) colónias semanal para a quantidade de alimentos e alimentos para animais com 1 litro de 50% de xarope de açúcar, se necessário (a área de armazenamento de mel está vazio). Definir uma saudávelcolónia como 9 quadros de favos de mel de abelha, em cada colónia com uma rainha postura dos ovos normalmente. </li></ol></li><li> Preparar 100 mL de dieta da larva de base (BLD). Dissolve-se 6% de D-glucose, 6% de frutose, e 1% de extracto de levedura em água desionizada destilada esterilizada (ddH2O) e completar com 50% a geleia real. Armazenar a 4 ° C, mas não mais de 3 dias. Nota: Pré-quente a 35 ° C antes da experiência e utilizar no prazo de 3 dias. </li></ol> 2. In Vivo método de alimentação Nota: In vivo método de alimentação foi modificado a partir de Hanley et al. 20 <ol><li> Mel de abelha selecção larvas e rotulagem. <ol><li> Inserir um excluidora para dividir 9 quadros de uma colónia saudável para 4 quadros e quadros 5, limitando a rainha para a secção de armação 4. Deixe pelo menos uma moldura vazia na seção 4 moldura para colocar ovos. </li><li> Após a rainha de pôr ovos por 1 dia, Veja os quadros para o aparecimento de ovos e manter os ovos no interior das colmeias de 72 h (a 4 ° dia) até 1 dia de idade larvas eclodem. Tomar um dos quadros contendo larvas trabalhador com 1 dia de idade (tracejado dentro de 24 h) para fora a partir do ramo de teste pela mão e remover os trabalhadores da abelha do mel a partir da estrutura com uma escova de abelha. </li><li> Cobrir o quadro com uma lâmina transparente (tamanho = comprimento x largura x espessura = 29,7 milímetros x 21 mm x 0.1 mm) e pregar a lâmina transparente na extremidade da armação com percevejos (Figura 1A). </li><li> Para cada tratamento, seleccionar aleatoriamente 50 um dia de idade, as larvas (a 4 ° dia) e marcar cada célula ninhada utilizando canetas permanentes na transparente corrediça (Figuras 1A e 1B). Nota: Adicione a informação de cada tratamento sobre a armação e corrediça transparente assim usando canetas permanentes para evitar a confusão entre os diferentes tratamentos. Remova os slides marcados e manter para o in vivo &lt;/ Em&gt; alimentação e observação. </li></ol></li><li> Na alimentação in vivo. <ol><li> Adicionar diferentes concentrações de PPN-BLD (0,1, 1, 10 e 100 ppm) para cada célula ninhada marcado por pipetagem no dia 1, 2 e 3 com 10 mL, 10 mL e 20 mL, respectivamente, de acordo com a quantidade de admissão do idade larvas. Adicionar a mesma quantidade de BLD (sem PPN) a um grupo de controlo. Desse modo, a dose total de PPN-BLD em cada célula de cria marcado acumula-se 4, 40, 400, e 4000 pg. NOTA: Reconhecer as células de cria rotulados pelas lâminas transparentes marcados e remover as lâminas transparentes marcados após a alimentação. Use fresco BLD para alimentar para prevenir a limpeza das células de cria pelas abelhas obreiras. </li><li> Devolver os quadros-tratados PPN para as colónias originais para observações adicionais. NOTA: Cada tratamento tem quatro repetições biológicas em quatro colônias. </li></ol></li><li> Observação de larvas tratadas no dia 7. <ol><li> Para observar the PPN-tratada larvas, retornar os slides transparentes etiquetados para os quadros para gravar a mortalidade e taxa máxima nas células de cria rotulados. </li></ol></li><li> Observação de taxas de eclosão e de pupa tratados no dia 13. <ol><li> Remova a cera de abelha de células criação selada. </li><li> Coloque as pinças macio derrubado na célula de cria e prender o pupas muito ligeiramente em seguida, tomar pupas suavemente. </li><li> Transferir as pupas em placas de 24 cavidades de cultura de tecido com uma camada dupla de tecidos de laboratório sob cada poço. Grave o dano e mortalidade durante a transferência de pupa. </li><li> Manter as placas de 24 cavidades de cultura de tecidos em uma incubadora a 34 ° C e 70% de humidade relativa até emergência (cerca de 8 dias). </li><li> Observar e registar a pupas e abelhas surgiram. </li></ol></li><li> Estatisticas <ol><li> Calculam-se os dados gravados e presente como uma média ± SD </li><li> Analisar os dados utilizando análise de variância (ANOVA), SAS e usar o teste de diferença mínima significativa (LSD) para analisar as diferenças entre os dois meios de diferentes tratamentos. Definir estatisticamente significativa como P -valor &lt;0,05. Letras diferentes na mesma coluna da tabela mostraram um efeito significativo, a análise estatística. </li></ol></li></ol> 3. A toxicidade de PPN na Colony Nível em colmeia <ol><li> Configure os grupos de abelhas. <ol><li> Inserir um excluidora verticalmente para dividir 9 quadros de uma colónia saudável para 4 quadros (Parte A) e 5 quadros (Parte B), enquanto que limitam a rainha para a secção de armação 4. Deixar, pelo menos, um quadro vazio na secção 4-quadro para a postura dos ovos. Nota: Dito de outra rainha Excluder o em cima da parte rainha para evitar a rainha de se mover entre as partes. </li><li> Após a rainha de pôr ovos por 1 dia, verifique os quadros para o aparecimento de ovos. Pegue os quadros apropriados contendo ovos para fora da parte A com a mão e retirar os trabalhadores da abelha do mela partir da moldura com uma escova de abelha. </li><li> Cobrir o quadro com corrediça transparente e pregar a lâmina transparente para a borda do quadro com tachas. </li><li> Aleatoriamente selecionar 100 células de cria contendo ovos e marcar cada célula de cria usando marcador permanente sobre a lâmina transparente. Atribuir estes 100 células de cria como Grupo 1. Adicione a informação de cada tratamento sobre a armação e corrediça transparente usando o marcador permanente para evitar a confusão entre os diferentes tratamentos. </li><li> Devolver o quadro rotulado a parte A, durante 3 dias e depois transferir a rainha a parte B para colocar ovos. </li><li> Após 1 dia, veja os quadros de parte B, escolher uma estrutura apropriada e rotular 100 células de cria contendo ovos, tal como descrito no passo 3.1.4. Atribuir esses 100 células de cria como Grupo 2. </li><li> Devolver o quadro rotulado com a parte B por 3 dias e, em seguida, transferir a rainha à parte A para pôr ovos. </li><li> Repetir a troca rainha entre a parte A e parte B mais 6 vezes e atribuir grupos numericamente,respectivamente (Figura 2). Deve haver total de 9 grupos. </li></ol></li><li> T mel reat colónia de abelhas com PPN xarope de açúcar no dia 13 (Figura 2). <ol><li> Adicionar 1 L 50% PPN xarope de açúcar contendo 10 ou 100 ppm em uma caixa de plástico alimentador de abelha (W x L x H = 20 cm x 30 cm x 3,5 cm) e colocar a caixa no topo dos quadros nas colónias experimentais. Nota: O Grupo 1 não receber o PPN em 13 dias, como as células de cria foram selados. </li><li> Alimentar o grupo de controlo com 1 L de 50% de xarope de açúcar (não PPN) como descrito na etapa 2.2. </li></ol></li><li> Contagem de larvas de um dia de idade e ficha como a taxa de eclosão de ovos de 100 células de cria marcadas para cada grupo no dia 5 (figura 2). Mel ovos de abelhas costumam levar 3 dias para eclodir em 0 larvas dia; portanto, verificar e rotular 100 ovos células contendo ninhada no dia 1 e contar o número de larvas de um dia de idade para cada grupo no dia 5 para se obter a percentagem de taxa de eclosão. </li><li> Count as células criação selada e ficha como a taxa de nivelamento larvar de 100 células de cria marcadas para cada grupo no dia 11 (Figura 2). 6 a 7 de células de cria larval dia de idade serão cobertas com cera de abelha por trabalhadores de abelhas para pupating larvas. </li><li> Observar pupas maturação e registar a taxa de eclosão de 100 células de cria marcadas para cada grupo no dia 17 (Figura 2). <ol><li> Remova a cera de abelha de células criação selada e tomar pupas com uma pinça com ponta macia suavemente. Transferir as pupas para uma placas de cultura de tecidos de 24 cavidades com uma camada dupla de tecidos de laboratório sob cada poço. </li><li> Manter as placas de 24 cavidades de cultura de tecidos em uma incubadora a 34 ° C e 70% de humidade relativa até emergência. </li><li> Observar e registar a pupas e emergiu abelhas para cada grupo até Grupo 9 (49 dias experimentais). Nota: Cada tratamento tem quatro repetições biológicas. </li></ol></li><li> Estatisticas <ol><li> Calculam-se os dados gravados e presente como a mia± SD. </li><li> Analisar as diferenças significativas entre os pares de tratamentos (por exemplo, 0 ppm / 10 ppm, 10 ppm / 100 ppm e 0 ppm / 100 ppm) em cada grupo através da utilização de duas caudas teste t de Student. Definir como estatisticamente significativa se P -valor &lt;0,05. </li></ol></li></ol>

<ol><li>Ruffi nengo, S. R., et al. <a target="_blank" href="https://www.researchgate.net/publication/287268867_Integrated_pest_management_to_control_Varroa_destructor_and_its_implications_to_Apis_mellifera_colonies">Integrated pest management to control Varroa destructor and its implications to Apis mellifera colonies.</a> Zootecnia Trop. 32 (2), 149-168 (2014).</li>
<li>Mullin, C. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High+levels+of+miticides+and+agrochemicals+in+North+American+apiaries%2C+implications+for+honey+bee+health%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">High levels of miticides and agrochemicals in North American apiaries, implications for honey bee health.</a> PLoS One. 5, e9754(2010).</li>
<li>Lu, C. A., Chang, C. H., Tao, L., Chen, M. <a target="_blank" href="https://www.researchgate.net/publication/282222257_Distributions_of_neonicotinoid_insecticides_in_the_Commonwealth_of_Massachusetts_A_temporal_and_spatial_variation_analysis_for_pollen_and_honey_samples">Distributions of neonicotinoid insecticides in the Commonwealth of Massachusetts, a temporal and spatial variation analysis for pollen and honey samples.</a> Environ. Chem. 13, 4-11 (2016).</li>
<li>Tsai, W. T. <a target="_blank" href="http://www.ccsenet.org/journal/index.php/ep/article/view/25732">Analysis of coupling the pesticide use reduction with environmental policy for agricultural sustainability in Taiwan.</a> Environ. & Pollut. 2, 59-65 (2013).</li>
<li>Weng, Z. H. Pesticide market status and development trend (in Chinese). PRIDE. , 
 <a target="_blank" href="https://pride.stpi.narl.org.tw/">https://pride.stpi.narl.org.tw/</a> (2016).</li>
<li>Kevan, P. G. <a target="_blank" href="http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0167880999000444">Pollinators as bioindicators of the state of the environment, species, activity and diversity.</a> Agric. Ecosys. Environ. 74 (1-3), 373-393 (1999).</li>
<li>Kevan, P. G. <a target="_blank" href="http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/0006320775900452">Forest application of the insecticide fenitrothion and its effect on wild bee pollinators (Hymenoptera: Apoidea) of lowbush blueberries (Vaccinium SPP.) in Southern New Brunswick, Canada.</a> Biol. Conserv. 7, 301-309 (1975).</li>
<li>Crane, E., Walker, P. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aCrane%2C+E+%22The+impact+of+pest+management+on+bees+and+pollination%22">The impact of pest management on bees and pollination</a>. , IBRA. Cardiff, UK. (1983).</li>
<li>Haouar, M., Decormis, L., Rey, J. <a target="_blank" href="https://www.cabdirect.org/cabdirect/abstract/19920232241">Fluvalinate applied to flowering apple trees-contamination of honey-gathering bees and hive products.</a> Agronomie. 10 (2), 133-137 (1990).</li>
<li>Chauzat, M. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+survey+of+pesticide+residues+in+pollen+loads+collected+by+honey+bees+in+France%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Econ.+Entomol%22%5BJournal%5D)">A survey of pesticide residues in pollen loads collected by honey bees in France.</a> J. Econ. Entomol. 99 (2), 253-262 (2006).</li>
<li>Bonzini, S., Tremolada, P., Bernardinelli, I., Colombo, M., Vighi, M. <a target="_blank" href="https://link.springer.com/article/10.1007/s13592-011-0011-2">Predicting pesticide fate in the hive (part 1), experimentally determined τ-fluvalinate residues in bees, honey and wax.</a> Apidologie. 42 (3), 378(2011).</li>
<li>Sanchez-Bayo, F., Goka, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pesticide+residues+and+bees-a+risk+assessment%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Pesticide residues and bees-a risk assessment.</a> PLoS One. 9 (4), e94482(2014).</li>
<li>Johnson, R. M., Ellis, M. D., Mullin, C. A., Frazier, M. <a target="_blank" href="http://www.apidologie.org/articles/apido/abs/2010/03/m09141/m09141.html">Pesticides and honey bee toxicity-USA.</a> Apidologie. 41, 312-331 (2010).</li>
<li>Yang, E. C., Chang, H. C., Wu, W. Y., Chen, Y. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impaired+olfactory+associative+behavior+of+honeybee+workers+due+to+contamination+of+imidacloprid+in+the+larval+stage%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Impaired olfactory associative behavior of honeybee workers due to contamination of imidacloprid in the larval stage.</a> PLoS One. 7, e49472(2012).</li>
<li>Urlacher, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Measurements+of+chlorpyrifos+levels+in+forager+bees+and+comparison+with+levels+that+disrupt+honey+bee+odor-mediated+learning+under+laboratory+conditions%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Chem.+Ecol%22%5BJournal%5D)">Measurements of chlorpyrifos levels in forager bees and comparison with levels that disrupt honey bee odor-mediated learning under laboratory conditions.</a> J. Chem. Ecol. 42 (2), 127-138 (2016).</li>
<li>Chen, Y. W., Wu, P. S., Yang, E. C., Nai, Y. S., Huang, Z. Y. <a target="_blank" href="http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S1226861516300012">The impact of pyriproxyfen on the development of honey bee (Apis mellifera L.) colony in field.</a> J. Asia Pac. Entomol. 19 (3), 589-594 (2016).</li>
<li>Dennehy, T. J., DrGain, B. A., Harpold, V. S., Brink, S. A., Nichols, R. L. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aDennehy%2C+TJ+%22Whitefly+Resistance+to+Insecticides+in+Arizona%3A+2002+and+2003+Results%22">Whitefly Resistance to Insecticides in Arizona: 2002 and 2003 Results</a>. , San Antonio, TX, USA. 
 <a target="_blank" href="http://ag.arizona.edu/crop/cotton/insects/wf/whiteflyresistance0204.pdf">http://ag.arizona.edu/crop/cotton/insects/wf/whiteflyresistance0204.pdf</a> 1926-1938 (2004).</li>
<li>Yang, E. C., Wu, P. S., Chang, H. C., Chen, Y. W. Effect of sub-lethal dosages of insecticides on honey bee behavior and physiology. Proceedings of international seminar on enhancement of functional biodiversity relevant to sustainable food production, ASPAC, Tsukuba, Japan, , 
 <a target="_blank" href="http://www.niaes.affrc.go.jp/sinfo/sympo/h22/1109/paper_06.pdf ">http://www.niaes.affrc.go.jp/sinfo/sympo/h22/1109/paper_06.pdf </a> (2010).</li>
<li>Fourrier, J., et al. <a target="_blank" href="http://journals.plos.org/plosone/article?id=10.1371/journal.pone.0132985">Larval exposure to the juvenile hormone analog pyriproxyfen disrupts acceptance of and social behavior performance in adult honey bees.</a> PLoS One. 10, e0132985(2015).</li>
<li>Hanley, A. V., Huang, Z. Y., Pett, W. L. <a target="_blank" href="http://www.tandfonline.com/doi/abs/10.1080/00218839.2003.11101097">Effects of dietary transgenic Bt corn pollen on larvae of Apis mellifera and Galleria mellonella.</a> J. Apicult.Res. 42 (4), 77-81 (2003).</li>
<li>Kaftanoglu, O., Linksvayer, T. A., Page, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rearing+honey+bees%2C+apis+mellifera%2C+in+vitro+1%2C+effects+of+sugar+concentrations+on+survival+and+development%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Insect+Sci%22%5BJournal%5D)">Rearing honey bees, apis mellifera, in vitro 1, effects of sugar concentrations on survival and development.</a> J. Insect Sci. 11 (96), 1-10 (2011).</li>
<li>Vandenberg, J. D., Shimanuki, H. <a target="_blank" href="http://www.tandfonline.com/doi/abs/10.1080/00218839.1987.11100743">Technique for rearing worker honey bees in the laboratory.</a> J. Apicult. Res. 26 (2), 90-97 (1987).</li>
<li>Peng, Y. S. C., Mussen, E., Fong, A., Montague, M. A., Tyler, T. <a target="_blank" href="http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/002220119290085I">Effects of chlortetracycline on honey bee worker larvae reared in vitro.</a> J. Invertebr.Pathol. 60 (2), 127-133 (1992).</li>
<li>Bitondi, M. M., Mora, I. M., Simoes, Z. L., Figueiredo, V. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Apis+mellifera+pupal+melanization+program+is+affected+by+treatment+with+a+juvenile+hormone+analogue%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Insect+Physiol%22%5BJournal%5D)">The Apis mellifera pupal melanization program is affected by treatment with a juvenile hormone analogue.</a> J. Insect Physiol. 44 (5-6), 499-507 (1998).</li>
<li>Zufelato, M. S., Bitondi, M. M., Simoes, Z. L., Hartfelder, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+juvenile+hormone+analog+pyriproxyfen+affects+ecdysteroid-dependent+cuticle+melanization+and+shifts+the+pupal+ecdysteroid+peak+in+the+honey+bee+%28Apis+mellifera%29%5BTitle%5D)+AND+%22Arthropod+Struct.+Dev%22%5BJournal%5D)">The juvenile hormone analog pyriproxyfen affects ecdysteroid-dependent cuticle melanization and shifts the pupal ecdysteroid peak in the honey bee (Apis mellifera).</a> Arthropod Struct. Dev. 29 (2), 111-119 (2000).</li>
<li>Santos, A. E., Bitondi, M. M., Simoes, Z. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hormone-dependent+protein+patterns+in+integument+and+cuticular+pigmentation+in+Apis+mellifera+during+pharate+adult+development%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Insect+Physiol%22%5BJournal%5D)">Hormone-dependent protein patterns in integument and cuticular pigmentation in Apis mellifera during pharate adult development.</a> J. Insect Physiol. 47 (11), 1275-1282 (2001).</li>
<li>Brouwers, E. V. M. <a target="_blank" href="http://www.tandfonline.com/doi/abs/10.1080/00218839.1984.11100616">Glucose/Fructose ratio in the food of honeybee larvae during caste differentiation.</a> J. Apicult.Res. 23 (2), 94-101 (1984).</li>
<li>Howe, S. R., Dimick, P. S., Benton, A. W. <a target="_blank" href="http://www.tandfonline.com/doi/abs/10.1080/00218839.1985.11100649">Composition of freshly harvested and commercial royal jelly.</a> J. Apicult. Res. 24 (1), 52-61 (1985).</li>
</ol>

Os autores declaram que não têm interesses financeiros concorrentes.

O método de postura de ovos limitados-rainha e método de permuta rainha são etapas críticas para a criação de grupos de abelhas para testes de campo dentro deste protocolo. O método de postura de ovos limitados-rainha permite a sincronização do ciclo de vida das abelhas de mel. Consequentemente, os pesquisadores podem selecionar um dia de idade larvas da mesma idade para o tratamento com diferentes doses de pesticidas. Para o método de permuta rainha, a rainha foi trocada entre a parte A (4 frames) e B (5 quadros) para ...

A presença de pesticidas no meio ambiente é um dos problemas mais graves que os impactos a vida de uma abelha do mel 1, 2, 3. Vários estudos têm demonstrado a presença de resíduos de pesticidas comum em colónias de abelhas e produtos das abelhas. Em Taiwan, a aplicação média de pesticidas foi 11-12 kg / ha a cada ano (de 2005 a 2013). A quantidade de pesticidas utilizados em Taiwan é maior do que a dos países da UE e os países da América Latina 4, 5. Em outras palavras, o ambiente apícola está sofrendo sério estresse de pesticidas, especialmente em Taiwan e possivelmente em outros países. O mel de abelha Apis mellifera é um dos principais polinizadores em sistemas agrícolas 6 e também produz produtos valiosos, como mel. No entanto, as abelhas são exposed para vários pesticidas e estes pesticidas podem ser trazidos de volta para colmeias depois das pastagens em flores que foram pulverizados com pesticidas ao recolher néctar e pólen 7, 8. Eles também podem ser expostos a pesticidas pelos apicultores-se com o objetivo de controlar os problemas de pragas dentro das colmeias 9, 10, 11. Porque as larvas de abelhas de mel são alimentados por abelhas enfermeira para o seu desenvolvimento, larvas, parasitas e mesmo a rainha podem ser expostos a estas néctares contaminados com pesticidas e pólen 12. A toxicidade de vários pesticidas para as abelhas precisa ser tratada 13. Muitos esforços têm sido feitos para avaliar as questões de resíduos de pesticidas ambientais. Yang et al. testado a influência do inseticida imidacloprid neurotóxicos no desenvolvimento de larvas de abelhas mel nocolmeia e relataram que uma dose sub-letal de imidacloprid resultou num comportamento associativo olfactiva das abelhas adultas 14. Além disso, Urlacher et al. examinaram os efeitos sub-letais de um dos pesticidas organofosforados, clorpirifos, sobre o desempenho de aprendizagem de um trabalhador da abelha do mel, em condições laboratoriais 15. No nosso estudo anterior, foi avaliado o impacto de um regulador de crescimento de insectos (IGR), piriproxifeno (PPN), em abelhas de mel larvais 16. Neste artigo, apresentamos métodos para avaliar os impactos químicos sobre o desenvolvimento das abelhas. métodos de alimentação de abelhas de mel foram descritos e aplicada quer abelhas produtoras de mel individuais ou a uma colónia. No primeiro, testaram-se diferentes concentrações de dieta da larva básica contaminada-pesticida (BLD) em larvas nas colónias para avaliar o impacto do pesticida em abelhas de mel individuais in vivo. Passamos então para simular o Condit naturaisiões do pesticida usando xarope contaminado-pesticida dentro de colmeias. Neste método, PPN, que é amplamente utilizado contra pragas de insectos 17 e é prejudicial para o desenvolvimento de larvas e pupas da abelha do mel 16, 18, 19, será um indicador para representar o efeito negativo do pesticida no campo.

<table><tbody><tr><td>Caixa de abelhas</td><td>SAN-YI Honey Factory</td><td>W1266</td><td>Abelhas criando</td></tr><tr><td>Rainha excluder (entre quadros)</td><td>SAN-YI Honey Factory</td><td>I1575</td><td>Limitação da Rainha&nbsp;</td></tr><tr><td>Exclusão de rainha (no topo)</td><td>SAN-YI Honey Factory</td><td>I1566</td><td>Limitação de rainha no topo&nbsp;</td></tr><tr><td>Escova de abelha</td><td>SAN-YI Honey Factory, Taiwan</td><td>W1414</td><td>limpa as abelhas na estrutura suavemente</td></tr><tr><td>Alimentador de abelha</td><td>SAN-YI Honey Factory, Taiwan</td><td>P0219</td><td>alimenta xarope de açúcar para a colônia</td></tr><tr><td>Lâmina transparente</td><td>Wan-Shih-Chei, Taiwan (http://www.mbsc.com.tw/a01goods.asp?s_id=40)</td><td>1139</td><td>Marque a área larval nas armações (Material: Polietileno Tereftalato, PET) (Tamanho = Comprimento*Largura*espessura = 29,7 mm * 21 mm * 0,1 mm)</td></tr><tr><td>Placa de cultura de 24 poços</td><td>Guangzhou Jet Bio-Filtration Co., Ltd</td><td>TCP011024</td><td>Criação de pupas de extração</td></tr><tr><td>Autoclave</td><td>Tomin medical equipmenco., LTD.</td><td>TM-321</td><td>Faça água destilada destilada esterilizada (ddH2O)</td></tr><tr><td>P20 pipetman</td><td>Gilson</td><td>F123600</td><td>Adicione PPN à piscina de alimentos para larvas de abelhas</td></tr><tr><td>Incubadora&nbsp;</td><td>Fornecedor:Yihder Co., Ltd.</td><td>LE-550RD</td><td>Criação de pupas de extração</td></tr><tr><td>Kimwipes</td><td>COW LUNG INSTRUMENT CO., LTD</td><td></td> KCS34155 <td>Criação de pupas de extração</td></tr><tr><td>Geléia real</td><td>National Ilan University (NIU)</td> <td>NIU</td><td>Faça dieta larval básica (BLD)</td></tr> <tr><td>D- (+) -Glicose</td><td>Sigma</td><td>G8270</td><td>Faça dieta larval básica (BLD)</td></tr> <tr><td>D- (-) -Frutose</td><td>Sigma</td><td>F0127</td><td>Faça dieta larval básica ( BLD)</td></tr> <tr><td>Extrato de levedura</td><td>CONDA, pronadisa</td><td>1702</td><td>Faça dieta larval básica (BLD)</td></tr> <tr><td>Sacarose</td><td>Taiwan açúcar coporation</td><td>E01071010</td><td>Faça xarope de açúcar para alimentos apícolas</td></tr><tr><td>Piriproxifeno (11%)</td> <td>LIH-NUNG CHEMICAL CO.. LTD.</td><td>Registro nº 1937</td><td>Regulador de crescimento de insetos (IGR) usado no experimento</td></tr></tbody></table>

avaliando o efeito de substâncias químicas ambientais em honey bee desenvolvimento do indivíduo para colony nível

Evaluating the Effect of Environmental Chemicals on Honey Bee Development from the Individual to Colony Level

A presença de pesticidas no ambiente apícola é um dos problemas mais sérios que impactam a vida de uma abelha. Os pesticidas podem ser trazidos de volta à colmeia depois que as abelhas se alimentarem de flores que foram pulverizadas com pesticidas. Alimentos contaminados com pesticidas podem ser trocados entre operárias que alimentam larvas e, portanto, podem afetar potencialmente o desenvolvimento das abelhas. Assim, pesticidas residuais no meio ambiente podem se tornar um fator prejudicial crônico para as populações de abelhas e gradualmente levar ao colapso das colônias. No protocolo apresentado, os métodos de alimentação das abelhas são descritos e aplicados a uma abelha individual ou a uma colônia. Aqui, o regulador de crescimento de insetos (IGR) piriproxifeno (PPN), que é amplamente utilizado para controlar insetos-praga e é prejudicial ao desenvolvimento de larvas e pupas de abelhas, é usado como pesticida. O procedimento de apresentação pode ser aplicado a outros produtos químicos potencialmente nocivos ou patógenos de abelhas para estudos posteriores.

Para o teste de campo da abelha do mel, uma rainha foi limitado à secção 4-quadro para a postura dos ovos. Este passo poderia aumentar a densidade de ninhada em um quadro e facilitar observações subsequentes. Cada tratamento foi rotulado, e desenvolvimento das abelhas foi claramente observado através de um slide transparente. Na alimentação in vivo de PPN-BLD para as larvas de abelhas na colmeia foi realizada para avaliar com precisão a influência de PPN sobre o desenvo...

Apresentamos aqui um método para alimentar pesticida alimentos contaminados se tanto a um indivíduo abelha do mel e uma colónia colmeia. O procedimento avalia o efeito pesticida em abelhas de mel individuais por alimentação in vivo de dieta da larva de base e também na condição natural da colónia colmeia.

Avaliando o efeito de substâncias químicas ambientais em Honey Bee Desenvolvimento do indivíduo para Colony Nível

The presence of pesticides in the beekeeping environment is one of the most serious problems that impacts the life of a honey bee. Pesticides can be ...

O objetivo geral deste experimento é avaliar como os resíduos de pesticidas no ambiente afetam abelhas-melíferas individuais na condição natural de colônias de colmeias. A principal vantagem deste método é que ele investiga os efeitos de pesticidas ou outros contaminantes de interesse tanto em abelhas-melíferas individuais quanto em colônias inteiras. A demonstração visual deste método é fundamental, pois a manipulação de pupas é difícil devido à sua fragilidade.Demonstrando o procedimento estará Ko Chong-Yu, um estudante de doutorado do meu laboratório. Antes do experimento, forneça a cada colônia um litro de xarope de açúcar a 50%. Reponha o reservatório de alimento semanalmente; uma colônia saudável terá nove quadros de favos de abelhas e uma rainha postando ovos.Para começar, localize a rainha na colônia e substitua pelo menos um quadro do lado dela por um quadro vazio. Em seguida, insira os separadores de rainha para isolar a rainha em uma seção de quatro quadros contendo pelo menos um quadro vazio. No dia seguinte, verifique os quadros quanto a ovos recém-postos e coloque os ovos separados da rainha por 72 horas.Em seguida, remova essas molduras, retire as abelhas operárias e

evaluating-effect-environmental-chemicals-on-honey-bee-development

Research

JoVE Journal

Environment

Ambiente

Aqui nós descrevemos nosso protocolo detalhado para a preparação de colônias de abelhas-coorte único - uma ferramenta útil para analisar a fisiologia trabalhador associada à função. Descrevemos também protocolos detalhados para o tratamento de trabalhadores com hormônio juvenil e ecdisona para avaliar o envolvimento desses hormônios na regulação do comportamento do trabalhador e / ou fisiologia.

Preparação de Colônias-coorte único e tratamento hormonal do trabalhador de abelhas para analisar Fisiologia Associated com a função e / ou sistema endócrino

Consórcios microbianos dentro bumble colmeias enriquecem e preservar o pólen para larvas de abelha. Usando o sequenciamento de próxima geração, juntamente com o laboratório e experiências no terreno, este manuscrito descreve protocolos usados para testar a hipótese de que resíduos do fungicida alteram o pólen microbiome e demografia de colônia, finalmente levando à colônia perda.

Técnicas empíricas, metagenômicas e computacionais iluminam os mecanismos pelos quais os fungicidas comprometem a saúde das abelhas

Doses subletais de pesticidas podem afetar colônias nas maneiras que são difíceis de detectar usando métodos somente periódicos ou visuais. Métodos para medir a massa total de abelha adulta, ninhada e os recursos alimentares por pesagem urticária e partes da colmeia, fotografando quadros e instalação de sensores, são fornecidos. Análise de dados também é abordada.

Monitoramento de nível de colônia os efeitos da exposição de pesticidas subletais em mel de abelhas

Sprays de fungicida em plantas de floração podem expor abelhas solitárias para altas concentrações de resíduos do fungicida transmitidas pelo pólen. Usando experimentos baseados em laboratório, envolvendo-se em vitro-larvas de abelha criados, este estudo investiga os efeitos interativos de consumir pólen tratada com fungicida derivado de host e host não plantas.

In Vitro Criação de abelhas solitárias: uma ferramenta para avaliar os fatores de risco Larval

Este protocolo foi desenvolvido para aprimorar a compreensão de como os agrotóxicos afetam a reprodução das abelhas de mel (Apis mellifera),estabelecendo métodos para expor rainhas das abelhas e seus cuidadores de trabalhadores a agrotóxicos em um ambiente controlado e laboratorial e monitorando cuidadosamente suas respostas relevantes.

Avaliando o risco agroquímico para rainhas de abelhas de mel acasaladas

O presente protocolo explica um método para alimentar provisões contaminadas por pesticidas às larvas das abelhas solitárias, Osmia escavada. O procedimento examina a ecotoxicidade do pesticida para as larvas das abelhas solitárias.

Avaliando o efeito dos pesticidas nas larvas das abelhas solitárias

Este manuscrito descreve uma abordagem automatizada de seleção de tamanho de gel para purificar fragmentos de DNA para sequenciamento de próxima geração. A tecnologia Ranger fornece automação completa de todo o processo de carregamento de gel de agarose, análise eletroforética e recuperação de fragmentos de DNA direcionados, permitindo bibliotecas de sequenciamento de última geração de alto rendimento e alta qualidade.

Automated Gel seleção de tamanho para melhorar a qualidade das bibliotecas de sequenciação de próxima geração Preparado a partir de amostras de água do ambiente

Um protocolo para a concepção e construção de um tanque de solo interface com uma pequena clima controlado túnel de vento para estudar os efeitos de forçantes atmosféricas sobre a evaporação é apresentado. Tanto o tanque de solo e túnel de vento são instrumentados com tecnologias de sensores para a medição in situ contínua das condições ambientais.

Explorando os efeitos de forçantes atmosféricas sobre evaporação: Integração Experimental da Camada Limite Atmosférica e Raso Subsurface

A água de sangria de produção (PBW) foi tratada com nanopartículas de óxido cúprico (CuO-NPs) e a toxicidade celular foi avaliada em células humanas cultivadas. O objetivo deste protocolo foi integrar a amostra ambiental nativa em um formato de cultura de células avaliando as mudanças na toxicidade devido ao tratamento com CuO-NP.

A remoção do Trace Elements por Óxido de Cupric nanopartículas de urânio<em&gt; In Situ</em&gt; Recuperação sangro água e seu efeito na viabilidade celular

Um sistema de exposição de fluxo contínuo robusto e flexível projetado para manter os sedimentos em suspensão é apresentado. O sistema é usado para investigar os efeitos do sedimento suspenso em várias espécies aquáticas e estágios de vida em laboratório.

Um Sistema de Exposição Fluxo através de sedimentação de Efeitos Avaliando suspensos sobre a vida aquática

Aprenda a avaliar os efeitos de resíduos de pesticidas em abelhas Apis mellifera em nível individual e de colônia. Este método demonstra visualmente o impacto toxicológico no desenvolvimento larval e saúde do enxame.

Avaliando o efeito de substâncias químicas ambientais em Honey Bee Desenvolvimento do indivíduo para Colony Nível

Explorar mais vídeos