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DOI: 10.3791/55297-v
Lorena Benedetti1,2,3, Anna Ghilardi4, Laura Prosperi4, Maura Francolini*1, Luca Del Giacco*4
1Department of Medical Biotechnology and Translational Medicine,Università degli Studi di Milano, 2Department of Neuroscience; Department of Cell Biology,Howard Hughes Medical Institute, Yale University School of Medicine, 3Program in Cellular Neuroscience, Neurodegeneration and Repair,Yale University School of Medicine, 4Department of BioSciences,Università degli Studi di Milano
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Os protocolos descritos aqui permitem o estudo das propriedades elétricas de células excitáveis nas condições fisiológicas mais não invasivas, empregando embriões de peixe-zebra em um sistema in vivo, juntamente com um indicador de voltagem geneticamente codificado (GEVI) baseado em transferência de energia de ressonância de fluorescência (FRET) seletivamente expresso no tipo de célula de interesse.
O objetivo geral deste procedimento é estudar as propriedades elétricas de células excitáveis em condições fisiológicas não invasivas empregando embriões de peixe-zebra junto com um GEVI baseado em FRET. Este método pode ajudar a responder a questões-chave sobre a biologia de células excitáveis, como os neurônios. Por exemplo, esses métodos podem ser usados para analisar o papel sobre a excitabilidade na patogênese de distúrbios neurológicos.
Essa abordagem emprega embriões transparentes de peixe-zebra que expressam indicadores de voltagem codificados geneticamente baseados em FRET. A abordagem permite a medição das propriedades elétricas das células in vivo de forma não invasiva. Portanto, este método pode fornecer informações sobre a excitabilidade dos neurônios espinhais em embriões de peixe-zebra.
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