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DOI: 10.3791/55300-v
Keith C. Heyde*1,2, Felicia Y. Scott*3, Sung-Ho Paek3, Ruihua Zhang3, Warren C. Ruder3,4
1Department of Mechanical Engineering,Carnegie Mellon University, 2Engineering Science and Mechanics Program,Virginia Polytechnic Institute and State University, 3Department of Biological Systems Engineering,Virginia Polytechnic Institute and State University, 4Department of Bioengineering,University of Pittsburgh
Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.
Este artigo apresenta uma série de protocolos para o desenvolvimento de células manipuladas e superfícies funcionalizadas que permitem sinteticamente engenharia E. coli para controlar e manipular superfícies de materiais programáveis.
O objetivo geral desses procedimentos é usar E.coli sinteticamente projetada para controlar e manipular superfícies de materiais programáveis, combinando modificação genética e estratégias de funcionalização de superfície. Este método pode ajudar a responder a questões-chave em áreas como medicina molecular e monitoramento ambiental. Ao usar células geneticamente programadas para interpretar um ambiente local e modificar um material funcionalizado de acordo, estamos fornecendo uma ferramenta modular para uma ampla variedade de aplicações.
A principal vantagem dessa técnica é que as células vivas são capazes de atuar como sensores dinâmicos capazes de ler, processar e registrar as condições ao seu redor por meio de interfaces funcionalizadas. Depois de preparar as soluções e coletar o sobrenadante enriquecido com biotina de E.coli produtora de biotina, de acordo com o protocolo de texto, adicione 1,4 microlitros de solução de SPDP a 20 microlitros de estreptavidina ou solução de SA. Enrole o tubo em papel alumínio e incube-o em temperatura ambiente por uma hora e meia para permitir que o reticulador SPDP se ligue ao SA por meio de um grupo amino, formando um SA ativado por piridilditio. Após a incubação, adicione 2,4 microlitros de solução de TDT ao tubo e incube a amostra em temperatura ambiente por uma hora para permitir uma clivagem de piridina-2-tiona, resultando em um SA ativado por sulfidrila. Em seguida, adicione 7,5 microlitros de solução SCC a 72 microlitros de solução HRP, embrulhe-o em papel alumínio e incube-o em temperatura ambiente por uma hora e meia.
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