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DOI: 10.3791/55315-v
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O cílio primário é fundamentalmente importante na proliferação de células progenitoras neurais, a diferenciação neuronal, e função neuronal adulta. Aqui, descrevemos um método para estudar ciliogênese e o tráfico de proteínas de sinalização para os cílios em células estaminais / progenitoras neuronais e neurónios diferenciados utilizando culturas primárias de neuroesferas.
O objetivo geral deste procedimento é utilizar métodos de cultura baseados em neuroesferas para células-tronco neurais primárias e progenitoras para estudar a biogênese e o tráfego primário de cílio. Este método pode ajudar a responder a questões-chave no campo dos cílios primários, como biogênese dos cílios e tráfego de moléculas de cílios para os cílios primários. Em células-tronco neurais primárias, progenitores neurais e neurônios.
A principal vantagem dessa técnica é que podemos usar os critérios de células primárias das células-tronco neurais, progenitores neurais e neurônios para analisar a biogênese e as vias ciliares no contexto do cílio primário. Geralmente, os indivíduos novos nesse método terão dificuldades porque a cultura de células-tronco neurais é tecnicamente desafiadora para iniciantes. Mostraremos que uma demonstração desse método é crítica, pois a dissecção do ventrículo lateral e etapas como a cultura de neuroesferas e a quantificação de cílios primários são facilmente aprendidas observando as etapas críticas.
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