Murino Descendente Anterior Esquerda (LAD) ligação da artéria coronária: um modelo melhorado e simplificado para Infarto do Miocárdio

O objetivo geral deste procedimento é induzir um infarto do miocárdio em um camundongo ligando a artéria coronária descendente anterior. Este método pode ajudar a responder a questões-chave no campo cardiovascular, como se a superexpressão ou eliminação de certos genes pode afetar a recuperação do coração após o infarto do miocárdio. A principal vantagem dessa técnica é que o procedimento é menos invasivo do que vários outros modelos de espelhamento de infarto do miocárdio e resulta em um tempo de recuperação rápido com menos complicações.

Geralmente, os indivíduos novos neste método terão dificuldades porque a intubação endotraqueal e a identificação da artéria LAD requerem prática com um instrutor treinado. A demonstração visual deste método é fundamental para identificar e avaliar que a DAE é difícil de aprender sem qualquer experiência ou treinamento. Antes de sedar o animal, comece a aquecer o esterilizador de esferas a 250 graus Celsius, o que pode levar até 20 minutos.

Verifique se o mouse está fortemente sedado. A taxa de respiração será de aproximadamente 32 respirações por minuto. Em seguida, coloque o rato sedado em decúbito dorsal em uma placa de isopor.

Posicione o mouse no nível dos olhos para facilitar a visualização da orofaringe. Antes de prosseguir, confirme a sedação com um beliscão no dedo do pé. Em seguida, usando um elástico, mantenha a boca aberta prendendo os incisivos superiores em uma posição aberta.

Em seguida, posicione um iluminador de alta intensidade acima do mouse para que a orofaringe seja transiluminada. Coloque alças cirúrgicas para observar as pequenas estruturas da orofaringe. Agora, usando uma pinça curva, abra a mandíbula.

Com outro par de pinças, mova a língua para fora do caminho e observe a abertura e o fechamento das cordas vocais. Quando aberto, insira um cateter intravenoso de calibre 20 de uma polegada com um introdutor de agulha de ponta romba. Use a agulha para guiar o cateter até a abertura traqueal, mas evite inserir a agulha na parede traqueal.

Em seguida, transfira o mouse intubado para uma superfície operacional equipada com um dispositivo de aquecimento e, lá, conecte o mouse a um pequeno ventilador para roedores. Antes de prosseguir, verifique o plano de anestesia do mouse usando uma pitada no dedo do pé. Em seguida, prenda o tubo de intubação com fita adesiva no local de conexão entre o ventilador e o cateter intravenoso.

Em seguida, coloque fita adesiva em todas as extremidades e lubrifique os olhos. Agora, apare o pelo do lado esquerdo ventral do tórax. Em seguida, aplique uma pequena camada de creme depilatório na pele exposta e deixe penetrar por 30 a 45 segundos.

Enquanto isso, mergulhe cotonetes estéreis em três tubos de 1,5 mililitro cheios de betadina. Em seguida, usando água destilada, limpe suavemente o creme e o pelo. Em seguida, limpe o campo cirúrgico três vezes com betadina e isopropanol 70%.

Agora, coloque o mouse com um orifício do tamanho de um quarto sobre o campo cirúrgico. Antes de fazer a primeira incisão, coloque os instrumentos cirúrgicos autoclavados no esterilizador de esferas quentes pré-aquecido a 250 graus Celsius por aproximadamente 20 segundos. Agora, use uma pinça de ponta fina para levantar suavemente a pele em um ponto aproximadamente cinco milímetros à esquerda da cartilagem xifóide proeminente.

Em seguida, use um bisturi número 10 para criar uma incisão vertical para cima até o nível do manúbrio. Em seguida, separe suavemente as camadas dérmicas com uma pinça curva. Para manter aberta a camada muscular, passe duas suturas de polipropileno zero de cada lado da incisão e prenda-as com grampos.

Agora, faça uma incisão no terceiro espaço intercostal seguindo o ângulo natural da caixa torácica. Em seguida, remova a fita das extremidades esquerdas do mouse. Em seguida, prenda os pés traseiros.

Em seguida, reposicione o pé da frente para que fique ligeiramente elevado. Certifique-se de limpar as luvas cirúrgicas após cada vez que o mouse for manuseado. Prossiga usando um retrator para separar suavemente a terceira e a quarta costelas.

Em seguida, mergulhe um pequeno pedaço de gaze em solução salina estéril a 0,9% e esprema o excesso de solução salina. Usando uma pinça, insira suavemente a gaze úmida contra o pulmão esquerdo para evitar danos acidentais aos pulmões. Em seguida, remova suavemente o pericárdio fino com uma pinça.

Em seguida, use uma pequena bola de algodão embebida em solução salina para limpar a superfície do coração e tornar as artérias observáveis. Empurre suavemente o oráculo esquerdo para cima e localize as artérias coronárias por baixo. Agora, passe uma sutura de náilon de oito zero sob a LAD e complete dois arremessos para garantir a ligadura.

Se for bem-sucedido, o ventrículo esquerdo destilado da ligadura empalidecerá. Em seguida, remova a gaze e o retrator. Em seguida, através da abertura da toracotomia, insira um tubo flexível de calibre 25 de seis polegadas, preso a uma agulha de calibre 25.

Insira-o uma ou duas polegadas na cavidade torácica acima do pulmão esquerdo. Em seguida, retorne o mouse para uma posição supina e limpe as luvas cirúrgicas. Agora, continue a usar cinco pontos de polipropileno zero em um padrão interrompido para fechar a caixa torácica, mantendo o dreno torácico no lugar.

Em seguida, remova as duas suturas que mantêm a camada muscular aberta e feche a camada muscular usando cinco suturas de polipropileno zero em um padrão contínuo simples. Em seguida, coloque uma seringa de um mililitro na agulha no dreno torácico. Puxe o êmbolo para trás para extrair ar e sangue.

Se a seringa encher, retire-a, esvazie-a e recoloque-a. Agora, extraia o dreno torácico e certifique-se de que o tórax esteja bem fechado. Prossiga administrando analgésicos e um bolus subcutâneo de solução salina.

Após cinco minutos, remova o mouse do tubo de intubação. Se o tórax não subir bilateralmente, o ar fica preso na cavidade torácica. Introduza uma agulha de calibre 25 com uma seringa de um mililitro entre a terceira e a quarta costelas, na cavidade torácica.

Em seguida, retire suavemente o ar preso e o peito começará a se mover normalmente. Os camundongos são eutanasiados 28 dias após a cirurgia descrita com cloreto de potássio. Seus corações foram presos em diástole e depois fixados com paraformaldeído.

Esta imagem mostra a falta de azul de Evans no ventrículo esquerdo isquêmico. Corações corados com corante tricrômico mostram que houve aumento de colágeno na região infartada, indicando fibrose. Os corações de controle mostraram agora evidências de aumento do colágeno.

Depois de assistir a este vídeo, você deve ter uma boa compreensão de como induzir um infarto do miocárdio usando um modelo murino. Utilizando as técnicas de intubação endotraqueal, uma abordagem de toracotomia do lado esquerdo para ligadura LAD e síntese total sem qualquer incisão adicional na parede torácica. Uma vez dominada, esta técnica pode ser feita em 30 minutos, se for realizada adequadamente.

Ao tentar este procedimento, é importante lembrar de fornecer às manjedouras isso ao redor da vasculatura por ligadura da artéria LAD. Após este procedimento, um ecocardiograma pode ser realizado para responder a perguntas adicionais, como a extensão da perda funcional ou a recuperação do coração após um período pós-operatório predeterminado. Após seu desenvolvimento, essa técnica abriu caminho para pesquisadores da área de cirurgia cardiovascular explorarem os efeitos de drogas e genes específicos no infarto do miocárdio em camundongos.