Detecção e enriquecimento da Rare células B antígeno-específica para a análise do fenótipo e função

O objetivo geral deste procedimento simples, mas eficaz, é isolar e enriquecer células B raras de ligação a antígenos do sangue periférico humano usando nanopartículas magnéticas para sua análise fenotípica e funcional. Este método pode ajudar a responder a questões-chave no campo da imunologia sobre o fenótipo e a biologia de células B raras de ligação a antígenos antes e depois do encontro de antígenos in vivo. A principal vantagem dessa técnica é que ela evita problemas associados à geometria, principalmente quando se usa uma placa de estireno ou um cordão grande.

E evita problemas associados à taxa de fluxo quando se está isolando células por citometria de fluxo para isolar células raras em populações de células iniciais bastante grandes. Imediatamente após a coleta de 30 a 50 mililitros de sangue total em tubos de coleta de sangue heparinizado, misture o sangue na proporção de 1:1 com magnésio estéril em temperatura ambiente e PBS sem cálcio. Em seguida, coloque a mistura de sangue em 10 mililitros de solução de gradiente de densidade de temperatura ambiente em um tubo cônico estéril de 50 mililitros usando pressão de gatilho de pipeta lenta e consistente.