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DOI: 10.3791/55465-v
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This article describes a method for generating precision-cut lung slices (PCLS) to visualize immune cell localization in the lung. The technique allows for the observation of various immune cell types and their interactions in a live ex vivo environment.
Descreve-se um método para a geração de corte de precisão pulmonar fatias (PCLS) e imunocoloração-los para visualizar a localização de vários tipos de células imunitárias no pulmão. Nosso protocolo pode ser estendido para visualizar a localização e função de muitos tipos diferentes de células sob uma variedade de condições.
O objetivo geral deste método é usar fatias de pulmão de corte preciso, ou PCLS, para visualizar a localização e o tráfego de vários tipos de células imunes no pulmão. Este método pode ajudar a responder a questões-chave no campo da imunologia, como os padrões de localização e migração de células imunes no pulmão. A principal vantagem dessa técnica é que várias interações podem ser visualizadas no tecido vivo ex vivo que mantém a arquitetura tridimensional do pulmão.
Embora esse método possa fornecer informações sobre a localização e o tráfego de células imunes durante a inflamação, ele também pode ser usado para visualizar a contração das vias aéreas e do tecido muscular liso. Para colher o tecido pulmonar, primeiro use uma tesoura para abrir a pele e o peritônio do meio do abdômen até a mandíbula de um camundongo de seis a 12 semanas de idade e mova os intestinos para o lado da cavidade abdominal. Corte a veia cava inferior para drenar o sangue dos pulmões e use a ponta afiada da tesoura para perfurar o diafragma para permitir a expansão da caixa torácica.
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