Bateria de comportamental testes de avaliação geral de locomoção, coordenação e força Muscular em camundongos

O objetivo geral desta bateria de testes comportamentais é observar a locomoção geral, a força muscular e a coordenação em camundongos. Esses métodos podem ajudar a responder perguntas fundamentais sobre a implementação de diferentes tratamentos em múltiplos ensaios pré-clínicos, como o benefício dos resultados do tratamento sobre a motilidade em camundongos. A principal vantagem dessa técnica é que múltiplos aspectos e dimensões do movimento são medidos e avaliados por meio desta bateria de testes comportamentais.

Quem demonstrará o procedimento será Meera, uma aluna de mestrado em nosso laboratório. Comece ligando o programa do teste de campo aberto e conectando o computador à câmera ou à caixa de campo aberto. Inicie o software SmartWare selecionando o ícone Campo Aberto.

Selecione OK. Se aplicável, escolha a fonte do Conversor Digital-Analógico nas opções da câmera. Siga as instruções para ajustar as dimensões apropriadas para cobrir a caixa do campo aberto.

Em seguida, certifique-se de que o rato está sendo detectado dentro dos limites do campo aberto, calibrando a parte apropriada do software. Clique em tempo para predefinir um período para testar os ratos. Neste caso, defina cinco minutos.

Insira os sujeitos, clicando e escrevendo o nome apropriado para os arquivos. Por exemplo, fase um, sessão um. Em seguida, coloque um camundongo no centro dos campos abertos e clique no ícone de início para solicitar ao programa que comece a gravação.

Após cinco minutos, observe o programa avançar automaticamente para o próximo sujeito. Nesse caso, remova o camundongo que concluiu o teste e coloque o próximo sujeito no campo aberto do programa. Em seguida, clique em iniciar.

Por fim, para analisar os dados, clique no ícone de análise no canto superior direito da tela. Clique em analisar novamente e, em seguida, em relatório resumido. Comece colocando um rato no centro de uma malha.

E inverta a malha a pelo menos 20 centímetros acima de um recipiente limpo. Após a inversão, inicie o cronômetro. Registre o tempo de latência para o camundongo cair da malha.

Se o camundongo não cair dentro de 60 segundos, atribua-lhe uma pontuação de 60 segundos e não realize mais tentativas. Em seguida, permita que o camundongo descanse por pelo menos cinco minutos. Depois, ligue o rotarod e o computador.

E certifique-se de que eles estejam corretamente conectados para a gravação de dados. Para executar o protocolo acelerado, use os códigos no teclado para definir o tempo desejado no rotarod como 300 segundos, o número de pistas como cinco, a velocidade inicial e final como quatro e quarenta rotações por minuto, respectivamente, e o tempo de rampa como 300 segundos. Em seguida, configure a unidade no modo avanço para camundongo.

Certifique-se de que todas as pistas magnetizadas estejam equilibradas antes de iniciar o ensaio e coloque um camundongo em cada pista do rotarod. Em seguida, pressione iniciar para ativar o programa. À medida que os camundongos caírem, remova-os imediatamente das suas pistas para garantir que não interfiram nas outras pistas.

Por fim, permita que os camundongos descansem durante um intervalo interensaio de 10 minutos. Durante esse intervalo, inicie o ensaio para o próximo grupo de camundongos. Esses dados demonstram o uso do rotarod como um meio para observar como os camundongos tratados se comportam em comparação com os camundongos heterozigotos normais.

A divergência entre os dois grupos em 40 semanas indica o início da diminuição da coordenação no grupo de tratamento em comparação com os controles normais. Ao longo dos testes comportamentais mensais, os camundongos tratados apresentaram desempenho semelhante ao dos controles heterozigotos normais nos testes de campo aberto, rotarod e malha. Em 12 semanas, os animais tratados superaram os não tratados em tempo de movimento no teste de campo aberto e na latência para cair no teste de malha.

Uma vez dominada, esta técnica pode ser concluída em duas horas e meia para completar o protocolo com 20 camundongos, se realizada corretamente. Ao tentar este procedimento, é importante lembrar de limpar o equipamento entre os testes de cada camundongo, a fim de evitar possíveis contaminações entre os animais e as gaiolas. Após este procedimento, outros métodos, como ensaios comportamentais e bioquímicos adicionais, podem ser realizados para responder perguntas complementares sobre a eficácia do tratamento, tais como ensaios de biodistribuição, ensaios de atividade enzimática, ensaios de histologia ou testes de memória e aprendizado.

Após seu desenvolvimento, essa técnica abriu caminho para pesquisadores nas áreas de psicologia e, posteriormente, nas neurociências, explorarem o efeito de uma variedade de tratamentos e condições sobre organismos modelo. Após assistir ao vídeo, você deverá ter uma boa compreensão de como realizar testes comportamentais para locomoção geral, força muscular e coordenação. Não se esqueça de que trabalhar com camundongos pode ser perigoso, e precauções, como o uso de equipamentos de proteção individual adequados, devem sempre ser tomadas ao realizar este procedimento.