Investigações por microscopia de força atômica para o reconhecimento de lesões de DNA no reparo por excisão de nucleotídeos

O objetivo geral deste experimento de microscopia de força atômica é resolver as interações das proteínas de reparo do DNA com locais de dano no DNA e distinguir entre diferentes interações de DNA por vários complexos de proteínas. Este método pode ajudar a responder a questões-chave no campo de reparo do DNA, como como um determinado sistema de reparo do DNA alcança o reconhecimento de suas lesões-alvo no DNA. A principal vantagem dessa técnica é que podemos ver e analisar diretamente os diferentes tipos de complexos envolvidos no processo de reconhecimento de lesões de DNA.

Demonstrando o procedimento estará Nicolas Wirth, que usou essa abordagem durante sua pesquisa de bacharelado. Para começar, prepare um substrato de DNA adequado gerando uma lacuna de DNA de fita simples em um plasmídeo. Preencha a lacuna com oligonucleotídeos de DNA de fita simples modificados e, finalmente, linearize o DNA plasmático usando enzimas de restrição apropriadas.