Name: Um método versátil de padronização proteínas e células (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-02-26T15:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 57 s
Description: Aprenda a padronizar células e substratos em microcanais usando vácuo de baixa pressão e ferramentas simples de bancada. Este método facilita o estudo de interações célula-célula e célula-proteína em laboratórios de biologia.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

O financiamento para esta pesquisa foi fornecido pela New Jersey Comissão sobre a medula espinhal Research (NJCSCR) (a FHK), conceder CSCR14IRG005 (a BLF), NIH conceder R15NS087501 (a CHC), ea Fundação Kirby FM (a ETA).

NOTA: Por favor, consulte todas as folhas de dados de segurança pertinentes (MSDS) antes do uso. Alguns dos produtos químicos utilizados no presente protocolo são tóxicos e cancerígenos. Por favor, use todas as práticas de segurança adequadas (extractor de fumo, porta-luvas) e equipamentos de proteção individual (óculos de segurança, luvas, jaleco, calça de corpo inteiro, sapatos fechados) ao utilizar materiais tóxicos ou ácido / base. 1. Fabricação de Mestre Moldes para macio Litografia usando fotolitografia <ol><li> Desenhar o layout dos microcanais, utilizando uma ferramenta de desenho assistido por computador (CAD). </li><li> Imprimir o layout em uma placa de máscara em branco usando escritor máscara laser. </li><li> Lavar uma bolacha de silício de 4 polegadas com acetona seguido de isopropanol e seco com uma pistola de ar de azoto para assegurar que não solvente é deixado sobre a bolacha. </li><li> Desidratar a bolacha cozendo-o sobre uma placa quente a 200 ° C durante 5 min. </li><li> Selecione um fotorresiste negativo projetado para a altura desejada dos microcanais. Fou exemplo, usar fotorresistente negativo SU-8 50 para obter microcanais com uma altura de 50 mm. </li><li> Permitir que a bolacha se arrefecer até à temperatura ambiente, e depois alinhar a bolacha sobre o mandril de uma máquina de revestimento de centrifugação. </li><li> Dispensar 4 mL (um diâmetro / polegada mL da bolacha) de material fotosensitivo negativo para o centro da bolacha. </li><li> Girar revestir o wafer com um ciclo de centrifugação de duas etapas usando um spinner. Em primeiro lugar, aplicam-se um ciclo de propagação de 500 rpm, com uma aceleração de 100 rotações / s para 10 s. Em seguida, aplicar um ciclo de centrifugação de 2000 rpm, com uma aceleração de 300 rotações / s para 30 s 2 para se obter um revestimento de 50 um de material fotosensitivo sobre uma bolacha. </li><li> coza macia do wafer em duas etapas em uma placa quente de acordo com as instruções do fabricante. Para um revestimento de 50 um de foto-resistente, em primeiro lugar pré-cozem a bolacha a 65 ° C durante 6 minutos e depois rampa imediatamente acima da temperatura da placa quente para o pós-coza a bolacha a 95 ° C durante 20 min. </li><li> Permitir que a bolacha se arrefecer até à temperatura ambiente e, em seguida, carregar owafer para o palco litografia. </li><li> Alinhar a máscara sobre a bolacha usando alinhador máscara e expõe a bolacha à luz UV (de acordo com as instruções do fabricante), a uma intensidade de 1,5 mW / cm2 durante 146 s de aplicar a dose total de UV de 220 mJ / cm 2 necessária para uma 50 um espessa camada de fotorresiste. </li><li> Aplicar coza pós exposição ao wafer em duas etapas em uma placa quente. Para um revestimento de 50 mícrons de material fotosensitivo, primeiro pré-cozem a bolacha a 65 ° C durante 1 min e imediatamente rampa até a temperatura da placa quente para o pós-asse a 95 ° C durante 5 min. </li><li> Desenvolver o wafer em submergindo a bolacha em SU-8 desenvolvedor e agitando até que os recursos tornam-se claras sobre o wafer. Desenvolver o wafer de ~ 6 min para o fotorresiste de espessura 50 mm. </li><li> Lavar o excesso de desenvolvedor com isopropanol e etanol, em seguida, secar o wafer com uma pistola de ar de azoto. </li><li> Disco cozer a bolacha de silício sobre uma placa quente a 150 ° C durante 15 min. </li><li> Coloque obolacha num exsicador com 25 uL do agente de silanização tridecafluoro-1,1,2,2-tetrahydrooctyl-1-triclorossilano. NOTA: O agente de silanização é corrosivo, portanto, deve ser usado em um exaustor de ácido / base, com equipamento adequado de proteção individual (óculos de segurança, luvas, jaleco, calça de corpo inteiro, fechou-toe sapatos). </li><li> Aplicar vácuo durante 5 minutos e expor a bolacha aos vapores de silano durante 30 min sem libertar o vácuo. </li><li> Transferir a bolacha em um prato de Petri de tamanho adequado. </li></ol> 2. Fabricação de Mestre Moldes para macio Litografia com fita adesiva <ol><li> Desenhar o layout dos microcanais, utilizando uma ferramenta de desenho CAD e imprimir o desenho em papel branco. </li><li> Limpar uma lâmina de vidro grande o suficiente para acomodar o projeto com isopropanol e depois secar o slide com uma pistola de ar. </li><li> Anexar fita adesiva sobre a lâmina de vidro limpa. Seja não tomar cuidado para prender as bolhas de ar. </li><li> Tape os lados do GLAss deslizar sobre o papel com o design, com o lado da fita para cima. </li><li> Usar um bisturi para cortar a fita sobre a lâmina de vidro usando o design de papel como uma referência e, em seguida, descascar fita de áreas não desejadas de a lâmina de vidro. </li><li> Lavar a lâmina de vidro com isopropanol e depois seque com uma pistola de ar. Cozer a lâmina de vidro em um forno a 65 ° C durante 30 min. </li><li> Rolar suavemente sobre a fita adesiva com um rolo de borracha para retirar as bolhas de ar e permitir que a corrediça se arrefecer até à temperatura ambiente. </li></ol> 3. Macio Litografia Fabricação dos dispositivos PDMS <ol><li> Misture PDMS elastómero e o seu agente de cura numa proporção de 10: 1 (w: w), agita-se a mistura vigorosamente, e, em seguida, desgaseificar a mistura, colocando-o em uma câmara de vácuo até que não há bolhas de ar aparecer na mistura. </li><li> Verter a mistura para um molde de silício silanizada ou molde de fita adesiva num prato de petri para obter um ~ 2 espessa camada de PDMS e desgaseificar mm até todo o ar bolhas desaparecem. </li><li> Curar o PDMS em um fornoa 65 ° C durante 2 h. </li><li> Use um bisturi para cortar a camada de PDMS pelo menos 5 mm de distância das características e, em seguida, descasque as PDMS curado fora do molde usando pinça. </li><li> Um único orifício de entrada com uma biópsia de um milímetro perfurar qualquer lugar no microcanal, de preferência ao fim de uma rede de microcanais como pode ser visto na Figura 2-A e 4-B. </li><li> Limpar o PDMS expressos com fita adesiva para remover partículas de poeira adsorvidos sobre o dispositivo. Esteriliza-se o dispositivo de microcanal PDMS (PDMS fundido) por lavagem com uma solução de etanol a 70%, seguido por estéril desionizada (DI) de água, e expor a UV durante 30 min. </li><li> Manter o dispositivo PDMS estéril numa placa de Petri estéril até à sua utilização. </li></ol> 4. Substrato Padronização <ol><li> Coloque as PDMS estéreis expressos usando uma pinça para uma lamela de vidro esterilizada ou placa de petri e aplique uma leve pressão com a ponta da pinça. NOTA: O elenco PDMS faz um conformado, mas vedação reversível com a gllamela asno ou placa de petri formando microcanais sem o uso de qualquer adesivo. </li><li> Coloque uma gota (20 - 40 ul) da solução de substrato na entrada cobrindo completamente o orifício de entrada. Padrão poli-D-lisina (PDL), colocando uma gota de 20 ul de PDL em tampão tetraborato de sódio na entrada dos microcanais. </li><li> Colocar a placa de Petri num vácuo de ~ 254 mmHgA (equivalente a uma câmara de vácuo em laboratórios biológicos) durante 10 min, e observar o ar que sai do canal sob a forma de bolhas. </li><li> Desligar o vácuo e observar a solução de substrato que flui para o microcanal. </li><li> Incubar o prato com as condições adequadas para a adesão substrato. Ver Quadros 1 e 2 para as condições de incubação (estes variam dependendo do substrato). Para padronização PDL, incubar durante 1 h a 37 ° C. </li><li> Retire cuidadosamente o selo PDMS usando uma pinça estéreis e lavar o padrão na lamela de vidro três vezes com água DI. </li&gt; <li> Adicionar uma solução a 1% de albumina de soro bovino (BSA) para a placa de petri para cobrir o prato ou a lamela de vidro e incubar durante a noite a 37 ° C. NOTA: Isto irá reduzir a aderência não específica em regiões não revestidos. </li><li> Aspirar fora a solução de BSA a 1%, e o substrato modelado está agora pronto para usar. </li></ol> 5. Padronização indireta de Células <ol><li> Preparar a suspensão de células em meio de cultura isento de soro. O tipo de célula e a densidade de células são listadas na Tabela 1. </li><li> Adicionar a suspensão de células para o prato modelado Petri e completamente imersa a região modelada em suspensão de células. </li><li> Incubar a placa de Petri a 37 ° C em uma incubadora durante 15 minutos para permitir que as células para anexar o substrato modelado. </li><li> Aspirar o excesso de suspensão de células a partir da placa de Petri e lavar as células modelado três vezes com salina tamponada com fosfato (PBS), enquanto agitando durante 10 segundos para remover células não ligadas. </li><li> Adicionar a umppropriate cultura médio para as culturas de células padronizadas e incubar as células padronizadas a 37 ° C em uma incubadora de CO 2. </li></ol> 6. Padronização direta de células NOTA: Esta técnica é uma alternativa à padronização de células indirecto descrito no passo 5. No entanto, ao contrário de no passo 5, nesta técnica células são modelados em superfícies de cultura de tecidos com ou sem revestimento de substrato. <ol><li> Esteriliza-se o dispositivo de microfluidos por lavagem com uma solução de 70% de etanol seguido por água desionizada. </li><li> Embeber o dispositivo durante a noite numa solução de 1% de BSA para evitar a adesão celular ao PDMS. </li><li> Seca-se o dispositivo à temperatura ambiente e coloque-o da parte inferior da placa de petri tratadas com cultura de tecidos. </li><li> Preparar a suspensão de células em meio de cultura isento de soro. O tipo de célula e a densidade de células são listadas na Tabela 2. </li><li> Coloque uma gota (4-8 mL) da suspensão de células, suficiente para encher omicrocanais, na entrada cobrindo completamente o orifício de entrada. </li><li> Colocar a placa de petri em vácuo durante 10 minutos e observar ar que sai do canal sob a forma de bolhas. Desligar o vácuo e observar a suspensão de células que flui para o microcanal. </li><li> Incubar a placa de Petri dentro de uma incubadora para promover a adesão celular de acordo com as condições de incubação (dependem do tipo de célula modelado) mencionado na Tabela 2. Adicionar PBS numa placa de Petri submergindo o dispositivo de PDMS. </li><li> Descasque o PDMS com cuidado para fora da placa de Petri com uma pinça e lavar o padrão com PBS. Adicionar meio de cultura de células para a placa de Petri e colocar a cultura de células na incubadora. </li></ol>

<ol><li>Kane, R. S., Takayama, S., Ostuni, E., Ingber, D. E., Whitesides, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Patterning+proteins+and+cells+using+soft+lithography%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Patterning proteins and cells using soft lithography.</a> Biomaterials. 20 (23-24), 2363-2376 (1999).</li>
<li>Lin, R. Z., Ho, C. T., Liu, C. H., Chang, H. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dielectrophoresis+based-cell+patterning+for+tissue+engineering%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechnol+J%22%5BJournal%5D)">Dielectrophoresis based-cell patterning for tissue engineering.</a> Biotechnol J. 1 (9), 949-957 (2006).</li>
<li>Veiseh, M., Zareie, M. H., Zhang, M. <a target="_blank" href="http://pubs.acs.org/doi/abs/10.1021/la025529j">Highly Selective Protein Patterning on Gold-Silicon Substrates for Biosensor Applications.</a> Langmuir. 18 (17), 6671-6678 (2002).</li>
<li>Kung, F., Wang, J., Perez-Castillejos, R., Townes-Anderson, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Position+along+the+nasal%2Ftemporal+plane+affects+synaptic+development+by+adult+photoreceptors%2C+revealed+by+micropatterning%5BTitle%5D)+AND+%22Integr+Biol%22%5BJournal%5D)">Position along the nasal/temporal plane affects synaptic development by adult photoreceptors, revealed by micropatterning.</a> Integr Biol. 7 (3), 313-323 (2015).</li>
<li>Dickinson, L. E., Lutgebaucks, C., Lewis, D. M., Gerecht, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Patterning+microscale+extracellular+matrices+to+study+endothelial+and+cancer+cell+interactions+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Chip%22%5BJournal%5D)">Patterning microscale extracellular matrices to study endothelial and cancer cell interactions in vitro.</a> Lab Chip. 12 (21), 4244-4248 (2012).</li>
<li>Khademhosseini, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Co-culture+of+human+embryonic+stem+cells+with+murine+embryonic+fibroblasts+on+microwell-patterned+substrates%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Co-culture of human embryonic stem cells with murine embryonic fibroblasts on microwell-patterned substrates.</a> Biomaterials. 27 (36), 5968-5977 (2006).</li>
<li>Bogdanowicz, D. R., Lu, H. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Studying+cell-cell+communication+in+co-culture%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechnol+J%22%5BJournal%5D)">Studying cell-cell communication in co-culture.</a> Biotechnol J. 8 (4), 395-396 (2013).</li>
<li>Choi, Y., Lee, S. <a target="_blank" href="http://link.springer.com/article/10.1007/BF02916509">Guided cell growth through surface treatments.</a> J of Mech Sci Technol. 19 (11), 2133-2137 (2005).</li>
<li>Hwang, I. -T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficient+Immobilization+and+Patterning+of+Biomolecules+on+Poly%28ethylene+terephthalate%29+Films+Functionalized+by+Ion+Irradiation+for+Biosensor+Applications%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Appl+Mater+Interf%22%5BJournal%5D)">Efficient Immobilization and Patterning of Biomolecules on Poly(ethylene terephthalate) Films Functionalized by Ion Irradiation for Biosensor Applications.</a> ACS Appl Mater Interf. 3 (7), 2235-2239 (2011).</li>
<li>Clark, P., Britland, S., Connolly, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Growth+cone+guidance+and+neuron+morphology+on+micropatterned+laminin+surfaces%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Sci%22%5BJournal%5D)">Growth cone guidance and neuron morphology on micropatterned laminin surfaces.</a> J Cell Sci. 105 (1), 203-212 (1993).</li>
<li>Théry, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Micropatterning+as+a+tool+to+decipher+cell+morphogenesis+and+functions%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Sci%22%5BJournal%5D)">Micropatterning as a tool to decipher cell morphogenesis and functions.</a> J Cell Sci. 123 (24), 4201-4213 (2010).</li>
<li>Douvas, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biocompatible+photolithographic+process+for+the+patterning+of+biomolecules%5BTitle%5D)+AND+%22Biosens+Bioelectron%22%5BJournal%5D)">Biocompatible photolithographic process for the patterning of biomolecules.</a> Biosens Bioelectron. 17 (4), 269-278 (2002).</li>
<li>Alom, R. S., Chen, C. S. <a target="_blank" href="http://pubs.rsc.org/en/Content/ArticleLanding/2007/SM/B613349E">Microcontact printing: A tool to pattern.</a> Soft Matter. 3 (2), 168-177 (2007).</li>
<li>Essö, C. <a target="_blank" href="http://www.diva-portal.org/smash/get/diva2:121034/fulltext01">Modifying Polydimethylsiloxane (PDMS) surfaces.</a> Institutionen för biologi och kemiteknik. , (2007).</li>
<li>Zhou, J., Ellis, A. V., Voelcker, N. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recent+developments+in+PDMS+surface+modification+for+microfluidic+devices%5BTitle%5D)+AND+%22Electrophoresis%22%5BJournal%5D)">Recent developments in PDMS surface modification for microfluidic devices.</a> Electrophoresis. 31 (1), 2-16 (2010).</li>
<li>Folch, A., Jo, B. H., Hurtado, O., Beebe, D. J., Toner, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microfabricated+elastomeric+stencils+for+micropatterning+cell+cultures%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biomed+Mater+Res%22%5BJournal%5D)">Microfabricated elastomeric stencils for micropatterning cell cultures.</a> J Biomed Mater Res. 52 (2), 346-353 (2000).</li>
<li>Yeo, W. S., Yousaf, M. N., Mrksich, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dynamic+interfaces+between+cells+and+surfaces%3A+electroactive+substrates+that+sequentially+release+and+attach+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Chem+Soc%22%5BJournal%5D)">Dynamic interfaces between cells and surfaces: electroactive substrates that sequentially release and attach cells.</a> J Am Chem Soc. 125 (49), 14994-14995 (2003).</li>
<li>Bhatia, S. N., Toner, M., Tompkins, R. G., Yarmush, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Selective+adhesion+of+hepatocytes+on+patterned+surfaces%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+N+Y+Acad+Sci%22%5BJournal%5D)">Selective adhesion of hepatocytes on patterned surfaces.</a> Ann N Y Acad Sci. 745, 187-209 (1994).</li>
<li>Song, E., Kim, S. Y., Chun, T., Byun, H. -J., Lee, Y. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Collagen+scaffolds+derived+from+a+marine+source+and+their+biocompatibility%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Collagen scaffolds derived from a marine source and their biocompatibility.</a> Biomaterials. 27 (15), 2951-2961 (2006).</li>
<li>Yamato, M., Konno, C., Utsumi, M., Kikuchi, A., Okano, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Thermally+responsive+polymer-grafted+surfaces+facilitate+patterned+cell+seeding+and+co-culture%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Thermally responsive polymer-grafted surfaces facilitate patterned cell seeding and co-culture.</a> Biomaterials. 23 (2), 561-567 (2002).</li>
<li>Takayama, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Patterning+cells+and+their+environments+using+multiple+laminar+fluid+flows+in+capillary+networks%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Patterning cells and their environments using multiple laminar fluid flows in capillary networks.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 96 (10), 5545-5548 (1999).</li>
<li>Kim, D. S., Lee, K. -C., Kwon, T. H., Lee, S. S. <a target="_blank" href="http://iopscience.iop.org/article/10.1088/0960-1317/12/3/307/meta">Micro-channel filling flow considering surface tension effect.</a> J of Micromech Microeng. 12 (3), 236(2002).</li>
<li>Kim, E., Xia, Y., Whitesides, G. M. <a target="_blank" href="http://pubs.acs.org/doi/abs/10.1021/ja960151v">Micromolding in Capillaries: Applications in Materials Science.</a> J Am Chem Soc. 118 (24), 5722-5731 (1996).</li>
<li>Kim, E., Xia, Y. N., Whitesides, G. M. <a target="_blank" href="http://www.nature.com/nature/journal/v376/n6541/abs/376581a0.html">Polymer Microstructures Formed by Molding in Capillaries.</a> Nature. 376 (6541), 581-584 (1995).</li>
<li>Jeon, N. L., Choi, I. S., Xu, B., Whitesides, G. M. <a target="_blank" href="https://gmwgroup.harvard.edu/pubs/pdf/665.pdf">Large-area patterning by vacuum-assisted micromolding.</a> Adv Mater. 11 (11), 946(1999).</li>
<li>Shrirao, A. B., et al. System and method for novel microfluidic device. US patent. , 61/414,237 (2010).</li>
<li>Merkel, T. C., Bondar, V. I., Nagai, K., Freeman, B. D., Pinnau, I. <a target="_blank" href="https://www.researchgate.net/publication/202178954_Gas_Sorption_Diffusion_and_Permeation_in_PolyDimethylsiloxane">Gas sorption, diffusion, and permeation in poly(dimethylsiloxane).</a> J Polym Sci Part B Polym Phys. 38 (3), 415-434 (2000).</li>
<li>Shrirao, A. B., Hussain, A., Cho, C. H., Perez-Castillejos, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adhesive-tape+soft+lithography+for+patterning+mammalian+cells%3A+application+to+wound-healing+assays%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechniques%22%5BJournal%5D)">Adhesive-tape soft lithography for patterning mammalian cells: application to wound-healing assays.</a> Biotechniques. 53 (5), 315-318 (2012).</li>
<li>Shrirao, A. B., Perez-Castillejos, R. <a target="_blank" href="http://blogs.rsc.org/chipsandtips/2010/05/17/simple-fabrication-of-microfluidic-devices-by-replicating-scotch-tape-masters/">Chips & tips: simple fabrication of microfluidic devices by replicating scotch-tape masters.</a> Lab Chip. , (2010).</li>
<li>Anil, B. S., Frank, H. K., Derek, Y., Cheul, H. C., Ellen, T. -A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vacuum-assisted+fluid+flow+in+microchannels+to+pattern+substrates+and+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Biofabrication%22%5BJournal%5D)">Vacuum-assisted fluid flow in microchannels to pattern substrates and cells.</a> Biofabrication. 6 (3), 035016(2014).</li>
<li>Yuen, P. K., Goral, V. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Low-cost+rapid+prototyping+of+flexible+microfluidic+devices+using+a+desktop+digital+craft+cutter%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+on+a+Chip%22%5BJournal%5D)">Low-cost rapid prototyping of flexible microfluidic devices using a desktop digital craft cutter.</a> Lab on a Chip. 10 (3), 384-387 (2010).</li>
<li>Wang, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Self-loading+and+cell+culture+in+one+layer+microfluidic+devices%5BTitle%5D)+AND+%22Biomed+Microdevices%22%5BJournal%5D)">Self-loading and cell culture in one layer microfluidic devices.</a> Biomed Microdevices. 11 (3), 679-684 (2009).</li>
<li>Feng, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Survival+of+mammalian+cells+under+high+vacuum+condition+for+ion+bombardment%5BTitle%5D)+AND+%22Cryobiology%22%5BJournal%5D)">Survival of mammalian cells under high vacuum condition for ion bombardment.</a> Cryobiology. 49 (3), 241-249 (2004).</li>
<li>Haubert, K., Drier, T., Beebe, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((PDMS+bonding+by+means+of+a+portable%2C+low-cost+corona+system%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+on+a+Chip%22%5BJournal%5D)">PDMS bonding by means of a portable, low-cost corona system.</a> Lab on a Chip. 6 (12), 1548-1549 (2006).</li>
<li>Fan, D. -H., Yuan, S. -W., Shen, Y. -M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Surface+modification+with+BSA+blocking+based+on+in+situ+synthesized+gold+nanoparticles+in+poly+%28dimethylsiloxane%29+microchip%5BTitle%5D)+AND+%22Colloids+Surf%2C+B%22%5BJournal%5D)">Surface modification with BSA blocking based on in situ synthesized gold nanoparticles in poly (dimethylsiloxane) microchip.</a> Colloids Surf, B. 75 (2), 608-611 (2010).</li>
<li>Hideshima, S., Sato, R., Inoue, S., Kuroiwa, S., Osaka, T. <a target="_blank" href="http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0925400511008902">Detection of tumor marker in blood serum using antibody-modified field effect transistor with optimized BSA blocking.</a> Sens Actuator B-Chem. 161 (1), 146-150 (2012).</li>
<li>Zheng, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-throughput+immunoassay+through+in-channel+microfluidic+patterning%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+on+a+Chip%22%5BJournal%5D)">High-throughput immunoassay through in-channel microfluidic patterning.</a> Lab on a Chip. 12 (14), 2487-2490 (2012).</li>
<li>MacLeish, P., Barnstable, C., Townes-Anderson, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+a+monoclonal+antibody+as+a+substrate+for+mature+neurons+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Procs+Nat+Acad+of+Sci%22%5BJournal%5D)">Use of a monoclonal antibody as a substrate for mature neurons in vitro.</a> Procs Nat Acad of Sci. 80 (22), 7014-7018 (1983).</li>
<li>Suchodolskis, A., et al. <a target="_blank" href="http://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1002/sia.3763/abstract">Elastic properties of chemically modified baker's yeast cells studied by AFM.</a> Surf Interface Anal. 43 (13), 1636-1640 (2011).</li>
</ol>

Os autores declaram não haver interesses financeiros concorrentes.

Enquanto fotolitografia convencional é uma técnica bem estabelecida para a realização de moldes de litografia macia, o equipamento, materiais, e as competências necessárias para utilizar fotolitografia convencional não estão prontamente disponíveis para a maioria dos laboratórios. Para laboratórios que não têm acesso a esses recursos, nós apresentamos a fabricação de fita adesiva como um método de criação de moldes com características relativamente simples para dispositivos microfluídicos. Este método permite que qualqu...

Em engenharia de tecidos e biosensing, a capacidade de controlar a organização espacial de proteínas e células em uma escala um, tornou-se cada vez mais importante ao longo das últimas quatro décadas 1, 2, 3. Organização espacial precisa de proteínas e células tem permitido aos pesquisadores examinar a interação entre as células e os substratos que contêm tipos semelhantes ou diferentes de células, para orientar o crescimento celular, e para imobilizar biomoléculas para a fabricação de biossensores 4, 5, 6, 7, 8, 9. Os métodos atuais de proteínas padronização incluem photopatterning e impressão microcontact. Photopatterning utiliza material sensível à luz que é reticulado por exposição a ultruma violeta (UV). Luz UV dirigida a uma fotomáscara (consistindo em áreas transparentes com regiões mais escuras para evitar a transmissão de luz UV) provoca reticulação em regiões específicas que podem então ser utilizados para a subsequente ligação de biomateriais ou células 10, 11. Embora este esquema é muito preciso e permite o controle preciso da topografia da superfície da cultura, é limitada a biomoléculas sensíveis aos raios UV, que pode ser modelado por radiação UV 12. Impressão microcontact é outro método popular de padronização proteínas específicas 13, 14. Neste método, um siloxano (PDMS) selo poli-dimetil é tratada com uma variedade de reagentes de modificação da superfície antes de ser embebido numa solução de substrato escolhido biomolecular. Em seguida, é suavemente pressionado para uma lamela de vidro ou outra superfície assim &quot;estampagem&quot; a biomolécula sobre a superfície da cultura. HoWever, estampagem se limita ao tipo de material que pode ser transferido assim como a molhabilidade de biomoléculas à superfície do PDMS selo 15. Padronização directa de células pode ser mais difícil e baseia-se em métodos de complexos, tais como substratos comutáveis, métodos com base estêncil, ou modelação com moléculas de adesão celular específicos 16, 17. Estes métodos estão limitados na sua capacidade de células de teste padrão, devido à falta de substratos de adesão celular compatíveis, a incompatibilidade do processo para o trabalho com células sensíveis biológicos e constrangimentos, inconsistência em reproduzir o padrão e a complexidade do processo. Por exemplo, substratos com comutáveis, substratos mercadorias necessitam de ser concebido para cada tipo de célula, para mudar a sua adesão a tipos específicos de células, sem a degradação por exposição à luz UV e calor usado no processo 17, &lt;<html> classe sup = &quot;xref&quot;&gt; 18, 19, 20. Estêncil métodos de padronização com base são versáteis em sua capacidade de células padrão; No entanto, é difícil fabricar matrizes PDMS nas espessuras adequadas para utilização 16, 21. injeção direta de células em canais microfluídicos PDMS tem algumas vantagens, tais como: 1) facilidade na fabricação de canais microfluídicos e 2) adequação para muitas células e diferentes substratos. No entanto, o problema predominante de captura de bolhas de ar durante o processo de injecção devido à hidrofobicidade dos PDMS sem o uso de limpeza de plasma, ou outros métodos para diminuir as bolhas de ar, faz com que seja difícil criar consistentemente células modelado sobre superfícies de vidro ou de plástico 21. Este trabalho expande micromolding capilar 22, 23,lass = &quot;refex&quot;&gt; 24, 25, 26 e relata um método para injectar suspensões de células de proteína e em microcanais. O método utilizado aqui demonstra a padronização de substratos e ambos padronização direta e indireta de tipos específicos de células. Esta técnica ultrapassa a elevada hidrofobicidade de PDMS e elimina a presença de bolhas durante a injecção quer de substratos ou células, tirando proveito da permeabilidade aos gases de PDMS 27. Este documento revela a utilização da técnica com vários substratos diferentes e tipos de células. O artigo também destaca a fabricação de moldes para litografia macia usando fotolitografia convencional, bem como um método simples e adesivo de baixo custo tape útil em recursos configurações limitadas 28, 29.

<table><tbody><tr><td>Ferramentas de desenho CAD CorelDRAW X4</td><td>Corel Corporation, Canadá</td><td>X4 Versão 14.0.0.701</td><td>Ferramenta CAD usada para desenhar o layout do dispositivo microfluídico</td></tr><tr><td>Impressora a laser HP</td><td>Hewlett Packard, CA</td><td>1739629</td><td>Usada para imprimir o layout do dispositivo microfluídico para técnica de fita adesiva</td></tr><tr><td>Bel-Art Dessecator</td><td>Fisher Scientific, MA</td><td>08-594-16B</td><td>Usado para desgaseificar a mistura</td></tr> <tr><td>PDMSFita adesiva escocesa</td><td>3M Produto, MN</td><td>Tape 600</td><td>Usado para fabricar fita adesiva Master</td></tr><tr><td>PDMS Sylgard 184</td><td>Dow Corning, MI</td><td>1064291</td><td>Fundição de polímero</td></tr><tr><td>Petri Dish</td><td>Fisher Scientific, MA</td><td>08-772-23</td><td>Usado para manter o molde para fundir com PDMS</td></tr><tr><td>Bisturi de aço inoxidável com lâmina (# 11)</td> <td>Feather Safety Razor Co. Ltd. Japão</td><td>2976 # 11</td><td>Usado para cortar o PDMS</td></tr><tr><td>Pinças</td><td>Ted Pella, CA</td><td>5627-07</td><td>Usado para manusear o molde PDMS durante o descascamento</td></tr><tr><td>de lâminas de vidro</td><td>Fisher Scientific, MA</td><td>12-546-2</td><td>Usado como superfície para padronizar as</td></tr><tr><td>lâminas de vidro</td> de substrato <td>Fisher Scientific, MA</td><td>12-544-4</td><td>Usado como superfície para padronizar o rolo de borracha de substrato</td></tr><tr><td></td><td>Dick Blick Art Materials, IL</td><td>40104-1004</td><td>Usado para fixar fita adesiva em vidro sem prender bolhas de ar</td></tr><tr><td>Laser Mask Writer</td><td>Heidelberg Instruments, Alemanha</td><td>DWL66fs</td><td>Usado para fabricar máscara de quartzo usado no processo de fabricação de fotolitografia</td></tr><tr><td>EVG Mask Aligner (ferramenta de exposição UV de fotolitografia)</td> <td>EV Group, Alemanha</td><td>EVG 620T (B)</td> <td>Usado para expor o fotorresistente à luz UV</td></tr><tr><td>Spin Coater Headway</td><td>Research Inc, TX</td><td>PWM32-PS-CB15PL</td><td>Usado para girar o revestimento do fotorresiste em wafer de silício</td></tr><tr><td>Fotorresistes SU-8 50</td><td>MicroChem, MA</td><td>Y131269</td><td>Fotorresistente negativo usado para fabricação de moldes</td></tr><tr><td>SU-8 Devloper</td><td>MicroChem, MA</td><td>Y020100</td><td>Desenvolvedor de fotorresistência</td></tr><tr><td>Tridecafluoro-1,1,2,2-Tetrahidrooctil-1-Triclorossilano</td><td>UCT Specialties, PA</td><td>T2492-KG</td><td>Molde de revestimento para evitar a adesão de PDMS</td></tr><tr><td>Isopropanol</td><td>Sigma-Aldrich, MO</td><td>Solvente de</td><td>Limpeza</td>190764</tr><tr><td>Etanol</td><td>Sigma-Aldrich, MO</td><td>24102</td><td>Solvente de Esterilização</td></tr><tr><td>Bromidrato de Poli-D-Lisina (PDL)</td><td>Sigma-Aldrich, MO</td><td>P0899-10MG</td><td>A solução de PDL é feita a 0,1 mg/mL em Tampão Tetraborato de Sódio</td></tr><tr><td>Laminina</td><td>Sigma-Aldrich, MO</td><td>L2020</td><td>Laminina aliquotada em 10 &micro; L alíquotas e diluídas a 20 &micro; g/&micro; L em PBS antes de usar BSA</td></tr><tr><td></td><td>Fisher Scientific, MA</td><td>BP1605100</td><td>Cultura de células</td></tr><tr><td>C2C12 Linha de células de mioblast</td><td>ATCC, VA</td><td>CRL-1722</td><td>Usado para demonstrar a padronização de C2C12</td></tr><tr><td>Linha celular PC12</td><td>ATCC, VA</td><td>CRL-1721</td><td>Usado para demonstrar a padronização de PC12</td></tr><tr><td>Colágeno tipo 1, cauda de rato</td><td>BD Biosciences</td><td>40236</td><td>Cultura de células</td></tr><tr><td>DMEM</td><td>GIBCO, MA</td><td>11965-084</td><td>Cultura de células</td></tr><tr><td>Soro de cavalo, inativado por calor</td><td>Fisher Scientific, MA</td><td>26050-070</td><td>Cultura de células</td></tr><tr><td>Faloidina-tetrametilrodamina B isotiocianato (TRITC)</td><td>Sigma-Aldrich, MO</td><td>P1951</td><td>Para rotular células</td></tr><tr><td>Calceína-AM células mortas vivas Kit de ensaio</td><td>Invitrogen, MA</td><td>L-3224</td><td>Viabilidade celular Ensaio</td></tr><tr><td>Biópsia Perfurador</td><td>Ted Pella, CA</td><td>15110-10</td><td>Furo perfurado no PDMS</td></tr></tbody></table>

um método versátil de padronização proteínas e células

A Versatile Method of Patterning Proteins and Cells

As técnicas de padronização de substrato e célula são amplamente utilizadas em biologia celular para estudar as interações célula a célula e célula a substrato. As técnicas convencionais de padronização funcionam bem apenas com formas simples, pequenas áreas e biomateriais selecionados. Este artigo descreve um método para distribuir suspensões celulares, bem como soluções de substrato, em microcanais complexos, longos, fechados (sem saída) de polidimetilsiloxano (PDMS) usando pressão negativa. Este método permite que os pesquisadores padronizem vários substratos, incluindo fibronectina, colágeno, anticorpos (Sal-1), poli-D-lisina (PDL) e laminina. A padronização de substratos permite padronizar indiretamente uma variedade de células. Testamos mioblastos C2C12, a linhagem celular neuronal PC12, neurônios corticais embrionários de ratos e neurônios retinianos anfíbios. Além disso, demonstramos que essa técnica pode padronizar diretamente os fibroblastos em canais microfluídicos por meio da breve aplicação de um baixo vácuo em suspensões celulares. O baixo vácuo não diminui significativamente a viabilidade celular, conforme mostrado pelos ensaios de viabilidade celular. Modificações são discutidas para aplicação do método a diferentes tipos de células e substratos. Essa técnica permite que os pesquisadores padronizem células e proteínas em padrões específicos sem a necessidade de materiais ou equipamentos exóticos e pode ser feita em qualquer laboratório com vácuo.

Este método permite a padronização de proteínas e padronização indireta de células usando canais microfluídicos sem saída com dimensões tão pequenas quanto 10 mm e equipamentos disponíveis em quase todos os laboratórios biológicos uma vez que o molde mestre é feita. Esta técnica pode ser utilizada com canais microfluídicos PDMS criados usando fotolitografia suave tradicional, ou com canais microfluídicos PDMS criadas com fita adesiva de fabricação (Figura 1) <sup class="...

Este relatório descreve uma técnica simples e fácil de executar, usando vácuo de baixa pressão, para preencher canais microfluídicos com células e substratos para pesquisa biológica.

Um método versátil de padronização proteínas e células

Substrate and cell patterning techniques are widely used in cell biology to study cell-to-cell and cell-to-substrate interactions. Conventional patterning ...

O objetivo geral deste procedimento é padronizar células ou substratos distribuindo-as em microcanais longos e fechados, complexos, utilizando ferramentas simples disponíveis na maioria dos laboratórios biológicos. Este método pode ajudar a responder perguntas fundamentais na área da biologia sobre interações célula-célula e célula-proteína. A principal vantagem desta técnica é que ela é fácil de executar e requer apenas ferramentas facilmente acessíveis na maioria dos laboratórios biológicos.De modo geral, indivíduos novos neste método enfrentarão dificuldades, pois o procedimento exige a otimização das condições de incubação para as células e substratos escolhidos pelo pesquisador. A demonstração visual deste método é essencial, já que o posicionamento adequado do carimbo de PDMS e da solução melhora significativamente a reprodutibilidade do experimento. Comece desenhando o layout do microcanal utilizando uma ferramenta de desenho CAD.Em seguida, imprima o desenho em papel branco. Depois, utilize isopropanol para limpar uma lâmina de vidro grande o suficiente para acomodar o desenho. Em seguida, seque a lâmina com uma pistola de ar.Fixe uma fita adesiva na lâmina de vidro limpa, tomando cuidado para não aprisionar bolhas de ar. Em seguida, prenda as bordas da lâmina de vidro no papel com o desenho, de modo que o lado com a fita fique voltado para cima. Use um bisturi para cortar a fita na lâmina de vidro, utilizando o desenho no papel como referência.Após cortar, remova a fita das áreas indesejadas da lâmina de vidro. Em seguida, enxágue a lâmina de vidro com isopropanol para remover qualquer resíduo adesivo. Depois, use uma pistola de ar para secar a superfície.Após o modelamento e limpeza, aqueça a lâmina de vidro em estufa a 65 graus Celsius por 30 minutos. Em seguida, passe suavemente um rolo de borracha sobre a fita para remover bolhas de ar e deixe a lâmina esfriar até a temperatura ambiente em uma placa de Petri. Comece misturando 10 partes de um elastômero de PDMS com 1 parte do agente de cura e agite a mistura vigorosamente.Em seguida, coloque a mistura em uma câmara de vácuo para dessuprar a mistura até que não restem bolhas de ar. Despeje uma camada de 2 mm de espessura da mistura sobre o molde de fita adesiva e dessupre o molde até que todas as bolhas de ar desapareçam. Após o resfriamento, use um bisturi para cortar a camada de PDMS a pelo menos 5 mm de distância das estruturas.Em seguida, retire o PDMS curado do molde utilizando um par de pin&ccedil;as. Fa&ccedil;a um &uacute;nico orif&iacute;cio de entrada com um furador de bi&oacute;psia de 1 mm, preferencialmente na extremidade de uma rede de microcanais. Depois, limpe o molde de PDMS com fita adesiva, para remover part&iacute;culas de poeira do dispositivo.Esterilize o dispositivo de microcanal de PDMS lavando-o com uma solução de etanol 70%, seguido por água desionizada estéril, e exponha-o à luz UV por 30 minutos. Use pinças para colocar o molde de PDMS estéril sobre uma lamínula de vidro estéril, aplicando pressão suave com a ponta das pinças. Em seguida, coloque uma gota de poli-d-lisina em tampão de tetraborato de sódio na entrada dos microcanais.Coloque a placa de Petri sob vácuo por 10 minutos. Durante esse tempo, observe a saída de ar do canal na forma de bolhas. Libere o vácuo e observe a solução do substrato fluindo para dentro do microcanal. Incube a placa a 37 graus Celsius por uma hora.Em seguida, retire cuidadosamente o carimbo de PDMS usando pinças estéreis e lave o padrão três vezes com água desionizada. Adicione uma solução de BSA 1% sobre a lamínula de vidro, para reduzir a adesão não específica, e incube a amostra durante a noite a 37 graus Celsius. No dia seguinte, aspire a solução de BSA.Para iniciar a padronização indireta de células, prepare uma suspensão celular em meio de cultura livre de soro, conforme descrito no protocolo textual complementar. Adicione a suspensão celular ao recipiente de petri padronizado, submergindo completamente a região padronizada na suspensão celular. Em seguida, incube o recipiente de petri a 37 graus Celsius em uma incubadora por 15 minutos para permitir que as células se liguem ao substrato padronizado.Após a incubação, aspire a suspensão celular em excesso da placa de Petri e lave as células padronizadas três vezes com PBS, agitando suavemente por dez segundos para remover as células não aderidas. Em seguida, adicione o meio de cultura apropriado aos cultivos celulares padronizados e incube as células padronizadas a 37 graus Celsius em uma incubadora tamponada com dióxido de carbono. Para o padronização direta das células, primeiramente, esterilize o dispositivo microfluídico enxaguando-o com uma solução de etanol 70%, seguido por água desionizada.Em seguida, mergulhe o dispositivo durante a noite em uma solução de BSA 1% para evitar a adesão celular não específica ao PDMS. Seque o dispositivo à temperatura ambiente e, em seguida, fixe-o ao fundo da placa de cultura de tecidos tratada. Coloque 4 a 8 microlitros da suspensão celular, quantidade suficiente para preencher os microcanais, na entrada, cobrindo completamente o orifício.Em seguida, coloque a placa de Petri em uma câmara de vácuo por 10 minutos. Libere o vácuo e observe a suspensão celular fluindo para o microcanal. Incube a placa de Petri a 37 graus Celsius em uma incubadora tamponada com dióxido de carbono, por até uma hora.Em seguida, retire a placa do incubador e use um par de pin&ccedil;as para descascar cuidadosamente o PDMS da placa. Lave o padr&atilde;o com PBS e, ent&atilde;o, adicione meio de cultura celular &agrave; placa de Petri. Quando terminar, coloque as c&eacute;lulas de volta no incubador.Mostram-se aqui neurônios corticais de embrião de rato cultivados em superfícies de poli-d-lisina e laminina. A localização das células demonstra aderência geral às áreas padronizadas e crescimento ao longo das faixas de PDL e laminina. Mostram-se aqui, com maior magnificação, os mioblastos C2C12.Esse tipo celular também adere às áreas padronizadas e demonstra fusão em miotúbulos multinucleados. Essa técnica também foi adaptada para o padronamento direto de células, mostrado aqui com fibroblastos. Esse método de padronamento celular direto não tem efeito adverso sobre a sobrevivência celular.Após este procedimento, outros métodos, como a microscopia fluorescente, podem ser realizados para responder perguntas adicionais envolvendo a localização de proteínas ou interações entre células e substrato. Ao tentar este procedimento, é importante lembrar que a colocação adequada da gota de células ou solução de substrato, de modo a cobrir completamente o inlay, é fundamental para o sucesso. Após seu desenvolvimento, esta técnica abriu caminho para pesquisadores na área de neurociência explorarem o direcionamento de axônios de fotorreceptores na biologia retiniana.Após assistir a este vídeo, você deverá ter uma boa compreensão de como padronizar células e substrato com dispositivos microfluídicos de PDMS permeáveis a gases utilizando pressão negativa. Obrigado por assistir e boa sorte com seu experimento.

a-versatile-method-of-patterning-proteins-and-cells

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Bioengenharia

Demonstramos um método simples para colocar as células em locais desejados sobre um substrato. Este método padrões células lançando um chip de silicone contendo micropoços preenchidos com células na superfície do substrato. Este método oferece uma nova forma de modular a sinalização difusíveis e juxtacrine entre as células.

Padronização de Células-Tronco Embrionárias Usando o Chip Bio Virar

Microcontact impressão é usado extensivamente às proteínas padrão e outras moléculas nas superfícies de materiais. Demonstramos as etapas básicas desse processo, carimbar padrões de fibronectina em vidro.

Impressão microcontact de Proteínas de Biologia Celular

De duas fases aquosas sistemas foram usados ​​para as populações em simultâneo múltiplos padrões de células. Este método fácil e rápido para a padronização de células tira vantagem da separação de fases de soluções aquosas de dextrano e polietileno glicol e a tensão interfacial que existe entre as duas soluções poliméricas.

Padronização de células co-cultura Usando duas fases aquosas Sistemas

Este protocolo descreve um método de microfabricação compatível para padronização de células em SiO 2. Um projeto parylene-C predefinido é photolithographically impresso em SiO 2. Após a incubação com soro (ou outra solução de ativação), as células aderem especificamente (e crescer de acordo com a conformidade de) subjacente parylene-C, enquanto está sendo repelido por SiO 2 regiões.

Padronização celular em photolithographically Definido Parylene-C: SiO<sub&gt; 2</sub&gt; Substratos

Neste método, utilizamos a fotopolimerização e técnicas de química clique para criar padrões de proteína ou peptídeo na superfície de hidrogel de polietileno glicol (PEG), fornecendo imobilizada sinais bioativos para o estudo da resposta celular em vitro .

Padronização bioativas proteínas ou peptídeos em hidrogel usando fotoquímica para aplicações biológicas

O método aqui apresentado utiliza micropadronização em conjunto com a imagem quantitativa para revelar a organização espacial dentro das culturas de mamíferos. A técnica é fácil de estabelecer em um laboratório de biologia celular padrão e oferece um sistema tratável para estudar padronização in vitro.

Mapeando a organização espacial emergente de células de mamíferos usando Micropatterns e imagens quantitativas

Nosso objetivo geral é entender como as células sentem sinais extracelulares que levam ao crescimento axonal direcionado. Aqui, nós descrevemos a metodologia da adsorção molecular Light-induced das proteínas, usadas para produzir micropatterns definidos de componentes da matriz extracelular a fim estudar os eventos específicos que governam o conseqüência do AXON e o pathfinding.

Adsorção molecular induzida por luz de proteínas usando o sistema PRIMO para Micropadronização para estudar as respostas celulares às proteínas da matriz extracelular

Aqui apresentamos um protocolo para células de micropattern em resolução unicelular usando a adesão programada pelo DNA. Este protocolo usa uma plataforma de fotolitografia benchtop para criar padrões de oligonucleotídeos de DNA em um slide de vidro e, em seguida, rotula membranas celulares com oligonucleotídeos complementares disponíveis comercialmente. A hibridização dos oligos resulta em adesão celularprogramada.

Padronização simples, acessível e modular de células usando DNA

O protocolo aqui apresentado permite a fabricação automatizada de micropatterns que padronizam a forma celular para estudar estruturas citoesquelletais dentro de células de mamíferos. Esta técnica fácil de usar pode ser configurada com sistemas de imagem disponíveis comercialmente e não requer equipamentos especializados inacessíveis aos laboratórios de biologia celular padrão.

Controle da Geometria Celular através de Micropatterning Assistido por Laser Infravermelho

Descrevemos melhorias em um método padrão para medir forças de tração celular, baseado na impressão de microcontatos com uma única etapa de padronização subtrativa de matrizes de pontos de proteínas de matriz extracelular em hidrogéis macios. Este método permite uma fabricação mais simples e consistente dos padrões da ilha, essenciais para controlar a forma do aglomerado celular.

Geração de Padrões para Microscopia de Tração de Micropattern

Tradicionalmente, a cultura celular é realizada em substratos planares que imitam mal o ambiente natural das células in vivo. Aqui descrevemos um método para produzir substratos de cultura celular com geometrias curvas fisiologicamente relevantes e proteínas extracelulares micropatteradas, permitindo investigações sistemáticas sobre o sensoriamento celular dessas pistas extracelulares.

Geração de Microambientes Celulares Multicue por UV-Fotopatterning de Substratos de Cultura Celular Tridimensional

Aprenda a padronizar células e substratos em microcanais usando vácuo de baixa pressão e ferramentas simples de bancada. Este método facilita o estudo de interações célula-célula e célula-proteína em laboratórios de biologia.

Um método versátil de padronização proteínas e células

Explorar mais vídeos