Avaliando o procedimento para realizar cistometria acordada em um modelo de mouse

O objetivo geral deste procedimento microcirúrgico é implantar um tubo intravesical na bexiga urinária e registrar a função do trato urinário inferior em um camundongo acordado. Este método pode ajudar na aquisição de dados experimentais reprodutíveis da cistometria acordada e no teste da função da bexiga em modelos de camundongos saudáveis e doentes. O principal objetivo desta técnica é fornecer um método padronizado baseado em dados experimentais para a realização de cistometria de enchimento em um modelo de camundongo.

Para preparar o tubo para implantação, primeiro corte um pedaço de sete centímetros de tubo pe10 e avance lentamente uma extremidade em direção a uma chama aberta para criar um flare, retirando rapidamente o tubo assim que o flare se desenvolver. Em seguida, use a configuração de baixa temperatura em uma pistola de cola para aplicar três gotas de cola quente multiuso a 4,5, 5 e 5,5 centímetros da extremidade alargada do tubo. Use uma tesoura para aparar as irregularidades das bolhas de cola.

Aplique cola quente em uma extremidade de uma agulha de calibre 30, que será usada para tampar o tubo pe10 após o implante. Em seguida, confirme a falta de resposta ao beliscão do dedo do pé e aplique pomada nos olhos do animal. Depois de esterilizar a parte superior das costas e a parte inferior do abdômen com álcool e betadine, faça uma incisão de 1,5 centímetro entre o bisturpo e coloque o animal em decúbito dorsal em cima de uma almofada de aquecimento a 37 graus Celsius coberta com cortinas estéreis sob um microscópio de dissecação.

Agora faça uma incisão na pele abdominal da linha média inferior de 1,5 centímetro. Seguido por uma incisão correspondente através da fáscia ao longo da linha alba e do músculo para expor a cúpula e a metade superior da bexiga urinária. Mantendo as vísceras abdominais úmidas com solução salina fisiológica morna, gire o animal para o lado para acessar a incisão na nuca.

Empurre um hemostático estreito por via subcutânea através da incisão para iniciar um canal subcutâneo nas costas e continuar ao longo da lateral do animal. Assim que a ponta do instrumento atingir o fundo da caixa torácica, gire a ponta em direção à linha média na parte interna do abdômen e continue avançando o hemostático até que a ponta fique exposta na incisão abdominal sob a camada muscular. Assim que a ponta do hemostático estiver dentro da incisão, aperte a pele acima do ombro e aplique tração para ajudar a estabilizar o animal até que a ponta do instrumento seja vista na incisão abdominal.

Agora use o hemostático para segurar a extremidade não alargada do tubo e retraia lentamente o hemostático, puxando a extremidade do tubo para fora da incisão na parte de trás do pescoço e ajustando a extremidade alargada do tubo para que fique diretamente acima da cúpula da bexiga. Estabilize a bexiga com um pequeno rolo de tecido sem fiapos. Coloque uma sutura de monofilamento 6-O frouxamente amarrada e não absorvível no topo da cúpula da bexiga.

Usando a mão não dominante e a micropinça curva Dumont número sete, segure a cúpula da bexiga e use uma agulha de calibre 21 na mão dominante para fazer uma cistotomia no ápice da cúpula. Sonde suavemente a cistotomia com um par fechado de micropinças curvas número cinco para garantir que o cateter possa passar facilmente pelo orifício e coloque a extremidade alargada do cateter pe10 na bexiga, empurrando o alargamento para baixo até o colo da bexiga para que não escorregue enquanto estiver preso. Com o laço de monofilamento colocado anteriormente ao tubo, aperte a sutura 6-O ao redor da cúpula da bexiga e do tubo o mais alto possível na bexiga para evitar reduzir artificialmente a capacidade da bexiga.

Alternativamente, coloque uma sutura solta na cúpula da bexiga, faça uma cistotomia como acabamos de demonstrar e insira a extremidade alargada do cateter na punção. Em seguida, amarre a sutura ao redor da cúpula e do tubo, conforme demonstrado para a sutura plana. Em ambos os casos, tome cuidado para prender o tubo sem causar ferimentos extensos na parede da bexiga.

Se muito tecido for retirado, a capacidade da bexiga será reduzida. Se for muito pouco, a conexão vazará. Para testar a vedação e a posição do tubo na bexiga, conecte uma seringa de insulina de 0,5 mililitro equipada com uma agulha de calibre 30 na extremidade distal do tubo e encha lentamente a bexiga com 0,1 a 0,2 mililitros de cloreto de sódio a 0,9% até que uma gota apareça no orifício uretral.

Se a vedação estiver incompleta, enrole as caudas de sutura ao redor da bexiga e retie. Em seguida, esvazie a bexiga por aspiração. Se não ocorrerem vazamentos na cúpula, prenda a bexiga com um par de micropinças curvas e puxe suavemente o tubo até que o alargamento esteja apoiado no interior da cúpula da bexiga.

Teste novamente a vedação usando o método descrito anteriormente. Apare as caudas da sutura, remova o rolo de tecido e retorne a bexiga à sua posição normal. Em seguida, use uma sutura 6-O para fechar a parede abdominal em duas camadas.

E gire suavemente o animal em seu abdômen. Insira a porção subcutânea da âncora metálica na incisão intraescapular e use um monofilamento 6-O para prender o tubo e a âncora com uma sutura vertical do colchão. Confirme se uma bolha de cola permanece acima e abaixo da pele para evitar que o tubo se solte e corte o tubo aproximadamente dois centímetros acima da pele.

Em seguida, insira suavemente um plugue de calibre 30 na extremidade do tubo para evitar que a urina vaze. Antes de realizar a leitura, use a tubulação pe50 para conectar a bomba de infusão, o transdutor de pressão e o giro de calibre 22. Em seguida, coloque o animal experimental anestesiado em decúbito ventral e remova o plugue de calibre 30.

Conecte a corda à âncora, deslize o cateter vesical na extremidade do pe50 e use cola quente para formar uma vedação à prova d'água. Coloque o mouse no chão de arame. E comece a gravação.

Então, quando o animal se recuperar da anestesia e a pressão da bexiga se estabilizar, comece a infundir cloreto de sódio a 0,9% a 0,6 mililitros por hora. Normalmente, no segundo dia após a inserção do cateter, desenvolve-se edema submucoso grave que ocupa metade da seção transversal da bexiga, levando à obstrução do lúmen. No quinto dia, o edema se resolve completamente, deixando as áreas submucosas infiltradas com células inflamatórias que invadiram parcialmente a muscular.

A maior extensão do inchaço do tecido observada nos dias dois e três se correlaciona com a micção comportamental correspondente, com os animais demonstrando uma função da bexiga significativamente prejudicada nesses momentos. Como esperado a partir dos dados histológicos, a frequência miccional se normaliza no quinto dia pós-operatório. A pressão intravesical em um animal acordado em movimento livre com artefatos de movimento mínimos é caracterizada por uma pressão basal de 10 a 15 centímetros de água, que pode permanecer inalterada ou pode aumentar gradualmente em não mais de 10 centímetros de água durante o ciclo de enchimento.

Seguido por um aumento repentino da pressão do estilo de pulso e queda durante a micção. Uma vez dominada, essa técnica pode ser concluída em 30 minutos se for executada corretamente. Ao tentar este procedimento, é importante lembrar de minimizar os danos à bexiga para preservar a fisiologia do tecido.

Após este procedimento, outros métodos, como a cistometria de enchimento de ciclo único, podem ser realizados para responder a perguntas adicionais sobre a capacidade funcional da bexiga. Depois de assistir a este vídeo, você deve ter uma boa compreensão de como implantar microcirurgicamente um tubo na bexiga urinária e usar cistometria de enchimento acordado para avaliar a função do trato urinário inferior em camundongos.