Name: Um novo método para modelar a encefalopatia traumática crônica em Drosophila (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-07-04T13:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 15 s
Description: Aprenda a induzir lesões cerebrais traumáticas fechadas em Drosophila melanogaster para modelar a encefalopatia traumática crônica. Este método permite impactos repetitivos de força ajustável diretamente na cabeça da mosca.

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Os autores não têm nada a divulgar.

1. Montagem do Dispositivo de Strike ( Figura 1 ) <ol><li> Remova o êmbolo de uma seringa de tuberculina de 1 ml. Corte o barril na marca de 1 mL. </li><li> Remova uma barreira de aerossol (3 mm de altura x 4 mm de diâmetro) de uma ponta de pipeta de 200 μL e use-a como pêndulo. Coloque o pêndulo dentro do tambor da seringa. Toque suavemente o cano para mover o pêndulo para a extremidade da ponta, com o lado plano cobrindo a abertura do bico. </li><li> Conecte a extremidade da ponta do barril a uma tubulação de plástico que esteja conectada ao regulador de fluxo de dióxido de carbono (CO 2 ) de uma estação de anestesia de Drosophila . </li><li> Segure o tambor verticalmente e aperte-o em um suporte de suporte de braçadeira padrão para que o pêndulo permaneça na parte inferior do barril. </li><li> Modifique uma ponta de pipeta de 200 μL para fazer o suporte da mosca. <ol><li> Corte 4 mm da ponta para fazer uma abertura de 0,8 mm de diâmetro, permitindo que apenas a cabeça da mosca seja exposta. NOTA: o thoRax e todas as outras partes do corpo da mosca permanecerão dentro da ponta da pipeta. </li></ol></li><li> Modifique uma ponta de pipeta de 1000 μL e uma tampa de agulha de seringa de 1 mL para fazer o conector. <ol><li> Cortar 44 mm da abertura da ponta. Pegue um comprimento de 6 mm de uma tampa da agulha de seringa de 1 mL e empurre-o firmemente no segmento restante da ponta da pipeta de 1.000 μL. </li></ol></li></ol> 2. Operação do Dispositivo de Strike <ol><li> Anestesiar uma única mosca feminina adulta de 2 dias usando CO 2 em uma almofada de mosca. </li><li> Mude-o com cuidado para o suporte da mosca usando uma escova fina. Toque o suporte suavemente para que a cabeça da mosca seja vista fora do extremo da ponta. Se a probabilidade de mosca estiver exposta fora da ponta, remova-a suavemente dentro da ponta com uma agulha de seringa de 1 mL embotada. NOTA: Certifique-se de manter a probabilidade de mosca dentro do suporte. Caso contrário, a mosca pode morrer por uma lesão de proboscis de sucção. </li><li> Aperte a mosca hoPara o tambor da seringa com o conector para que a cabeça da mosca esteja voltada para baixo. </li><li> Ajuste a pressão do gás a 100 kPa. Ajuste o caudal de acordo com o desenho da experiência. </li><li> Ligue e desligue rapidamente o interruptor alternativo do regulador de fluxo para que o pêndulo acerque a cabeça da mosca uma vez. </li><li> Levante o suporte da mosca e mova-o sobre uma almofada de mosca. Inverta o suporte da mosca e toque suavemente o lado para deixar a mosca sair. Deixe a mosca em um frasco vazio para se recuperar. </li></ol> 3. Rastreamento de movimento assistido por vídeo <ol><li> Encha uma placa de Petri de 6 cm de diâmetro com elastômero de silício transparente para fazer a arena de rastreamento. Deixe um espaço de 3 mm entre o silício e a tampa do prato para permitir que as moscas caminhem livremente, mas não voam. </li><li> Anestesiar quatro moscas do grupo sham ou tratado cada vez e colocá-las na arena. Deixe as moscas a 22 ° C durante 1 h. </li><li> Posicione uma câmera de dispositivo acoplado por carga (CCD) acima das arenas e grave durante 5 min.</li><li> Analise as trajetórias de movimento gravadas usando o software Ctrax (disponível gratuitamente na Caltech) 16 . Exporte os dados rastreados em um formato compatível com a linguagem de programação (por exemplo, Matlab) e analise os dados com base na distância percorrida por quadro 17 . Calcule a distância média a pé para cada mosca e combine-a com todas as outras moscas / grupos gravados para obter uma distância cumulativa média percorrida pela população de arquivos no mesmo grupo. </li></ol>

<ol><li>McKee, A. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+first+NINDS%2FNIBIB+consensus+meeting+to+define+neuropathological+criteria+for+the+diagnosis+of+chronic+traumatic+encephalopathy%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Neuropathol%22%5BJournal%5D)">The first NINDS/NIBIB consensus meeting to define neuropathological criteria for the diagnosis of chronic traumatic encephalopathy.</a> Acta Neuropathol. 131, 75-86 (2016).</li>
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<li>Omalu, B. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chronic+traumatic+encephalopathy+in+a+national+football+league+player%3A+part+II%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosurgery%22%5BJournal%5D)">Chronic traumatic encephalopathy in a national football league player: part II.</a> Neurosurgery. 59 (5), 1086-1092 (2006).</li>
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<li>Theadom, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Frequency+and+impact+of+recurrent+traumatic+brain+injury+in+a+population-based+sample%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurotrauma%22%5BJournal%5D)">Frequency and impact of recurrent traumatic brain injury in a population-based sample.</a> J Neurotrauma. 32 (10), 674-681 (2015).</li>
<li>Drobysheva, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+optimized+method+for+histological+detection+of+dopaminergic+neurons+in+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22J+Histochem+Cytochem%22%5BJournal%5D)">An optimized method for histological detection of dopaminergic neurons in Drosophila melanogaster.</a> J Histochem Cytochem. 56 (12), 1049-1063 (2008).</li>
</ol>

Este trabalho foi apoiado pelo fundo de iniciação da faculdade de medicina da Universidade Johns Hopkins para LC

Modelos de animais que modelam fielmente as características de CTE, incluindo alterações neurofisiológicas, características neuropatológicas e déficits neurocomportamentais, são essenciais para descobrir mecanismos de doenças e para desenvolver alvos diagnósticos e terapêuticos. É compreensível que nenhum modelo animal de uma doença humana seja perfeito na imitação de todos os pontos finais clinicamente relevantes. No entanto, acreditamos que um modelo CTE robusto deve satisfazer os seguintes três requisitos: (1) o impa...

A Encefalopatia Traumática Crônica (CTE) recentemente foi reconhecida como um distúrbio neurodegenerativo distinto, separado de outras tauopatias, como a doença de Alzheimer 1 . Ao contrário da doença de Alzheimer e outras tauopatias comuns - cujos fatores de risco mais importantes estão avançando em idade e história familiar de demência, o CTE, como indicado pelo seu nome, implica uma estreita associação com história de trauma cerebral, muito provavelmente visto em atletas de esportes de contato, Como boxers e jogadores de futebol, bem como em veteranos militares 2 , 3 , 4 , 5 . É pensado para ser iniciado por golpes repetidos de concussão e subconcussão na cabeça. Os pacientes podem apresentar sintomas e sinais como déficits cognitivos, mudanças de humor e comportamento e disfunção do movimento, que se sobrepõem significativamente com a doença de Alzheimer, frontotemporalDemência, demência do corpo de Lewy e doença de Parkinson 6 . Em contrapartida, os exames pós-mortem do tecido cerebral revelam um padrão distinto de acumulação de tau hiperfosforilada em torno de pequenos vasos sanguíneos nas profundezas dos sulcos corticais, uma característica patognomônica não observada nas outras condições degenerativas 7 . No entanto, até agora, muito pouco se sabe sobre a patogênese que leva à manifestação da doença. Isto é em grande parte devido à falta de um modelo animal fiel - apenas recentemente foram gerados modelos de roedores 5 , 8 . Esses organismos modelo apresentam as desvantagens dos cuidados intensivos em custos e uma vida útil relativamente longa, que não são adequadas para estudos de doenças neurodegenerativas. Em comparação com homólogos de mamíferos, animais invertebrados, como Drosophila, são uma excelente alternativa, com sua manutenção econômica,Ferramentas extensivas para dissecar determinantes genéticos e vida útil relativamente curta 9 . Notavelmente, a mosca e os cérebros humanos compartilham caminhos molecular e celular evolutivamente conservados, bem como semelhanças anatômicas 10 , 11 , 12 . Dois modelos engenhosos de Drosophila para estudar lesão cerebral traumática foram relatados anteriormente 13 , 14 . O primeiro dispositivo &quot;High Impact Trauma&quot; (HIT) projetado por Katzenberger e colegas continha moscas de movimento livre em um frasco de plástico que estava ligado à extremidade livre de uma mola metálica 13 , 15 . Quando o frasco de plástico foi inclinado verticalmente e liberado, ele atingiu uma almofada de poliuretano e transmitiu trauma para as moscas enquanto eles saltavam para a parede do frasco e se recuperaram. Em contraste, Barekat e colegas desenharam um método de entrega diferente, nósNa plataforma de homogeneizador Omni Bead Ruptor-24 14 . As moscas foram incapacitadas com CO 2 e colocadas em um tubo de rosca de rosca de 2 mL que foi fixado ao homogeneizador e submetido a condições de agitação pré-programadas. Um dos benefícios do uso do sistema de homogeneizador de tecido é que o experimentador poderia modular a intensidade do ferimento, a duração da lesão e o número de episódios de lesões. No entanto, ambos os regimes sofrem a mesma desvantagem: lesões primárias na cabeça são inflacionadas aleatoriamente em termos de localização e força de impacto. Além disso, ambos os métodos resultaram em mortalidade considerável, causada por danos colaterais inevitáveis ​​a outras partes do corpo e órgãos internos. Aqui, descrevemos um novo método para induzir o mTBI nas moscas da fruta. Nosso aparelho consiste em um pêndulo balístico a gás. Comparado com os modelos Drosophila existentes 14 , 15 , nosso método tem a vantagem única de fornecer medidasImpacto de urable, dirigido apenas para a cabeça de mosca de movimento livre, permitindo o controle preciso de vários fatores, como a gravidade do impacto, o intervalo de tempo entre os impactos e o número total de impactos sofridos.

<table><tbody><tr><td>Barreira de aerossol</td><td>USA Scientific</td><td>1120-8810</td><td>Usado como um impactor</td></tr><tr><td>200 &#956; L Ponta de Pipeta</td><td>USA Scientific</td><td>1111-0706</td><td>Usada como suporte de cabeça de mosca</td></tr><tr><td>1000 &#956; Ponta de Pipeta L</td><td>USA Scientific</td><td>1122-1830</td><td>Usada como conector</td></tr><tr><td>Seringa Tuberculina de 1 mL</td> Placas de Petri <td>Becton Dickinson</td><td>309625</td><td></td></tr><tr><td>60 mm</td><td>Fisher Scientific</td><td>FB0875713A</td><td>Usado como um regulador de fluxo de arenas de rastreamento</td></tr><tr><td></td><td>Genesee Scientific</td><td>59-122WC</td><td></td></tr><tr><td>Suporte/suporte de grampo padrão</td><td>EISCO Scientific</td><td>CH0688</td><td></td></tr><tr><td>Pincel Fino</td><td>Genesee Scientific</td><td>59-204</td><td></td></tr><tr><td>Flypad</td><td>Genesee Scientific</td><td>59-114</td><td></td></tr><tr><td>Sylgard Silicone Elastômero</td><td>Dow Corning</td><td>4019862</td><td></td></tr><tr><td>Câmera CCD</td><td>Microsoft&nbsp;</td><td>HD-5000</td><td></td></tr><tr><td>Ctrax Walking Fly Tracker</td><td>Caltech</td><td>Ctrax 0.2.11</td><td></td></tr><tr><td>MATLAB Caixa de ferramentas de processamento de imagem</td><td>MATLAB</td><td>R2015b</td><td></td></tr></tbody></table>

um novo método para modelar a encefalopatia traumática crônica em<em&gt; drosophila</em

A Novel Method to Model Chronic Traumatic Encephalopathy in Drosophila

A encefalopatia traumática crônica (CTE) é uma doença neurodegenerativa estabelecida que está intimamente associada à exposição a lesões cerebrais traumáticas leves repetitivas (mTBI). Os mecanismos responsáveis ​​por suas complexas mudanças patológicas permanecem bastante evasivos, apesar de um consenso recente para definir os critérios neuropatológicos. Aqui, descrevemos um novo método para desenvolver um modelo de CTE em Drosophila melanogaster ( Drosophila ), na tentativa de identificar os genes e caminhos chave que levam ao acúmulo de tau hiperfosforilizado característico e a morte neuronal no cérebro. Os impactos de resistência ajustável para infligir feridas fechadas leves são entregues diretamente na cabeça da mosca, submetendo a cabeça a aceleração e desaceleração rápidas. Nosso método elimina os problemas potenciais inerentes a outros modelos de mTBI de Drosophila ( por exemplo, a morte de animais pode ser induzida por danos aOutras partes do corpo ou órgãos internos). O menor cuidado de animais com uso intensivo de mão-de-obra e custo, vida curta e extensas ferramentas genéticas tornam a mosca da fruta ideal para estudar a patogênese do CTE e possibilitar a realização de telas genéticas e farmacológicas avançadas em grande escala, genômicas. Prevemos que a caracterização contínua do modelo gerará importantes insights mecanísticos sobre prevenção de doenças e abordagens terapêuticas.

Para estabelecer um modelo CTE usando Drosophila adulta, determinamos a eficácia do nosso dispositivo ao infligir um único ferimento na cabeça fechada. Para eliminar as variações relativas ao genótipo, ao sexo ou à idade, utilizamos moscas fêmeas Canton-S WT de 2 dias na experiência. Poderíamos facilmente controlar a força do pêndulo, regulando a taxa de fluxo de CO 2 a uma pressão de gás constante de 100 kPa. As moscas expostas a uma única greve com a taxa de fluxo m...

Aqui, descrevemos uma nova abordagem para infligir lesões cerebrais traumáticas de cabeça fechada em Drosophila melanogaster . Nosso método tem a vantagem de entregar diretamente impactos repetitivos com força ajustável para a cabeça sozinho. Uma maior exploração do sistema de invertebrados ajudará a iluminar a patogênese da encefalopatia traumática crônica.

Um novo método para modelar a encefalopatia traumática crônica em<em&gt; Drosophila</em

Chronic Traumatic Encephalopathy (CTE) is an established neurodegenerative disease that is closely associated with exposure to repetitive mild Traumatic ...

O objetivo geral deste novo procedimento é provocar lesões cerebrais fechadas na mosca-das-frutas, Drosophila, a fim de estabelecer um novo modelo de encefalopatia traumática crônica. Este método pode ajudar a responder perguntas-chave na área da encefalopatia traumática crônica, como a forma pela qual o trauma repetitivo induz a degeneração neuronal. A principal vantagem desta técnica é que ela aplica impactos repetitivos de intensidades ajustáveis diretamente na cabeça da mosca, sem causar danos a outras partes do corpo do animal.A demonstração prática deste método é fundamental, pois a montagem do dispositivo e os passos de carregamento das moscas são difíceis de aprender, já que a cabeça de Drosophila é muito pequena e é importante aplicar o impacto somente na cabeça. Para montar o aparelho usado para concussão ou impacto das moscas-das-frutas, primeiro prepare a parte do impactador do aparelho. Remova o êmbolo de uma seringa tuberculínica de um mililitro feita de policarbonato e, em seguida, corte o corpo da seringa na marca de um mililitro.Para um impactor, utilize a barreira de aerossol encontrada em uma ponteira de pipeta de 200 microlitros. Esse impactor deve ter três milímetros de comprimento e quatro milímetros de diâmetro. Em seguida, coloque o impactor dentro do corpo da seringa com o lado plano voltado para o bico.Para fornecer força, conecte o corpo da seringa a um regulador de fluxo de dióxido de carbono. O regulador deve possuir um interruptor liga-desliga e bom controle da taxa de fluxo de gás. Em seguida, prenda o corpo verticalmente a um suporte de ferro, de modo que o impactador caia até o fundo do corpo.Em seguida, prepare o suporte para mosca. Comece com uma ponteira de pipeta de 200 microlitros. Corte a ponta da pipeta a cinco milímetros da extremidade menor para obter uma abertura com diâmetro de 8 milímetros.A cabeça de uma mosca passará por esse orifício, mas o tórax não passará. Por fim, prepare o suporte para a mosca e o dispositivo de impacto. Primeiro, corte a ponta de uma pipeta de um mililitro a 44 milímetros da abertura menor.Em segundo lugar, corte um segmento de seis milímetros do protetor da agulha de uma seringa de um mililitro. Em seguida, empurre os dois juntos. Anestesie uma única mosca fêmea adulta de dois dias de idade utilizando dióxido de carbono.A partir do suporte de dióxido de carbono, use um pincel fino para transferir cuidadosamente a mosca para o porta-amostras. Em seguida, bata suavemente no porta-amostras até que a cabeça apareça pela extremidade. Se o probóscide estiver exposto, use uma agulha de seringa de um mililitro com a ponta rombuda para recolocá-lo suavemente no interior da extremidade.É fundamental manter o corpo da mosca, especialmente a parte bucal, dentro do suporte. Caso contrário, a mosca pode morrer devido a danos nos órgãos internos ou por não conseguir ingerir alimento. Em seguida, ajuste a pressão do gás para 100 kilopascals e regule o fluxo conforme necessário.Uma vez que a mosca esteja carregada, aperte o suporte ao corpo da seringa usando o conector, de modo que a cabeça da mosca fique voltada para baixo. Em seguida, utilizando o interruptor de alternância, envie uma rajada de gás que movimenta o impactador para atingir a mosca uma única vez e somente uma vez. Agora, desconecte o suporte da mosca e devolva a mosca ao coxim de dióxido de carbono.Coloque a mosca em um tubo vazio até que ela se recupere. Mantenha uma mosca por tubo. A recuperação leva apenas alguns minutos.Repita o processo para testar quatro moscas por grupo experimental. O processamento de dois grupos, um de teste e um controle, deve levar apenas de 20 a 30 minutos. Trate os controles exatamente como os animais de teste, exceto por não incluir uma barreira de aerossol no tubo do impactador.Para rastrear os movimentos das moscas em uma placa de Petri, primeiro, preencha uma placa de seis centímetros com elastômero de silicone transparente para criar a arena de rastreamento. Deixe uma folga de três milímetros entre o silicone e a tampa para que as moscas possam andar livremente na folga, mas não possam voar. Abaixo da arena de rastreamento, utilize um fundo branco.Em seguida, anestesie quatro moscas do mesmo grupo de tratamento e coloque-as na arena. Deixe as moscas aclimatarem-se à arena por uma hora, em ambiente totalmente iluminado e a cerca de 22 graus Celsius. Não mais quente que a temperatura ambiente.Após uma hora, utilize uma câmera com dispositivo acoplado por carga para registrar a atividade da mosca no arena durante cinco minutos. Após a gravação de cinco minutos, anestesie as moscas no arena e devolva-as para um novo frasco de criação. Em seguida, descarte o arena.Posteriormente, analise as gravações utilizando o software Ctrax, disponível gratuitamente. Este software gera dados de rastreamento, que podem ser exportados em um formato compatível com linguagens programáveis, como o formato MATLAB. A partir dos dados, calcule a distância percorrida por quadro, a distância média de locomoção para cada mosca e a distância média percorrida por mosca.Para significância estatística, espera-se testar cerca de 100 moscas por grupo de tratamento. Para estabelecer um modelo de encefalopatia traumática crônica, a eficácia de uma única lesão em crânio fechado provocada pelo aparelho de impacto em diferentes velocidades foi analisada utilizando fêmeas de dois dias de idade da linhagem Canton-S. A pressão do gás foi mantida em 100 quilopascals.As moscas expostas a um único impacto na vazão mais alta testada apresentaram defeitos externos mínimos. Apesar da ausência de evidências claras de danos externos, lesões em uma vazão de 15 litros por minuto foram agudamente letais, resultando em menos de 10% de sobrevivência dentro de 24 horas. A sobrevivência aumentou com vazões mais baixas.Obteve-se 100% de sobrevivência a cinco litros por minuto ou menos, portanto cinco litros por minuto foi selecionado como o padrão para o modelo. Pouco depois de serem atingidas, as moscas recuperaram gradualmente sua mobilidade em até quatro minutos. A recuperação dos controles foi cerca de um minuto mais rápida.Após o impacto, a rastreabilidade do movimento com auxílio de vídeo foi utilizada para medir a função locomotora. Durante os dois dias após o impacto, a locomoção retornou lentamente ao normal. Essa evidência de recuperação gradual está de acordo com a recuperação da ETC em humanos.Para avaliar os efeitos a longo prazo, foi aplicado um protocolo de lesão traumática cerebral repetitiva com cinco impactos ao longo de cinco dias. Vinte dias após o tratamento, a locomoção dos indivíduos sobreviventes em cada grupo foi comparada e o grupo tratado claramente caminhou menos. A longevidade do grupo tratado também foi substancialmente reduzida, com uma mediana de 26 dias em comparação com 37 dias para os controles.Após seu desenvolvimento, esta técnica abre caminho para pesquisadores na área de lesão cerebral traumática leve e repetitiva explorarem mecanismos patogênicos no modelo animal clássico Drosophila melanogaster. Ao tentar realizar este procedimento, é importante lembrar-se de proteger o probóscide, tórax e abdômen do impacto direto pela barreira de aerossol.

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Research

JoVE Journal

Neuroscience

Neurociência

Ensaios de comportamento para as funções de medição de locomoção, aprendizado e habilidades de memória...

Locomotor ensaio, Aprendizagem e Memória Os déficits no Drosophila Modelos de neurodegeneração

Este vídeo descreve como rastrear moscas que andam livremente para avaliar sua capacidade geral de locomoção. O protocolo apresentado demonstra a configuração do ensaio e a análise de dados usando software de rastreamento de vídeo.

Rastreando moscas que andam livremente: um método para avaliar a locomoção em Drosophila

Este vídeo demonstra um procedimento para infligir uma lesão traumática de cabeça fechada em moscas Drosophila anestesiadas usando um dispositivo de ataque com um impactador movido a gás. A lesão afeta a função neuronal e prejudica a capacidade de caminhar.

Uma técnica para infligir lesão cerebral traumática de cabeça fechada em moscas Drosophila

O vídeo demonstra o uso de um dispositivo de trauma de alto impacto (HIT) para induzir traumatismo cranioencefálico (TCE) de cabeça fechada em Drosophila. O TCE causa trauma cerebral mecânico que afeta a função neuronal, o que, com o tempo, leva à neurodegeneração e mortalidade.

Um método para infligir traumatismo cranioencefálico fechado na cabeça em Drosophila

Este vídeo demonstra a indução de lesão cerebral traumática penetrante no cérebro da drosófila. As moscas recém-emergidas são selecionadas, anestesiadas e posicionadas sob um microscópio estéreo equipado com fluorescência. O corpo do cogumelo que expressa GFP é identificado e um pino Minutien é inserido para causar ferimentos. As moscas podem se recuperar para estudos posteriores.

Induzindo Lesão Cerebral Traumática Penetrante em Moscas Drosophila Adultas

Descrevemos a seguir os processos de extracção e purificação de ARNm e metabolitos...

Purificação de Transcrições e metabolitos de<em&gt; Drosophila</em&gt; Cabeças

Aqui nós descrevemos dois ensaios que foram estabelecidos para estudar neurodegeneração idade-dependente de dopaminérgicos (DA)...

Avaliando fenótipos Neurodegenerativas em<em&gt; Drosophila</em&gt; Neurônios dopaminérgicos subindo Ensaios e toda Imunocoloração Cérebro

Apresentamos um ensaio de geotaxia negativa otimizado, barato e confiável em Drosophila melanogaster como modelo para doenças neurodegenerativas. Sendo mais sensível a defeitos locomotores leves, este ensaio ajudará a rastrear possíveis interações genéticas e alvos de drogas.

Análise Quantitativa de Defeitos de escalada em um modelo de Drosophila de doenças neurodegenerativas

Aqui nós descrevemos um método para infligir a cabeça fechado traumatismo crânio-encefálico (TCE) em Drosophila. Este método oferece um portal para investigar os mecanismos celulares e moleculares que estão na base patologias TCE, utilizando a vasta gama de ferramentas experimentais e técnicas disponíveis para as moscas.

Um Método para infligir Cabeça Fechada Lesão cerebral traumático em<em&gt; Drosophila</em

Drosophila é amplamente usado como um sistema modelo para estudar a neurodegeneração. Este protocolo descreve um método pelo qual a degeneração, como determinado pela formação de vacúolo no cérebro, podem ser quantificados. Ela também minimiza os efeitos devido ao procedimento experimental por meio de processamento e controlo de moscas e de seccionamento experimentais como uma amostra.

Mass Histologia para quantificar neurodegeneração em<em&gt; Drosophila</em

Este protocolo descreve a dissecção e imunocoloração de adultos Drosophila melanogaster tecidos do cérebro. Especificamente, este protocolo destaca o uso da Drosophila cogumelo corpo e fotoreceptor neurônios como subconjuntos neuronal de exemplo que podem ser usados com precisão para descobrir princípios gerais subjacentes a muitos aspectos do desenvolvimento neuronal.

Dissecção e imunofluorescência coloração de cogumelo corpo e fotoreceptor neurônios em cérebros adultos Drosophila melanogaster

Aprenda a induzir lesões cerebrais traumáticas fechadas em Drosophila melanogaster para modelar a encefalopatia traumática crônica. Este método permite impactos repetitivos de força ajustável diretamente na cabeça da mosca.

Um novo método para modelar a encefalopatia traumática crônica em

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