Um método para testar a eficácia do lavagem das mãos para a remoção de patógenos infecciosos emergentes

O objetivo geral deste experimento é testar a eficácia comparativa das opções de lavagem das mãos em mãos que foram inoculadas experimentalmente com um organismo de interesse. Este método pode fornecer informações sobre questões-chave para ajudar na prevenção de doenças infecciosas. Permitindo que os pesquisadores investiguem a eficácia da lavagem das mãos para determinados organismos de interesse.

A principal vantagem dessa técnica é que ela é flexível e pode ser adaptada para permitir a investigação de muitos organismos diferentes. Tivemos a ideia desse método pela primeira vez quando percebemos que soluções de cloro estavam sendo usadas para lavar as mãos em contextos de Ebola e não havia evidências da eficácia disso na época. Depois de recrutar indivíduos elegíveis e preparar soluções para lavar as mãos de acordo com o protocolo de texto, prepare as bactérias listrando uma fita não patogênica de E.Coli em placas de ágar LB e incube as culturas a 37 graus Celsius por 24 horas para obter colônias únicas.

Um dia antes do início do experimento, use um lubrificante estéril para pegar uma única colônia do prato e inocular 10 mililitros de caldo LB. Incubar as culturas a 37 graus Celsius, com agitação, durante a noite. Na manhã do experimento, adicione um mililitro da cultura noturna a 20 mililitros de caldo LB fresco.

Incubar as culturas durante cerca de duas horas e meia para atingir uma densidade de sal superior a 10 elevado ao oitavo UFC por mililitro. Em seguida, use um espectrofotômetro para estimar a concentração da cultura. Imediatamente antes do teste, prepare um inóculo composto por 68% de bactérias ou suspensão viral e 32% de cloreto de sódio ou carga do solo.

Agite ou bata suavemente para misturar. Depois de preparar os voluntários de acordo com o protocolo de texto, teste o pH da pele de cada voluntário colocando uma sonda de pH de pele de ponta plana no espaço entre o indicador e os dedos médios. Certifique-se de que o eletrodo esteja plano contra a pele e registre a leitura do pH.

Em seguida, faça com que o voluntário junte as duas mãos. Em seguida, pipete cuidadosamente 750 microlitros do inoculado em cada palma para espetar as mãos. Ao cravar as mãos dos voluntários, é importante que nenhum inóculo seja derramado.

Lembre aos voluntários que isso é importante e dê a eles a oportunidade de praticar com água antes de iniciar o procedimento. Peça aos voluntários que esfreguem suavemente as mãos até que todas as superfícies da mão estejam codificadas com o inoculado, enquanto submetem as mãos ao mínimo de atrito possível. Instrua os voluntários a manter as mãos paradas e afastadas do corpo por mais 30 segundos para permitir que o inoculado seque.

Em seguida, lave as mãos usando um dos métodos descritos no protocolo de texto. Para lavar as mãos com sabão, use 10 mililitros de água ultrapura para molhar as mãos. Peça aos voluntários que ensaboem as mãos com sabão e depois esfreguem as mãos por mais 20 segundos.

Enxágue as mãos do voluntário despejando 500 mililitros de água ultrapura em temperatura ambiente através de um funil a uma taxa de fluxo de 1,5 litros por minuto em um grande saco de coleta de amostras e processe a amostra em duas horas. Para todas as soluções de cloro, despeje 200 mililitros de solução de cloro sobre as mãos do voluntário através de um funil a uma taxa de fluxo de 1,5 litros por minuto e peça aos voluntários que esfreguem bem as mãos. Como outro método de lavagem das mãos, peça aos voluntários que usem desinfetante para as mãos para lavar as mãos.

É importante que todas as superfícies da mão sejam esfregadas suavemente, instrua os participantes a se concentrarem em cada parte, palmas das mãos, unhas, entre os dedos enquanto esfregam e, em seguida, certifique-se de que toda a mão foi enxaguada. Para o controle A, após a inoculação, não execute uma etapa de lavagem das mãos. Para o controle B, use apenas água ultrapura em temperatura ambiente para realizar a lavagem das mãos através de um funil com uma taxa de fluxo conhecida.

Após a lavagem das mãos, coloque imediatamente a mão de cada voluntário selecionada para teste em um saco de amostra contendo 75 mililitros de Leeuwin até o pulso. Segure a parte superior da bolsa firmemente ao redor do pulso. Peça aos voluntários que esfreguem suavemente a mão na solução por 30 segundos, tomando cuidado para alcançar entre os dedos e embaixo das unhas.

Massageie suavemente a mão de fora da bolsa por 30 segundos para garantir que toda a mão seja bem enxaguada no Leeuwin, até o pulso. Feche o saco e processe-o de acordo com o ensaio apropriado. Antes de repetir o processo com cada método de lavagem das mãos, peça aos voluntários que usem sabão em água morna para lavar bem as mãos na pia.

Por fim, use etanol 70% para borrifar as mãos do voluntário até que estejam revestidas dos dois lados e deixe-as secar. Para analisar as amostras, configure uma chama e um coletor de filtração com funis de filtração estéreis e uma conexão de vácuo. Esterilize as pinças mergulhando-as em etanol e flamejando-as.

Use a pinça para colocar um filtro de 0,45 mícron no coletor de filtração com a grade voltada para cima. Em seguida, use uma pequena quantidade de PBS estéril para molhar o filtro. Coloque o funil na base e pipete ou despeje a amostra diretamente no filtro.

Acione o vácuo até que toda a amostra tenha passado pela membrana. Em seguida, use PBS estéril para enxaguar as laterais do funil e engatar o aspirador novamente. Em seguida, remova o funil, esterilize a pinça com chama e levante o filtro da base.

Em seguida, coloque o filtro suavemente no meio em uma placa de Petri com a grade voltada para cima, garantindo que o filtro fique nivelado com a superfície. Inverta as placas e incube a 37 graus Celsius por 24 horas. Após a incubação, conte as colônias de E.Coli e registre os dados.

Realize a análise dos dados de acordo com o protocolo de texto. O protocolo descrito neste vídeo foi completado com 18 voluntários testados com E.Coli e Phi6, para E.Coli sem carga de solo, lavagem das mãos com HTH, NaDCC e NaOCl estabilizado, todos resultaram em reduções logarítmicas significativamente maiores do que a lavagem das mãos apenas com água. Com a carga do solo, o HTH resultou em uma redução significativamente maior de E.Coli do que a lavagem à mão apenas com água com sabão e ABHS.

Não houve diferença significativa entre os métodos para Phi6 sem carga de solo. No entanto, para Phi6 com carga de solo, a água sozinha resultou em uma maior redução de log do que ABHS ou NaOCl estabilizado, e a lavagem das mãos com sabão em uma redução de log maior do que o ABHS, estabilizou NaOCl e gerou NaOCl. O HTH também teve uma maior redução logarítmica do que o ABHS e o NaOCl e o NaDCC estabilizados resultaram em uma maior redução logarítmica do que o NaOCl e o ABHS estabilizados.

Conforme demonstrado nesses gráficos, o cloro resultou em uma redução logarítmica significativamente maior de E.Coli persistente na água de enxágue do que a lavagem das mãos com sabão. Finalmente, o mesmo padrão foi encontrado em Phi6 sem carga de solo com todas as soluções de cloro, resultando em uma redução significativamente maior de Phi6 na água de enxágue do que lavar as mãos com sabão. Não houve reduções significativas na água de enxágue com Phi6 e na carga do solo.

Ao tentar este procedimento, é importante lembrar que os resultados de eficácia para cada condição são calculados comparando os resultados dos dois controles. Isso significa que é muito importante executar as etapas de forma consistente para cada opção de lavagem das mãos.