Name: Dissecação do pâncreas Mouse para análise histológica e perfis metabólicos (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-08-19T14:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 21 s
Description: Aprenda a dissecar o pâncreas de camundongo para análise histológica e perfis metabólicos. Este método demonstra coleta de sangue terminal por punção cardíaca e preservação de tecidos para estudos de doenças pancreáticas.

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MAK reconhece apoio para este trabalho a partir do National Institutes of Health / número - 1R15CA152985-01A1 de concessão do National Cancer Institute. Este projeto também foi apoiado pela Miami University graduação prêmio programa de pesquisa, as oportunidades de doutorado-graduação de Universidade de Miami para programa de bolsas e o programa de estudiosos de Verão de Universidade de Miami.

os procedimentos realizados no vídeo e descritos a seguir foram aprovados pelo Comitê de uso (IACUC) na Universidade de Miami e institucional Cuidado Animal.
 1. preparação e estímulo teste <ol><li>estabelecer duas áreas distintas para o procedimento cirúrgico, mesa de operações e a tabela de pós operação. Estágio de ambas as áreas com todos os materiais e utensílios necessários.
	Tabela de <ol><li>fase a operar sob uma capa exalada. Organizar a mesa com o equipamento de uma forma que permite o desempenho contínuo e sem entraves do processo.</li>
		<li>Estabelecer uma tabela pós-operatória na mesma sala e perto da mesa principal da operação. Manter ambas as tabelas como ambientes estéreis durante o procedimento.</li>
	</ol></li> <li>Lugar o seguinte fornece na mesa de operações: um frasco com tampa, um tubo de 15 mL, um par de tesouras cirúrgicas, uma garrafa de etanol a 70%, duas placas de espuma, duas pinças, duas seringas de calibre 1 mL 21, dois tubos de 50 mL, tubo de centrifugação de uma , um frasco criogênico, quatro almofadas cirúrgicas, dez pinos, um distribuidor de toalhetes esterilizantes e um recipiente de objectos cortantes.</li>
	<li>Coloque o seguinte material na mesa de pós operação: uma balança analítica, um 4 L dewar de nitrogênio líquido, uma rasa grande boca dewar, um rack de microtubo flutuante, um par de tesouras cirúrgicas, pinças de dois, quatro frascos criogênicos e um dispensador de Toalhetes esterilizados.</li>
	<li>Preencher um de 50 mL e um tubo de 15 mL, volume 75% com formalina.</li>
	<li>Usando um alfinete em cada esquina, apor um bloco cirúrgico para uma placa de espuma de aproximadamente 30 cm x 30 cm para servir como o tabuleiro de dissecação. Use os restantes quatro pinos durante a operação. Preparar uma placa de espuma menor com um bloco cirúrgico para transferir os órgãos à tabela pós-operatório. 
	Cuidado: Isoflurano (99,9%) é um químico do tóxico e deve ser usado em uma capa do respiradouro para garantir o máximo nível de segurança da eliminação de resíduos de gás anestésico 8. Informações adicionais sobre os riscos para os pesquisadores associados com o uso do método aberto-gota utilizando isoflurano podem ser encontradas em um artigo por Taylor e Mook 8.</li>
	<li>Colocar um bloco cirúrgico, o frasco de vidro e embeba com algumas gotas de isoflurano (99,9%) e coloque um papel toalha por cima para evitar o contato direto do mouse com o isoflurano. Da mesma forma, use um bloco cirúrgico para o restante do tubo de linha e mergulhe com algumas gotas de isoflurano e coloque uma almofada adicional por cima para evitar o contato direto entre o rato e o isoflurano.</li>
	<li>Pour nitrogênio líquido na boca larga superficial dewar até o máximo preencher linha é alcançado.</li>
	<li>Lugar o mouse selecionado para dissecção para a anestesia de câmara, ou seja, o frasco de vidro com um pad embebido com algumas gotas de isoflurano (99,9%) coberto com a tampa, para ~ 1 min. 
	Nota: Esse tempo varia de rato de rato. Uma vez que o mouse é inconsciente, removê-lo da câmara e colocá-lo no quadro de funcionamento.</li>
	<li>Oriente do mouse para que o lado ventral é uma mentira e com sua cabeça apontada longe o cientista. Coloque a cabeça dentro do tubo alinhado com um bloco cirúrgico embebido com algumas gotas de isoflurano (99,9%) e executar um teste de estímulo uma pitada de pé para garantir que o mouse não responde a estímulos.
	<ol><li>Se este teste falha e o mouse responde para o teste do beliscão de pé, repita o passo 1.8.</li>
	</ol></li></ol> 2. Inicial de incisão, punção de coração e eutanásia <ol><li>Pin dos membros do rato para a placa de espuma cirúrgica e molhado do lado ventral do mouse com etanol a 70%.</li>
	<li>Aperte a pele/pele perto da abertura uretral com pinça e puxe ligeiramente para cima. Fazer uma incisão com a tesoura cirúrgica através da cavidade abdominal a partir da linha mediana, a abertura uretral e terminando no queixo.
	<ol><li>Perto de ponto de partida da incisão inicial, pegue um dos lados da pele/pele com a pinça e fazer outra incisão com a tesoura para baixo e na diagonal em direção a pata traseira.</li>
		<li>Repetir isto da mesma maneira do lado oposto. 
		Nota: A pele/pele pode ser fixada para baixo para criar uma abertura mais larga, mas não é necessária.</li>
	</ol></li> <li>Localizar o coração e remover o pericárdio, que é o saco em torno do coração, para evitar entupimento da agulha da seringa.
	<ol><li>Segure o pericárdio com a pinça e cortar com a tesoura. Realizar a punção do coração inserindo cuidadosamente a agulha da seringa o coração e comece a retrair o êmbolo lentamente.</li>
		<li>Para coleta de sangue ideal, utilize o êmbolo da agulha para imitar a ação de bombeamento do coração e evitar desenhar rapidamente. 
		Nota: Normalmente cerca de 1 mL de sangue pode ser coletado.</li>
		<li>Depois de concluir a coleta de sangue, dissipar o sangue no tubo de centrífuga e descarte a seringa no recipiente de objectos cortantes.</li>
		<li>Depois que é feita a punção do coração, realizar eutanásia removendo os anexos conectando o coração. 
		Nota: Heparina, um anticoagulante, não foi adicionada à seringa neste procedimento antes da punção do coração para permitir que o sangue a coagular para coleta de soro neste estudo específico. No entanto, se o pesquisador quis evitar a coagulação de sangue para coleta de plasma, heparina pôde ser adicionada à seringa antes da punção do coração.</li>
	</ol></li> <li>Se o estudo envolve a determinação do genótipo do rato, cortar uma parte da orelha com a tesoura e coloque em um tubo de centrífuga para uma verificação de genótipo.</li></ol>
 3. extração do pâncreas <ol><li>localizar o estômago do lado esquerdo do mouse. Comece suavemente (a fim de evitar rasgar) Separe o pâncreas do estômago e duodeno, utilizando duas pinças. 
	Nota: Quando desconectar o pâncreas do estômago e intestinos, é muito importante que a pinça é usada suavemente para guiar o tecido do pâncreas longe os órgãos e para não esmagar ou rasgar o pâncreas com a pinça.
	<ol><li>Continuar a separar o pâncreas das seções intestino delgado jejuno e íleo e por último do ceco do intestino grosso.</li>
	</ol></li> <li>Para o ceco, reposicionar o fórceps e continuar a separação do pâncreas ao longo do cólon restante no sentido reto. 
	Nota: Neste ponto, é conveniente cortar e remover a parte do estômago para a região do cólon imediatamente anterior do reto.</li>
	<li>Localizar o pâncreas e baço em anexo. Deslize o pâncreas para o lado direito do mouse. Separe as restantes ligações entre o pâncreas e a cavidade torácica com a pinça para retirar totalmente o pâncreas e o baço conjugado.</li>
	<li>Remover o pâncreas e espalhá-lo para exame. Deixe o baço anexado ao pâncreas para fins de identificação.
	<ol><li>Remover todos do tecido conjuntivo, tecido gordo e mesentérico do pâncreas. 
		Nota: Este tecido é mais branco na cor e, portanto, pode ser facilmente distinguido do tecido do pâncreas é mais rosado na cor. Isto é particularmente importante se o pâncreas inteiro precisa ser removido. Por exemplo, se o pâncreas precisa ser pesado e em relação ao peso corporal, ou entre grupos de animais. No Ptf1a cre / +; LSL-Kras G12D / + modelo do rato, especificamente nos meses mais velhos, difícil fibroso tecido pancreático poderia estar presente. Neste caso, a remoção cuidadosa do pâncreas deve ser conduzida como os intestinos podem ser entrelaçados no tecido do tumor. Em casos avançados, baço anormal e tecido do fígado podem também estar presentes.</li>
	</ol></li> <li>Se desejado, remover outros órgãos neste ponto.</li></ol>
 4. coleta de dados e armazenamento <ol><li>após a extração dos órgãos, mover as amostras para a área de pós-operatório para preservação.</li>
	<li>Pesar cada órgão e colocá-los em seus respectivos frascos criogênicos. 
	Nota: ao longo de sagacidadeh a massa de cada amostra, as irregularidades devem ser registadas para referência futura.</li>
	<li>Uma vez que os órgãos são pesados, colocá-los para o nitrogênio líquido para congelamento de snap.</li>
	<li>Após snap congelando, armazenar os órgãos a-80 ° C para armazenamento a longo prazo.</li>
	<li>Colocar as amostras de formalina armazenada na parte superior do banco durante a noite, e na manhã seguinte alterar sua solução de formalina para etanol a 70%. 
	Nota: Estas amostras devem ser armazenadas a 4 ° C para armazenamento a longo prazo.</li>
	<li>Para o armazenamento de longo prazo, congelar o ponche de sangue e orelha a-80 ° c... Para coleta de soro do sangue, permitir que o sangue a coagular por 30 min, em seguida, centrifugá-lo. Remover a porção de soro com uma pipeta e armazene-o em seguida a -80 ° C.</li>
</ol> 5. Clean Up <ol><li>Sanitize a dissecação todas as ferramentas com as toalhitas esterilizantes. Tampa do tubo alinhado com o isoflurano embebido bloco cirúrgico. Substitua o bloco cirúrgico sobre a placa de espuma com um bloco cirúrgico novo. Elimine as porções do mouse que não foram coletadas pela facilidade &#39; política de eliminação de animais de s.</li>
</ol>

<ol><li>Fesinmeyer, M. D., Austin, M. A., Li, C. I., De Roos, A. J., Bowen, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differences+in+Survival+by+Histologic+Type+of+Pancreatic+Cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Epidemiol+Biomarkers+Prev%22%5BJournal%5D)">Differences in Survival by Histologic Type of Pancreatic Cancer.</a> Cancer Epidemiol Biomarkers Prev. 14 (7), 1766-1773 (2005).</li>
<li>Jackson-Grusby, L. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/12154411">Modeling cancer in mice.</a> Oncogene. 21 (35), 5504-5514 (2002).</li>
<li>Heid, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Early+requirement+of+Rac1+in+a+mouse+model+of+pancreatic+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Early requirement of Rac1 in a mouse model of pancreatic cancer.</a> Gastroenterology. 141 (2), 719-730 (2011).</li>
<li>Hingorani, S. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preinvasive+and+invasive+ductal+pancreatic+cancer+and+its+early+detection+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+cell%22%5BJournal%5D)">Preinvasive and invasive ductal pancreatic cancer and its early detection in the mouse.</a> Cancer cell. 4 (6), 437-450 (2003).</li>
<li>Shi, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((KRAS2+Mutations+in+Human+Pancreatic+Acinar-Ductal+Metaplastic+Lesions+Are+Limited+to+Those+with+PanIN+Implications+for+the+Human+Pancreatic+Cancer+Cell+of+Origin%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">KRAS2 Mutations in Human Pancreatic Acinar-Ductal Metaplastic Lesions Are Limited to Those with PanIN Implications for the Human Pancreatic Cancer Cell of Origin.</a> Mol Cancer Res. 7 (2), 230-236 (2009).</li>
<li>LaConti, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distinct+serum+metabolomics+profiles+associated+with+malignant+progression+in+the+KrasG12D+mouse+model+of+pancreatic+ductal+adenocarcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Genomics%22%5BJournal%5D)">Distinct serum metabolomics profiles associated with malignant progression in the KrasG12D mouse model of pancreatic ductal adenocarcinoma.</a> BMC Genomics. 16 (1), 1-10 (2015).</li>
<li>Ludwig, M. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Surveying+the+serologic+proteome+in+a+tissue-specific+kras%28G12D%29+knockin+mouse+model+of+pancreatic+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Proteomics%22%5BJournal%5D)">Surveying the serologic proteome in a tissue-specific kras(G12D) knockin mouse model of pancreatic cancer.</a> Proteomics. 16 (3), 516-531 (2016).</li>
<li>Taylor, D. K., Mook, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isoflurane+Waste+Anesthetic+Gas+Concentrations+Associated+with+the+Open-Drop+Method%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Assoc+Lab+Anim+Sci%22%5BJournal%5D)">Isoflurane Waste Anesthetic Gas Concentrations Associated with the Open-Drop Method.</a> J Am Assoc Lab Anim Sci. 48 (1), 61-64 (2009).</li>
<li>Parasuraman, S., Raveendran, R., Kesavan, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blood+sample+collection+in+small+laboratory+animals%5BTitle%5D)+AND+%22J+Pharmacol+Pharmacother%22%5BJournal%5D)">Blood sample collection in small laboratory animals.</a> J Pharmacol Pharmacother. 1 (2), 87-93 (2010).</li>
<li>Li, D. S., Yuan, Y. H., Tu, H. J., Liang, Q. L., Dai, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+protocol+for+islet+isolation+from+mouse+pancreas%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Protocols%22%5BJournal%5D)">A protocol for islet isolation from mouse pancreas.</a> Nature Protocols. 4 (11), 1649-1652 (2009).</li>
<li>Auer, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effects+of+frozen+tissue+storage+conditions+on+the+integrity+of+RNA+and+protein%5BTitle%5D)+AND+%22Biotech+Histochem%22%5BJournal%5D)">The effects of frozen tissue storage conditions on the integrity of RNA and protein.</a> Biotech Histochem. 89 (7), 518-528 (2014).</li>
<li>Ma, J., Leung, L. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Limbic+System+Participates+in+Mediating+the+Effects+of+General+Anesthetics%5BTitle%5D)+AND+%22Neuropsychopharmacology%22%5BJournal%5D)">Limbic System Participates in Mediating the Effects of General Anesthetics.</a> Neuropsychopharmacology. 31, 1177-1192 (2006).</li>
<li>Ijichi, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aggressive+pancreatic+ductal+adenocarcinoma+in+mice+caused+by+pancreas-specific+blockade+of+transforming+growth+factor-%CE%B2+signaling+in+cooperation+with+active+Kras+expression%5BTitle%5D)+AND+%22Genes+Dev%22%5BJournal%5D)">Aggressive pancreatic ductal adenocarcinoma in mice caused by pancreas-specific blockade of transforming growth factor-β signaling in cooperation with active Kras expression.</a> Genes Dev. 20 (22), 3147-3160 (2006).</li>
<li>Abiatari, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Moesin-dependent+cytoskeleton+remodelling+is+associated+with+an+anaplastic+phenotype+of+pancreatic+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Mol+Med%22%5BJournal%5D)">Moesin-dependent cytoskeleton remodelling is associated with an anaplastic phenotype of pancreatic cancer.</a> J Cell Mol Med. 14 (5), 1166-1179 (2010).</li>
<li>Goodpaster, A. M., Romick-Rosendale, L. E., Kennedy, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((a+Statistical+significance+analysis+of+nuclear+magnetic+resonance-based+metabonomics+data%5BTitle%5D)+AND+%22Analytical+biochemistry%22%5BJournal%5D)">a Statistical significance analysis of nuclear magnetic resonance-based metabonomics data.</a> Analytical biochemistry. 401, 134-143 (2010).</li>
<li>Yadav, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Idiopathic+Tumefactive+Chronic+Pancreatitis%3A+Clinical+Profile%2C+Histology%2C+and+Natural+History+After+Resection%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Gastroenterol+Hepatol%22%5BJournal%5D)">Idiopathic Tumefactive Chronic Pancreatitis: Clinical Profile, Histology, and Natural History After Resection.</a> Clin Gastroenterol Hepatol. 1 (2), 129-135 (2003).</li>
</ol>

Os autores não têm nada para divulgar.

Importância no que diz respeito a métodos existentes Enquanto existem outros vídeos informais de dissecções de rato, este artigo de vídeo fornece a primeira qualidade profissional, par-revistos, demonstração visual de todas as etapas detalhadas necessárias para extração e colheita do pâncreas rato por dissecação10 . Com o pâncreas é um órgão principal para a atividade metabólica e insulina produção, dissecção e colheita do pâncreas permite a preservação das características fisi...

O mouse tem emergido como um importante modelo animal de câncer no pâncreas humano1,2. No Ptf1acre / +; LSL-KrasG12D / + modelo do rato, a Kristen oncogene de sarcoma (K-Ras) de rato é ativado exclusivamente no pâncreas, resultando em iniciação de lesões pré-cancerosas no pâncreas, conhecido como neoplasias intra-epitelial pancreáticas (PanINs), que o progresso para adenocarcinoma ductal do pâncreas, comumente referido como PDACs3. Este sistema de modelo do mouse fornece dentre os melhores modelos animais disponíveis para4,câncer de pâncreas humano5, com a vantagem adicional dos PanINs emergem dentro os primeiros cinco meses de vida e, frequentemente, progresso a PDAC dentro um único ano4,5, Considerando que o câncer de pâncreas ocorre mais frequentemente em humanos 60-70 anos de idade.
Extração do pâncreas por dissecação do Ptf1acre / +; LSL-KrasG12D / + ratos em várias idades permite detalhado exame histológico longitudinal do desenvolvimento de câncer no pâncreas, desde os primeiros estágios de PanIN através da progressão PDAC3,4 , 5. colheita do pâncreas em idades que variam de cinco a quinze meses também pode ser usada para preparar o tecido extratos para caracterizar mudanças globais no metabolismo de4 pâncreas que ocorrem durante a transição de saudável para o tecido doente 6,7.
Este artigo apresenta um guia visual completo das etapas necessárias para realizar uma extração de pâncreas de rato e fornece diretrizes para o armazenamento de um pâncreas para posterior análise. Este guia será igualmente valioso para indivíduos realizando pesquisa sobre outras doenças do pâncreas, incluindo diabetes tipo e devem ser especialmente útil para estudantes e investigadores novos para pesquisas envolvendo a colheita do pâncreas de rato usando dissecação para criação de perfil metabólico ou análise histológica.

<table><tbody><tr><td>Jarra de Vidro&nbsp;</td><td>Corning</td><td>3140-150</td><td>O frasco de vidro usado no vídeo foi descontinuado.&nbsp; Este é o seu substituto.</td></tr><tr><td>Tampa do Frasco de Vidro</td><td>Corning</td><td>9985-150</td><td>A tampa do frasco de vidro usada no vídeo foi descontinuada.&nbsp; Este é o seu substituto.</td></tr><tr><td>Tubos Falcon de 15 mL</td><td>Tesoura Cirúrgica Fisher Scientific</td><td>339650</td><td></td></tr> Garrafa de aperto <tr><td></td><td>Fisher Scientific</td><td>9201</td><td></td></tr><tr><td>&nbsp;</td><td>Fisher Scientific</td><td>03-409-10DD</td><td></td></tr><tr><td>100% Etanol</td><td>Fisher Scientific</td><td>22-032-103</td><td></td></tr><tr><td>Formalina</td><td>Fisher Scientific</td><td>245-684</td><td></td></tr><tr><td>Placas de Espuma</td><td>Therapak</td><td>562908</td><td></td></tr><tr><td>Fórceps</td><td>Fisher Scientific</td><td>200205SHN</td><td></td></tr><tr><td>1 mL 21G Seringas</td><td>BD Biosciences</td><td>309624</td><td></td></tr><tr><td>Tubos Falcon de 50 mL</td><td>Fisher Scientific</td><td>339652</td><td></td></tr><tr><td>Tubos de Microcentrífuga de 2.0 mL&nbsp;</td><td>Fisher Scientific</td><td>02-681-258</td><td></td></tr><tr><td>Almofadas Cirúrgicas</td><td>Fisher Scientific</td><td>S67011</td><td></td></tr><tr><td>T-Pins Comprimento:&nbsp; 2"&nbsp;</td><td>Produtos da Loja Advance</td><td>X32T-05</td><td></td></tr><tr><td>Toalhetes Esterilizantes</td><td>Descartáveis Profissionais Internacional Inc.</td><td>Q85084</td><td></td></tr><tr><td>Recipiente para Objetos Cortantes</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-827-122</td><td></td></tr><tr><td>Balança Analítica</td><td>Marshall Scientific</td><td>ME-AE200</td><td></td></tr><tr><td>4L Dewar</td><td>Taylor-Wharton</td><td>4LD</td><td></td></tr> Boca <tr><td>Larga Rasa Dewar</td><td>Fisher Scientific</td><td>F3087-V</td><td></td></tr><tr><td>Rack de Microtubo Flutuante</td><td>VWR</td><td>60986-100</td><td></td></tr><tr><td>Frasco Criogênico 1.2 mL, Estéril</td><td>Fisher Scientific</td><td>10-500-25</td><td></td></tr><tr><td>Isothesia (Isoflurano)&nbsp;</td><td>Henry Schein Saúde Animal</td><td>050033</td><td></td></tr><tr><td>Nitrogênio Líquido</td><td>Wright Brothers</td><td>NIT-60-XX</td><td></td></tr><tr><td>Cepa Kras de Camundongo</td><td>The Jackson Laboratory</td><td>OO8179</td><td></td></tr><tr><td>Cepa Cre de Camundongo</td><td>MMRRC</td><td>OOO435-UNC</td><td></td></tr></tbody></table>

dissecação do pâncreas mouse para análise histológica e perfis metabólicos

Dissection of the Mouse Pancreas for Histological Analysis and Metabolic Profiling

Nós temos investigado o fator de transcrição específico do pâncreas, 1a cre-recombinase; sarcoma de rato LOX-paragem-lox-Kristen, glicina, ácido aspártico no codão 12 (Ptf1acre / +; LSL-KrasG12D / +) cepa de rato como modelo de câncer no pâncreas humano. O objetivo dos nossos estudos atuais é identificar biomarcadores metabólicos romance de progressão do câncer pancreático. Efetuamos a criação de perfil metabólico de urina, fezes, sangue e extratos de tecido do pâncreas, bem como a análise histológica do pâncreas para encenar a progressão do câncer. O pâncreas de rato não é um órgão sólido bem definido como nos seres humanos, mas pelo contrário, é um tecido mole difusamente distribuído que não é facilmente identificado por indivíduos que não estão familiarizados com a anatomia interna do mouse ou por indivíduos que têm pouca ou nenhuma experiência realizando dissecções de órgão do rato. O objetivo deste artigo é fornecer uma detalhada step-wise demonstração visual para orientar noviços na remoção do pâncreas rato por dissecação. Este artigo deve ser especialmente valioso para estudantes e investigadores de novo à investigação que requer a colheita do pâncreas de rato por dissecação para criação de perfil metabólico ou análise histológica.

A Figura 1 mostra uma visão geral da área de ambiente operacional e a Figura 2 mostra a área de operação do post. Enquanto essa configuração fornece a quantidade mínima de equipamentos e preparo, os indivíduos podem optar por alterar isto para melhor atender as necessidades individuais. O protocolo deve ser otimizado de acordo com as necessidades específicas da experiência. Este procedimento é realizado de uma forma que termina a...

Este artigo de vídeo fornece uma demonstração detalhada das formalidades necessárias para remover com êxito o pâncreas de um rato por dissecação para análise histológica e perfis metabólicos.

Dissecação do pâncreas Mouse para análise histológica e perfis metabólicos

We have been investigating the pancreas specific transcription factor, 1a cre-recombinase; lox-stop-lox- Kristen rat sarcoma, glycine to aspartic acid at ...

O objetivo principal deste artigo em vídeo é fornecer instruções visuais detalhadas sobre a dissecação do pâncreas de camundongo. As instruções devem ser úteis para pesquisadores que estudam modelos murinos de doenças pancreáticas humanas e que precisam coletar o pâncreas de camundongo por dissecação para análise histológica ou perfil metabólico. O artigo em vídeo também fornece instruções detalhadas para realizar uma coleta terminal de sangue utilizando o procedimento de punção cardíaca.É exibida uma mesa de operação com os materiais necessários. Estes incluem um pote de vidro com tampa, um tubo cônico de 15 mL, um par de tesouras cirúrgicas, um frasco com bico aplicador contendo etanol 70%, duas placas de isopor, duas pinças, duas seringas de 1 mL com agulha de 21 graus, dois tubos cônicos de 50 mL, um tubo de centrífuga, um criotubo, quatro campos cirúrgicos, dez alfinetes, um dispensador de lenços esterilizantes e um recipiente para objetos perfurocortantes. É exibida a mesa pós-operatória com os materiais necessários.Estes incluem uma balança analítica, um Dewar de quatro litros de nitrogênio líquido, um Dewar de boca larga e rasa, um suporte flutuante para microtubos, um par

dissection-mouse-pancreas-for-histological-analysis-metabolic

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Medicina

O protocolo a seguir descreve o processo de dissecção pancreática para imagens fatia virtual, e posterior quantificação de todos os GFP-tagged células beta no pâncreas inteiro.

Quantificação em situ da Missa das células beta pancreáticas em camundongos

Este vídeo descreve a técnica de diferenciação de células acinares pancreáticas em células ductais em cultura 3D ex vivo. Isso ajuda a entender os mecanismos que regulam a metaplasia acinar-ductal (ADM), um processo chave no desenvolvimento inicial do câncer de pâncreas.

Indução de metaplasia acinar-ductal: um método para estudar a diferenciação de células acinares para células ductais em cultura 3D ex vivo

Ensaiando in vitro a função das células β usando o mouse ilhotas isoladas de Langerhans é um componente importante no estudo da fisiopatologia do diabetes e terapêutica. Embora muitas aplicações a jusante estão disponíveis, este protocolo descreve especificamente a medida da intracelular monofosfato cíclico de adenosina (AMPc) como um parâmetro essencial para definir a função das células β.

Um Método para Mouse ilhotas pancreáticas Isolamento e intracelular cAMP Determinação

Apresentamos aqui um protocolo para o isolamento de ilhotas do modelo de camundongo com diabetes tipo 2, Leprdb e detalhes de um ensaio de células vivas para medição da secreção de insulina de ilhotas intactas que utiliza microscopia de 2 fótons.

Lepr<sup&gt; Db</sup&gt; Mouse Modelo de Diabetes Tipo 2: Isolamento de ilhotas pancreáticas e células vivas 2-Photon Imagens de ilhotas intactas

Aqui, nós descrevemos um processo para o isolamento de células no microambiente pâncreas do rato a partir de tecido embrionário, neonatal e adulto, incidindo sobre o isolamento de células do mesênquima. Este método permite que perfis de expressão gênica celular e secreção de proteínas, a fim de elucidar os sinais extrínsecos que regulam o desenvolvimento pâncreas, função e tumorigênese.

Isolando e analisando células do pâncreas Mesênquima por citometria de fluxo

Nós descrevemos um método para o isolamento de células endócrinas de pancreases embrionárias, Neonatais e pós-natal, seguidos por sequenciação do ARN de célula única. Esse método permite que as análises do desenvolvimento de linhagem endócrina do pâncreas, heterogeneidade e transcriptomic dinâmica de células.

Análises de célula única Transcriptomic de células endócrinas no pâncreas de rato

Aplicativos de jusante, modulação de expressão ou atividade de proteína, cultura e isolamento primário de células acinares são abundantemente úteis em ex vivo estudo de metaplasia acinares-para-ductal (ADM), um evento precoce no desenvolvimento de câncer no pâncreas.

Imitando e manipulando Metaplasia acinares-para-Ductal pancreático na cultura de pilha 3-dimensional

Pancreatite crônica (PC) é uma doença caracterizada por inflamação e fibrose do pâncreas, frequentemente associada a dor abdominal intratável. Este artigo se concentra na refinação da técnica para gerar um modelo de camundongo de CP via infusão de ducto biliar com ácido sulfônico de 2,4,6 -trinitrobenzene (TNBS).

Um modelo de rato para pancreatite crônica através da infusão TNBS do ducto biliar

Este estudo apresenta a aplicação de fatias de tecido pancreático vivo ao estudo da fisiologia da ilhota e interações ilhotas-células imunes.

Observando a função da ilhota e interações celulares ilhotas-imunes em fatias de tecido pancreático ao vivo

As células metaplásicas pancreáticas são precursoras de células malignas que dão origem a tumores pancreáticos. No entanto, isolar células pancreáticas viáveis intactas é um desafio. Apresentamos aqui um método eficiente para dissociação do tecido pancreático. As células podem então ser usadas para sequenciamento de RNA de célula única (scRNA-seq) ou para co-cultivo bidimensional ou tridimensional.

Dissecção do tecido pancreático para isolar células únicas viáveis

Este protocolo descreve o isolamento de células endoteliais de camundongos de todo o pâncreas.

Isolamento de células endoteliais pancreáticas de camundongo

Aprenda a dissecar o pâncreas de camundongo para análise histológica e perfis metabólicos. Este método demonstra coleta de sangue terminal por punção cardíaca e preservação de tecidos para estudos de doenças pancreáticas.

Dissecação do pâncreas Mouse para análise histológica e perfis metabólicos

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