Dissecação do pâncreas Mouse para análise histológica e perfis metabólicos
19 de agosto de 2017
Este artigo de vídeo fornece uma demonstração detalhada das formalidades necessárias para remover com êxito o pâncreas de um rato por dissecação para análise histológica e perfis metabólicos.
O objetivo principal deste artigo em vídeo é fornecer instruções visuais detalhadas sobre a dissecação do pâncreas de camundongo. As instruções devem ser úteis para pesquisadores que estudam modelos murinos de doenças pancreáticas humanas e que precisam coletar o pâncreas de camundongo por dissecação para análise histológica ou perfil metabólico. O artigo em vídeo também fornece instruções detalhadas para realizar uma coleta terminal de sangue utilizando o procedimento de punção cardíaca.
É exibida uma mesa de operação com os materiais necessários. Estes incluem um pote de vidro com tampa, um tubo cônico de 15 mL, um par de tesouras cirúrgicas, um frasco com bico aplicador contendo etanol 70%, duas placas de isopor, duas pinças, duas seringas de 1 mL com agulha de 21 graus, dois tubos cônicos de 50 mL, um tubo de centrífuga, um criotubo, quatro campos cirúrgicos, dez alfinetes, um dispensador de lenços esterilizantes e um recipiente para objetos perfurocortantes. É exibida a mesa pós-operatória com os materiais necessários.
Estes incluem uma balança analítica, um Dewar de quatro litros de nitrogênio líquido, um Dewar de boca larga e rasa, um suporte flutuante para microtubos, um par de tesouras cirúrgicas, duas pinças, cinco crioviales e um dispensador de lenços estéreis. Para realizar a eutanásia, o camundongo é primeiro colocado no frasco de vidro contendo uma gaze embebida com algumas gotas de isoflurano e, em seguida, coberto com a tampa até que o camundongo perca a consciência, o que normalmente leva cerca de um minuto. O camundongo é então removido do frasco de vidro e é realizado um teste de preensão no pé para garantir que o animal não possa sentir desconforto.
Se o teste de pressão no pé falhar, o camundongo deve ser devolvido ao frasco de vidro e a tampa recolocada até que o teste de pressão no pé possa ser realizado com sucesso. Coloque o camundongo de costas e fixe as patas do camundongo na placa de espuma cirúrgica e umedeça a região ventral do camundongo com etanol a 70%. Pince os pelos próximos à abertura uretral com a pinça e puxe levemente para cima.
Realize uma incisão através da cavidade abdominal, começando pela abertura da uretra, seguindo pela linha média e terminando no queixo. Próximo ao ponto inicial da incisão primária, segure um dos lados da pele e faça outra incisão descendente e diagonal em direção à pata traseira. Repita este procedimento da mesma maneira no lado oposto.
Localize o coração para realizar a punção cardíaca terminal. Para isso, segure o esterno com a pinça e corte o diafragma. Corte rapidamente para cima através da caixa torácica e remova a parte cortada para expor o coração batendo.
Uma vez localizado o coração, remova o pericárdio e realize a punção cardíaca terminal com a seringa. Para uma coleta de sangue ideal, use o êmbolo da agulha para imitar a ação de bombeamento do coração e evite aspirar muito rapidamente. Transfira o sangue para o tubo de centrífuga e descarte a seringa no recipiente para objetos perfurocortantes.
Após a realização da punção cardíaca, a eutanásia é realizada removendo-se os tecidos que conectam o coração. Localize o estômago no lado esquerdo do camundongo. O pâncreas tem a aparência de um tecido difuso de cor mais clara que está ligado ao estômago, ao duodeno, a toda a extensão dos intestinos delgado e grosso, e também está conectado ao baço.
Comece a separar suavemente o pâncreas do estômago e do duodeno utilizando a pinça. Continue separando o pâncreas do intestino delgado, avançando pelas porções do jejuno e íleo, e finalmente até o ceco e intestino grosso. No ceco, reposicione a pinça e continue a separação do pâncreas ao longo do cólon restante em direção ao reto.
Neste momento, é conveniente cortar e remover a seção do estômago até a região do cólon imediatamente anterior ao reto. Localize o pâncreas e o baço anexo. Deslize o pâncreas em direção ao lado direito do camundongo.
Corte as conexões restantes entre o pâncreas e a cavidade torácica para destacar completamente o pâncreas e o baço adjacente. Remova o pâncreas e espalhe-o para examinar. Se desejado, outros órgãos podem ser removidos neste momento.
Após a extração, as amostras são transferidas para a área pós-operatória. Cada órgão será pesado e, em seguida, colocado no respectivo criotubo. Registre quaisquer irregularidades observadas.
Uma vez que os órgãos estejam nos criotubos, coloque-os na grade flutuante para microtubos e, em seguida, no Dewar com nitrogênio líquido. Após o congelamento rápido, o órgão deve ser armazenado a menos 80 graus Celsius para conservação de longo prazo. Todas as ferramentas utilizadas na dissecação devem ser sanitizadas com lenços esterilizantes.
O tubo de centrífuga forrado com a almofada cirúrgica embebida em isoflurano deve ser tampado. A almofada cirúrgica sobre a placa de espuma deve ser substituída por uma almofada cirúrgica nova. As partes do camundongo que não foram coletadas devem ser descartadas de acordo com a política do laboratório para descarte de animais.
Os seguintes itens devem ser manuseados conforme apropriado. Uma vez que esses itens sejam adequadamente armazenados, uma variedade de experimentos pode ser realizada, incluindo, mas não se limitando a, microscopia de fluorescência, histologia com hematoxilina e eosina, imunohistoquímica, espectrometria de massas e espectroscopia de ressonância magnética nuclear. Considerando que o pâncreas é um órgão primário para atividade metabólica e produção de insulina, este procedimento permite a preservação das características fisiológicas.
Ao isolar o pâncreas, análises futuras podem ser realizadas na amostra. Este procedimento permite a comparação e o estudo de interações provenientes de outros tecidos dentro do mesmo organismo, no mesmo período de tempo.
Veja a transcrição completa e aceda a milhares de vídeos científicos
Visão Geral
Este artigo em vídeo fornece instruções visuais detalhadas para a dissecação do pâncreas de camundongo, destinadas a pesquisadores que estudam doenças pancreáticas. Inclui procedimentos para a coleta do pâncreas destinado à análise histológica e ao perfil metabólico, bem como a coleta terminal de sangue por punção cardíaca.
Componentes Principais do Estudo
Área da Ciência
- Neurociência
- Biologia
- Histologia
Contexto
- Modelos de camundongos são essenciais para o estudo de doenças pancreáticas humanas.
- Técnicas de dissecação são fundamentais para a coleta precisa de tecidos.
- A análise histológica e o perfil metabólico fornecem informações sobre os mecanismos das doenças.
- A coleta terminal de sangue é necessária para estudos metabólicos abrangentes.
Objetivo do Estudo
- Demonstrar a dissecação do pâncreas de camundongo.
- Fornecer aos pesquisadores um método confiável para coleta de tecidos.
- Facilitar o estudo de doenças pancreáticas por meio de orientações procedimentais detalhadas.
Métodos Utilizados
- Dissecção do pâncreas de camundongo utilizando instrumentos cirúrgicos.
- Coleta terminal de sangue por punção cardíaca.
- Preparação dos materiais necessários para o processo de dissecção.
- Instruções visuais para melhorar o entendimento do procedimento.
Resultados Principais
- Dissecação bem-sucedida do pâncreas demonstrada.
- Orientação visual clara fornecida aos pesquisadores.
- Métodos eficazes para coleta sanguínea terminal descritos.
- Visão geral abrangente dos materiais e procedimentos necessários.
Conclusões
- O artigo em vídeo serve como um recurso valioso para pesquisadores.
- Técnicas precisas de dissecação são cruciais para estudos metabólicos.
- Recursos visuais aprimoram a experiência de aprendizado em procedimentos complexos.
Perguntas Frequentes
Relevância Executiva para a Indústria
A dissecação precisa do pâncreas de camundongo permite a coleta confiável de tecido para análise metabólica e histológica subsequente na pesquisa de câncer pancreático. Essa padronização do procedimento apoia a validação de alvos e a descoberta de biomarcadores, garantindo a integridade das amostras e reduzindo a variabilidade em modelos pré-clínicos. O método aumenta a confiança preditiva em fluxos de trabalho de descoberta precoce, fornecendo uma base reprodutível para estudos mecanicistas da progressão da doença.
Aplicações Estratégicas em P&D de Biotecnologia Farmacêutica
Descoberta Inicial e Validação de Alvo
- Valor Científico: Permite a investigação de hipóteses terapêuticas mediante o isolamento preciso de tecido pancreático para avaliação metabólica e histológica.
- Valor Operacional: Apoia a redução de riscos biológicos ao fornecer amostras de tecido consistentes para análise de interação com o alvo e de vias metabólicas.
Triagem e Desenvolvimento de Ensaios
- Valor Científico: Prepara sistemas biológicos validados para padronização de ensaios, garantindo a extração intacta do pâncreas para leituras metabólicas.
- Valor Operacional: Atende aos requisitos de reprodutibilidade por meio de técnicas padronizadas de dissecação que minimizam a variabilidade pré-analítica.
Pesquisa Translacional e Pré-clínica
- Valor Científico: Mantém a relevância da doença ao preservar a arquitetura do tecido pancreático para a estratificação da progressão do câncer em modelos pré-clínicos.
- Valor Operacional: Permite a continuidade desde a descoberta até a validação pré-clínica, fornecendo tecido pronto para colheita destinado à análise multi-ômica.
Integração de Pipeline e Fluxo de Trabalho
O método de dissecação integra-se ao continuum de descoberta ao fornecer tecido pancreático de alta qualidade para perfilagem metabólica e estadiamento histológico, apoiando diretamente as etapas de identificação de compostos promissores e validação pré-clínica.
- Biologia do Descobrimento: Facilita a verificação de hipóteses e a elucidação de vias ao permitir a coleta de tecido pancreático relevante para a doença a partir de modelos geneticamente modificados.
- Triagem: Garante a prontidão dos ensaios por meio de um preparo padronizado do tecido, que sustenta resultados metabólicos e histológicos consistentes.
- Análises: Gera medições quantitativas a partir de extratos teciduais que permitem a comparação dos estados metabólicos entre diferentes condições experimentais.
- Pesquisa Translacional: Conecta-se à continuidade pré-clínica ao preservar o tecido para análise longitudinal da progressão do câncer e da resposta ao tratamento.
- Reutilização Institucional: Estabelece uma capacidade reutilizável de coleta de tecido aplicável a múltiplos modelos de câncer pancreático e estudos metabólicos.
Impacto Operacional e Empresarial
- Valor Científico: Aumenta a confiança preditiva ao reduzir a ambiguidade mecanicista por meio de amostragem tecidual confiável para correlação metabólica e histológica.
- Valor Operacional: Aprimora a padronização e escalabilidade da coleta de pâncreas entre equipes de pesquisa e lotes experimentais.
- Valor Estratégico: Melhora as decisões de avançar/não avançar ao fornecer dados pré-clínicos de alta fidelidade que reduzem riscos biológicos em estágios avançados na validação de alvos.
- Impacto no Portfólio: Apoia a priorização ajustada ao risco ao permitir o estadiamento preciso da progressão do câncer pancreático em modelos pré-clínicos.
Considerações sobre a Implementação
- Exige proficiência em anatomia de camundongo e técnicas de dissecação para evitar danos teciduais durante o isolamento do pâncreas.
- Requer acesso a instrumentos cirúrgicos, materiais de esterilização e armazenamento criogênico para a preservação da amostra após a dissecação.
- Exige padronização entre equipes dos protocolos de dissecação para garantir a reprodutibilidade entre diferentes operadores e instalações.
- Envolve considerações de adaptação ao aplicar a técnica a diferentes linhagens de camundongos ou modelos de doenças com morfologia pancreática variável.
- Inclui limitações práticas relacionadas à natureza difusa do pâncreas de camundongo, o que exige separação cuidadosa dos tecidos circundantes para manter a integridade da amostra.
