Teste de reconhecimento de objeto romance para a investigação da aprendizagem e memória em ratos

O objetivo geral deste ensaio comportamental é testar vários aspectos do aprendizado e da memória em camundongos. Este método pode ajudar a responder a inúmeras perguntas na área da cognição de roedores, desde os fundamentos do desenvolvimento de uma compreensão mais profunda, para certos aspectos da aprendizagem na memória e em camundongos, bem como questões mais complexas, como comprometimento cognitivo, incluindo modelos de doenças, como a doença de Alzheimer, até a exploração de potencial aprimoramento cognitivo. A principal vantagem do ORT, é a sua simplicidade, eficiência e flexibilidade e estudo de aprendizagem e memória em ratos.

Demonstrando este procedimento estará Andrei Jeltyi, um técnico de laboratório do nosso laboratório. Comece selecionando objetos do tamanho de uma toupeira que possam ser facilmente discriminados pelo animal, mas tenham um grau semelhante de complexidade em características, como textura, forma ou brilho para minimizar qualquer preferência de objeto induzida em potencial que possa influenciar os resultados. Além disso, para reduzir ainda mais as preferências induzidas, certifique-se de que os ratos sejam capazes de subir em ambos os objetos ou em nenhum dos objetos.

A capacidade de escalar um objeto pode aumentar o interesse na exploração. Em seguida, para minimizar o estresse da iluminação brilhante, use iluminação baixa desativada com o centro do labirinto iluminado em torno de 20 sortes. Aclimate os ratos a quaisquer novas salas de teste por pelo menos uma hora antes do uso todos os dias e mantenha a temperatura e a umidade semelhantes às condições normais de alojamento.

Observe que os camundongos devem ser manuseados uma a duas vezes ao dia por pelo menos um minuto, ao longo de uma a duas semanas antes do teste. Por fim, para a arena principal, use uma câmara quadrada feita de plástico não poroso branco ou preto em contraste com a cor do mouse. Comece removendo o mouse de sua gaiola inicial e colocando-o no meio da arena aberta e vazia.

Permita a exploração livre da arena por cinco minutos. Quando a gaiola doméstica estiver vazia, guarde-a para usar como gaiola no dia seguinte. Ao final de cinco minutos, remova o mouse e coloque-o em uma gaiola.

Não devolva o mouse à sua gaiola original, ou isso pode afetar o comportamento dos mouses restantes a serem testados. Em seguida, limpe completamente o aparelho entre os camundongos, usando 70% de volume por volume de etanol. Em seguida, comece a fase de treinamento ou T1, colocando dois objetos idênticos em quadrões opostos da arena.

Por exemplo, um no canto noroeste e outro no canto sudeste. Prenda todos os objetos muito leves ao chão com massa de montagem de remoção. Contrabalanceie o uso de cada conjunto de objetos, bem como a localização do novo objeto em cada um dos quatro cantos da arena.

Certifique-se de saber qual diagonal é usada para qual animal, para que o uso diagonal no dia do treinamento seja a forma usada no dia do teste para cada rato. 24 horas após a habituação, remova o mouse de sua gaiola inicial e coloque-o no centro da arena, equidistante dos dois objetos idênticos para iniciar o treinamento. Permita a exploração livre por um mínimo de cinco minutos, se fundir uma cepa de camundongos que sabidamente têm baixa atividade locomotora ou de exploração, estenda o teste para 10 minutos para todos os camundongos das coortes.

No final do teste de treinamento, remova o mouse e coloque-o na gaiola de retenção. Quando a gaiola doméstica estiver vazia, guarde-a para usar como gaiola de retenção no dia do teste. Certifique-se de limpar o aparelho e os objetos entre os mouses.

Em seguida, inicie a fase de teste ou T2, colocando o objeto familiar usado durante o treinamento e um novo objeto em quadros opostos da arena. Use os mesmos locais que você usa durante o treinamento para cada mouse. No intervalo de escolha T1 a T2, remova o mouse de sua gaiola inicial e coloque-o na arena central, equidistante do objeto familiar e do novo objeto.

Permita a exploração livre por 10 minutos. Finalmente, no final do teste de teste, remova o mouse e coloque-o na gaiola de retenção. Para análise, a exploração é definida como o nariz direcionado para o objeto dentro de dois a três centímetros com varredura de vibração ativa.

No entanto, o mouse sentado no objeto não é contado para o tempo de exploração. Para T1 e T2, marque os primeiros cinco minutos e calcule o tempo total de exploração de ambos os objetos para cada sessão. Se o mouse não atingir o tempo mínimo de exploração de 20 segundos para ambos os objetos, continue marcando após cinco minutos até que a exploração total exceda 20 segundos.

Estender o tempo T1 e T2 para 10 minutos para cepas de camundongos que têm baixa exploração e não atendem a esse critério mínimo em cinco minutos, conforme observado durante o teste piloto. Finalmente, se os camundongos não atingirem um mínimo de 20 segundos de exploração para ambos os objetos para T1 ou T2 em 10 minutos, exclua-os da análise, pois não pode ser confirmado que o animal passou tempo suficiente explorando para aprender e discriminar. A tarefa de reconhecimento de objetos é um método eficiente e flexível para estudar o aprendizado e a memória em camundongos, no qual os inibidores da fosfodiesterase 2 demonstraram melhorar durante essa tarefa.

Em comparação com o veículo, a administração dos inibidores da PDE2 baias 60-7550 ou ND7001 melhorou significativamente a memória de maneira dependente da dose, quando administrada 30 minutos antes do treinamento. Quando administrado em diferentes momentos, em relação ao treinamento e teste, o inibidor de PDE2 bay 60-7550 melhorou significativamente sua memória quando administrado 30 minutos antes do treinamento, bem como imediatamente após o treinamento e 30 minutos antes da recordação. Uma vez dominada, essa técnica pode ser concluída em dois a três dias se for executada corretamente.

Ao tentar este procedimento, é importante lembrar de executar estudos piloto e escolher cuidadosamente o intervalo T1 a T2, pois escolher um intervalo errado pode resultar em um efeito incorreto. Seguindo este procedimento, outros métodos, como o labirinto do celeiro, podem ser realizados para responder a perguntas adicionais, como diferenças de aprendizado, que não podem ser totalmente abordadas usando os testes de reconhecimento de objetos. Após seu desenvolvimento, essa técnica abriu caminho para pesquisadores no campo da aprendizagem e da memória explorarem os mecanismos biológicos básicos da memória, bem como explorar mecanismos potenciais de vários déficits cognitivos em roedores.

Depois de assistir a este vídeo, você deve ter uma boa compreensão de como configurar e projetar um experimento apropriado usando o teste de reconhecimento de objetos, incluindo a execução de estudos piloto, a escolha de objetos e a seleção do intervalo T1 a T2 apropriado. Obrigado por assistir e boa sorte com seus experimentos.