Name: Teste de reconhecimento de objeto romance para a investigação da aprendizagem e memória em ratos (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-08-30T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 52 s
Description: Aprenda o teste de reconhecimento de objeto para investigar aprendizagem e memória em camundongos. Este protocolo simples e flexível avalia a memória de reconhecimento sem reforço, sendo ideal para estudos farmacológicos e de manipulação genética.

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Trabalhos citados e anteriormente publicados pelo autor foi apoiado por uma concessão do Instituto Nacional de Saúde Mental (MH088480). O autor gostaria de agradecer o seu antigo mentor, Dr. James O'Donnell pelo seu apoio nesse projeto. Esta publicação é suportada por uma concessão do Instituto Nacional de saúde (T32 DA007135).

todos os procedimentos realizados aqui foram apresentados ao aprovado pelo cuidado do Animal e usar o Comité e realizaram-se seguindo as diretrizes do NIH.
 1. seleção de objetos e configuração Experimental <ol><li>Selecione os objetos que são diferentes o suficiente para ser facilmente discriminados por ratos, mas tem um grau de complexidade (textura, forma, a padronização de cor e brilho, similar etc.) a fim de minimizar qualquer potencial induzido por preferência de objeto que pode influenciar os resultados (ver Ennaceur 2010 para obter uma descrição detalhada do objeto escolha 7).
	<ol><li>Teste de preferência inata e discriminação (consulte as etapas 2 &#38; 3).</li>
		<li>Objetos de uso que são tamanho de rato ou apenas ligeiramente maior para incentivar a exploração ( Figura 1). Para reduzir a preferência induzida, certifique-se de que os ratos são capazes de subir em objetos ou em nenhum objeto, embora a habilidade de subir em um objeto pode aumentar o interesse na exploração (tempo gasto sentado sobre um objeto não é contado para tempo de exploração.)</li>
		<li>Tem pelo menos 2 cópias de cada objeto. No entanto, para minimizar possíveis pistas de odor durante o teste, ter pelo menos 3 de cada objeto, duplicatas para treinamento e outro para teste.</li>
		<li>Usar objetos feitos de material não-quebrável, como perda de um objeto devidos a danos durante a experimentação podem interferir com a continuidade de testes e potencialmente causar danos ou ferimentos ao animal.</li>
		<li>Limpe cuidadosamente os objetos antes e entre uso (etanol a 70% vol/vol é apropriado).</li>
	</ol></li> <li>Para minimizar o stress de iluminação brilhante, use iluminação difusa, baixa, com o centro do labirinto iluminado por volta de 20 lux. Use uma temperatura e umidade semelhante às condições de habitação regular. Se os ratos estão sendo movidos de uma sala de habitação para um quarto diferente para o experimento, aclimatar ratos para sua nova sala pelo menos 1 h antes da utilização de cada dia.</li>
	<li>Pega ratos bem antes do treinamento. Porque o teste baseia-se na tendência natural de roedores para explorar a novidade, reduza qualquer stress ou ansiedade de manipulação que pode interferir com o seu desejo de explorar a arena e, posteriormente, os objetos. Idealmente, lidar com ratos 1 - 2 vezes / dia durante pelo menos 1 min, 1 a 2 semanas antes do teste de 15 , 29.</li>
	<li>Para a arena principal, usar uma câmara quadrada (cerca 40 x 40 cm x 40 cm) feitos de branco ou preto, plástico não-porosas, contrastava com a cor do mouse. Como alternativa, usar uma arena redonda Ed. especificamente, quando usando ratos ansiosos que podem sentar-se nos cantos de um quadrado arena, uma arena redonda pode ser preferível para encorajar o comportamento exploratório 18 , 30.
	<ol><li>Em dia de treinamento, coloque 2 objetos idênticos na diagonal (ou seja, um no canto do nanowatt e um no canto sudeste). Se os objetos são muito leves e podem ser movidos pelo mouse, fixá-las no chão. Removível montagem massa funciona bem.</li>
		<li>Para dia de teste, use a cópia de 3 rd de cada objeto para colocar um objeto familiar e um novo objeto na mesma diagonal como o dia de treinamento ( Figura 2).</li>
		<li>Contrabalançar o uso de cada conjunto de objetos para que cada objeto é usado igualmente como um objeto familiar e como um objeto de romance. Além disso, contrabalançar a localização do objeto romance a cada um dos 4 cantos da arena. Certifique-se de observar qual diagonal é usado para qual animal para que a diagonal usado sobre o dia de treinamento é o mesmo usado no teste dia, para cada rato.</li>
		<li>Limpe cuidadosamente o aparelho e objetos para remover pistas de odor antes e entre uso (etanol a 70% vol/vol é apropriado).</li>
	</ol></li> <li>Coloque a câmara aérea diretamente do aparelho para a exibição ideal de exploração. Só uso software com deteção de nariz-ponto para análise precisa. Se utilizar o software, capture uma imagem de fundo com os objetos no lugar antes de começar. No software, definir a área de exploração para ser aproximadamente 2-3 cm ao redor do objeto.</li>
	<li>Para reduzir a interferência do experimentador, gravar o julgamento e marcá-lo mais tarde. Cega o marcador para as condições experimentais. Se manualmente marcando durante o experimento, certifique-se de que o experimentador é mais de 1 metro da arena e não é visível para o mouse. 
	Nota: Quando o mouse passa sentado no objeto sem ativo vibrissae varrendo ou cheirando não conta como tempo de exploração.</li>
	Exploração de <li>definir como quando o mouse &#39; ruído s está apontado para o objeto e dentro de 2 a 3 cm do objeto, com ativo vibrissae varrendo ou cheirando. Não contam qualquer hora sentado no objeto sem indicação de exploração activa.</li>
</ol> 2. Necessário experiências piloto <ol><li>teste de preferência induzida <ol><li>para habituação, remover o mouse de sua gaiola em casa e colocá-lo no meio da arena aberta. Permitir que o mouse para explorar livremente por 5 min.</li>
		<li>No dia de treinamento (T1), coloque 2 objetos diferentes em quadrantes opostos do aparelho, (i.e., NW e SE cantos). Remova o mouse de sua gaiola em casa e colocá-lo no meio da arena aberta. Permitir a livre exploração de 10 min.</li>
		<li>Calcular o índice de discriminação. Se não houver nenhuma preferência induzida, o índice de discriminação deve ser em ou perto de zero. Quaisquer objetos que mostram a preferência não devem ser usados para ORT.</li>
	</ol></li> <li>Testes para capacidade de discriminação <ol><li>para habituação, remover o rato de sua gaiola em casa e colocá-lo no meio da arena aberta. Permitir que o mouse para explorar livremente por 5 min.</li>
		<li>Na sessão de treino (T1), coloque 2 objetos idênticos em quadrantes opostos. Coloque o mouse no centro da arena e permitir que o mouse para explorar durante 10 min.</li>
		<li>Em teste sessão (T2), lugar de objeto usado durante T1 e um objeto romance em quadrantes opostos (i.e., NW e SE cantos). Sessenta minutos após T1, posicione o mouse no centro da arena e permitir a livre exploração de 10 min.</li>
		<li>Calcular o índice de discriminação. Em um intervalo de retenção de 60 min, o índice de discriminação deve ser acima de 0,25.</li>
	</ol></li></ol> 3. Procedimento experimental <ol><li>habituação <ol><li>remover o mouse de sua gaiola em casa e colocá-lo no meio da arena aberta e vazia. Permita a livre exploração da arena por 5 min. Uma vez que a gaiola em casa está vazia, salvá-lo para uso como uma gaiola de exploração no dia seguinte.</li>
		<li>No final de 5 min, retire o mouse e coloque em uma gaiola de exploração. Não devolva o rato da gaiola original, ou isso pode afetar o comportamento dos ratos restantes a serem testadas.</li>
		<li>Limpe cuidadosamente o aparelho entre ratos usando etanol a 70% vol/vol. 
		Nota: Durante a habituação, comportamento de ansiedade pode ser avaliado calculando o tempo gasto no centro (ver Prut &#38; Belzung 2003 31). Esta é uma métrica útil ao considerar o comprimento de tempo para T1. Ratos de ansiedade mais elevados podem exigir uma sessão de 10 min para alcançar o critério mínimo de exploração.</li>
	</ol></li> <li>Formação (T1) <ol><li>Coloque dois objetos idênticos em quadrantes opostos da arena (i.e., canto NE e canto SW).</li>
		<li>24 h após a habituação, remover o mouse de sua gaiola em casa e coloque-o no centro da arena, equidistante de 2 objetos idênticos.</li>
		<li>Permitir a livre exploração por um período mínimo de 5 min. Se usando uma cepa de ratos que são conhecidos por terem baixa atividade locomotora ou exploração, (ou seja, maioria dos ratos não atingir um mínimo de 20 exploração de s dos dois objetos por 5 min, conforme observado em experiências piloto ou literatura), estender o julgamento de 10 min para todos mic e na coorte.</li>
		<li>No final do julgamento, retire o mouse e coloque na gaiola exploração. Uma vez que a gaiola em casa está vazia, salvá-lo para uso como a gaiola de exploração em testes dia.</li>
		<li>Limpe cuidadosamente o aparelho e objetos entre ratos usando etanol a 70% vol/vol.</li>
	</ol></li> <li>Testing (T2) <ol><li>Coloque um objeto usado durante T1 (ou seja, o objeto familiar) e um objeto romance em quadrantes opostos da arena. Usar os mesmos locais como usado durante T1 para cada mouse.</li>
		<li>Em the T1 para T2 intervalo de escolha, remover o rato de sua gaiola em casa e colocá-lo na arena central, equidistante do objeto familiar e o romance objeto. 
		Nota: Em um intervalo de retenção de 24 h, a maioria dos ratos não será capazes de discriminar entre o objeto familiar e romance (geralmente-0.2 &#60; d2 &#60; 0.2, em comparação com um positivo controle 32). Se testando efeitos nootropic, use este ponto de tempo de investigação para o realce da memória. Para sondar para déficits de memória, use um intervalo de retenção mais curto de algum lugar entre 20 min para 4h, dependendo da cepa de rato.</li>
		<li>Permitir a exploração livre por 10 min. No final do julgamento, retire o mouse e coloque na gaiola exploração.</li>
	</ol></li> <li>Para T1 e T2, marcar o primeiro 5 min. Se o mouse não satisfaz o tempo mínimo de exploração de 20 s para ambos os objetos, continuar marcando passado 5 min até exploração total for superior a 20 s.</li>
</ol> 4. Análise de dados <ol><li>Os critérios de exclusão <ol><li>durante ambos treinamento (T1) e teste (T2), calcular o tempo de exploração total para os dois objetos para cada sessão (e1 e e2). A maioria dos ratos devem alcançar uma exploração mínima total para ambos os objetos de 20 s por 5 min.</li>
		<li>Tempo estender T1 e T2, a 10 min para cepas de ratos que têm baixa exploração e não satisfazem este critério mínimo por 5 min, como observado durante o teste piloto.</li>
		<li>Marcar o comportamento por 5 min ou para além de 5 min até atingirem o critério mínimo 20 de s.</li>
		<li>Se ratos não atingir um mínimo de s 20 da prospecção para ambos os objetos ou T1 ou T2 em 10 min, excluir da análise, como não pode ser confirmado gastaram bastante tempo explorando para aprender/discriminar.</li>
	</ol></li> <li>Absolutos vs análise relativa Nota: fórmulas diferentes para análise e sua relação com o outro podem ser vistas na tabela 1.
	E1 <ol><li>calcular o tempo de exploração total durante o treino de 2 objetos idênticos, onde a1 e a2 são os objetos idênticos. 
		e1 = a1 + a2</li>
		E2 <li>calcular como o tempo total de exploração durante o teste para o objeto familiar (a) e o romance objeto b. 
		e2 = a + b</li>
		<li>Calcular d1 simplesmente como o tempo gasto explorando o romance objeto menos tempo a explorar o objeto familiar. A medida de discriminação absoluta (d1) não leva em conta as diferenças em vez de exploração entre os ratos ou tratamento grupos, embora em determinadas circunstâncias, pode ser uma medida mais sensível 2. 
		d1 = b-a</li>
		<li>Calcular d2 como o tempo passado a explorar o objeto novo menos o tempo a explorar o objeto familiar dividido pelo tempo total exploração. A medida mais comumente usada é um valor de discriminação relativa, muitas vezes referido como o índice de discriminação (d2), que não é influenciado pelas diferenças no tempo de exploração. Isto significa que todos os valores vão cair entre -1 e + 1. 
		d2 = d1/e2</li>
		<li>, Alternativamente, calcular o índice (d3) de reconhecimento ou preferência 3. Este é o tempo gasto a explorar o novo objeto dividido pelo tempo total. Isto significa que todos os valores cairão entre 0 e 1. Muitas vezes é multiplicado por 100 e usado como valor de percentagem. 
		d3 = b/e2 * 100</li>
	</ol></li> <li>Análise estatística <ol><li>usando os valores de discriminação média para cada grupo, determinar o desempenho da memória usando o One-Way ANOVA. Para posterior análise, fazer comparações bidirecional post hoc com os grupos de controle positivo/negativo e condição do veículo Tratado vs.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>

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</ol>

O autor não tem nada para divulgar.

A ORT é um método eficiente e flexível para estudar aprendizagem e memória em camundongos. Ao configurar um experimento, é importante considerar uma série de variáveis que podem afetar o resultado. Conforme discutido nos resultados representativos, a cepa de rato afetará ambos intervalo de tempo e de retenção de exploração. Uma diminuição no tempo de exploração pode inclinar ou máscara resulta em uma discriminação absoluta análise2,3,...

O teste de reconhecimento de objeto (ORT), também conhecido como o teste de reconhecimento objeto romance (NOR), é um meio relativamente rápido e eficiente para testar as diferentes fases da aprendizagem e memória em camundongos. Foi originalmente descrita por Ennaceur e Delacour em 1988 e usado principalmente em ratos1; no entanto, desde então, tem sido adaptado com sucesso para uso em camundongos2,3,4,5,6,7. O teste baseia-se em apenas três sessões: uma habituação sessão, sessão de um treinamento e teste de uma sessão. Treinamento envolve simplesmente a exploração visual de dois objetos idênticos, enquanto a sessão de teste envolve substituindo um dos objetos anteriormente explorados com um novo objeto. Porque os roedores têm uma preferência inata por novidade, um roedor que lembra o objeto familiar vai gastar mais tempo explorando o objeto romance7,8,9.
A principal vantagem da ORT sobre outros testes de memória roedores é que baseia-se na tendência natural dos roedores para explorar novidade8. Portanto, não há nenhuma necessidade de inúmeras sessões de treinamento ou qualquer reforço positivo ou negativo para motivar o comportamento. Isso significa que a ORT é muito menos estressante, em relação a outros testes10,11,12,13,14,15e requer significativamente testes de menos tempo para executar do que outros usados com memória, como o labirinto de água Morris ou labirinto de Barnes, que pode levar até uma semana ou mais. Consequentemente, as condições da ORT mais se assemelham aqueles usados no estudo de cognição humana, aumentando a validade ecológica do teste sobre muitos outros testes de memória de roedores. Da mesma forma, porque ORT é uma tarefa simples recordação visual, tem sido adaptado com sucesso para uso em numerosas espécies, incluindo os seres humanos e primatas não-humanos, para avaliar aspectos entre espécies diferentes de memória declarativa 2,16 ,17. Finalmente, o ORT pode ser facilmente modificado para examinar as diferentes fases da aprendizagem e memória (ou seja, aquisição, consolidação ou recordação), para avaliar diferentes tipos de memória (por exemplo, memória espacial), ou para a avaliação de retenção diferente intervalos (ou seja, memória de longo prazo curto prazo vs ).
A versatilidade da ORT oferece uma plataforma para inúmeras aplicações. Estudos podem fazer uso de agentes farmacológicos para interromper ou melhorar a memória. Variar o tempo de administração de drogas antes ou depois do treino ou antes do teste pode dica no neural subjacente mecanismos que levam à interrompido ou reforçada memória6,18,19, 20. de forma semelhante, a tecnologia de optogenetic pode ser usado para estes mesmo vários pontos de tempo para examinar a ativação/inibição neural que contribui para as diferentes fases de aprendizagem e memória. A ORT é também adequado para avaliar as diferenças em animais transgénicos, em estudos de lesão, modelos neurodegenerativas ou no envelhecimento estudos21,22,23,24, 25 , 26 , 27 , 28. o tempo entre o treinamento e teste, conhecido como o intervalo de retenção, pode ser alterado para avaliar qualquer uma dessas alterações na memória de curto e longo prazo26. Em última análise, a ORT pode ser usado como uma ferramenta para estudar alterações farmacológicas, genéticas e neurológicas de aprendizagem e memória, ou estas ferramentas podem ser usadas para estudar a base do aprendizado e memória no ORT.

<table><tbody><tr><td>Caixa de campo aberto</td><td>Panlab / Harvard</td><td>Apparatus LE800SC</td><td>Disponível em cinza, branco ou preto</td></tr><tr><td>ANY-maze</td><td>Stoelting Co.</td>Sistema <td>de rastreamento de comportamento</td> <td>60000</td></tr><tr><td>EthoVisionXT 12</td> Sistema de rastreamento de comportamento <td>Noldus</td><td></td><td>; requer câmera de vídeo de rastreamento de 3 pontos</td></tr><tr><td></td><td>Qualquer</td><td></td><td>câmera de vídeo deve ser montada diretamente acima do aparelho</td></tr><tr><td>70% Etanol&nbsp;</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP2818-4</td><td>Antes de iniciar o teste e entre os testes, cada objeto deve ser cuidadosamente limpo. O piso e as paredes do aparelho também devem ser limpos.&nbsp;</td></tr></tbody></table>

teste de reconhecimento de objeto romance para a investigação da aprendizagem e memória em ratos

Novel Object Recognition Test for the Investigation of Learning and Memory in Mice

O teste de reconhecimento de objeto (ORT) é um ensaio comportamental comumente utilizado para a investigação de vários aspectos da aprendizagem e memória em camundongos. A ORT é bastante simples e pode ser concluída em 3 dias: dia de habituação, dia de treinamento e teste de dia. Durante o treinamento, o mouse é permitido explorar 2 objetos idênticos. No dia do teste, um dos objetos de treinamento é substituído com um novo objeto. Porque os ratos têm uma preferência inata por novidade, se o mouse reconhece o objeto familiar, ele passará a maior parte de seu tempo no romance objeto. Devido a esta preferência inata, não há nenhuma necessidade para reforço positivo ou negativo ou tempo horários de treinamento. Além disso, o ORT também pode ser modificada para numerosas aplicações. O intervalo de retenção pode ser encurtado para examinar a memória de curto prazo, ou alongado para sondar a memória de longo prazo. Intervenção farmacológica pode ser usada em vários momentos antes do treinamento, após o treinamento, ou antes da recordação para investigar as diferentes fases da aprendizagem (ou seja, aquisição, cedo ou tarde consolidação ou recordação). Em geral, a ORT é um teste relativamente baixo-stress, eficiente para a memória em ratos e é apropriado para a detecção de alterações neuropsicológicos após manipulação farmacológica, biológica ou genética.

Uma configuração geral e experimental para a ORT é mostrada na Figura 2. Na habituação ratos dia (T0) são colocados na arena vazia por 5 min. de vinte e quatro horas depois, os ratos são colocados de volta na câmara com 2 objetos idênticos e permitiu explorar livremente por até 10 min (T1). Em testes dia (T2), os ratos são novamente colocados na arena, mas com um objeto familiar e um objeto de romance e permitiu explorar para até 10 min. O intervalo de retenç...

O teste de reconhecimento de objeto (ORT) é um ensaio simples e eficiente para a avaliação da aprendizagem e memória em camundongos. A metodologia é descrita abaixo.

Teste de reconhecimento de objeto romance para a investigação da aprendizagem e memória em ratos

The object recognition test (ORT) is a commonly used behavioral assay for the investigation of various aspects of learning and memory in mice. The ORT is ...

O objetivo geral deste ensaio comportamental é testar diversos aspectos da aprendizagem e da memória em camundongos. Este método pode ajudar a responder inúmeras questões na área da cognição de roedores, desde os fundamentos para o desenvolvimento de uma compreensão mais profunda sobre certos aspectos da aprendizagem e da memória em camundongos, até questões mais complexas, como o comprometimento cognitivo, incluindo modelos de doenças, como a doença de Alzheimer, e a exploração de possíveis melhorias cognitivas. A principal vantagem do ORT é sua simplicidade, eficiência e flexibilidade no estudo da aprendizagem e da memória em camundongos.Demonstrará este procedimento Andrei Jeltyi, técnico de laboratório do nosso laboratório. Comece selecionando objetos do tamanho de toupeiras que possam ser facilmente discriminados pelo animal, mas que tenham um grau semelhante de complexidade em características, como textura, forma ou brilho, para minimizar qualquer preferência induzida pelo objeto que possa enviesar os resultados. Além disso, para reduzir ainda mais as preferências induzidas, certifique-se de que os camundongos consigam subir em ambos os objetos ou em nenhum deles.A capacidade de subir em um objeto pode aumentar o interesse pela exploração. Para minimizar o estresse causado pela iluminação intensa, utilize iluminação baixa e difusa, com o centro do labirinto iluminado em torno de 20 lux. Acostume os camundongos a qualquer novo ambiente de teste por pelo menos uma hora antes do uso a cada dia e mantenha a temperatura e a umidade semelhantes às condições regulares de alojamento.Observe que os camundongos devem ser manipulados de uma a duas vezes ao dia, por pelo menos um minuto, durante um período de uma a duas semanas antes do teste. Por fim, para a arena principal, utilize uma câmara quadrada feita de plástico não poroso branco ou preto, em contraste com a cor do camundongo. Comece removendo o camundongo da sua gaiola de origem e colocando-o no centro da arena vazia e aberta.Permita a exploração livre da arena por cinco minutos. Assim que a gaiola domicílio estiver vazia, guarde-a para uso como gaiola de contenção no dia seguinte. Ao final de cinco minutos, retire o camundongo e coloque-o em uma gaiola de contenção.Não devolva o camundongo à sua gaiola original, pois isso pode afetar o comportamento dos demais camundongos a serem testados. Em seguida, limpe minuciosamente o equipamento entre os camundongos, utilizando etanol a 70% volume por volume. Depois, inicie a fase de treinamento ou T1, colocando dois objetos idênticos em quadrantes opostos da arena.Por exemplo, um no canto noroeste e um no canto sudeste. Prenda ao chão quaisquer objetos que sejam muito leves utilizando massa adesiva removível. Contrabalanceie o uso de cada conjunto de objetos, bem como a localização do objeto novo, em relação aos quatro cantos da arena.Certifique-se de saber qual diagonal é usada para qual animal, de modo que a diagonal utilizada no dia do treinamento seja a mesma usada no dia do teste para cada camundongo. Vinte e quatro horas após a habituação, retire o camundongo de sua gaiola de origem e coloque-o no centro da arena, equidistante dos dois objetos idênticos, para iniciar o treinamento. Permita a exploração livre por um mínimo de cinco minutos; se estiver utilizando uma linhagem de camundongos conhecida por apresentar baixa atividade locomotora ou exploratória, prolongue o ensaio para 10 minutos para todos os camundongos nos grupos.No final do ensaio de treinamento, retire o camundongo e coloque-o na gaiola de espera. Quando a gaiola de origem estiver vazia, guarde-a para uso como gaiola de espera no dia do teste. Certifique-se de limpar o equipamento e os objetos entre os camundongos.Em seguida, inicie a fase de teste ou T2, colocando o objeto familiar utilizado durante o treinamento e um objeto novo em quadrantes opostos da arena. Utilize os mesmos locais usados durante o treinamento para cada camundongo. No intervalo entre T1 e T2, retire o camundongo de sua gaiola de origem e coloque-o no centro da arena, equidistante do objeto familiar e do objeto novo.Permita exploração livre por 10 minutos. Por fim, ao final do ensaio de teste, retire o camundongo e coloque-o na gaiola de espera. Para análise, exploração é definida como o focinho voltado para o objeto a uma distância de dois a três centímetros, com movimentos ativos de varredura dos vibrissas.No entanto, o tempo em que o camundongo está sentado sobre o objeto não é contabilizado como tempo de exploração. Para T1 e T2, analise os primeiros cinco minutos e calcule o tempo total de exploração para ambos os objetos em cada sessão. Se o camundongo não atingir o tempo mínimo de exploração de 20 segundos para ambos os objetos, continue a análise além dos cinco minutos até que o tempo total de exploração ultrapasse 20 segundos.Estenda os tempos de T1 e T2 para 10 minutos em cepas de camundongos que apresentam baixa exploração e não atingem esse critério mínimo em cinco minutos, conforme observado durante testes pilotos. Por fim, se os camundongos não atingirem um tempo mínimo de exploração de 20 segundos para ambos os objetos em T1 ou T2 após 10 minutos, exclua-os da análise, pois não será possível confirmar se o animal passou tempo suficiente explorando para aprender e discriminar. A tarefa de reconhecimento de objetos é um método eficiente e flexível para estudar aprendizado e memória em camundongos, no qual inibidores da fosfodiesterase 2 demonstraram melhorar o desempenho durante esta tarefa.Em comparação com o veículo, a administração dos inibidores da PDE2 bay 60-7550 ou ND7001 aumentou significativamente a memória de maneira dependente da dose, quando administrados 30 minutos antes do treinamento. Quando administrados em diferentes momentos em relação ao treinamento e ao teste, o inibidor da PDE2 bay 60-7550 aumentou significativamente a memória quando dado 30 minutos antes do treinamento, bem como imediatamente após o treinamento e 30 minutos antes da recordação. Uma vez dominada, esta técnica pode ser concluída em dois a três dias, se realizada corretamente.Ao tentar este procedimento, é importante lembrar de realizar estudos pilotos e escolher cuidadosamente o intervalo entre T1 e T2, pois a escolha de um intervalo inadequado pode resultar em um efeito equivocado. Após este procedimento, outros métodos, como o labirinto de Barnes, podem ser realizados para responder perguntas adicionais, como diferenças na aprendizagem, que não podem ser totalmente abordadas usando os testes de reconhecimento de objetos. Após seu desenvolvimento, esta técnica abriu caminho para pesquisadores na área de aprendizagem e memória explorarem os mecanismos biológicos básicos da memória, bem como investigarem possíveis mecanismos de diversos déficits cognitivos em roedores.Após assistir a este vídeo, você deverá ter uma boa compreensão de como montar e planejar um experimento apropriado utilizando o teste de reconhecimento de objetos, incluindo a realização de estudos pilotos, a escolha dos objetos e a seleção do intervalo adequado entre T1 e T2. Obrigado por assistir e boa sorte com seus experimentos.

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Research

JoVE Journal

Behavior

Comportamento

Este artigo apresenta o protocolo de T-maze testes utilizando um aparelho modificado automatizado para avaliar as funções de aprendizagem e memória em camundongos.

T-maze Alternância forçado e Tarefas esquerda-direita para a Avaliação da Discriminação de Trabalho e Memória de Referência em Ratos

Comportamentos repetitivos e restritos de ordem superior (RRBs) perturbam a vida dos indivíduos afetados.  Esses comportamentos são difíceis de modelar em roedores, dificultando a pesquisa biomédica básica sobre possíveis tratamentos ou intervenções para RRBs.  Aqui, descrevemos a exploração de novos objetos como um ensaio potencial para RRBs de ordem superior em camundongos.

Exploração objeto romance como um ensaio de Potencial de ordem superior comportamentos repetitivos em Ratos

Descreve-se aqui uma abordagem de rastreio comportamental escalonada que pode ser utilizada para pesquisar compostos que exibem eficácia in vivo sobre comportamentos motores cognitivos e funcionais em modelos de ratinho transgénicos de β-amiloidose e tauopatia. Esses métodos são otimizados para pesquisar compostos para atividades em tarefas de memória de curto prazo e de trabalho.

Avaliação de Alternância Espontânea, Reconhecimento de Objetos Novos e Clasping de Membros em Modelos de Rato Transgênico de Neuropatologia Amilóide-β e Tau

Aqui, treinamos os ratos em uma tarefa de aprendizagem associativa para testar a discriminação do odor. Este protocolo permite também para estudos sobre aprendizagem-induzido mudanças estruturais no cérebro.

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Aqui nós fornecemos um protocolo que inclui instruções abrangentes para o estabelecimento econômico da localização de murino objeto e objeto romance reconhecimento testes comportamentais, incluindo o custo, projeto e construção de equipamentos necessários, bem como execução de testes comportamentais, coleta de dados e análise.

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Este artigo apresenta procedimentos experimentais para avaliação de prejuízos de memória em camundongos epilépticos induzidos por pilocarpina. Este protocolo pode ser usado para estudar os mecanismos fisiosiológicos do declínio cognitivo associado à epilepsia, que é uma das comorbidades mais comuns na epilepsia.

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O protocolo aqui apresentado fornece informações sobre o eletroencefalograma (EEG) simultâneo e avaliação comportamental em tempo real. Discutimos todas as etapas envolvidas neste protocolo como uma solução atraente para pesquisadores em muitos campos da neurociência, particularmente nas áreas de aprendizagem e memória.

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Este protocolo fornece etapas detalhadas para uma tarefa de localização de objetos com quatro repetições usando a mesma coorte de ratos. Codificação fraca e forte pode produzir memórias de curto e longo prazo. A flexibilidade do protocolo com a repetição pode ser benéfica para estudos envolvendo operações cirúrgicas economizando tempo e trabalho.

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Esse protocolo fornece uma descrição abrangente de um método para o registro simultâneo de sinais de cálcio de neurônios e astrócitos em múltiplas regiões cerebrais relacionadas à memória e demonstra sua aplicação durante um paradigma de aprendizagem e comportamento da memória.

Um método de fotometria de fibra bicolorida para registrar a atividade dos neurônios dos astrócitos em múltiplas regiões cerebrais durante comportamentos de aprendizagem e memória

Aprenda o teste de reconhecimento de objeto para investigar aprendizagem e memória em camundongos. Este protocolo simples e flexível avalia a memória de reconhecimento sem reforço, sendo ideal para estudos farmacológicos e de manipulação genética.

Teste de reconhecimento de objeto romance para a investigação da aprendizagem e memória em ratos

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