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Condrócitos diferenciadores de células-tronco pluripotentes induzidas por humanos derivadas de sa...
Condrócitos diferenciadores de células-tronco pluripotentes induzidas por humanos derivadas de sa...
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Developmental Biology
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JoVE Journal Developmental Biology
Differentiating Chondrocytes from Peripheral Blood-derived Human Induced Pluripotent Stem Cells

Condrócitos diferenciadores de células-tronco pluripotentes induzidas por humanos derivadas de sangue periférico

Full Text
9,679 Views
07:51 min
July 18, 2017

DOI: 10.3791/55722-v

Yueying Li2, Yong Hai1, Jiayu Chen3, Tie Liu1

1Department of Orthopedics, Beijing Chao-Yang Hospital,Capital Medical University, 2Key Laboratory of Genomic and Precision Medicine, Beijing Institute of Genomics,Chinese Academy of Sciences, 3Clinical and Translational Research Center of Shanghai First Maternity & Infant Hospital, School of Life Sciences and Technology,Tongji University

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Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Overview

This protocol outlines the generation of chondrogenic lineage cells from human peripheral blood-derived induced pluripotent stem cells (iPSCs) using an integration-free method. The technique is designed to facilitate cartilage regeneration research by utilizing patient-derived cells.

Key Study Components

Area of Science

  • Stem Cell Biology
  • Regenerative Medicine
  • Cartilage Repair

Background

  • Chondrogenic lineage cells are crucial for cartilage repair.
  • Induced pluripotent stem cells (iPSCs) can be derived from peripheral blood.
  • The method is designed to be serum and xeno-free.
  • Utilizing patient-derived cells can enhance personalized medicine approaches.

Purpose of Study

  • To develop a reproducible protocol for generating chondrogenic cells.
  • To explore the potential of peripheral blood as a source for iPSCs.
  • To contribute to advancements in cartilage regeneration techniques.

Methods Used

  • Plating human iPSCs in culture medium on a feeder layer of irradiated mouse embryonic fibroblasts.
  • Maintaining culture conditions at 37 degrees Celsius with 5% CO2.
  • Dissociating cells with dispace solution for subculturing when 80-90% confluent.
  • Inducing chondrogenic differentiation through specific culture conditions.

Main Results

  • The protocol successfully generates chondrogenic lineage cells.
  • Cells differentiate under serum and xeno-free conditions.
  • The method is reproducible and efficient for research purposes.
  • Patient-derived cells show promise for personalized cartilage repair strategies.

Conclusions

  • This integration-free method is a significant advancement in stem cell research.
  • Utilizing peripheral blood for iPSC generation is a viable approach.
  • The findings support further exploration of cartilage regeneration techniques.

Frequently Asked Questions

What are induced pluripotent stem cells?
Induced pluripotent stem cells (iPSCs) are reprogrammed cells that can differentiate into various cell types, including chondrogenic lineage cells.
Why is a serum and xeno-free environment important?
A serum and xeno-free environment reduces the risk of contamination and immune rejection, making the cells safer for potential therapeutic applications.
How does this method contribute to cartilage repair?
By generating chondrogenic lineage cells from patient-derived iPSCs, this method aims to enhance personalized treatment options for cartilage damage.
What are the advantages of using peripheral blood for iPSC generation?
Peripheral blood is a less invasive source for obtaining cells compared to other methods, making it more accessible for patients.
Can this protocol be reproduced in different laboratories?
Yes, the protocol is designed to be easily reproducible across different research settings.

Apresentamos um protocolo para gerar uma linhagem condrogênica de sangue periférico humano (PB) através de células-tronco pluripotentes induzidas (iPSCs) usando um método livre de integração, que inclui a formação de corpo embrionóide (EB), expansão de células fibroblásticas e indução condrogênica.

O objetivo geral deste procedimento é gerar células de linhagem condrogênica a partir de células-tronco pluripotentes induzidas derivadas do sangue periférico humano, ou células IPS. Este método pode ajudar a responder às principais questões no campo da regeneração da cartilagem sobre o uso de células sanguíneas periféricas derivadas do paciente como células C para a geração de células IPS para reparo da cartilagem. As principais vantagens desta técnica são que ela é facilmente reprodutível, e a diferenciação de condrócitos ocorre nas condições sérica e livre de xeno.

Comece colocando células IPS humanas em meio IPSC humano de quatro mililitros em uma placa de cultura de tecidos de 60 milímetros contendo uma monocamada de células alimentadoras de fibroblastos embrionários de camundongo irradiadas. Cultive as células a 37 graus Celsius em cinco por cento de dióxido de carbono. Quando as células-tronco forem 80 a 90 por cento confluentes, dissocie as células com solução dispace para subcultura.

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Biologia do Desenvolvimento Número 125 células-tronco pluripotentes induzidas sangue periférico diferenciação corpo embrionóide células fibroblásticas condrócitos

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