Criação de um modelo de roedor de aneurisma da Aorta Abdominal, bloqueando adventícia Vasa Vasorum perfusão

O objetivo geral deste procedimento é induzir hipóxia do tecido aórtico para o início de um aneurisma da aorta abdominal ou AAA com dilatação progressiva da aorta no rato. Este método pode ajudar a responder a questões-chave no período de pesquisa de aneurismas da aorta sobre os mecanismos responsáveis pelo desenvolvimento e ruptura dos aneurismas da aorta abdominal. A principal vantagem desta técnica é que as características morfológicas e patológicas do modelo de rato são semelhantes às observadas nos aneurismas da aorta abdominal humana.

Tivemos a ideia para esse método pela primeira vez quando estávamos investigando outra possibilidade de um AAA humano. A demonstração visual desse método é crítica, pois a cirurgia de indução de hipóxia é difícil de aprender apenas com instruções versadas em texto. Demonstrando o procedimento estarão Tatsuro Yata, nosso cirurgião vascular, e Hirona Kugo, ambos ex-médicos de nosso laboratório.

Depois de confirmar o nível apropriado de sedação por pinça do dedo do pé, use um barbeador elétrico para raspar os pelos abdominais de um rato de 300 a 400 miligramas, seguido por uma desinfecção sequencial com álcool e solução de iodopovidona da pele exposta. Coloque o rato na mesa de operação em decúbito dorsal e aplique pomada nos olhos do animal. Em seguida, use uma tesoura para fazer uma incisão abdominal na linha média ventral e use gaze estéril e um afastador de ferida para embalar o conteúdo abdominal dentro da cavidade abdominal.

Para separar a aorta do tecido perivascular, use uma pinça para pegar e rasgar suavemente o retroperitônio, expondo a parede da aorta. Em seguida, esfolie a aorta infrarrenal dentro do espaço retroperitoneal da veia renal esquerda até a bifurcação do tecido perivascular. Use uma sutura de seda 5-0 para ligar os vasos que se ramificam da aorta abdominal para bloquear o suprimento de sangue em um ponto distante da aorta que não estreite o lúmen aórtico.

Para bloquear o fluxo sanguíneo aórtico, coloque clipes vasculares logo abaixo da artéria renal e logo acima da bifurcação da aorta. Semelhante à criação de uma hemorragia pontual na superfície da parede aórtica, insira a microtesoura 5 mm distalmente do clipe aórtico adjacente aos ramos da artéria renal para cortar a parede aórtica anterior e use uma agulha permanente de calibre 24 para inserir superficialmente um cateter de poliuretano através da incisão. Conecte uma seringa de 1 mL cheia de água ao poliuretano e lave o sangue restante da aorta.

Em seguida, corte um novo cateter de poliuretano com 10 mm de comprimento e insira completamente este cateter na incisão do lúmen aórtico. Reposicione o ponto médio do cateter para corresponder à localização da incisão e use um 8-0 sutura de monofilamento para fechar a incisão com uma sutura interrompida. Ligue a aorta abdominal com um nó de cirurgião usando sutura de seda 5-0 e o cateter de poliuretano.

Quando o cateter estiver seguro, remova os clipes vasculares na bifurcação aórtica e abaixo da artéria renal para restaurar o fluxo sanguíneo anterógrado e confirmar a presença de pulsação aórtica macroscópica. Depois de remover a gaze, use uma sutura de polipropileno 4-0 para fechar firmemente a incisão abdominal em duas camadas para evitar um órgão saliente. Em seguida, aplique lidocaína tópica na incisão abdominal e coloque o rato em uma almofada de aquecimento com monitoramento até a recompensa total.

No pós-operatório, observar o desenvolvimento da aorta aumentada em um ecograma ultrassonográfico, medindo o diâmetro máximo da borda interna à borda externa da aorta abdominal de acordo com os protocolos padrão. 28 dias após a cirurgia, use um bisturi para abrir o abdômen com uma nova incisão ventral e use uma tesoura para colher o aneurisma. Coloque as aortas colhidas em formalina tamponada a 10% por 24 a 48 horas.

Após a inclusão das aortas em parafina e a obtenção de cortes do tecido aórtico, de acordo com os protocolos padrão, hidratar os cortes fixos de parafina em água destilada por 10 minutos, seguido de incubação em hematoxilina de Verhoeff. A ferrugem e a corrosão podem ser identificadas com a hematoxilina de Verhoeff e a atividade do laboratório de soluções de van Gieson. Portanto, o frescor e os tempos de incubação desses corantes de tecido são importantes para arquivamento e coloração opcional.

Após 25 minutos, enxágue as seções com três lavagens de 1 minuto em água, seguidas de 10 a 30 mergulhos em solução diferenciadora. Enxágue as seções três vezes em água novamente e coloque as amostras em tiossulfato de sódio a 5% por um minuto. Após outra lavagem com água, mergulhe as amostras na solução de van Gieson por cinco minutos.

Em seguida, desidrate os tecidos em imersões ascendentes de etanol de 30 segundos, seguidas de depuração com duas incubações de xileno de 5 minutos. Em seguida, use o meio de montagem de ressonância para cobrir as seções com lamínulas de tamanho apropriado. Nessas imagens, é mostrado um aneurisma representativo da aorta abdominal, 28 dias após a inserção do cateter.

A medição das extremidades superior e inferior da aorta por ultrassonografia transabdominal revela um diâmetro normal sem dilatação imediatamente após a colocação do cateter, que aumenta para um tamanho máximo em cerca de 14 dias após a colocação e permanece inalterado ou aumenta ligeiramente até o final do período experimental. A análise histopatológica do aneurisma no dia 28 revela uma degradação proeminente das fibras elásticas em comparação com a observada no dia zero. Uma vez dominada, essa técnica pode ser concluída em cerca de uma hora se for executada corretamente.

Após este procedimento, outros métodos, como a análise in vitro, podem ser realizados para responder a perguntas adicionais sobre as funções seriais individuais. Após seu desenvolvimento, essa técnica abriu caminho para pesquisadores no campo do aneurisma da aorta abdominal explorarem a doença em dados demográficos específicos de pacientes. Depois de assistir a este vídeo, você deve ter uma boa compreensão de como induzir a hipóxia do tecido aórtico para o início de aneurismas da aorta abdominal com dilatação progressiva da aorta no rato.

Não se esqueça de que trabalhar com instrumentos cirúrgicos pode ser extremamente perigoso e que precauções contra lesões e infecções devem sempre ser tomadas durante a realização deste procedimento.