Um Mouse 5/6^th nefrectomia modelo que induz a miocardiopatia urêmica Experimental

O objetivo geral deste procedimento é configurar um modelo simples de nefrectomia parcial de cinco sextos em camundongos com ligadura de vara com uma taxa de sobrevivência melhor do que os modelos tradicionais. Este método pode ajudar a responder a questões-chave no campo da doença renal crônica sobre o desenvolvimento e o potencial tratamento terapêutico da cardiomiopatia urêmica. A principal vantagem dessa técnica é que ela é um modelo animal fácil e consistentemente reprodutível que mimetiza a patologia da doença renal crônica em pacientes humanos.

Geralmente, os indivíduos novos neste método terão dificuldades por causa dos rins, vasos sanguíneos e ureteres muito menores no camundongo. Comece confirmando o nível apropriado de sedação por falta de resposta ao beliscão do dedo do pé e aplicando lubrificante nos olhos do mouse. Coloque o mouse em uma almofada de aquecimento e insira um termômetro retal para manter a temperatura corporal em torno de 37 graus Celsius durante o procedimento.

Em seguida, coloque o animal do lado direito e raspe o cabelo sobre a área cirúrgica. Remova qualquer cabelo restante com creme depilatório e desinfete a pele exposta com solução de polihidroxidina e etanol 70%. Alinhe uma roupa cirúrgica em autoclave sobre o local da cirurgia.

E faça uma incisão lombar de aproximadamente um centímetro através da pele e do tecido muscular. Usando o bisturi e a pinça, separe o músculo e a fáscia para expor o rim esquerdo. Em seguida, use uma pequena pinça romba para puxar suavemente a gordura perirrenal para extrair o rim da cavidade abdominal.

Provoque suavemente o tecido conjuntivo e a glândula adrenal da extremidade superior do rim em direção ao piloro médio do órgão, onde os vasos sanguíneos entram e saem do tecido renal. Isole o ureter ao redor da metade inferior do rim dentro do tecido conjuntivo e separe suavemente o tecido conjuntivo do rim para garantir que o ureter não esteja ligado. É essencial separar o tecido conjuntivo com cuidado para que o ureter não seja danificado e não sangre.

Isole o ureter ao redor da metade inferior do rim dentro do tecido conjuntivo. Em seguida, use três fios de sutura de seda zero para ligar o rim a aproximadamente 0,4 centímetros da porção superior, em direção ao meio do piloro e 0,4 centímetros da porção inferior em direção ao piloro. Ao apertar as suturas, aplique tensão suficiente para comprometer o suprimento de sangue para a porção distal do rim sem causar sangramento em nenhum dos lados.

Se nenhum sangramento for observado após dois minutos, retorne suavemente o rim ao seu local anatômico original e use quatro pontos zero e três zero para fechar as camadas muscular e cutânea, respectivamente. Em seguida, aplique pomada antibiótica na área cirúrgica e aloje o camundongo individualmente com uma lâmpada de calor e monitorando até a decúbito esternal. Sete dias após a ligadura polar, exponha o rim direito como acabamos de demonstrar.

Use uma pinça romba para limpar a gordura circundante e o tecido conjuntivo e coloque frouxamente duas suturas de seda zero ao redor da artéria e veia renal. Provoque suavemente o tecido conjuntivo e a glândula adrenal da extremidade superior do rim em direção ao piloro médio. Deslocando suavemente o ureter da extremidade inferior do tecido, desamarre todos os vasos sem causar sangramento.

Em seguida, mova um nó de ligadura frouxa em direção ao lado da aorta abdominal e o segundo nó de ligadura frouxa em direção ao lado do rim. E amarre a ligadura da aorta abdominal com nós duplos. Um nó sólido mudará a cor do rim direito.

Amarre o segundo nó de ligadura com nós duplos, deixando espaços entre os nós para que os vasos possam ser cortados, e corte os vasos renais. Depois de remover o rim, feche as camadas muscular e cutânea como acabamos de demonstrar. Em seguida, seque o rim com gaze estéril e pese o tecido renal colhido.

Quatro semanas após a cirurgia, os camundongos com nefrectomia parcial demonstraram níveis significativamente aumentados de citatina C, creatinina e nitrogênio ureico no sangue no plasma em comparação com animais de cirurgia simulada. A anemia estimulada por nefrectomia parcial também é aparente, como evidenciado pelos níveis significativamente mais baixos de hematócrito nos animais ligados polares. A hipertrofia cardíaca e a disfunção diastólica nos camundongos parcialmente nefrectomizados são indicadas por um aumento da relação coração-peso corporal e pela análise ecocardiográfica transtorácica que revela aumentos significativos nas espessuras das paredes posterior e anterior, no índice de desempenho miocárdico e no índice de massa do ventrículo esquerdo.

A fibrose cardíaca mediada por nefrectomia parcial também é demonstrada por aumentos na expressão de colágeno tipo 1 em homogeneizados de ventrículo esquerdo e homogeneizados de rim remanescente esquerdo. Além disso, o estresse oxidativo desempenha um papel importante na cardiomiopatia urêmica experimental, estimulando significativamente a modificação direta da carbonilação de proteínas de múltiplas proteínas e a ativação da tirosina-proteína quinase proto-oncogênica nos homogeneizados do ventrículo esquerdo. Uma vez dominada, essa técnica pode ser concluída em 40 minutos se for executada corretamente.

Ao tentar este procedimento, é importante lembrar de verificar a frequência respiratória do animal e ajustar os isofluranos conforme apropriado. Após esse procedimento, outros experimentos, como comparar os efeitos de tratamentos medicamentosos específicos na recuperação da nefrectomia parcial, podem ser realizados para responder a perguntas tradicionais sobre tratamentos terapêuticos específicos de interesse. Após seu desenvolvimento, essa técnica abriu caminho para pesquisadores no campo da doença renal crônica explorarem a patologia e o potencial rastreamento de drogas na cardiomiopatia urêmica.

Depois de assistir a este vídeo, você deve ter uma boa compreensão de como configurar um modelo de nefrectomia parcial no mouse.