Name: Um Mouse 5/6th nefrectomia modelo que induz a miocardiopatia urêmica Experimental (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-11-07T12:30:00.000+00:00
Duration: 7 min 52 s
Description: Aprenda a realizar nefrectomia parcial 5/6 em camundongos com ligadura de polo para estudar cardiomiopatia urêmica. Este modelo reproduzível melhora a sobrevivência e imita a patologia da doença renal crônica humana.

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Este trabalho foi financiado pelo NIH R15 1R15DK106666-01A1 (para J. Liu) e NIH RO1 HL071556 (para o J.I. Shapiro).

todos os cuidados com animais e experiências foram aprovadas pelo Marshall University de cuidados institucionais com animais e Comissão de utilização (IACUC) de acordo com o National Institutes of Health (NIH) guia para o cuidado e o uso de animais de laboratório. Camundongos C57BL/6 do sexo masculino (10-12 semanas de idade) foram alojados em uma unidade animal livre de patógeno em designado quartos equipados com gaiolas que fornecem ar purificado, sob um ciclo claro/escuro de 12 h. Comida e água foram fornecidos ad libitum.
 1. preparação de cirurgia Nota: os instrumentos cirúrgicos e materiais são obtidos de fontes diferentes que não são específicas para operações de cirurgia. Instrumentos e materiais de outras fontes também podem ser usados para a mesma finalidade. Consulte a Tabela de materiais, para obter uma lista de instrumentos cirúrgicos.
Tabela de <ol><li>de preparação para a cirurgia <ol><li>lugar a seguir ao alcance de funcionamento: Aquecimento pad, lâmpada halógena, tanque de oxigênio e tanque de isoflurano, vaporizador de isoflurano, tosquiadeira de cabelo, creme da remoção do cabelo, escalas, esterilizadas funcionamento conjunto, linho cirúrgico esterilizado, cotonetes, álcool a 70%, solução de polyhydroxydine (contendo 1% de iodo), solução de NaCl 0,9%, buprenorfina de seringas e agulhas (30 G), suturas de seda 3-0 e 4-0, 1ml e penicilina, pomada antibiótica, e pomada lubrificante.</li>
		<li>Limpar a gaiola e coloque uma almofada de calor sob o fundamento para ratos habitação após a cirurgia.</li>
	</ol></li></ol> 2. Passo-um cirurgia: polo da ligadura da esquerda rim Nota: manter condições estéreis durante a cirurgia. Cobrir os instrumentais cirúrgicos esterilizados em autoclave com uma almofada de estéril. Manter mais de um conjunto de instrumentos cirúrgicos na mão por mais de uma cirurgia evitar contaminação cruzada durante a cirurgia. Se os instrumentos precisam ser usados novamente, no caso de múltiplas cirurgias, desinfetar os instrumentos com solução de betadine e etanol a 70% e em seguida esterilizar em um esterilizador de grânulo de vidro germinador por 5 min. desinfectar a área de atuação com 70% de etanol. Vestir a toga, máscara (para cobrir nariz e boca), PAC (para cobrir a cabeça) e um par de luvas estéreis. Trocar as luvas após cada cirurgia.
<ol><li>Lavar e desinfectar as mãos e usar luvas cirúrgicas estéreis. Usar uma máscara e um tampão principal.</li>
	<li>Desinfectar a tabela com álcool a 70%. Aplicar a pomada lubrificante para ambos os olhos do rato para evitar ressecamento do olho enquanto sob anestesia.</li>
	<li>Coloque o mouse em uma câmara de indução de um sistema de vaporizador de isoflurano e induzir anestesia com uma mistura de 2,5% de isoflurano com oxigênio a 100% (0,8 - 1,2 L/min) 1-2 min. 
	Nota: A eficácia da anestesia foi determinada pela ausência de reflexo de dor provocada por beliscar a cauda, bem como pela ausência de reflexo palpebral ao tocar a pálpebra.</li>
	<li>Injetar penicilina (40.000 unidade/kg de peso corporal, IM) e a buprenorfina (0,02 mg/kg de peso corporal, SC) para prevenir a infecção e dor durante a cirurgia.</li>
	<li>Coloque o mouse sobre uma almofada de aquecimento (inicialmente definido a 42 ° C) com um termômetro retal para manter e monitorar a temperatura do corpo em torno de 37 ° C durante o procedimento. Coloque o nariz de rato para o cone do nariz e ventilar com uma mistura de 0,8-1,2% de isoflurano com oxigênio a 100% (0,8-1,2 L/min) durante a cirurgia.</li>
	<li>Posicione o mouse no lado direito. Raspar os pelos da área cirúrgica com um aparador de cabelo e em seguida, retire com o creme depilatório. Desinfecte o local com solução de polyhydroxydine (contendo 1% de iodo) seguido de etanol a 70%. Alinhar o linho cirúrgico autoclavado na área cirúrgica.</li>
	<li>Fazer uma incisão lombar cm de ~1.0 e separar o músculo e a fáscia para expor o rim esquerdo, usando o bisturi e pinça ( Figura 1a).</li>
	<li>Retirar o rim esquerdo suavemente puxando a gordura perirrenal com pequenas pinças sem corte. No processo, a fim de não perturbar a glândula adrenal, mova a glândula adrenal para cima do rim com fórceps.</li>
	<li>Usando fórceps rombudo, tease suavemente o tecido conjuntivo e glândula adrenal da extremidade superior do rim em direção ao piloro médio do rim onde os vasos sanguíneos entram e saem. Identificar e isolar o ureter. 
	Nota: O ureter situa-se próximo a metade inferior do rim incorporado no tecido conjuntivo e claramente visível sob luz.</li>
	<li>Suavemente pegue o tecido conjuntivo e separar o tecido renal para garantir que o ureter não é ligado.</li>
	<li>Antes de ligadura polar, use uma régua estéril para identificar a parte de 1/3 superior e inferior do rim. O rim de rato é geralmente em torno de 1.25-1.5 cm tempo</li>
	<li>Ligam usando uma seda 3-0 sequência de sutura e com os devidos forçar, aproximadamente 0,4 cm da parte superior para o meio do piloro e do mesmo modo, 0,4 cm da porção inferior em direção ao piloro ( Figura 1a, pontilhado linhas).</li>
	<li>Depois ligando os dois polos ( Figura 1b), permitem um tempo de observação de 2 min certificar-se de que não há nenhuma hemorragia. 
	Nota: No processo, é muito importante evitar a ligadura da glândula supra-renal, artéria renal e ureter. Se o ureter esquerdo é ligado, o rato vai morrer após a remoção do rim direito em cirurgia o passo dois. A força da ligadura pode restringir o fluxo de sangue para os polos sem causar hemorragia intra-renal. Dentro de 1-2 min depois da ligadura, os polos são descoloridos devido o limite do fluxo de sangue para os polos.</li>
	<li>Empurre o rim esquerdo de volta para o lugar original. Feche o músculo e a pele com fios de sutura de seda 4-0 e 3-0, respectivamente. Aplique pomada antibiótica na área cirúrgica para uma melhor recuperação e desinfecção.</li>
	<li>Depois da ligadura, casa o mouse separadamente em uma gaiola com uma lâmpada de calor sobre a gaiola para que a área da cama é perto de 37 ° C (monitorizado com um termômetro), antes de colocar os animais em gaiolas individuais. 
	Nota: Monitorar o mouse até que ele recuperou a consciência suficiente para manter a prostração esternal.</li>
	<li>Permitir o fácil acesso a água e comida durante a recuperação. Administrar a penicilina e a buprenorfina cada 12 h para o primeiro 3 dias depois da cirurgia prevenir a infecção e dor. 
	Nota: O mouse deve recuperar do trauma da cirurgia dentro de 2-3 dias e deve ser volta ao normal comer, beber e se movendo. Desta vez, na casa do mouse individualmente para recuperação completa. O seguinte deve ser monitorado: beber, comer, caminhar, padrões, andar desajeitado, encurvada atrás, descarga nasal ou ocular e comportamento agressivo. Eutanásia o mouse se mostra qualquer sinal de convulsão, coma, infecção intratável, dificuldade para andar, perda da marcha, incapaz de comer e beber e perda de mais de 15% peso de pré-operação.</li>
</ol> 3. Cirurgia de dois passo: remoção de rim direito <ol><li>sete dias mais tarde, expor o rim direito, conforme descrito para o rim esquerdo em passos 2.1 a 2.10, exceto Coloque o mouse sobre seu lado esquerdo.</li>
	<li>Colocar o rim direito sobre o linho e limpar gordura e tecido conjuntivo circundantes com fórceps rombudo.</li>
	<li>Identificar a veia e artéria renal e em seguida coloque duas ligaduras (seda 3-0) cada com um único nó solto ao redor dos vasos. Tease suavemente o tecido conjuntivo e adrenal glândula da extremidade superior do rim em direção ao piloro médio do rim usando fórceps rombudo. Suavemente, deslocar o ureter da extremidade inferior e amarrar todos os vasos juntos (seda 3-0) sem causar sangramento.</li>
	<li>Mover os dois nós de ligadura solta ao longo dos vasos. Um em direção ao lado da aorta abdominal e o outro para o lado do rim.</li>
	<li>Primeiro amarrar o nó de ligadura (para o lado de aorta abdominal) com nó duplo; um nó sólido mudará a cor do rim direito. Amarrar o nó de ligadura (para o lado do rim) com nó duplo. Deixe espaço suficiente entre estes dois nós dobro a fim de cortar os vasos entre os dois nós sem cortar os maçaricos de ligadura.</li>
	<li>Cortar os vasos renais entre os dois nós e remover o rim direito. Verifique possível sangramento dos vasos renais.</li>
	<li>Secar o rim direito, usando gaze estéril e pesá-lo</li>
	<li>Fechar a incisão do músculo com sequência de sutura de seda 4-0 e, em seguida, feche a incisão da pele com sequência de sutura de seda 3-0.</li>
	<li>De casa o mouse separadamente em uma gaiola limpa solitário com uma lâmpada de calor sobre a gaiola (passo 2.15), com fácil acesso à água e comida para pelo menos 24 h para recuperação. Administrar a penicilina e a buprenorfina cada 12 h por 3 dias para evitar infecção e dor. 
	Nota: O mouse deve recuperar do trauma da cirurgia dentro de 2-3 dias e deve ser volta ao normal de comer, a beber e a mover-se.</li>
	<li>Após a cirurgia, monitorar os ratos duas vezes ao dia por três dias e depois uma vez por dia para a duração do experimento. Siga os procedimentos de monitorização e tratamento pós-cirúrgicos descritos na etapa 2.16.</li>
</ol> 4. Sham a cirurgia <ol><li>para a cirurgia de Souza, executar os mesmos procedimentos de cirurgia, incluindo a exposição do rim, dissecação de tecido e o fechamento da ferida, mas sem a ligadura de polo do rim esquerdo ou remoção do rim direito.</li></ol>
 5. avaliação de miocardiopatia urêmica Experimental <ol><li>um dia antes do sacrifício, executar uma ecocardiografia transtorácica e capturar imagens 18. 
	Nota: Aqui, a Ecocardiografia transtorácica foi realizada com um mouse tratamento tabela e termômetro retal. As imagens ecocardiográficas foram capturadas usando um 18-38 MHz funcionamento transdutor de frequência ligado a um sistema da imagem latente. Espessura de parede relativo (RWT), índice de desempenho miocárdico (MPI) e índice de massa de ventrículo esquerdo (LVMI) foram calculados como descrevemos 18.</li>
	<li>Na hora do sacrifício, medir o peso do corpo. Hematócrito (HCT) com uma centrífuga HCT conforme fabricante &#39; instruções s. Prepare as amostras de plasma utilizando tubos revestidos por heparina por centrifugação por 10min a 1.500 x g a 4 ° C em uma centrífuga de mesa refrigerada as amostras de sangue. Medir a cistatina C, creatinina e usando kits de seguir o fabricante &#39; instruções s. Realizar as medições em duplicado.</li>
	<li>No final do experimento, anestesiar os ratos com cetamina (90 mg/kg, IP) e xylaxine (10 mg/kg, IP) e sacrificar-se por toracotomia. Medir o peso do coração após removê-lo do peito. Prepare cardíaco (LV) e rim homogenates, bem como a determinação do colágeno tipo 1 (COL-1), a fosforilação de carbonilação c-Src e proteína, como descrito antes 18 , 19.</li>
</ol>

<ol><li>Sarnak, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Kidney+Disease+as+a+Risk+Factor+for+Development+of+Cardiovascular+Disease%3A+A+Statement+From+the+American+Heart+Association+Councils+on+Kidney+in+Cardiovascular+Disease%2C+High+Blood+Pressure+Research%2C+Clinical+Cardiology%2C+and+Epidemiology+and+Prevention%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Kidney Disease as a Risk Factor for Development of Cardiovascular Disease: A Statement From the American Heart Association Councils on Kidney in Cardiovascular Disease, High Blood Pressure Research, Clinical Cardiology, and Epidemiology and Prevention.</a> Circulation. 108 (17), 2154-2169 (2003).</li>
<li>Levey, A. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Controlling+the+epidemic+of+cardiovascular+disease+in+chronic+renal+disease%3A+what+do+we+know%3F+What+do+we+need+to+learn%3F+Where+do+we+go+from+here%3F+National+Kidney+Foundation+Task+Force+on+Cardiovascular+Disease%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Kidney+Dis%22%5BJournal%5D)">Controlling the epidemic of cardiovascular disease in chronic renal disease: what do we know? What do we need to learn? Where do we go from here? National Kidney Foundation Task Force on Cardiovascular Disease.</a> Am J Kidney Dis. 32 (5), 853-906 (1998).</li>
<li>Schiffrin, E. L., Lipman, M. L., Mann, J. F. E. Chronic Kidney Disease. Effects on the Cardiovascular System. 116 (1), 85-97 (2007).</li>
<li>Foley, R. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinical+and+echocardiographic+disease+in+patients+starting+end-stage+renal+disease+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Kidney+Int%22%5BJournal%5D)">Clinical and echocardiographic disease in patients starting end-stage renal disease therapy.</a> Kidney Int. 47 (1), 186-192 (1995).</li>
<li>Foley, R. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+prognostic+importance+of+left+ventricular+geometry+in+uremic+cardiomyopathy%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Soc+Nephrol%22%5BJournal%5D)">The prognostic importance of left ventricular geometry in uremic cardiomyopathy.</a> J Am Soc Nephrol. 5 (12), 2024-2031 (1995).</li>
<li>Alhaj, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Uremic+cardiomyopathy%3A+an+underdiagnosed+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Congest+Heart+Fail%22%5BJournal%5D)">Uremic cardiomyopathy: an underdiagnosed disease.</a> Congest Heart Fail. 19 (4), 40-45 (2013).</li>
<li>Gulati, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Association+of+fibrosis+with+mortality+and+sudden+cardiac+death+in+patients+with+nonischemic+dilated+cardiomyopathy%5BTitle%5D)+AND+%22JAMA%22%5BJournal%5D)">Association of fibrosis with mortality and sudden cardiac death in patients with nonischemic dilated cardiomyopathy.</a> JAMA. 309 (9), 896-908 (2013).</li>
<li>London, G. M., Parfrey, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cardiac+disease+in+chronic+uremia%3A+pathogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Adv+Ren+Replace+Ther%22%5BJournal%5D)">Cardiac disease in chronic uremia: pathogenesis.</a> Adv Ren Replace Ther. 4 (3), 194-211 (1997).</li>
<li>Mohmand, B., Malhotra, D. K., Shapiro, J. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Uremic+cardiomyopathy%3A+role+of+circulating+digitalis+like+substances%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Biosci%22%5BJournal%5D)">Uremic cardiomyopathy: role of circulating digitalis like substances.</a> Front Biosci. 10, 2036-2044 (2005).</li>
<li>Himmelfarb, J., McMonagle, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Manifestations+of+oxidant+stress+in+uremia%5BTitle%5D)+AND+%22Blood+Purif%22%5BJournal%5D)">Manifestations of oxidant stress in uremia.</a> Blood Purif. 19 (2), 200-205 (2001).</li>
<li>Okamura, D. M., Himmelfarb, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tipping+the+redox+balance+of+oxidative+stress+in+fibrogenic+pathways+in+chronic+kidney+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatr+Nephrol%22%5BJournal%5D)">Tipping the redox balance of oxidative stress in fibrogenic pathways in chronic kidney disease.</a> Pediatr Nephrol. 24 (12), 2309-2319 (2009).</li>
<li>Himmelfarb, J., Stenvinkel, P., Ikizler, T. A., Hakim, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+elephant+in+uremia%3A+oxidant+stress+as+a+unifying+concept+of+cardiovascular+disease+in+uremia%5BTitle%5D)+AND+%22Kidney+Int%22%5BJournal%5D)">The elephant in uremia: oxidant stress as a unifying concept of cardiovascular disease in uremia.</a> Kidney Int. 62 (5), 1524-1538 (2002).</li>
<li>Becker, B. N., Himmelfarb, J., Henrich, W. L., Hakim, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reassessing+the+cardiac+risk+profile+in+chronic+hemodialysis+patients%3A+a+hypothesis+on+the+role+of+oxidant+stress+and+other+non-traditional+cardiac+risk+factors%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Soc+Nephrol%22%5BJournal%5D)">Reassessing the cardiac risk profile in chronic hemodialysis patients: a hypothesis on the role of oxidant stress and other non-traditional cardiac risk factors.</a> J Am Soc Nephrol. 8 (3), 475-486 (1997).</li>
<li>Drummond, C. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reduction+of+Na%2FK-ATPase+affects+cardiac+remodeling+and+increases+c-kit+cell+abundance+in+partial+nephrectomized+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Heart+Circ+Physiol%22%5BJournal%5D)">Reduction of Na/K-ATPase affects cardiac remodeling and increases c-kit cell abundance in partial nephrectomized mice.</a> Am J Physiol Heart Circ Physiol. 306 (12), 1631-1643 (2014).</li>
<li>Kennedy, D. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Partial+nephrectomy+as+a+model+for+uremic+cardiomyopathy+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Renal+Physiol%22%5BJournal%5D)">Partial nephrectomy as a model for uremic cardiomyopathy in the mouse.</a> Am J Physiol Renal Physiol. 294 (2), 450-454 (2008).</li>
<li>Haller, S. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Monoclonal+antibody+against+marinobufagenin+reverses+cardiac+fibrosis+in+rats+with+chronic+renal+failure%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Hypertens%22%5BJournal%5D)">Monoclonal antibody against marinobufagenin reverses cardiac fibrosis in rats with chronic renal failure.</a> Am J Hypertens. 25 (6), 690-696 (2012).</li>
<li>Tian, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spironolactone+attenuates+experimental+uremic+cardiomyopathy+by+antagonizing+marinobufagenin%5BTitle%5D)+AND+%22Hypertension%22%5BJournal%5D)">Spironolactone attenuates experimental uremic cardiomyopathy by antagonizing marinobufagenin.</a> Hypertension. 54 (6), 1313-1320 (2009).</li>
<li>Liu, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Attenuation+of+Na%2FK-ATPase+Mediated+Oxidant+Amplification+with+pNaKtide+Ameliorates+Experimental+Uremic+Cardiomyopathy%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Attenuation of Na/K-ATPase Mediated Oxidant Amplification with pNaKtide Ameliorates Experimental Uremic Cardiomyopathy.</a> Sci Rep. 6, 34592(2016).</li>
<li>Yan, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Involvement+of+reactive+oxygen+species+in+a+feed-forward+mechanism+of+Na%2FK-ATPase-mediated+signaling+transduction%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">Involvement of reactive oxygen species in a feed-forward mechanism of Na/K-ATPase-mediated signaling transduction.</a> J Biol Chem. 288 (47), 34249-34258 (2013).</li>
<li>Leelahavanichkul, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Angiotensin+II+overcomes+strain-dependent+resistance+of+rapid+CKD+progression+in+a+new+remnant+kidney+mouse+model%5BTitle%5D)+AND+%22Kidney+Int%22%5BJournal%5D)">Angiotensin II overcomes strain-dependent resistance of rapid CKD progression in a new remnant kidney mouse model.</a> Kidney Int. 78 (11), 1136-1153 (2010).</li>
<li>Ma, L. J., Fogo, A. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Model+of+robust+induction+of+glomerulosclerosis+in+mice%3A+importance+of+genetic+background%5BTitle%5D)+AND+%22Kidney+Int%22%5BJournal%5D)">Model of robust induction of glomerulosclerosis in mice: importance of genetic background.</a> Kidney Int. 64 (1), 350-355 (2003).</li>
</ol>

Os autores não têm nada para divulgar.

O rato 5/6th PNx modelo tem sido amplamente utilizado para estudar CKD. Devido o muito rim tamanho menor no mouse, a ligadura da artéria clássica e ressecção de polo são muito desafiadores em modelos do rato com possíveis altas taxas de mortalidade e inesperado sangramento/hemorragia.
Adotamos um modelo de PNx rato com ligadura de polo para superar a perda de sangue/hemorragias. Este modelo de PNx leva menos tempo com a taxa de sobrevivência melhorada e alta reprodutibilidade. Este ...

CKD, também conhecida como insuficiência renal crônica, é uma perda progressiva da função renal ao longo do tempo que eventualmente se desenvolve em insuficiência renal permanente. CKD, de Estados de doença renal precoce do estágio ao estágio final da doença renal (DRT), é um grande fator de risco para eventos cardiovasculares e mortalidade e desenvolve progressivamente para o fenótipo clínico chamado "miocardiopatia urêmica"1, 2,3. A miocardiopatia urêmica em pacientes com DRC ou DRT está associada com anormalidades cardiovasculares, principalmente causadas por sobrecarga do ventrículo esquerdo (LV) pressão e/ou volume, levando a hipertrofia LV (HVE), dilatação de LV e disfunção sistólica LV4 ,5,6. Fibrose cardíaca é outro processo patológico comum de miocardiopatia urêmica que reduz a conformidade cardíaca resultando em disfunção diastólica LV. Fibrose cardíaca severa pode levar à morte súbita cardíaca, mesmo naqueles sem sintomas cardíacos7.
5/6th PNx é um modelo animal de CKD comumente usado para estudos animais envolvendo a insuficiência renal, miocardiopatia urêmica e hipertensão. PNx é alcançado pela ablação do parênquima renal de 5/6. O modelo de rato foi desenvolvido inicialmente com as duas mais comuns protocolos empregados sendo a ressecção cirúrgica ou infarto. O modelo de PNx do rato é um modelo extremamente útil para estudar a miocardiopatia urêmica, com elevações substanciais na pressão arterial, hipertrofia cardíaca e insuficiência diastólica. Mais tarde, desenvolveram-se modelos de rato PNx, operados com as técnicas semelhantes, como o modelo de rato, devido à ampla disponibilidade e facilidade de fazer manipulações genéticas no sistema de rato.
É bem documentado que o estresse oxidante sistêmica é uma característica constante de ambos miocardiopatia urêmica clínica e experimental8,9. Além disso, o estresse oxidante contribui para a síndrome urêmica10e desempenha um papel crítico na patogênese das anormalidades cardíacas visto em miocardiopatia urêmica11,12,13. A este ponto, Nós demonstramos que o roedor de 5/6th PNx modelo faz com que características fisiológicas, morfológicas e bioquímicas de miocardiopatia urêmica14,15,16, 17. no rato PNx modelo descrito aqui, PNx-operado ratos desenvolveram estresse oxidativo significativo, pelo menos parcialmente mediado pela Na/K-ATPase, sinalizando a função, que é crítica em mediada por PNx experimental miocardiopatia urêmica. Atenuação de sinalização Na/K-ATPase não só reduz a amplificação oxidativa, mas também melhora as alterações fenotípica em mediada por PNx experimental miocardiopatia urêmica18.

<table><tbody><tr><td>Tesoura de Íris, 11.5 cm, Reta</td><td>World Precision Instruments</td><td>501758</td><td></td></tr><tr><td>WPI Pinças Suíças #5 11 cm, 0.1x0.06 mm Pontas</td><td>World Precision Instruments</td><td>504506</td><td></td></tr><tr><td>Joalheiros #5 Pinça, 11cm, Reta, Titânio</td><td>World Precision Instruments</td><td>555227F</td><td></td></tr><tr><td>Pinça de Íris, 10cm, Reta, Serrilhada</td><td>World Precision Instruments</td><td>15914</td><td></td></tr><tr><td>Pinças #3, 11cm, 0.2x0.4mm Dicas</td><td>World Precision Instruments</td><td>501976</td><td></td></tr><tr><td>Medesy Iris 4.5" Tesoura Curvada, Rede de Aço</td><td>Inoxidável23</td><td>3512</td><td>www.Net32.com</td></tr><tr><td>Tesoura Dr. Slick Iris; 3.5"</td><td>Avid Max</td><td>220-1-965-IrisScsrs-P&nbsp;</td><td>www. Tesoura de íris Avid Max.com</td></tr><tr><td>Miltex 4 1/8" curvada</td><td>4mdmedical</td><td>V95-306</td><td>www.4mdmedical.com</td></tr><tr><td>5" Hemostat clap, mandíbula curvada</td><td>PJTool</td><td>4355</td><td>www.pjtool.com</td></tr><tr><td>sklar Knapp Iris tesoura, reta e afiada/sem corte 4"</td> <td>Medical Device depot</td><td>64-3430</td><td>www.medicaldevicedepot.com</td></tr><tr><td>Kelly Hemostatic Forceps reta 5.5"</td><td>Camundongos Pilgtimmedical</td><td>FA710-50</td><td>www.pilgtimmedical.com</td></tr><tr><td>C57BL/6</td><td>Hilltop Lab Animals Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>&nbsp; Mesa de Manuseio de Mouse e termômetro retal</td><td>Transdutor Visualsonics</td><td></td><td></td></tr><tr><td>MicroScan&nbsp;</td>Sistema de Imagem <td>Vevo 1100</td><td>MS400</td><td></td></tr><tr><td>Vevo 1100&nbsp;</td><td>FUJIFILM VisualSonics Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Kit ELISA de cistatina C e kit de creatinina de camundongo</td><td>Crystal Chem. Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Kit BUN ELISA para mouse</td><td>MyBioSource Inc&nbsp;</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

um mouse 5/6th nefrectomia modelo que induz a miocardiopatia urêmica experimental

A Mouse 5/6th Nephrectomy Model That Induces Experimental Uremic Cardiomyopathy

Doença renal crônica (DRC) é um grande fator de risco para eventos cardiovasculares e mortalidade e desenvolve progressivamente para o fenótipo clínico chamado "miocardiopatia urêmica". Descrevemos aqui um modelo experimental de rato CKD, denominado 5/6th nefrectomia parcial (PNx) com ligadura de polo, que desenvolveu miocardiopatia urêmica no pós-operatório de quatro semanas. Este modelo de PNx foi realizado por uma cirurgia em duas fases. Na cirurgia de um passo, ambos os polos do rim esquerdo foram ligados. No passo dois cirurgia, que foi realizada 7 dias após a cirurgia de uma etapa, o rim direito foi removido. Para a cirurgia de Souza, realizaram-se os mesmos procedimentos de cirurgia, mas sem Polo ligadura do rim esquerdo ou remoção do rim direito. Os procedimentos cirúrgicos são mais fácil e menos demorado, em comparação com outros métodos. No entanto, os remanescentes massa renal funcional não é facilmente controlada como a ligadura da artéria renal. Quatro semanas após a cirurgia, em comparação com os ratos de operação, os ratos PNx desenvolveram insuficiência renal, anemia, hipertrofia cardíaca, Fibrose cardíaca e diminuição da função sistólica e diastólica do coração.

Os dados indicaram que este modificado 5/6th PNx modelo pela ligadura de polo é um modelo simples e eficaz para investigar miocardiopatia urêmica. No pós-operatório de quatro semanas, este PNx modelo apresenta deficiência da função renal, anemia, hipertrofia cardíaca, Fibrose cardíaca e diminuição da função sistólica e diastólica do coração. Os resultados estão resumidos a seguir.
No pós-operatório de...

Este manuscrito fornece um procedimento cirúrgico de duas etapas detalhadas para executar o rato 5/6th nefrectomia parcial (PNx) com ligadura de polo. Quatro semanas após a cirurgia, em comparação com a operação de ratos, os ratos PNx desenvolveram insuficiência renal, anemia, hipertrofia cardíaca, Fibrose cardíaca e diminuição da função sistólica e diastólica do coração.

Um Mouse 5/6th nefrectomia modelo que induz a miocardiopatia urêmica Experimental

Chronic kidney disease (CKD) is a great risk factor for cardiovascular disease events and mortality, and progressively develops to the clinical phenotype ...

O objetivo geral deste procedimento é estabelecer um modelo simples de nefrectomia parcial de cinco sextos em camundongo, com ligadura do polo, que apresente uma taxa de sobrevida superior à dos modelos tradicionais. Este método pode ajudar a responder perguntas fundamentais na área de doença renal crônica sobre o desenvolvimento e possíveis tratamentos terapêuticos da cardiomiopatia urêmica. A principal vantagem desta técnica é que ela constitui um modelo animal fácil e consistentemente reprodutível, que imita a patologia da doença renal crônica em pacientes humanos.Em geral, indivíduos novos neste método terão dificuldades devido aos rins, vasos sanguíneos e ureteres muito menores no camundongo. Comece confirmando o nível apropriado de sedação pela ausência de resposta ao aperto nos dedos dos pés e aplique lubrificante nos olhos do camundongo. Posicione o camundongo sobre uma placa aquecida e insira um termômetro retal para manter a temperatura corporal em torno de 37 graus Celsius durante o procedimento.Em seguida, coloque o animal sobre o seu lado direito e retire o pêlo da área cirúrgica com uma lâmina. Remova qualquer pêlo remanescente com creme depilatório e desinfete a pele exposta com solução de polihidroxi iodo e etanol 70%. Alinhe um campo cirúrgico esterilizado sobre o local da cirurgia.E faça uma incisão lombar de aproximadamente um centímetro através da pele e do tecido muscular. Usando o bisturi e a pinça, separe o músculo e a fáscia para expor o rim esquerdo. Em seguida, use uma pinça romba pequena para puxar suavemente a gordura perirrenal e extrair o rim da cavidade abdominal.Separe delicadamente o tecido conjuntivo e a glândula adrenal da extremidade superior do rim em direção à porção média do órgão, onde os vasos sanguíneos entram e saem do tecido renal. Isole o ureter na metade inferior do rim dentro do tecido conjuntivo e separe cuidadosamente o tecido conjuntivo do rim para garantir que o ureter não seja ligado. É essencial separar o tecido conjuntivo com cuidado para que o ureter não seja danificado nem sangre.Isolar o ureter ao redor da metade inferior do rim dentro do tecido conjuntivo. Em seguida, usar três fios de seda zero para ligar o rim aproximadamente a 0,4 centímetros da porção superior, em direção à região média do piloro, e a 0,4 centímetros da porção inferior em direção ao piloro. Ao apertar os pontos, aplicar tensão suficiente apenas para comprometer o suprimento sanguíneo da porção distal do rim, sem causar sangramento em nenhum dos lados.Se não for observado sangramento após dois minutos, retorne suavemente o rim para sua localização anatômica original e use pontos zero quatro e zero três para fechar as camadas muscular e da pele, respectivamente. Em seguida, aplique pomada antibiótica na área cirúrgica e mantenha o camunduco isolado com lâmpada de calor e monitoramento até a recuperação esternal. Sete dias após a ligadura polar, exponha o rim direito conforme acabou de ser demonstrado.Use pin&ccedil;as rombas para remover a gordura e o tecido conjuntivo ao redor, e coloque vagamente dois fios de seda tr&ecirc;s zero ao redor da art&eacute;ria e veia renais. Separe cuidadosamente o tecido conjuntivo e a gl&acirc;ndula adrenal da extremidade superior do rim em dire&ccedil;&atilde;o ao piloro m&eacute;dio. Desloque suavemente o ureter da extremidade inferior do tecido e desamarre todos os vasos juntos sem causar sangramento.Em seguida, mova um nó solto da ligadura em direção ao lado da aorta abdominal e o segundo nó solto em direção ao lado do rim. Em seguida, amarre a ligadura da aorta abdominal com nós duplos. Um nó firme mudará a cor do rim direito.Feche o segundo nó de ligadura com nós duplos, deixando espaços entre os nós para que os vasos possam ser cortados, e seccione os vasos renais. Após a remoção do rim, feche as camadas muscular e cutânea conforme acabou de ser demonstrado. Em seguida, seque o rim com gaze estéril e pese o tecido renal coletado.Quatro semanas após a cirurgia, os camundongos submetidos à nefrectomia parcial demonstram níveis significativamente aumentados de cistatina C, creatinina e nitrogênio ureico no plasma em comparação com os animais submetidos à cirurgia simulada. A anemia estimulada pela nefrectomia parcial também é evidente, conforme indicado pelos níveis significativamente mais baixos de hematócrito nos animais com ligadura polar. A hipertrofia cardíaca e a disfunção diastólica nos camundongos submetidos à nefrectomia parcial são indicadas por uma razão entre o peso do coração e o peso corporal aumentada e pela análise de ecocardiografia transtorácica, que revela aumentos significativos nas espessuras das paredes posterior e anterior, no índice de desempenho miocárdico e no índice de massa do ventrículo esquerdo.A fibrose cardíaca mediada pela nefrectomia parcial também é demonstrada pelo aumento da expressão de colágeno tipo 1 em homogenatos do ventrículo esquerdo e em homogenatos do rim remanescente esquerdo. Além disso, o estresse oxidante desempenha um papel importante na cardiomiopatia urêmica experimental, estimulando significativamente a modificação por carbônio direto de múltiplas proteínas e a ativação da tirosina-proteína quinase proto-oncogênica nos homogenatos do ventrículo esquerdo. Uma vez dominada, esta técnica pode ser concluída em 40 minutos, se realizada corretamente.Ao realizar este procedimento, é importante lembrar-se de verificar a frequência respiratória do animal e ajustar os níveis de isoflurano conforme apropriado. Após este procedimento, outros experimentos, como comparar os efeitos de tratamentos farmacológicos específicos na recuperação de nefrectomia parcial, podem ser realizados para responder perguntas tradicionais sobre tratamentos terapêuticos de interesse. Após seu desenvolvimento, esta técnica abriu caminho para pesquisadores na área de doença renal crônica explorarem a patologia e a triagem potencial de fármacos na cardiomiopatia urêmica.Após assistir a este vídeo, você deverá ter uma boa compreensão de como configurar um modelo de nefrectomia parcial no camundongo.

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Research

JoVE Journal

Biology

Biologia

Um modelo poderoso para perioperatório e crítica lesão renal aguda relacionada com o cuidado é apresentado. Usando hipoperfusão corpo inteiro induzida por parada cardíaca é possível a quase replicar as alterações histológicas e funcionais do AKI clínico.

Cardiac Arrest normotérmica e Ressuscitação Cardiopulmonar: um modelo do rato de isquemia-reperfusão

Um método de duas fases para estabelecer a doença renal crónica (IRC) em ratos Lewis por remoção cirúrgica da massa renal 5/6th é descrito. Combinação do procedimento cirúrgico, NOS-inibição e uma dieta rica em sal leva a um modelo semelhante CKD humano, permitindo estudo dos mecanismos causais e desenvolvimento de intervenções terapêuticas.

5/6th Nephrectomy em combinação com uma dieta alta de sal e Óxido Nítrico Sintase inibição para induzir o Doença Renal Crônica no Rato Lewis

O modelo murino de obstrução ureteral unilateral irreversível (UUO) é apresentado juntamente com o modelo de UUO reversível no qual a obstrução ureteral é aliviada pela anastomose do ureter cortado na bexiga. Esses modelos permitem o estudo da inflamação e cicatrização renal, bem como a remodelação tecidual.

Um modelo murino de irreversível e reversível obstrução ureteral unilateral

Um modelo modificado de 2 rim 1 (2K1C) O modelo de rato Goldblatt foi desenvolvido usando tubos de poliuretano para iniciar a estenose da artéria renal, induzindo um aumento na expressão de renin e lesão renal. Aqui, descrevemos um procedimento detalhado de preparação e colocação da braçadeira na artéria renal para gerar um modelo de mouse 2K1C reprodutível e consistente.

Um modelo modificado de rato de dois rins um clipe de regulação de renin em estenose da artéria renal

A lesão por isquemia renal está associada à alta morbidade e mortalidade em pacientes hospitalizados. Aqui, apresentamos um modelo de camundongo simples e eficaz de lesão unilateral de isquemia renal-reperfusão e fornecemos uma visão geral sequencial das alterações patológicas representativas observadas no rim.

Um modelo eficaz de rato de isquemia renal unilateral-reperfusão lesão

Este protocolo detalha os passos cirúrgicos da criação da fístula arteriovenosa ilíaca comum murina. Desenvolvemos este modelo para estudar a fisiopatologia do membro relacionada ao acesso hemodialítico.

Um modelo murino de disfunção da mão relacionada ao acesso para hemodiálise

Este manuscrito apresenta um protocolo padronizado para uma nefrectomia 5/6 por bipolectomia aguda via laparotomia mediana em modelo de rato, com o objetivo de induzir um estado de insuficiência renal via redução do parênquima renal com grande grau de precisão metódica e baixo risco de erro técnico.

Nefrectomia 5/6 usando bipolectomia afiada via laparotomia de linha média em ratos

Este protocolo descreve um método para induzir obstrução ureteral unilateral (UUO) em camundongos para estudar a progressão da fibrose tecidual na nefropatia obstrutiva. Inclui procedimentos cirúrgicos, cuidados pós-operatórios e métodos para avaliação da fibrose.

Modelo de obstrução ureteral unilateral para investigação de fibrose intersticial renal

Este artigo fornece instruções detalhadas para permitir que os investigadores realizem obstrução ureteral unilateral reversível em camundongos usando um modelo padronizado que permite a análise dos resultados estruturais e funcionais de longo prazo após a reversão da obstrução ureteral prolongada.

Um modelo de camundongo para avaliar os resultados estruturais e funcionais de longo prazo após a reversão da obstrução ureteral unilateral prolongada

Este artigo apresenta um modelo isquêmico de DRC usando IRI renal unilateral com nefrectomia contralateral realizada um dia antes da coleta da amostra; esse protocolo permite avaliação funcional baseada em soro, alta sobrevivência e patologia reprodutível da DRC em 28 e 42 dias, proporcionando uma plataforma versátil para estudos mecanicistas e intervencionistas.

Modelo murino de transição aguda para crônica de doença renal induzida por isquemia/lesão de reperfusão renal

Aprenda a realizar nefrectomia parcial 5/6 em camundongos com ligadura de polo para estudar cardiomiopatia urêmica. Este modelo reproduzível melhora a sobrevivência e imita a patologia da doença renal crônica humana.

Um Mouse 5/6^th nefrectomia modelo que induz a miocardiopatia urêmica Experimental

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