Name: A infusão subcutânea de neurotrofina 4 com bombas osmóticas ou injeção muscular direta melhora o envelhecimento dos músculos da laringe do rato (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-06-13T15:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 50 s
Description: Aprenda a administrar Neurotrofina 4 em músculos laríngeos de ratos envelhecidos usando bombas osmóticas e injeção endoscópica. Este protocolo demonstra remodelação muscular e melhora da função vocal com potencial aplicação clínica.

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Este trabalho foi apoiado por bolsas do Instituto Nacional de Surdez e Outros Transtornos de Comunicação (R21DC010806 para CAM e JCS e R01DC011285 para CAM).

Use ratos machos Fischer 344-Brown Norway com 6 e 30 meses de idade para este protocolo. Os ratos foram obtidos da colônia de roedores do Instituto Nacional do Envelhecimento. Utilizamos ratos para este estudo porque a estrutura da laringe de ratos é semelhante à do ser humano, servindo funcionalmente para a proteção das vias aéreas e vocalizações específicas de espécies. Este estudo foi realizado de acordo com a Política PHS sobre Cuidados Humanos e Uso de Animais de Laboratório, O Guia NIH para o Cuidado e Uso de Animais de Laboratório, e a Lei de Bem-estar dos Animais (7 USC et seq.); O protocolo de uso de animais foi aprovado pelo Comitê Institucional de Cuidados e Uso Animal (IACUC) da Universidade do Kentucky. 1. Anestesia de ratos <ol><li> Prepare os anestésicos misturando cloridrato de cetamina (anestésico dissociativo) e cloridrato de xilazina (sedativo e analgésico) em solução salina tamponada. As concentrações de ketamina e xilazina na solução final são 100 mg / 8 mg por kgPeso corporal, respectivamente. </li><li> Injete os anestésicos no rato por administração intraperitoneal usando uma seringa com uma agulha de 25 G. </li><li> Determine que o rato está suficientemente anestesiado pressionando o pé ou o pé com fórceps. Se o rato não reagir à pitada, a cirurgia pode começar. Se o rato reage à prega do dedo do pé com contrações reflexas ou musculares, espere 1-2 minutos e repita o teste de pitada. Se o rato reage novamente, substitua o rato por um novo animal e repita o procedimento a partir do passo 1.2. </li><li> Aplique pomada oftálmica aos olhos do rato, depois que o rato estiver imóvel, para evitar que as córneas se sectem. </li></ol> 2. Implantação de bomba osmótica <ol><li> Coloque o ventral do rato na área cirúrgica asséptica. Administrar meloxicam como medicamento pré-anestésico. Administrar intraperitonealmente a uma dosagem de 1-4 mg / kg de peso corporal usando uma seringa com uma agulha de 25 G. </li><li> Use cortadores para remover uma aproximação1 &quot;x 1&quot; quadrado de pele da parte de trás do pescoço e aproximadamente 1 &quot;caudal de espaço entre os ombros. Rasgue o mais próximo possível da pele. </li><li> Molhe as costas eo pescoço com etanol desinfetante (70%). </li><li> Após o barbear, esfregue o aspecto dorsal do pescoço com 3 esfrega em sucessão de álcool iodo com o álcool. </li><li> Mantenha a temperatura corporal do rato, colocando-o sobre uma almofada de aquecimento ajustada para 34 ° C. </li><li> Preencha as bombas osmóticas preparadas assepticamente com 50 μL de NTF4 ou solução salina para tratamento NTF4 sistêmico ( Figura 1 ). <ol><li> Use um bisturi para fazer uma incisão horizontal de aproximadamente 2 cm de largura através da pele, apenas craniana para o espaço entre a escápula. Levante a extremidade posterior da incisão com fórceps com uma mão ao inserir a ponta dos hemostáticos e empurrando suavemente para posterior a incisão. </li><li> Depois que a ponta dos hemostatos é de aproximadamente 2 cm cRanial para a incisão, abra as alças nos hemostáticos, expandindo as pontas para formar um &quot;bolso&quot; oco subcutâneo para o local da incisão. Este será o site de colocação da bomba. </li></ol></li><li> Oriente o fim do portal de entrega da bomba primeiro após a inserção para minimizar qualquer interação do NTF4 e a cicatrização do site da incisão de bolso. </li><li> Entregue 50 μL de solução salina NTF4 durante 7 14 dias. O grupo de 7 dias recebeu 6,72 mg / dia de NTF4 para uma dose total de 47,04 mg. O grupo de 14 dias recebeu 6,72 mg / dia para uma dose total de 94,08 mg de NTF4 25 . </li><li> Use uma rosca de sutura de nylon 5-0, hemostáticos e fórceps para fechar a incisão feita para a colocação da bomba. </li><li> Observe os ratos durante um mínimo de 30 min à medida que se recuperam da anestesia. Os critérios para a conclusão do monitoramento incluem o animal se tornando ativo, movendo-se sobre a gaiola, bebendo água e iniciando outras atividades normais, como a preparação. </li><li> Monitore animais diariamenteDurante a primeira semana, observando a cicatrização do local cirúrgico, alimentação normal e consumo de água e passagem de urina / fezes e quaisquer sinais comportamentais anormais de estresse, dor ou outras complicações pós-operatórias. </li><li> Se o rato parece estar com dor ou angústia, forneça ao rato uma injeção subcutânea de 5 mg / kg de carprofeno uma vez a cada 24 h por até 5 dias para aliviar a dor. </li><li> Se parece haver uma infecção, consulte um veterinário para que a ferida se cure adequadamente. </li><li> Dependendo de qual grupo experimental o rato dentro, remova a sutura de nylon 5-0 7-10 dias após a cirurgia para evitar irritação da rosca. </li></ol> 3. Anestesia de ratos para injeção direta <ol><li> Retire o alimento dos ratos a noite anterior ao procedimento. Isso garante que não há alimentos para bloquear o endoscópio ou a agulha de injeção. </li><li> Pesar ratos e preparar acepromazina 1-2 mg / kg de peso corporal. Injetar por via intramuscular (a localização IM é aMúsculo tireo-arteronóide esquerdo). </li><li> Coloque o rato na caixa de indução. Induzir anestesia na caixa de indução com 5% de isoflurano e 1 LO 2 . </li><li> Mova o rato para um cone do nariz com 2% de isoflurano e 600 mL de O2. </li><li> Determine que o rato está suficientemente anestesiado pressionando o pé ou o pé com fórceps. Se o rato não reagir à pitada, o protocolo de injeção pode começar. Se o rato reage à prega do dedo do pé com contrações reflexas ou musculares, espere 1-2 minutos e repita o teste de pitada. Se o rato reage de novo, substitua o rato por um novo animal e repita o procedimento a partir do passo 3.4. </li></ol> 4. Injeção direta e visualização <ol><li> Coloque doses 50 μL preparadas assepticamente contendo NTF4 ou solução salina em um banho de H 2 O ajustado a 25 ° C durante 30 min antes da injeção. </li><li> Coloque o rato em posição supina e reclinada em uma plataforma de plexiglass ( Figura 2 ). SusColoque o rato na postura reclinada de seus incisivos superiores frontais através de um fio guia empurrado pela parte superior da plataforma. </li><li> Anexe uma seringa de 50 mm, 30 gauge, 100 μL a um endoscópio sinusal de 1,9 mm, 30 ° ( Figura 3 ). NOTA: A montagem da seringa está presa através de um gabarito que segura a cânula firmemente na parede externa do endoscópio. O endoscópio permite a visualização das pregas vocais e a orientação da seringa intra-oralmente. A posição da ponta da cânula é ajustada antes de cada animal para garantir que a ponta seja totalmente e claramente visível através da visão endoscópica ( Figura 4 ). </li><li> Use um par de fórmulas de borracha para estender a língua e movê-la lateralmente. Depois, insira um espéculo de plástico para manter a permeabilidade oral. Faça o espéculo de um tambor de seringa de plástico de 5 mL que é cortado para um comprimento de 1,5 a 2 cm, com as bordas cortadas deburadas e polidas lisas. </li><li> Desligue as luzes no rooM e coloque uma fonte de luz halógena no endoscópio. Ligue o gravador de vídeo para capturar o procedimento. </li><li> Mergulhe a extremidade distal do endoscópio em água morna por alguns segundos para minimizar o desenvolvimento de condensação na ponta de vidro quando inserido na boca do rato. </li><li> Usando feedback visual do monitor, guie cuidadosamente a agulha na área da prega vocal esquerda. </li><li> Tempo de injeção da solução com a fase inspiratória do ciclo de respiração dos animais para acessar completamente a prega vocal. Durante a fase inspiratória da respiração, a prega vocal é totalmente exposta. <ol><li> Uma vez que a prega vocal é totalmente visível, insira a agulha no tireoaritenóide esquerdo, encontrado lateral à borda mediana branca da prega vocal. Com a agulha no lugar, entregue o injeção através da depressão da seringa. </li></ol></li><li> Desligue a fonte de luz halógena no endoscópio e no reprodutor de vídeo e volte-se no roOm luzes. </li><li> Retorne o rato para a sua gaiola de casa e coloque em uma almofada de aquecimento. </li><li> Permita que o rato se recupere antes da remoção da almofada de aquecimento. Substitua alimentos e água na gaiola. </li><li> Monitorar ratos durante 7 dias após a injeção e, em seguida, eutanizar. Remova as laringes para crioesecção 24 . </li></ol> 5. Eutanização de ratos <ol><li> Anestesiar ratos com cloridrato de cetamina e cloridrato de xilazina (100 mg / 8 mg por kg de injeção intraperitoneal injetada no peso corporal). </li><li> Eutanizar por exsanguinação após uma toracotomia mediana. </li></ol>

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Os autores não têm nada a revelar.

Os músculos laríngeos são vulneráveis ​​aos efeitos desfavoráveis ​​do envelhecimento. Estudos anteriores demonstraram alterações nos músculos da laringe envelhecidos que incluem mudanças no tamanho da fibra, número total de fibras, capacidade regenerativa, tamanho NMJ e alterações quantitativas, além de variações na função contrátil e mudanças da isoforma da miosina 4 , 11 , 27 , 30 ,</s...

Os músculos laríngeos se contraem de forma rápida e consistente e são vulneráveis ​​aos efeitos adversos do envelhecimento. Espera-se que essa atividade constante contribua para problemas de voz ou disfagia observados em pessoas com mais de 65 anos de idade 1 , 2 , 3 , 4 , 5 , 6 , 7 . Vários mecanismos moleculares e fisiopatológicos contribuem para esta disfunção relacionada à idade. Esses mecanismos podem incluir a remodelação da mucosa laríngea, a atrofia ou perda de fibras musculares, a falta de regeneração ou atrofia de fibras musculares que provoca curvatura das pregas vocais e incapacidade de fechamento gloteado 8 , 9 , 10 , 11 . Não há uma terapia médica comprovada neste momento que possa comPrever ou reabilitar essas mudanças relacionadas com a idade desses músculos. A modulação da eficácia da transmissão neuromuscular pode influenciar significativamente o desempenho neuromotor. A família das neurotrofinas inclui o fator de crescimento nervoso (NGF), o fator de crescimento do nervo derivado do cérebro (BDNF), neurotrofina 3 (NTF3) e NTF4 12 , 13 . Verificou-se que as neurotrofinas modulam a eficácia sináptica 1 , 4 . O fator de crescimento de hepatócitos, o fator de crescimento transformador beta e o fator de crescimento de fibroblastos foram recentemente utilizados em seres humanos para o tratamento de cicatrizes de pregas vocais de 15 a 17 . NTF4 também regula a eficácia NMJ; Ratos com falta de NTF4 mostram NMJs desmontados 11 , 18 , 19 . Esses estudos levam a efeitos promissores do tratamentoT do envelhecimento dos distúrbios do músculo laríngeo e da desnervação com fatores de crescimento. A terapêutica de injeção direta aos tecidos das pregas vocais não é sem precedentes em seres humanos. Por exemplo, as injeções locais de toxina botulínica são atualmente utilizadas como um tratamento eficaz para distúrbios do movimento neurológico que afetam os músculos da laringe, como a disfonia espasmódica e paralisia bilateral do nervo laríngeo 20 , 21 . O hidrogel de ácido hialurônico é outro injetável, que é usado para tratar a queima de dobras vocais e insuficiência glotal 22 , 23 . A laringoplastia por injeção pode ser usada para tratar uma variedade de distúrbios de comunicação 24 . Esses métodos de injeção direta são promissores para melhorar a função vocal e deglutição no envelhecimento populacional.

<table><tbody><tr><td>Neurotrofina 4</td><td>Pepro Tech</td><td>450-04</td><td>200 ng em 50 &mu; L</td></tr><tr><td>Bomba Osmótica Alzet</td><td>DURECT Corporation</td><td>2001D</td><td></td></tr><tr><td>30 &deg; endoscópio</td><td>Stoltz</td><td>61029D</td><td></td></tr><tr><td>50 mm 30 gauge 100-&mu; L Hamilton</td><td></td><td>84850 e 201812</td><td></td></tr><tr><td>solução salina (solução de cloreto de sódio)</td><td>Cloridrato de cetamina Sigma-Aldrich</td><td>S8776</td><td></td></tr><tr><td></td><td>Henry Schein</td><td>56344</td><td></td></tr><tr><td>cloridrato de xilazina</td><td>Henry Schein</td><td>33198</td><td></td></tr><tr><td>25 G 5/8 agulha</td><td>Becton-Dickinson</td><td>305901</td><td></td></tr><tr><td>seringa de 1 mL</td><td>Becton-Dickinson</td><td></td><td></td>309659</tr><tr><td>pomada oftálmica</td><td>Henry Schein</td><td>8897</td><td></td></tr><tr><td>clippers</td><td>Oster</td><td>44-018</td><td></td></tr><tr><td>etanol</td><td>Decon</td><td>2716</td><td></td></tr><tr><td>iodo (Betadine)</td><td>Purdue Pharma L.P.</td><td></td><td></td>almofada</tr><tr><td>de aquecimento</td> 606404 <td>Sunbeam</td><td>731-5</td><td></td></tr><tr><td>5-0 fio de sutura de nylon</td><td>AD Surgical</td><td>PMN-518R6</td><td></td></tr><tr><td>crile hemostat</td><td>Fine Science Tools</td><td>13005-14</td><td></td></tr><tr><td>pinça de amarração de sutura delicada</td><td>Fine Science Tools</td><td>11063-07</td><td></td></tr><tr><td>meloxicam</td><td>Henry Schein</td><td>49756</td><td></td></tr><tr><td>carprofeno</td><td>Merritt Veterinary Supplies</td><td>148700</td><td></td></tr><tr><td>pomada antibiótica</td><td>Henry Schein</td><td>57110</td><td></td></tr><tr><td>acepromizina Aceproject</td><td>Henry Schein</td><td>3845</td><td></td></tr><tr><td>isoflurano Isothesia</td><td>Henry Schein</td><td>50033</td><td></td></tr><tr><td>caixa de indução (caixa de anestesia)</td><td>Harvard Apparatus</td><td>50-0116</td><td></td></tr><tr><td>tanque comprimido de oxigênio</td><td>Scott Gross</td><td>UN1072</td><td></td></tr><tr><td>plexiglas plataforma</td><td>Small Parts Inc (Amazon)</td><td></td><td></td></tr> <tr><td>pinça com ponta de borracha</td><td>Ferramentas de ciência fina borracha</td><td>11075-00</td><td></td></tr><tr><td>borracha líquida para pinça acima</td> do espectro de plástico <td>Lowe's</td><td>42518</td><td></td></tr><tr><td>(seringa BD cortada no comprimento)</td> Fonte <td>de</td> luz halógena 309659 <td></td><td>Becton-Dickinson</td></tr><tr><td>rinocero-laríngea estroboscópio</td><td>Kay-Pentax</td><td>RLS 9100 B</td><td></td></tr><tr><td>gravador de vídeo</td><td>Kay-Pentax</td><td></td><td></td></tr><tr><td>sacarose</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S0389-500G</td><td></td></tr><tr><td>solução salina tamponada com fosfato</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P4417-100TAB</td><td></td></tr><tr><td>criostato Mictotom HM525</td><td>Thermo Scientific</td><td>HM 525</td><td></td></tr><tr><td>Gill 1 hematoxilina</td><td>VWR</td><td>10143-142</td><td></td></tr><tr><td>Shandon eosina-Y alcoólico</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>6766007</td><td></td></tr><tr><td>anti-canal de sódio Nav1.5 anticorpo produzido em coelho</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S0819</td><td></td></tr><tr><td>Texas red-X faloidina</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T7471</td><td></td></tr><tr><td>alfa-bungarotoxina alexa fluor 488 conjugado</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>B-13422</td><td></td></tr><tr><td>Anestesia para pequenos animais máquina</td><td>Smiths Medical</td><td>CDS 9000</td><td></td></tr></tbody></table>

a infusão subcutânea de neurotrofina 4 com bombas osmóticas ou injeção muscular direta melhora o envelhecimento dos músculos da laringe do rato

Subcutaneous Neurotrophin 4 Infusion Using Osmotic Pumps or Direct Muscular Injection Enhances Aging Rat Laryngeal Muscles

A disfunção laríngea em idosos é uma das principais causas de incapacidade, de distúrbios de voz à disfagia e perda de reflexos protetores das vias aéreas. Poucas, se houver, existem terapias que visam a disfunção do músculo laríngeo relacionado à idade. As neurotrofinas estão envolvidas na inervação muscular e na diferenciação das junções neuromusculares (NMJs). Pensa-se que as neurotrofinas melhoram a transmissão neuromuscular ao aumentar a liberação do neurotransmissor. As junções neuromusculares (NMJs) tornam-se menores e menos abundantes no envelhecimento dos músculos da laringe do rato, com evidência de desnervação funcional. Nós exploramos os efeitos do NTF4 para o uso clínico futuro como um procedimento terapêutico para melhorar a função no envelhecimento dos músculos da laringe humana. Aqui, fornecemos o protocolo detalhado para aplicação sistêmica e injeção direta de NTF4 para investigar a capacidade do músculo laríngeo do rato em envelhecimento de remodelar em resposta à aplicação NTF4. Neste método, os ratos receberam NTF4 sistematicamente via oBomba smotic ou por injeção direta através das pregas vocais. Os músculos laríngeos foram então dissecados e utilizados para exame histológico de morfologia e denervação relacionada à idade.

Os ratos foram eutanásicos após 2 semanas de infusão de bomba osmótica ou 1 semana após a injeção direta de NTF4. Larynges foram colhidos, colocados em crioprotectores (30% de sacarose e 70% de solução salina tamponada com fosfato) e depois seccionados em série em 10 μm de largura com um criostato. O envelhecimento dos músculos laríngeos é afetado pela administração de NTF4 25 . Além de ratos jovens e velhos, comparamos o lado injetado e não injetado dos músculos ...

Aqui, apresentamos um protocolo para descrever o uso de neurotrofina 4 (NTF4) sistematicamente e diretamente para remodelar os músculos laríngeos do envelhecimento do rato.

A infusão subcutânea de neurotrofina 4 com bombas osmóticas ou injeção muscular direta melhora o envelhecimento dos músculos da laringe do rato

Laryngeal dysfunction in the elderly is a major cause of disability, from voice disorders to dysphagia and loss of airway protective reflexes. Few, if ...

O objetivo geral deste protocolo é administrar Neurotrofina 4 para induzir a remodelação do músculo laríngeo em ratos idosos. Este método pode ajudar a responder perguntas-chave relacionadas à função muscular laríngea. Por exemplo, pode a atrofia muscular relacionada à idade ser revertida para melhorar a função vocal?A principal vantagem desta técnica é que ela pode ser facilmente adaptada para modelos humanos de envelhecimento vocal. Podemos utilizar métodos de injeção comumente empregados por otorrinolaringologistas em humanos para aplicar as soluções necessárias para melhorar a função vocal. Em geral, indivíduos novos neste método terão dificuldades devido à delicadeza dos procedimentos de implantação e injeção.Para demonstrar o procedimento, contaremos com Tanya Seward, técnica do departamento de fisiologia, e Richard Andreatta, professor associado em ciências da comunicação e distúrbios, ambos da Universidade de Kentucky. Para implantar a bomba, posicione primeiramente a rata na posição ventral em uma área cirúrgica asséptica. Umedeça as costas e o pescoço com iodo.Em seguida, esfregue a região dorsal do pescoço com etanol 70%. A seguir, coloque o animal sobre uma placa aquecida a 34 graus Celsius e administre a medicação pré-anestésica. Preencha as bombas osmóticas preparadas assépticamente com 50 microlitros de Neurotrofina 4.E use um bisturi para fazer uma incisão horizontal com dois centímetros de largura através da pele logo posterior ao espaço entre as escápulas. Levante a borda posterior da incisão com uma pinça e insira suavemente as pontas do hemostato posteriormente à incisão. Quando a ponta estiver aproximadamente a dois centímetros posterior à incisão, abra as alças do hemostato para criar uma bolsa oca subcutânea no local da incisão.Insira a bomba no bolsão, orientando a extremidade do portal de administração de forma que qualquer outra interação entre o tratamento e a cicatrização do local da incisão do bolsão seja minimizada. Em seguida, utilize fio de sutura de nylon 5-0, hemostato e pinça para fechar a incisão de colocação da bomba e monitore o animal até que esteja completamente lúcido e ambulante. Trinta minutos antes da injeção, aqueça doses de 50 microlitros preparadas assépticamente do Neurotrophin ou solução salina em um banho-maria a 25 graus Celsius.Quando os tratamentos estiverem prontos, posicione um rato anestesiado em decúbito dorsal sobre uma plataforma de plexiglass e utilize o fio-guia para suspender o animal pelos incisivos frontais superiores. Em seguida, acople uma seringa de 100 microlitros, 30 graus, 50 milímetros, calibre 30 a um endoscópio sinusal de 1,9 milímetro e 30 graus. E fixe o conjunto da seringa em um suporte na parede externa do endoscópio.Quando a seringa estiver segura, carregue o tratamento e conecte o conjunto do endoscópio à câmera. Em seguida, use pinças com pontas de borracha para desviar a língua para o lado e insira um espéculo plástico para manter a patência oral. Ligue então a fonte de luz de halogênio ao endoscópio.Com o gravador de vídeo ligado, mergulhe a extremidade distal do endoscópio em água morna por alguns segundos para minimizar o surgimento de condensação na ponta de vidro. E insira cuidadosamente a agulha na região da prega vocal esquerda, utilizando a retroalimentação visual do monitor como orientação. Quando a prega vocal estiver totalmente visível, injete a agulha no músculo tireoaritenóideo esquerdo, lateral à borda medial branca da prega vocal.E pressione o êmbolo para administrar o tratamento. Se a epiglote estiver presa no fechamento, impedindo uma visualização clara da laringe, utilize um movimento ascendente com a ponta da seringa para soltar suavemente o tecido. Em seguida, retire a agulha e coloque o animal na sua gaiola de origem sobre uma almofada aquecida até a recuperação completa da posição de repouso.Normalmente, uma alteração no tamanho das fibras é observada com a idade em animais tratados com Neurotrophin 4. Um menor grau de fibrose e geração de fibras também é observado em animais idosos tratados com Neurotrophin. Embora a quantidade de junções neuromusculares seja aumentada.Uma vez dominados, o implante da bomba osmótica e o procedimento de injeção podem ser concluídos em uma hora, se realizados corretamente. Ao realizar este procedimento, é importante lembrar-se de usar a agulha com movimentos lentos e suaves para evitar arranhões e lesões na região laríngea. Embora este método possa fornecer informações sobre os mecanismos da função das pregas vocais durante o processo de envelhecimento, ele também pode ser aplicado a outros sistemas, como a faringe e distúrbios relacionados à deglutição.

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Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Biologia do Desenvolvimento

Este artigo demonstra dois métodos muito diferentes de injecção: 1) para o cérebro (intracerebroventricular) e 2) sistêmica (intravenosa) para introduzir a agentes terapêuticos para o sistema nervoso central de camundongos recém-nascidos.

Entrega de agentes terapêuticos Através intracerebroventricular (ICV) e injecção intravenosa (IV) em ratos

Descrevemos os procedimentos para a administração repetida de inibidores da sinalização muscarínicos ao longus levantador auris (LAL) muscular de ratos adultos jovens e para a imunocoloração subseqüente de sua junções neuromusculares (NMJs) em wholemounts. O músculo LAL tem vantagens exclusivas para...

A administração subcutânea de antagonistas muscarínicos e Triple-A imunocoloração do músculo Longus Levator Auris em Ratos

Fonte: Andreatta, R. D. et. al., A infusão subcutânea de neurotrofina 4 usando bombas osmóticas ou injeção muscular direta melhora o envelhecimento dos músculos laríngeos de ratos. J. Vis. Exp. (2017)Este vídeo demonstra a infusão de neurotrofina 4 (NTF4) em um modelo de rato idoso para restaurar a função muscular laríngea afetada pela denervação relacionada ao envelhecimento e redução das junções neuromusculares. O NTF4 desencadeia a regeneração nervosa e promove a formação de junções...

Infusão de neurotrofina 4 para regeneração do nervo laríngeo em um rato idoso

Células olfativas ensheathing (OECO) são células da crista neural que permitem o crescimento dos neurônios olfativos primários. Esta propriedade específica pode ser utilizado para transplantação celular. Apresentamos aqui um modelo de transplante celular baseado na utilização de OECs em um modelo de lesão do nervo laríngeo.

Transplante de células olfativas Ensheathing para avaliar a recuperação funcional após a lesão do nervo periférico

A eficácia da captação intramuscular e do transporte retrógrado de moléculas para os neurônios motores correspondentes depende da localização dos locais de injeção em relação às placas terminais motoras (MEPs). Aqui, descrevemos como localizar MEPs nos músculos esqueléticos para otimizar o transporte retrógrado de traçadores para os neurônios motores.

Injecções intramusculares Ao longo das placas Motor End: uma abordagem minimamente invasiva para Shuttle Tracers Diretamente em Neurônios Motores

A implantação subcutânea de bombas osmóticas fornece uma abordagem conveniente para administração prolongada e constante de compostos. Esta abordagem tem sido amplamente utilizado para estudar ambos os aneurismas aórticos torácicos e abdominais em ratos.

Subcutânea perfusão de angiotensina II usando osmótica Bombas Induz aneurismas da aorta em ratos

Aqui, apresentamos um protocolo para injetar autólogas músculo-derivado células-tronco em proximidade com o nervo laríngeo recorrente, com a ajuda de um estimulador de nervo elétrico. Esta nova técnica pode tornar-se útil para o tratamento da neuropatia laríngeo recorrente equina.

Nervo guiadas estimulador injeção de células-tronco autólogas perto do nervo laríngeo recorrente esquerdo equina

Apresentado aqui é um protocolo para a fabricação de um sistema implantável para registro cronológico in vivo de potenciais eletromiográficos evocados e espontâneos. O sistema é aplicado à investigação da reinervação dos músculos laríngeos após lesão nervosa.

Um sistema implantável para eletromiografia crônica in vivo

Este protocolo descreve métodos usados para preparar dobras vocais de ratos para estudo neuromuscular histoquímico.

Preparação da Dobra Vocal do Rato para Análises Neuromusculares

Aqui, apresentamos um protocolo que combina eletroporação in vivo e desnervação do músculo levantador do auro longo do crânio (LAL). Este procedimento permite o estudo do papel potencial das proteínas derivadas do músculo na regeneração da sinapse neuromuscular.

Eletroporação In Vivo Combinada e Reinervação de Curto Prazo do Músculo Esquelético do Elevador do Crânio Longo do Auris

Apresentamos um protocolo para injeção direta do nervo vago em ratos, permitindo a administração do medicamento diretamente no nervo sem complicações pós-injeção. Este método se aplica a estudos neurológicos pré-clínicos envolvendo manipulação do sistema nervoso autônomo. Pode ser usado para injeção direta de nervos para outros nervos em ratos e outras espécies, com as modificações necessárias.

Protocolo de injeção direta do nervo vago para ratos

Aprenda a administrar Neurotrofina 4 em músculos laríngeos de ratos envelhecidos usando bombas osmóticas e injeção endoscópica. Este protocolo demonstra remodelação muscular e melhora da função vocal com potencial aplicação clínica.

A infusão subcutânea de neurotrofina 4 com bombas osmóticas ou injeção muscular direta melhora o envelhecimento dos músculos da laringe do rato (Vídeo) | JoVE Journal

A infusão subcutânea de neurotrofina 4 com bombas osmóticas ou injeção muscular direta melhora o envelhecimento dos músculos da laringe do rato

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