Name: Neurocomportamentais avaliações em um modelo do rato de lesão cerebral hipóxica-isquêmica Neonatal (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-11-24T12:30:00.000+00:00
Duration: 8 min 32 s
Description: Aprenda a realizar avaliações neurocomportamentais em modelo de lesão cerebral hipóxica-isquêmica neonatal em camundongos CD-1. Este método permite estudar funções motoras e cognitivas após oclusão da carótida unilateral.

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Este estudo foi suportado por doações da Fundação Nacional de pesquisa (NRF-2014R1A2A1A11052042; 2015M3A9B4067068), do Ministério da ciência e tecnologia, República da Coreia, o coreano saúde tecnologia R & D Project (HI16C1012), Ministério da saúde & Bem-estar, República da Coreia e o programa de assistência de pesquisa da faculdade "Dongwha" do Yonsei University College de medicina (6-2016-0126).

Todos os animais foram alojados em uma gaiola padrão (27 × 22,5 × 14 cm3) em uma instituição credenciada pela Associação de avaliação e acreditação do laboratório Animal conta (AAALAC) e dado comida e água ad libitum sob alternando-12h claro/escuro ciclos. Os autores seguiram de regulamentos de proteção animal, e os procedimentos experimentais foram aprovados pelo cuidado institucional do Animal e uso Comitê de Yonsei University College of Medicine (IACUC n º 2010-0252; 2013-0220).
1. Mouse modelo de uma lesão cerebral Neonatal HI
<ol><li>Anestesia os filhotes com isoflurano.<ol>
<li>Coloque os filhotes (inferior a 5) em uma caixa de anestésica e feche a tampa.</li>
		<li>Ligue o sistema anestésico por aproximadamente 15 min; ajuste o gás e isoflurano usando uma máquina de anestesia superior da tabela. Ajuste o medidor de fluxo de oxigênio para 1,5 L/min. Ajuste o vaporizador de isoflurano para 3-5% para a indução da anestesia.</li>
		<li>Depois de 15 min, ajuste o vaporizador de isoflurano a 1-2% para a manutenção da anestesia.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Coloque um filhote totalmente anestesiado sob um microscópio de dissecação (abdome virado para o pesquisador) e prenda com fita.</li>
	<li>Faça uma incisão de ~0.7-mm no pescoço com uma tesoura esterilizada.</li>
	<li>Cuidadosamente remova o tecido adiposo usando Pinças esterilizadas e expor a artéria carótida direita unilateral.</li>
	<li>Ligar a artéria carótida direita unilateral com uma sutura absorvível de 5-0.</li>
	<li>Sutura da incisão no pescoço com sutura de 5-0.</li>
	<li>Coloque cada filhote em uma câmara de hipoxia quente 37 ° C por 1h para recuperação. Não feche a tampa da câmara.</li>
	<li>1 h após a cirurgia, quando os filhotes são totalmente acordados, feche a tampa de câmara de hipóxia e diminuir os níveis de gás para estabelecer condições de hipóxicos (8% O2 e 92% N2).</li>
	<li>Após 90 min de hipóxia, retorne os filhotes de suas gaiolas.</li>
	<li>Uma semana após a lesão cerebral HI, repita a etapa 1.<ol>
<li>Após a anestesia, fazer uma incisão no couro cabeludo com tesoura esterilizada e pinça para identificar a lesão cerebral na área póstero-lateral do hemisfério direito. Nota: Este tratamento induz hipóxia em filhotes. A presença e a extensão da lesão cerebral em ratos todos é avaliada visualmente a olho nu através do crânio semi-transparente. Conforme determinado pelo tamanho ou volume da descoloração (ou seja, a lesão cerebral), os filhotes são classificados em grupos. Se não há nenhuma lesão visível cortical, o mouse é classificado no grupo "sem lesão cortical". Se houver uma lesão cortical visível (ou seja, uma lesão no hemisfério direito), o mouse é classificado no grupo "lesão cortical". Desde a classificação dos ratos em grupos é feita uma semana após a operação, os agrupamentos podem ser modificados quando as morfologias das amostras de cérebro estão claramente definidas no momento do sacrifício1,2,3, 4.</li>
	</ol>
</li>
</ol><img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/55838/55838fig1v3.jpg"> Figura 1: Modelagem neonatal lesão cerebral de HI em camundongos. (A) um filhote de rato de sete dias de idade foi submetido a cirurgia, e a artéria carótida direita unilateral foi ligada. (B) filhotes foram colocados numa câmara hipóxica para 90 min com 8% de O2 e 92% N2. (C, D e E) O cérebro com lesão de HI neonatal mostrou vários severidade de danos e foram categorizado com base no grau de dano. Na semana 14, obtiveram-se os miolos, e as lesões foram visualizadas. (C) a imagem de um cérebro, classificado como uma "nenhuma lesão cortical". Os dois (D) e (E) foram classificados no grupo "lesão cortical". (F, G e H) MRI representativa de (C), (D) e os ratos (E), respectivamente. (F) os danos no hipocampo é indicado com uma seta amarela, e lesões no hemisfério direito são também indicadas com setas amarelas (G e H). Barras de escala = 1 mm <a href="http://cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/55838/55838fig1v3large.jpg" target="_blank">clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
2. neonatais testes comportamentais
Nota: Aqui, os testes comportamentais foram realizados em 6 semanas de idade.
<ol><li>
Tarefa de vacância passiva. Nota: Para avaliar a função de memória com base na aprendizagem e a evitação de um estímulo contrário, uma compartimento de dois passo-a PAT deve ser conduzido13,14,15,16.<ol>
<li>Coloque um rato no compartimento da brilhante da caixa de transporte de Plexiglas (41,5 × 21 × 35 cm3) de um aparelho de PAT.</li>
		<li>Após 30 s, abra a porta de guilhotina e registrar o tempo de latência para o mouse para mover para o compartimento escuro (até 300 s).</li>
		<li>Feche a porta de guilhotina quando todos os quatro membros do mouse são totalmente no interior do compartimento escuro.</li>
		<li>Administrar o choque elétrico de pé (0,5 mA) para 2 s e retorno o mouse para sua gaiola.</li>
		<li>Substitua o mouse no compartimento do brilhante 24 h após o choque elétrico de pé.</li>
		<li>Abra a guilhotina porta 10 s depois que o mouse é totalmente colocado no compartimento de brilhantes e registrar o tempo de latência para o mouse para mover para o compartimento escuro (até 300 s).</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Teste de caminhada de escada. Nota: A tarefa de ambulante de degrau de escada permite a discriminação entre sutis distúrbios da função motora combinando qualitativas e análises quantitativas de qualificados ambulante de17,18.<ol>
<li>Ligue uma câmara de vídeo.</li>
		<li>Coloque o mouse no painel do início da escada e começar imediatamente a gravação.</li>
		<li>Grave o vídeo, enfocando os membros do mouse.</li>
		<li>Pare a gravação quando o mouse toca o último painel da escada. Repeti a viagem de volta-e-vem quatro vezes.</li>
		<li>Analisar a gravação de vídeo e manualmente, contar o número de deslizamentos de cada membro anterior, como segue:<ol>
<li>Jogar a gravação do vídeo em um computador a uma velocidade lenta (0,1 x) e contar os passos manualmente.</li>
		</ol>
</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Ensaio de resistência de aderência. Nota: O ensaio de resistência de aderência é executado usando um medidor de força de aperto, que inclui um calibre de tensão-empurra.<ol>
<li>Conserte o aparelho de força de aperto em um painel de acrílico.</li>
		<li>Coloque um rato no painel de acrílico e segure sua cauda.<ol>
<li>Mova a mão segurando a cauda para que o rato pode chegar e pega o fio de metal do aparelho.</li>
		</ol>
</li>
		<li>Permitir vários ensaios até o mouse agarra um pedaço triangular de fio de metal (2 mm de diâmetro); a força máxima é automaticamente registrada em gramas pelo aparato. Nota: Utilize a força média de três ensaios para análise19,20,21.</li>
	</ol>
</li>
</ol>

<ol><li>Yager, J. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+hypoxic-ischemic+brain+damage+in+the+newborn%5BTitle%5D)+AND+%22Semin+Pediatr+Neurol%22%5BJournal%5D)">Animal models of hypoxic-ischemic brain damage in the newborn.</a> Semin Pediatr Neurol. 11 (1), 31-46 (2004).</li>
<li>Vannucci, R. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rat+model+of+perinatal+hypoxic-ischemic+brain+damage%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Res%22%5BJournal%5D)">Rat model of perinatal hypoxic-ischemic brain damage.</a> J Neurosci Res. 55 (2), 158-163 (1999).</li>
<li>Im, S. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+striatal+neurogenesis+enhances+functional+recovery+in+an+adult+animal+model+of+neonatal+hypoxic-ischemic+brain+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Induction of striatal neurogenesis enhances functional recovery in an adult animal model of neonatal hypoxic-ischemic brain injury.</a> Neuroscience. 169 (1), 259-268 (2010).</li>
<li>Clowry, G. J., Basuodan, R., Chan, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((What+are+the+Best+Animal+Models+for+Testing+Early+Intervention+in+Cerebral+Palsy%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Neurol%22%5BJournal%5D)">What are the Best Animal Models for Testing Early Intervention in Cerebral Palsy?</a> Front Neurol. 5 (258), 1-17 (2014).</li>
<li>Colver, A., Fairhurst, C., Pharoah, P. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cerebral+palsy%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Cerebral palsy.</a> Lancet. 383 (9924), 1240-1249 (2014).</li>
<li>Levine, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anoxic-ischemic+encephalopathy+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Pathol%22%5BJournal%5D)">Anoxic-ischemic encephalopathy in rats.</a> Am J Pathol. 36, 1-17 (1960).</li>
<li>Rice 3rd, J. E., Vannucci, R. C., Brierley, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+influence+of+immaturity+on+hypoxic-ischemic+brain+damage+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Neurol%22%5BJournal%5D)">The influence of immaturity on hypoxic-ischemic brain damage in the rat.</a> Ann Neurol. 9 (2), 131-141 (1981).</li>
<li>Lafemina, M. J., Sheldon, R. A., Ferriero, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acute+hypoxia-ischemia+results+in+hydrogen+peroxide+accumulation+in+neonatal+but+not+adult+mouse+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatr+Res%22%5BJournal%5D)">Acute hypoxia-ischemia results in hydrogen peroxide accumulation in neonatal but not adult mouse brain.</a> Pediatr Res. 59 (5), 680-683 (2006).</li>
<li>Brazel, C. Y., Rosti 3rd, R. T., Boyce, S., Rothstein, R. P., Levison, S. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Perinatal+hypoxia%2Fischemia+damages+and+depletes+progenitors+from+the+mouse+subventricular+zone%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Perinatal hypoxia/ischemia damages and depletes progenitors from the mouse subventricular zone.</a> Dev Neurosci. 26 (2-4), 266-274 (2004).</li>
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<li>Rumajogee, P., Bregman, T., Miller, S. P., Yager, J. Y., Fehlings, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rodent+Hypoxia-Ischemia+Models+for+Cerebral+Palsy+Research%3A+A+Systematic+Review%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Neurol%22%5BJournal%5D)">Rodent Hypoxia-Ischemia Models for Cerebral Palsy Research: A Systematic Review.</a> Front Neurol. 7 (57), 1-20 (2016).</li>
<li>Hagberg, H., Peebles, D., Mallard, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Models+of+white+matter+injury%3A+comparison+of+infectious%2C+hypoxic-ischemic%2C+and+excitotoxic+insults%5BTitle%5D)+AND+%22Ment+Retard+Dev+Disabil+Res+Rev%22%5BJournal%5D)">Models of white matter injury: comparison of infectious, hypoxic-ischemic, and excitotoxic insults.</a> Ment Retard Dev Disabil Res Rev. 8 (1), 30-38 (2002).</li>
<li>Wi, S., Yu, J. H., Kim, M., Cho, S. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+Vivo+Expression+of+Reprogramming+Factors+Increases+Hippocampal+Neurogenesis+and+Synaptic+Plasticity+in+Chronic+Hypoxic-Ischemic+Brain+Injury%5BTitle%5D)+AND+%22Neural+Plast%22%5BJournal%5D)">In Vivo Expression of Reprogramming Factors Increases Hippocampal Neurogenesis and Synaptic Plasticity in Chronic Hypoxic-Ischemic Brain Injury.</a> Neural Plast. 2016 (2580837), 1-11 (2016).</li>
<li>Lu, Y., Christian, K., Lu, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((BDNF%3A+a+key+regulator+for+protein+synthesis-dependent+LTP+and+long-term+memory%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Neurobiol+Learn+Mem%22%5BJournal%5D)">BDNF: a key regulator for protein synthesis-dependent LTP and long-term memory?</a> Neurobiol Learn Mem. 89 (3), 312-323 (2008).</li>
<li>Manabe, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Facilitation+of+long-term+potentiation+and+memory+in+mice+lacking+nociceptin+receptors%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Facilitation of long-term potentiation and memory in mice lacking nociceptin receptors.</a> Nature. 394 (6693), 577-581 (1998).</li>
<li>Alonso, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((BDNF-triggered+events+in+the+rat+hippocampus+are+required+for+both+short-+and+long-term+memory+formation%5BTitle%5D)+AND+%22Hippocampus%22%5BJournal%5D)">BDNF-triggered events in the rat hippocampus are required for both short- and long-term memory formation.</a> Hippocampus. 12 (4), 551-560 (2002).</li>
<li>Seo, J. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+Situ+Pluripotency+Factor+Expression+Promotes+Functional+Recovery+From+Cerebral+Ischemia%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Ther%22%5BJournal%5D)">In Situ Pluripotency Factor Expression Promotes Functional Recovery From Cerebral Ischemia.</a> Mol Ther. 24 (9), 1538-1549 (2016).</li>
<li>Kim, M. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Environmental+enrichment+enhances+synaptic+plasticity+by+internalization+of+striatal+dopamine+transporters%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cereb+Blood+Flow+Metab%22%5BJournal%5D)">Environmental enrichment enhances synaptic plasticity by internalization of striatal dopamine transporters.</a> J Cereb Blood Flow Metab. 36 (12), 2122-2133 (2015).</li>
<li>Lee, M. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alteration+of+synaptic+activity-regulating+genes+underlying+functional+improvement+by+long-term+exposure+to+an+enriched+environment+in+the+adult+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Neurorehabil+Neural+Repair%22%5BJournal%5D)">Alteration of synaptic activity-regulating genes underlying functional improvement by long-term exposure to an enriched environment in the adult brain.</a> Neurorehabil Neural Repair. 27 (6), 561-574 (2013).</li>
<li>Rha, D. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+constraint-induced+movement+therapy+on+neurogenesis+and+functional+recovery+after+early+hypoxic-ischemic+injury+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Med+Child+Neurol%22%5BJournal%5D)">Effects of constraint-induced movement therapy on neurogenesis and functional recovery after early hypoxic-ischemic injury in mice.</a> Dev Med Child Neurol. 53 (4), 327-333 (2011).</li>
<li>Chong, H. J., Cho, S. R., Jeong, E., Kim, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Finger+exercise+with+keyboard+playing+in+adults+with+cerebral+palsy%3A+A+preliminary+study%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exerc+Rehabil%22%5BJournal%5D)">Finger exercise with keyboard playing in adults with cerebral palsy: A preliminary study.</a> J Exerc Rehabil. 9 (4), 420-425 (2013).</li>
<li>Chong, H. J., Cho, S. R., Kim, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hand+rehabilitation+using+MIDI+keyboard+playing+in+adolescents+with+brain+damage%3A+a+preliminary+study%5BTitle%5D)+AND+%22NeuroRehabilitation%22%5BJournal%5D)">Hand rehabilitation using MIDI keyboard playing in adolescents with brain damage: a preliminary study.</a> NeuroRehabilitation. 34 (1), 147-155 (2014).</li>
<li>Seo, J. H., Yu, J. H., Suh, H., Kim, M. S., Cho, S. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fibroblast+growth+factor-2+induced+by+enriched+environment+enhances+angiogenesis+and+motor+function+in+chronic+hypoxic-ischemic+brain+injury%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Fibroblast growth factor-2 induced by enriched environment enhances angiogenesis and motor function in chronic hypoxic-ischemic brain injury.</a> PLoS One. 8 (9), e74405(2013).</li>
<li>Washington, P. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effect+of+injury+severity+on+behavior%3A+a+phenotypic+study+of+cognitive+and+emotional+deficits+after+mild%2C+moderate%2C+and+severe+controlled+cortical+impact+injury+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurotrauma%22%5BJournal%5D)">The effect of injury severity on behavior: a phenotypic study of cognitive and emotional deficits after mild, moderate, and severe controlled cortical impact injury in mice.</a> J Neurotrauma. 29 (13), 2283-2296 (2012).</li>
<li>Cho, S. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Astroglial+Activation+by+an+Enriched+Environment+after+Transplantation+of+Mesenchymal+Stem+Cells+Enhances+Angiogenesis+after+Hypoxic-Ischemic+Brain+Injury%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Astroglial Activation by an Enriched Environment after Transplantation of Mesenchymal Stem Cells Enhances Angiogenesis after Hypoxic-Ischemic Brain Injury.</a> Int J Mol Sci. 17 (9), 1-15 (2016).</li>
<li>Tsuji, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+reproducible+model+of+neonatal+stroke+in+mice%3A+comparison+with+a+hypoxia-ischemia+model%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Neurol%22%5BJournal%5D)">A novel reproducible model of neonatal stroke in mice: comparison with a hypoxia-ischemia model.</a> Exp Neurol. 247, 218-225 (2013).</li>
</ol>

Os autores têm sem interesses concorrentes.

Neste estudo, nós induzido por lesão cerebral de HI em um rato P7-10 CD-1 neonatal e identificado a lesão cerebral com relevantes déficits cognitivos e motor. Durante este procedimento, oclusão da artéria carótida direita unilateral foi crítico. Nesta etapa, a artéria pode ser danificada e rasgada. A maioria dos filhotes que experimentaram uma lágrima de artéria morreram. Por outro lado, se pesquisadores ligados a outra veia de sangue em vez da artéria carótida direita unilateral, o cérebro do filhote foi apenas levement...

Uma lesão cerebral neonatal HI ocorre durante a primeira infância (aproximadamente dois pacientes por cada 1.000 crianças)1,2,3,4,5. Estudos sobre uma lesão cerebral neonatal HI são importantes, e usar um neonatal HI cérebro lesão do mouse modelo estabelecido pode facilitar na vivo pesquisas pré-clínicas na lesão cerebral de HI.
Os modelos tradicionais de HI são usados em ratos adultos6. Para o modelo em recém-nascidos, o método de arroz-Vannucci é comumente usado em P7 ratos7,8. No entanto, como ratos e camundongos são ligeiramente diferentes9,10, mesmo que eles são ambos os roedores, realizamos um método modificado de arroz-Vannucci na CD-1 filhotes no P7-10, com base em estudos anteriores que mostraram que o P7-10 é o período com oligodendrócitos imaturos, correspondente ao termo humano P011,12. O modelo de rato HI neonatal é estabelecido através de ambos a ligadura da artéria carótida unilateral e a exposição dos ratos a hipóxia com 8% de oxigênio em P7-10 filhotes.
Os ratos submetido ao procedimento mostrou vários graus de lesões cerebrais na área póstero-lateral do hemisfério direito. Para identificar os déficits cognitivos e motor, Neurocomportamentais avaliações com base no PAT, realizaram-se escada curta teste e teste de força de aperto. Analisaram-se as diferenças entre não-operados (isto é, normal) e ratos HI. Este trabalho apresenta informações básicas sobre o modelo do rato do HI. As imagens de MRI demonstram os fenótipos diferentes, separados de acordo com a gravidade dos danos de cérebro usando testes de motor e cognitivos.

<table><tbody><tr><td>Câmara hipóxica</td><td>Jeung Do Bio & Aparelho PAT Plant Co</td><td>Experimental Builder</td><td></td></tr><tr><td></td><td>Jeung Do Bio & Plant Co</td><td>Experimental Builder</td><td></td></tr><tr><td>O degrau da escada andando</td><td>Jeung Do Bio & Plant Co</td><td>Experimental Builder</td><td></td></tr><tr><td>SDI Sistema de Força de Preensão San</td><td>Diego Instruments Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Medidor de Força de Agarre</td><td>Ugo Basile</td><td>47200</td><td></td></tr><tr><td>Aparelho Harvard Sistema de anestesia Fluovac&nbsp;</td><td>Aparelho</td><td></td><td></td>de Harvard</tr><tr><td>Caixa de anestésico</td><td></td><td></td><td>caixa</td></tr><tr><td>de acrílico I-Fran Liquid (Isofluorano)</td> <td>Hana Pharm. Co., Ltd.</td><td></td><td>Anestésicos Gerais (isoflurano 100ml) Camundongos</td></tr> <tr><td>CD-1</td><td>Orient Co., Ltd.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Sutura de nylon azul mono não absorvível 5-0 50cm</td><td>Ailee Co., Ltd.</td><td>NB 521</td><td></td></tr><tr><td>Estatísticas do IBM SPSS</td><td>IBM</td><td>Ver. 23</td><td></td></tr></tbody></table>

neurocomportamentais avaliações em um modelo do rato de lesão cerebral hipóxica-isquêmica neonatal

Neurobehavioral Assessments in a Mouse Model of Neonatal Hypoxic-ischemic Brain Injury

Realizamos a oclusão da artéria carótida unilateral em ratos CD-1 para criar um modelo de (HI) hipóxico-isquêmica neonatal e investigou os efeitos de uma lesão cerebral neonatal HI estudando funções Neurocomportamentais nestes ratos em comparação com não-operados (i.e., ratos normais). Durante o estudo, método do arroz-Vannucci foi usado para induzir dano de cérebro HI neonatal em ratos de 7-10 (P7-10) dia pós-natal. A operação de HI foi executada sobre os filhotes por ligadura da artéria carótida unilateral e exposição à hipoxia (8% O2 e 92% N2 para 90 min). Uma semana após a operação, os cérebros danificados foram avaliados com o olho nu através do crânio semi-transparente e foram divididos em subgrupos baseados na ausência (grupo "nenhuma lesão cortical") ou presença (grupo de "lesão cortical") da lesão cortical, como uma lesão no hemisfério direito. Na semana 6, os seguintes testes Neurocomportamentais foram realizados para avaliar as funções cognitivas e motoras: escada de (PAT), vacância passiva tarefa andando de teste e teste de força de aperto. Estes testes comportamentais são úteis para determinar os efeitos de uma lesão cerebral neonatal HI e são utilizados em outros modelos de rato de doenças neurodegenerativas. Neste estudo, os ratos da lesão cerebral de HI neonatais mostraram déficit motor que correspondessem aos danos do hemisfério direito. Os resultados do teste comportamental são relevantes para os déficits observados em pacientes humanos de HI neonatais, tais como paralisia cerebral ou pacientes com AVC neonatal. Neste estudo, um modelo do rato de uma lesão cerebral neonatal HI foi estabelecido e mostraram diferentes graus de déficits motor e comprometimento cognitivo comparado com ratos não operado. Este trabalho fornece informações básicas sobre o modelo do rato do HI. Imagens de MRI demonstram os fenótipos diferentes, separados de acordo com a gravidade da lesão cerebral por testes de motor e cognitivos.

Todos os dados são expressos como média ± erro padrão da média (SEM). A comparação das variáveis entre os dois grupos foi realizada utilizando um independente ou a pares, t-teste em software de estatística SPSS. Um p-valor < 0,05 foi considerado estatisticamente significativo.
O cérebro com lesão de HI neonatal mostrou diferente gravidade dos danos e foram Categorizado em conformidade (Figu...

Realizamos a oclusão da artéria carótida unilateral no pós-Natal dia 7-10 CD-1 mouse filhotes para criar um modelo de (HI) hipóxico-isquêmica neonatal e investigaram os efeitos da lesão cerebral de HI. Nós estudamos funções Neurocomportamentais nestes ratos em comparação com camundongos normais não operado.

Neurocomportamentais avaliações em um modelo do rato de lesão cerebral hipóxica-isquêmica Neonatal

We performed unilateral carotid artery occlusion on CD-1 mice to create a neonatal hypoxic-ischemic (HI) model and investigated the effects of neonatal HI ...

O objetivo geral da cirurgia de lesão cerebral hipóxico-isquêmica em neonatos, seguida por testes cognitivos e motores, é obter um modelo murino para estudar essas lesões e os danos cerebrais relacionados. Este método pode ajudar a responder perguntas fundamentais sobre a lesão cerebral hipóxico-isquêmica neonatal, como a forma como tais lesões afetam as funções motoras e cognitivas. A principal vantagem desta técnica é que ela é bem conhecida e amplamente utilizada.É também um modelo pré-clínico para paralisia cerebral e acidentes vasculares cerebrais neonatais. Geralmente, indivíduos novos neste método terão dificuldades porque a artéria carótida direita unilateral é difícil de identificar. Demonstrará o procedimento, juntamente comigo, Yoon-Kyum Shin, um estudante de pós-graduação do nosso laboratório.Após anestesiar pelo menos cinco filhotes de camundongo P-sete, posicione um filhote sob um microscópio de dissecação com o abdômen voltado para cima. Em seguida, limpe o pescoço com álcool. Para iniciar a cirurgia, use uma tesoura para fazer uma incisão de 0,7 milímetro no pescoço.Em seguida, remova cuidadosamente o tecido adiposo com pinça, até expor a artéria carótida direita unilateral. A seguir, com fio 5-0, ligue a artéria carótida direita unilateral. Agora, feche a incisão no pescoço com nylon 5-0 e esterilize a incisão.Em seguida, permita que a ninhada se recupere em uma câmara hipóxica a 37 graus Celsius com a tampa aberta por cerca de uma hora. Coloque outro camundongo submetido a manipulação cirúrgica na câmara hipóxica para recuperação. Quando todas as ninhadas estiverem completamente acordadas, feche a tampa da câmara e reduza os níveis de gás para estabelecer condições hipóxicas.Após 90 minutos de hipóxia, devolva os filhotes com lesão cerebral às suas gaiolas. Uma semana depois, prepare os filhotes para cirurgia, como anteriormente, para procurar evidências da lesão. Faça uma incisão no couro cabeludo para identificar a lesão cerebral na área posterolateral do hemisfério direito.Observe através do crânio semitransparente em busca de evidências de lesão cortical e lesão hipocampal. Assim, classifique os filhotes como lesados ou controles não lesados. Após a verificação, feche o couro cabeludo com sutura e esterilize a incisão.Quando os camundongos tiverem seis semanas de idade, avalie sua memória com base na aprendizagem e na evitação de um estímulo adversivo. Utilize um aparelho comercial de duas câmaras para o teste de evitação passiva com passagem para iniciar o procedimento. Para começar, coloque um camundongo na câmara clara da caixa por 30 segundos.Em seguida, abra a porta entre os compartimentos e registre a latência do animal para entrar no compartimento escuro. Permita até 300 segundos para a realização da tarefa. Quando os quatro membros do camundongo estiverem completamente dentro do compartimento escuro, feche a porta.Em seguida, aplique um choque elétrico de 1/2 miliampère nos pés durante dois segundos e devolva o camundongo à sua gaiola. Vinte e quatro horas depois, repita o teste. Desta vez, permita que o camundongo leve um tempo completo de 300 segundos para entrar na câmara escura e não aplique choque no camundongo.Realize o teste de caminhada na escada com camundongos de seis semanas de idade para discriminar entre distúrbios sutis da função motora, utilizando análises qualitativas e quantitativas. Primeiro, monte o equipamento em forma de escada e, em seguida, posicione uma câmera de vídeo para gravar os movimentos dos membros de um camundongo no equipamento. A seguir, coloque um camundongo no painel de partida e inicie a gravação com a câmera de vídeo.Certifique-se de que o vídeo mostre as patas com boa nitidez. Quando o camundongo tocar no último painel do equipamento em forma de escada, interrompa a gravação. Em seguida, retorne o camundongo ao painel inicial e grave novamente a travessia do equipamento pelo animal.Repita isso um total de quatro vezes por camundongo em cada data do experimento. Posteriormente, ao analisar o vídeo, conte manualmente o número de escorregões cometidos por cada membro enquanto reproduz o vídeo em velocidade 1/10. Quando um membro desliza entre as barras, isso constitui um escorregão.Quando os camundongos tiverem seis semanas de idade, avalie sua força de preensão. Utilize um medidor de tensão de empuxo/tração, equipado com um fio triangular de dois milímetros de diâmetro, fixado a um painel. Posicione o camundongo sobre o painel, segurando-o pela cauda.Em seguida, permita que o camundongo alcance apenas o fio metálico com suas patas dianteiras. Assim que o camundongo agarrar o fio, puxe suavemente sua cauda até que ele solte o aperto. O aparelho registrará a força máxima exercida sobre o fio em gramas.Repita este teste cinco vezes antes de dar um descanso ao camundongo. Durante o teste de força de preensão, ocorrem movimentos notáveis de desempenhos precisos. Tente identificar esses movimentos ao longo de cinco tentativas antes de descansar o camundongo, por pelo menos um minuto, para reduzir a fadiga muscular.Após o camundongo descansar por pelo menos um minuto, repita a série de cinco ensaios novamente. Em seguida, conceda outro descanso ao camundongo e realize a série pela última vez naquele dia de teste. A partir dos dados, utilize a média das três maiores pontuações para qualquer uma das patas dianteiras ou para ambas as patas dianteiras para análise.Após a coleta dos cérebros de animais com 14 semanas de idade que sofreram lesão por hipóxia-isquemia, os cérebros foram avaliados morfologicamente quanto à ausência de lesão cortical, lesão leve ou lesão grave. Os mesmos animais foram submetidos a uma ressonância magnética uma semana antes, o que também foi muito revelador. Mesmo o cérebro morfologicamente normal apresentou lesão leve no hipocampo.Na sexta semana de idade, cinco semanas após a lesão, os camundongos foram avaliados com diversas tarefas comportamentais. Os camundongos com lesão por hipóxia-isquemia apresentaram comprometimento cognitivo na tarefa de evitação passiva de 24 horas. Como apenas o hemisfério direito foi danificado, os camundongos exibiram funções motoras hemiplégicas.Isso foi revelado pela diferença na porcentagem de escorregões nos degraus transversais da escada para cada membro anterior. Além disso, como a força de preensão envolve o córtex motor no cérebro, os grupos normais e com lesão cortical apresentaram diferenças na força de preensão. Nenhuma diferença foi observada entre os controles normais e os camundongos categoricamente não lesionados, mas os camundongos lesionados estavam claramente prejudicados.Após assistir a este vídeo, você deverá ter uma boa compreensão de como ligar a artéria carótida direita unilateral para gerar camundongos neonatos com hipóxia-isquemia e como realizar análises comportamentais de acompanhamento. É importante observar que, mesmo quando não há dano visível no cérebro cortical sete dias após a lesão, uma ressonância magnética pode revelar uma lesão no hipocampo. Além disso, é fundamental lembrar-se de manipular as crias com delicadeza e realizar a cirurgia o mais rapidamente possível.Os filhotes têm peles muito fracas e finas, portanto tenha muito cuidado.

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Research

JoVE Journal

Neuroscience

Neurociência

O modelo de ratos pós-natal para hipóxico-isquêmica lesão cerebral é um modelo bem estabelecido de humanos encefalopatia hipóxico isquêmica neonatal (HIE). Neste artigo, descrevemos o modelo de HIE em filhotes de ratos pós-natal.

O Modelo de encefalopatia hipóxico isquêmica Perinatal da Isquemia

Nós estabelecemos modelos do rato de leucomalácia periventricular (LPV), a lesão cerebral predominante em prematuros caracterizada por lesões na substância branca periventricular. Hipóxia / isquemia com / sem infecção sistêmica são as principais causas de LPV. Ligadura da carótida unilateral e exposição a hipóxia com / sem injeção de lipopolissacarídeo cria PVL-como lesões em camundongos P6.

Modelos de mouse de leucomalácia periventricular

O vídeo demonstra o procedimento para criar um modelo de camundongo para estudar a lesão cerebral hipóxico-isquêmica neonatal. Ele descreve as etapas para induzir cirurgicamente a isquemia e submeter o animal à hipóxia para exacerbar o dano cerebral. Por fim, mostra como avaliar as lesões cerebrais resultantes, garantindo que o modelo de camundongo esteja preparado para uma investigação científica mais aprofundada.

Estabelecendo um modelo de camundongo de lesão cerebral hipóxico-isquêmica neonatal

Fonte: Ouyang, Y., et al. Imagem simultânea de PET/MRI durante hipóxia-isquemia cerebral de camundongo. J. Vis. Exp. (2015)Este vídeo demonstra uma técnica para avaliar a lesão por hipóxia cerebral por meio de tomografia por emissão de pósitrons (PET) e ressonância magnética (MRI) simultâneas. Um camundongo anestesiado é submetido à ligadura da artéria carótida comum (CCA), reduzindo o fluxo sanguíneo para um hemisfério cerebral e predispondo-o a lesões induzidas por hipóxia. A PET e a...

Imagem de danos cerebrais induzidos por hipóxia-isquemia cerebral em um modelo de camundongo

A encefalopatia hipóxico-isquêmica após asfixia perinatal pode ser estudada usando modelos animais. Demonstramos os procedimentos necessários para estabelecer um modelo de leitão de encefalopatia hipóxico-isquêmica neonatal.

Um Modelo de Leitão Neonatal encefalopatia hipóxico-isquêmica

Apresentada é uma bateria concisa de testes motores neonatais em camundongos. Usando esses testes, os déficits motores neonatais podem ser demonstrados em uma variedade de distúrbios motores neonatais. Por ter um conjunto padronizado de testes, os resultados de diferentes estudos podem ser comparados, permitindo relatórios melhores e precisos entre os grupos.

Uma bateria de testes de motor em um Neonatal Rato Modelo de Paralisia Cerebral

Descrevemos um modelo de camundongo de AVC induzido pela oclusão da artéria cerebral média usando uma sutura revestida de silicone. O protocolo pode ser aplicado para induzir oclusão permanente ou isquemia temporária, seguida de reperfusão.

Indução de Acidente Vascular Cerebral Isquêmico e isquemia-reperfusão em ratos usando a técnica de oclusão da artéria Oriente e Visualização de infarto Área

Este manuscrito descreve um método para gravações contínuas de EEG de vídeo usando eletrodos de profundidade múltiplos em camundongos neonatais submetidos à hipoxia-isquemia.

Eletroencefalograma de vídeo contínuo durante hipoxia-isquemia em camundongos neonatais

As concussões pediátricas podem resultar em sequelas a longo prazo com perturbações fisiológicas e psicológicas. Este modelo de camundongo com concussão pediátrica resulta em neuroinflamação de longo prazo, alterações na substância branca e modificações neuronais com disfunção comportamental. O modelo pode ser adaptado a locais de impacto diferencial ou concussões repetidas para avaliar mudanças ao longo da vida.

Um modelo de concussão pediátrica em camundongos: traumatismo craniano fechado com distúrbios de longo prazo (CHILD) 

Aqui, apresentamos um protocolo para induzir hipóxia em camundongos neonatais, entregando-os em ambientes controlados com concentrações variáveis de oxigênio. Modelos de camundongos submetidos a variações de oxigênio ao nascimento variaram de forma duradoura a expressão de miRNAs envolvidos na indução de alterações fenotípicas comportamentais, como o autismo.

Hipóxia altera os níveis de miRNAs envolvidos na herança não mendeliana do transtorno do espectro autista em camundongos

Aprenda a realizar avaliações neurocomportamentais em modelo de lesão cerebral hipóxica-isquêmica neonatal em camundongos CD-1. Este método permite estudar funções motoras e cognitivas após oclusão da carótida unilateral.

Neurocomportamentais avaliações em um modelo do rato de lesão cerebral hipóxica-isquêmica Neonatal

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