Name: Isolamento e cultura de neurônios da medula espinhal de ratos neonatais (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-07-11T15:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 49 s
Description: Aprenda a isolar neurônios da medula espinhal de camundongos neonatais usando métodos mecânicos e enzimáticos. Esta técnica permite obter células viáveis para estudos de neurobiologia e respostas a estressores.

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Os autores não têm reconhecimento.

O atendimento e o tratamento dos animais neste procedimento foram conduzidos de acordo com as diretrizes do Comitê Institucional de Cuidados e Uso Animal da Universidade do Colorado. 1. Preparando Soluções <ol><li> Prepare e armazene todas as soluções a temperaturas apropriadas, conforme mostrado na Tabela 1 . </li></ol> 2. Coating Wells e Slides NOTA: Os neurônios não aderem bem às superfícies de plástico ou de vidro. <ol><li> Um dia antes do isolamento dos neurônios, revestir os poços de uma placa de cultura estéril de 24 poços com 0,5 mL de poli-D-lisina (PDL, Tabela 2 ) e deixá-lo em uma camada de fluxo laminar O / N. NOTA: O método preferido é usar placas de 24 poços e revestir apenas os poços centrais, uma vez que a evaporação dos poços periféricos tende a ser mais acelerada e a resultados inconsistentes. Além disso, lâminas de vidro podem ser colocadas dentro dos poços antes de tO revestimento. Os neurônios serão anexados às lâminas de vidro revestidas e podem ser removidos posteriormente para outras imagens microscópicas . </li><li> No dia do isolamento, retire o PDL dos poços. Lave com água esterilizada por alguns minutos antes de remover a água restante e deixe secar durante 1 h (veja abaixo). </li><li> Após a secagem, cubra as lâminas com laminina ( Tabela 2 ). NOTA: Aproximadamente 10 μL de laminina (10 μg / μL) é suficiente para revestir cada poço de uma placa estéril de 24 poços. Isto é misturado com 340 μL de meio (volume total: 350 μL) para cobrir todo o poço. Deixe isso sentar-se durante 2 h à RT em um capuz de cultura e depois aspirar antes de revestir as células. </li></ol> 3. Colheita de Cordas Espinhais NOTA: Todos os instrumentos devem ser autoclavados (135 ° C e 30 psi para ciclos de 4 x 7 min) para esterilidade. <ol><li> Eutanizar cachorros de rato C57BL / 6 de um dia de um dia em uma câmara com isoflurano. Esperar30 s após a cessação do movimento e pitada a perna para confirmar a falta de resposta. </li><li> Separe a cabeça do corpo usando uma tesoura, com cachorro na posição propensa. </li><li> Estabilize as patas traseiras ou a cauda e os braços na mesa de procedimento, com o lado dorsal voltado para o usuário. </li><li> Corte a pele com uma tesoura de íris curvada. </li><li> Corte a medula espinhal da região lombar logo acima dos quadris e continue a cortar os dois lados do tórax para separá-lo do corpo. NOTA: Isso requer a dissecação cuidadosa da medula espinhal dos órgãos viscerais para evitar danos inadvertidos a outros órgãos ( Figura 1a ). </li><li> Lave sequencialmente por 10 s em placas de Petri de 3 x 10 cm contendo 5 mL de solução salina tamponada com fosfato esterilizado (PBS) esterilizado com filtro de 0,2 μm para remover o excesso de tecido. </li><li> Insira uma agulha de 22 G e uma seringa preenchida com 5 mL de PBS esterilizado em filtro na extremidade caudal da coluna vertebral e flush cranialmente, permitindo que o cordão tO saída para uma quarta placa de Petri ( Figura 1b ). </li><li> Recolher a medula espinhal em um tubo de 15 mL com 5 mL de HABG ( Tabela 1 ) em gelo. Tenha cuidado para evitar esmagar a medula espinhal. </li><li> Repita as etapas 3.1-3.8 para cada cachorro na liteira. NOTA: Idealmente, este processo deve levar menos de 30 min por medula espinhal para garantir o isolamento saudável do neurônio. </li></ol> 4. Isolando neurônios NOTA: O seguinte passo deve ser realizado em uma capa de fluxo laminar. É esperada familiaridade com a técnica estéril básica. <ol><li> Mincing de tecidos <ol><li> Pegue o tubo contendo as cordas espinhais e agite levemente para suspender o tecido. </li><li> Despeje o tecido do tubo em uma placa de Petri de vidro de 60 mm e dê com uma lâmina de barbear para criar peças finas de 0,5 mm de tamanho. </li><li> Transfira o tecido com uma pipeta de diâmetro largo para um tubo de 15 mL contendo 5 mL de HABG. </li><li> Coloque-o em um30 ° C de banho de água durante 30 min para permitir que as células se equilibrem a esta temperatura. Mantenha as células em um agitador apenas o suficiente para permitir que elas sejam suspensas no fluido. NOTA: Este passo é feito para evitar chocar as células após a transferência do gelo para o meio de digestão. Manter as células a 30 ° C ajuda a diminuir a morte celular associada a um aumento do metabolismo a 37 ° C. </li></ol></li><li> Prepare o meio de digestão ( Tabela 1 ). </li><li> Prepare o gradiente de densidade (Tabela 1). <ol><li> Prepare cada uma das 4 camadas em 4 tubos separados de 15 mL, conforme descrito na Tabela 1 . </li><li> Adicione 1 mL de cada camada a um novo tubo de 15 mL. Comece com a camada 1 na parte inferior e adicione-se sequencialmente até atingir a camada 4 no topo. Evite perturbar as camadas enquanto se adiciona. </li></ol></li><li> Lave as placas revestidas PDL do passo 2.2. Lave com água estéril por alguns minutos antes de remover qualquer água restante ePermitindo secar durante 1 h. </li><li> Transfira o tecido para o meio de digestão. <ol><li> Remova o tubo contendo tecido do banho de água do agitador a 30 ° C e deixe-o sedimentar por alguns minutos. </li><li> Remova o tubo médio de digestão do banho-maria a 37 ° C e aspirá-lo para dentro de uma seringa. </li><li> Aspirar o excesso de HABG do tubo contendo tecido. </li><li> Use um filtro de seu filtro de 0,2 μm na seringa para adicionar o meio de digestão ao tubo contendo tecido. </li><li> Coloque o tubo em um banho de água a 30 ° C durante 30 min. Mantenha as células tremendo o suficiente para permitir que elas sejam suspensas no fluido. NOTA: É importante não manter as células no meio de digestão por muito tempo ou deixar a temperatura ficar muito alta, o que pode levar à digestão excessiva e resultar em suspensão do tecido em uma mistura gelatinosa. </li></ol></li><li> Durante este período, revestir a laminina como no passo 2.3. </li> &lt;Li&gt; Realize a trituração ( ou seja, separe as células do tecido). <ol><li> Remova o tubo do banho de água agitado de 30 ° C e deixe-o se assentar durante alguns minutos. </li><li> Aspirar o excesso de meio de digestão. </li><li> Suspenda o tecido em 2 mL de HABG. </li><li> Usando uma pipeta de diâmetro estreito, triture 10x por 45 s. NOTA: Este é provavelmente o passo mais crucial e pode diminuir significativamente o rendimento se não for feito corretamente. <ol><li> Aspirar o tecido na pipeta e imediatamente esvaziar o conteúdo. </li><li> Evite a introdução de ar, pois diminuirá significativamente o rendimento viável. NOTA: A pipeta ideal é uma pipeta de vidro de 9 &quot;. A ponta da pipeta deve ser polida a fogo para suavizar superfícies rugosas. Em seguida, deve ser siliconada por colocação em uma solução 1:20 de diclorodimetilsilano (DMDCS) em clorofórmio e esquerda de O / N. A pipeta deve então ser removida e deixada secar ao ar. Posteriormente, éDeve ser autoclavado para esterilização. Atenção: o DMDCS e o clorofórmio são altamente inflamáveis ​​e a siliconização deve ser realizada em uma exaustão. </li></ol></li><li> Aspirar os 2 ml superiores de sobrenadante e colocá-lo em um novo tubo de 15 mL rotulado como &quot;coleção&quot;. </li><li> Repita as etapas 4.7.3-4.7.5 duas vezes adicionais (o tubo de coleta celular deve ter 6 mL até o final). </li><li> Transmita lentamente o conteúdo do tubo de recolha para o tubo de gradiente preparado no passo 4.2, evitando a interrupção do gradiente. </li></ol></li><li> Neste ponto, remova o meio neurobasal previamente preparado ( Tabela 1 ) da geladeira e deixe-o aquecer em um banho de 37 ° C. </li><li> Purifique os neurônios. <ol><li> Centrifugue o tubo gradiente por 15 min a 800 xg e 22 ° C. </li><li> Colecione a (s) camada (s) desejada (s) com uma pipeta ( Figura 2 ) e coloque em um novo tubo de 15 mL. Para o neurociências de maior purezaN isolação ( ou seja, 90%), coletar camada 3. Para obter mais rendimento com menos pureza ( ie &gt; 70-80%), colete as camadas 2 e 3. </li><li> Diluir o gradiente de densidade adicionando 5 mL de HABG às camadas recém-coletadas. </li><li> Centrifugar a 200 xg durante 2 min a 22 ° C. </li><li> Descarte o sobrenadante, volte a suspender em 5 mL de HABG e pique o sedimento para suspender as células. </li><li> Centrifugar durante 2 min 200 xg a 22 ° C. </li><li> Descarte o sobrenadante, ressuspenda em 3 mL de meio neurobasal e pique o sedimento para ressuspender as células. </li></ol></li><li> Conte as células. <ol><li> Pegue 10 μL da solução, agora com células em meio neurobasal, e misture com 10 μL de azul de Trypan. </li><li> Coloque 10 μL desta mistura numa câmara de contagem de vidro. </li><li> Usando uma câmara de contagem de vidro padrão, conte o número de células em cada um dos quatro quadrantes de 4 x 4. Adicione todas as células contadas (n), multiPor 2 (fator de diluição), dividir por 4 (número de quadrantes contados), multiplicar por 3 (volume de meio neurobasal) e multiplicar por 10 4 para obter a concentração de células em células / mL. <img alt="Equação" src="/files/ftp_upload/55856/55856eq0.jpg" /></li></ol></li><li> Semear as células em placas de cultura <ol><li> Diluir a suspensão celular para 300.000 células em 1 mL de meio neurobasal. NOTA: Com base na concentração de células obtidas nas etapas acima, adiciona-se meio neurobasal adicional para obter uma concentração final de 3 * 10 5 células / mL. A equação é C 1 V 1 = C 2 V 2 , onde C 1 é a concentração inicial de células obtidas a partir da colheita; V 1 é 3 mL; E C 2 é 3 * 10 5 células / mL, como discutido acima. A equação é resolvida para V 2 . Adicione o volume do meio neurobasal necessário para tornar o volume total de células em solução igual aV 2 . </li><li> Agite suavemente para distribuir as células em solução e adicione 1 mL a cada poço nas placas revestidas de 24 poços. </li></ol></li></ol>

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</ol>

Os autores não possuem divulgações.

Esta técnica permite a cultura confiável dos neurônios da medula espinhal. Uma vez alcançada a proficiência na técnica, demora cerca de 3,5 h para completar. Nós conseguimos realizar o isolamento de neurônios de 2 camadas separadas (16 camundongos totais) em aproximadamente 4 h. O passo-chave na viabilidade é poder extrair com eficiência as cordas espinhais dos ratos. O rendimento permite revestir vários poços e a capacidade de testar os neurônios em várias condições. Nós conseguimos tratar os neurônios após a maturidad...

<html> Compreender a patologia da medula espinhal requer o uso de vários modelos, tanto no nível macroscópico quanto microscópico. Os modelos de animais grandes e pequenos 1 , 2 , 3 são utilizados para investigações in vivo de doenças da medula espinhal e lesões. Ao estudar estas questões in vivo tem seus méritos, a análise da medula espinhal é limitada ao homogeneizado da medula espinal inteira ou às seções de tecido 4 . Isso cria alguma ambigüidade ao tentar isolar respostas e alvos específicos na medula espinhal entre seus neurônios residentes e glia circundante. A crescente disponibilidade de camundongos manipulados geneticamente permite investigações mais detalhadas da biologia em níveis celulares e moleculares. Assim, um modelo de rato neonatal é usado aqui, permitindo o estudo das propriedades únicas e biologia dos neurônios da medula espinhal in vitro . O isolamento e manutenção de neurônios in vitro não é particularmente direto. Existe uma abundância relativa de técnicas de isolamento de neurônios do tecido cortical de roedores adultos que parecem resultar em um número substancial de neurônios isolados ( ou seja, milhões) 5 , 6 , 7. Em contraste, o rendimento de neurônios do tecido da medula espinhal é menor 8 , 9 , 10 , em parte devido à menor massa de tecido. Além disso, em camundongos, há uma escassez relativa de técnicas para o isolamento de neonatologia Os neurônios da medula espinhal e os métodos existentes são limitados por menores rendimentos de neurônios ( ou seja, centenas) 9 ou técnicas pesadas e pesadas que exigem o isolamento de camundongos embrionários 10 . Neste protocolo, nósUse uma técnica que permita o isolamento efetivo de custo e recursos de um número substancial de neurônios das cordas espinhais de camundongos neonatais. Como é comum em técnicas previamente publicadas, utilizamos papaina como protease enzimática, permitindo a liberação de neurônios do tecido da medula espinhal 5 , 6 . Além disso, usamos um gradiente de densidade para a separação de células refinadas, que anteriormente foi mostrado como efetivo 6 , 10 . Embora o meio em que as células estejam incubadas possa variar, em nossa experiência e como publicado anteriormente 11 , a suplementação com suplemento de meio de cultura B27 fresco provou ser crítica para a longevidade do neurônio. Os neurônios são geralmente viáveis ​​por até 10 dias, permitindo que o tratamento seja realizado.

<table><tbody><tr><td>Hibernate A Medium - 500 mL</td><td>Thermo-Fisher</td><td>A1247501</td><td>https://www.thermofisher.com/order/catalog/product/A1247501</td></tr><tr><td>Hibernate A Minus Calcium - 500 mL</td><td>Brainbits</td><td>HA-Ca</td><td>http://www.brainbitsllc.com/hibernate-a-minus-calcium/</td></tr> <tr><td>Glutamax 100X - 100 mL</td><td>Thermo-Fisher</td><td>35050061</td><td>https://www.thermofisher.com/order/catalog/product/35050079</td></tr><tr><td>Suplemento B27 50X - 10 mL</td><td>Thermo-Fisher</td><td>17504044</td><td>https://www.thermofisher.com/order/catalog/product/17504044</td></tr><tr><td>Papaína, Liofilizado - 100 mg</td><td>Worthington</td><td>LS003119</td><td>http://www.worthington-biochem.com/pap/cat.html</td></tr><tr><td>Neurobasal A Medium - 500 mL</td><td>Thermo-Fisher</td><td>10888022</td><td>https://www.thermofisher.com/order/catalog/product/10888022</td></tr><tr><td>Penicilina-estreptomicina (10.000 U / mL)</td> <td>Thermo-Fisher</td><td>15140122</td><td>https://www.thermofisher.com/order/catalog/product/15140122</td></tr><tr><td>bromidrato de poli-D-lisina (PDL) - 5 mg</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P6407-5MG</td><td>http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/p6407?lang=en&region=US</td></tr><tr><td>Laminina de camundongo - 1 mg</td><td>Thermo-Fisher</td><td>23017015</td><td>https://www.thermofisher.com/order/catalog/product/23017015</td></tr><tr><td>Azul de Tripano - 20 mL</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T8154-20ML</td><td>http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/t8154?lang=en&region=US</td></tr><tr><td>OptiPrep Gradiente de Densidade Médio - 250 mL</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D1556-250ML</td><td>http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/d1556?lang=en&region=US</td></tr><tr><td>Diclorodimetilsilano ( DMDCS, Sigma Silicoat)</td> <td>Sigma-Aldrich</td><td>440272-100ML</td><td>http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/aldrich/440272?lang=en&region=US</td></tr><tr><td>Clorofórmio</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>288306-1L</td><td>http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sial/288306?lang=en&region=US</td></tr><tr><td>Glass Pippette - 9"</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>13-678-20C</td><td>http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/cls7095d9?lang=en&region=US</td></tr><tr><td>Bulbo de pipeta - 5 mL</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>Z186678-3EA</td><td>http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/aldrich/z186678?lang=en&region=US&cm_sp=Insite-_-prodRecCold_xviews-_-prodRecCold10-1</td></tr><tr><td>MARCA&reg; &nbsp; Placa de Petri, vidro - 60 x 15 mm</td> Placa <td></td>de cultura de células estéril de 24 poços <td>Sigma-Aldrich</td><td>BR455717-10EA</td> http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/aldrich/br455717?lang=en&region=US</tr><tr><td></td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M8812-100EA</td><td>http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/m8812?lang=en&region=US</td></tr><tr><td>Hausser Hemacitômetro (câmara de contagem de vidro)</td><td>Fischer Scientific</td><td>02-671-6</td><td>https://www.fishersci.com/shop/products/hausser-bright-line-phase-hemacytometer-hemacytometer/026716</td></tr><tr><td>Lâminas de Vidro - Tampa de vidro estéril de 12 mm - não revestida</td><td>Neuvitro</td><td>GG-12-1.5-Pre</td><td>http://www.neuvitro.com/german-coverslip-12mm-diameter.htm</td></tr><tr><td>NeuN Rabbit Monoclonal Antibody - 100 &micro; L</td><td>Abcam</td><td>ab177487</td><td>Após fixação em paraformaldeído (PFA) e bloqueio com 5% de BSA, as células em uma lamínula de 12 mm foram incubadas no anticorpo diluído 1:200 por 18 h em 4 &deg; C</td></tr><tr><td>MAP-2 Anticorpo Monoclonal de Camundongo - 50 &micro; L</td><td>Abcam</td><td>ab11267</td><td>Após fixação em paraformaldeído e bloqueio com 5% de BSA, as células em uma lamínula de 12 mm foram incubadas no anticorpo diluído 1:500 por 18 h em 4 &graus; O</td></tr></tbody></table>

isolamento e cultura de neurônios da medula espinhal de ratos neonatais

Spinal Cord Neurons Isolation and Culture from Neonatal Mice

Apresentamos um protocolo para o isolamento e a cultura dos neurônios da medula espinhal. Os neurônios são obtidos a partir de camundongos C57BL / 6 neonatais e são isolados no dia 1 pós-natal. Uma maca de rato, geralmente 4-10 cachorros nascidos de um par reprodutor, é recolhida para uma experiência e as cordas espinhais são coletadas individualmente de cada mouse após a eutanásia com isoflurano. A coluna vertebral é dissecada e depois a medula espinal é liberada da coluna. As cordas espinhais são então picadas para aumentar a área superficial de parto para uma protease enzimática que permite que os neurônios e outras células sejam liberados do tecido. A trituração é então usada para liberar as células em solução. Esta solução é subsequentemente fraccionada em um gradiente de densidade para separar as várias células em solução, permitindo que os neurônios sejam isolados. Aproximadamente 1-2,5 x 10 6 neurônios podem ser isolados de um grupo de lixo. Os neurônios são então semeados em poços revestidos com adesãoRs que permitem um crescimento e maturação adequados. Os neurônios levam aproximadamente 7 dias para atingir a maturidade no meio de crescimento e cultura e podem ser usados ​​posteriormente para tratamento e análise.

Usando esta técnica, uma única ninhada (4-10 filhotes) permite o isolamento de 1-2,5 10 6 neurônios adequados para semeadura em placas de cultura. Tipicamente, 4-8 poços são semeados na concentração mencionada acima ( ou seja, 300.000 células / mL). A Figura 3 demonstra o aparecimento de neurônios nesta concentração após uma semana de cultura em microscopia de luz de ampliação baixa ( a ) e alta ( b ). No...

Este estudo apresenta uma técnica para o isolamento de neurônios de ratos neonatais WT. Requer a dissecção cuidadosa da medula espinhal do rato neonatal, seguida da separação de neurônios do tecido da medula espinhal através da clivagem mecânica e enzimática.

Isolamento e cultura de neurônios da medula espinhal de ratos neonatais

We present a protocol for the isolation and culture of spinal cord neurons. The neurons are obtained from neonatal C57BL/6 mice and are isolated on ...

O objetivo geral deste procedimento é poder isolar repetidamente e de forma consistente neurônios da medula espinhal que possam ser utilizados em uma variedade de experimentos. Este método pode nos permitir obter uma compreensão mais profunda da biologia dos neurônios da medula espinhal e, esperançosamente, entender sua resposta a uma variedade de agentes estressores. A principal vantagem desta técnica é que ela permite o isolamento de um número significativo de neurônios, possibilitando que esses neurônios sejam usados em uma ampla variedade de experimentos.A demonstração visual deste método é essencial, pois a etapa de trituração, na qual os neurônios são isolados mecanicamente do tecido, exige certo tempo para ser dominada, a fim de garantir um isolamento saudável dos neurônios sem matá-los. Para iniciar este procedimento, separe a cabeça do corpo dos filhotes de camundongo eutanasiados utilizando uma tesoura. Em seguida, estabilize a cauda e os membros na mesa de procedimento com o lado dorsal voltado para cima.Em seguida, retire a pele utilizando a tesoura de íris curva. Depois disso, corte a medula espinhal da região lombar, logo acima dos quadris, e então corte ambos os lado

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Research

JoVE Journal

Neuroscience

Neurociência

A demonstração do isolamento do cabo do mouse neonatal espinhal para estudos eletrofisiológicos.

Spinal Cord Eletrofisiologia

Uma forma alternativa de isolar motoneurônios embrionárias de camundongos a partir da medula espinhal é descrito. O método leva em consideração o fato de que a lectina pode ligar para a afinidade baixo do nervo receptor do fator de crescimento p75NTR. Este preplating lectina baseado permite uma purificação semelhante ao que, com um anticorpo específico contra o p75NTR.

Lectina baseado em isolamento e cultura de motoneurônios embrionárias de rato

Neste vídeo, descrevemos um protocolo passo a passo para isolar neurônios da medula espinhal de um camundongo neonatal para estudos in vitro.

Isolamento de neurônios da medula espinhal: um procedimento de gradiente de densidade para isolar neurônios neonatais da medula espinhal para estudos in vitro

O vídeo demonstra o isolamento de neurônios oculomotores, trocleares e motores espinhais de um embrião de camundongo transgênico. O embrião expressa neurônios motores marcados com uma proteína fluorescente verde (GFP) para fácil visualização e identificação. Os neurônios motores são isolados cirurgicamente sob um microscópio de fluorescência e mantidos em meio de cultura.

Isolamento e cultura de neurônios oculomotores, trocleares e motores espinhais de um embrião de camundongo

O vídeo demonstrou o método de isolar e cultivar células de um cérebro de camundongo neonatal. Envolveu dissociação enzimática e mecânica do cérebro, seguida de cultura em meios de crescimento sem fator de crescimento neuronal para obter uma população glial mista.

Obtenção de uma cultura de células gliais mistas de um cérebro de camundongo neonatal

Este vídeo demonstra uma técnica para isolar e cultivar células gliais mistas primárias do tecido da medula espinhal de camundongos adultos. O protocolo envolve a digestão enzimática do tecido, seguida pela remoção de membranas celulares quebradas e detritos de mielina para obter uma população unicelular. As células são então cultivadas em meios otimizados para o crescimento de células gliais mistas.

Estabelecimento de culturas primárias de células gliais mistas a partir de uma medula espinhal de camundongo

Nós delinear métodos para a rápida e eficiente isolamento / cultura da microglia viável a partir do córtex cerebral neonatal e adulto medula espinhal. A dissecção e revestimento de microglia cortical pode ser realizado dentro de 90 minutos, com a colheita da microglia subseqüente ocorrendo ~ 10 dias após a dissecção inicial.

Microglia cultura do Sistema Nervoso Central Neonatal e Adulto

Realizar experimentos in vitro para refletir as condições in vivo da forma mais adequada possível não é uma tarefa fácil. O uso de culturas celulares primárias é um passo importante para a compreensão da biologia celular em um organismo inteiro. O protocolo fornecido descreve como crescer com sucesso e cultura embrionária mouse neurônios cerebelares.

Cultura primária de neurônios isolados do cerebelo embrionário do rato

Este trabalho apresenta um protocolo para produzir culturas celulares homogêneas de neurônios motores oculomotores primários, trochlear e espinhais. Essas culturas podem ser usadas para análises comparativas das características morfológicas, celulares, moleculares e eletrofisiológicas dos neurônios motores oculares e espinhais.

Isolamento e Cultura dos neurônios oculomotores, trochlear e motores espinhais de pré-natal Islmn:GFP Ratos Transgênicos

Este protocolo apresenta uma maneira única de gerar culturas de células do sistema nervoso central a partir de cérebros embrionários de camundongos do dia 17 para pesquisa em neuro(imuno)logia. Este modelo pode ser analisado usando várias técnicas experimentais, incluindo RT-qPCR, microscopia, ELISA e citometria de fluxo.

Estabelecendo culturas mistas de células neuronais e gliais de cérebros embrionários de camundongos para estudar infecção e imunidade inata

Este protocolo descreve o isolamento de astrócitos purificados e microglia da medula espinhal de camundongos adultos, facilitando aplicações subsequentes, como análise de RNA e cultura celular. Inclui métodos e procedimentos detalhados de dissociação celular projetados para melhorar a qualidade e o rendimento das células isoladas.

Isolamento de Astrócitos Puros e Microglia da Medula Espinhal de Camundongos Adultos para Ensaios In Vitro e Estudos Transcriptômicos

Aprenda a isolar neurônios da medula espinhal de camundongos neonatais usando métodos mecânicos e enzimáticos. Esta técnica permite obter células viáveis para estudos de neurobiologia e respostas a estressores.

Isolamento e cultura de neurônios da medula espinhal de ratos neonatais

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