Localização de Genes de Receptor de Odorantes em Antenas de Locustídeo por RNA In Situ Hibridação

O objetivo geral deste procedimento é localizar genes receptores de odor expressos de baixo nível, bem como outros genes nas antenas do inseto usando sondas marcadas com digoxigenina ou biotina. Para iniciar este procedimento, selecione os novos gafanhotos adultos em muda que estão ativos e têm antenas intactas e, em seguida, corte as antenas em pedaços de dois a três milímetros usando lâminas esterilizadas. Em seguida, aplique o composto OCT em um suporte de micrótomo de congelamento e coloque as amostras no composto horizontalmente.

Transfira o suporte para o micrótomo de congelamento a 24 graus Celsius negativos para equilibrar até que o composto congele. Depois, retire o suporte e cubra as amostras com um pouco de composto. Transfira o suporte para o micrótomo de congelamento a 24 graus Celsius negativos novamente por pelo menos 10 minutos e, em seguida, divida as amostras congeladas em fatias de 12 micrômetros de espessura.