Name: Um modelo de mouse de engenharia genética de câncer colorretal esporádico (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-07-06T12:30:00.000+00:00
Duration: 6 min 1 s
Description: Aprenda a criar um modelo de câncer colorretal esporádico em camundongos por infecção segmentada com adeno-cre. Este método permite monitorar tumores por colonoscopia de alta resolução.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Este trabalho é dedicado à memória do professor Moritz Koch.

Os experimentos com animais apresentados aqui foram revisados ​​e aprovados de forma independente por um Comitê de Uso e Cuidados de Animais institucional e governamental e foram conduzidos de acordo com as diretrizes da Federação de Associações de Ciências de Animais de Laboratório (FELASA). Todas as medidas possíveis foram tomadas para minimizar o sofrimento, incluindo anestesia e analgesia ou, se necessário, eutanásia prematura. 1. Indução local do tumor através da infecção cirúrgica Adeno-cre <ol><li> Preparação de animais para cirurgia NOTA: Virtualmente qualquer mutação condicional (&quot;floxed&quot;) pode ser induzida através do método aqui descrito. É recomendado o uso de mutações em genes relevantes em câncer colorretal, como Apc, Kras ou Tp53. A eficiência da recombinação do creme é dependente do tamanho da construção a ser excisada. As grandes sequências de floxed são excisadas de forma menos eficiente. A recombinação de todos os alelos deve ser confirmada nos tumores por PCR. <ol><li> Para o desenvolvimento de tumores colorretais, use uma cruz dos seguintes alelos condicionais para um modelo básico de CRC (número de banco de dados MGI entre colchetes): Apc tm2Rak (MGI: 3688435) 16 Kras tm4Tyj (MGI: 2429948) 17 Tp53 tm2Tyj (MGI: 3039263) 18 </li><li> Se um alelo repórter de fluorescência for necessário ( por exemplo , para detectar micrometástases), use o seguinte alelo: Gt (ROSA) 26Sor tm6 (CAG-ZsGreen1) Hze (MGI: 3809522) 19 NOTA: Todas as cepas acima estão disponíveis através do NCI Mouse Repository ou Jackson Laboratory. Não é necessário jejum, pois todas as matérias fecais remanescentes podem ser lavadas antes da infecção adenoviral. O jejum pré-operatório leva a maior mortalidade perioperatória e constitui um tremendo estresse para pequenos roedores. </li><li> Use sevoflurano com 3 a 3,5% vol para anestesia geral. Uma perda de tO reflexo de pitada do dedo do pé indica anestesia suficiente. </li><li> Antes da primeira incisão, injete 0,05 mg / kg de buprenorfina por via subcutânea. </li><li> Cubra os olhos do mouse anestesiado com pomada oftálmica para evitar a dessecação da córnea. </li><li> Coloque o mouse em posição supina em uma pequena mesa. Use fitas adesivas não traumáticas para restringir o mouse. </li><li> Raspar o abdômen com uma máquina de barbear elétrica (o creme depilatório pode ser usado alternativamente) e desinfetar com cotonete com álcool ou iodo. Use o tempo de contato recomendado pelo fabricante. </li><li> Cubra o campo cirúrgico com cortinas estéreis. NOTA: O uso de antibióticos perioperatórios é opcional e está sujeito a diretrizes institucionais. </li><li> Use instrumentos estéreis de uso único ou esterilizados para todos os procedimentos cirúrgicos. </li></ol></li><li> Laparotomia da linha média e exposição do cólon <ol><li> Use tesoura (os escalpelos podem ser usados ​​alternativamente) para fazer uma incisão na linha média(~ 15 mm) da pele no abdômen inferior. </li><li> Pegue a musculatura da parede abdominal com fórceps e cuidadosamente o incise com uma tesoura, abrindo assim a cavidade abdominal. </li><li> Identifique o cólon distal, toque-o apenas com fórceps atraumáticos. Aperte o cólon com um grampo delicado ( por exemplo , uma braçadeira vascular Micro Serrefine) aproximadamente 15 mm proximalmente do ânus. NOTA: Dê especial atenção à vulnerabilidade do cólon em todos os momentos. A perfuração leva inevitavelmente a peritonite e sepse e requer eutanásia do animal. </li></ol></li><li> Infecção do cólon segmentar com o vírus Adeno-cre <ol><li> Insira um tubo de Teflon flexível de forma transanal e avançar cuidadosamente até atingir a oclusão do lúmen alcançada pela braçadeira previamente colocada a 15 mm da largura anal. Não use força excessiva, pois isso pode levar a perfuração. </li><li> Cannule o tubo com uma cânula 30G, conecte uma seringa padrão de 1 mL e elimine o coloN com solução salina normal para evacuar a matéria fecal restante. Isso pode exigir vários mL de solução salina. </li><li> Uma vez que o cólon distal está vazio, remova o tubo e substitua-o por um tubo de Teflon fresco e novamente posicione-o diretamente distal ao grampo como descrito acima. </li><li> Ocultar o cólon com uma segunda braçadeira ~ 3 mm distal ao grampo proximal ( ou seja , sobre o tubo inserido, ~ 12 mm da largura anal), resultando em um segmento isolado de 3 mm para ser infectado. NOTA: Para a oclusão distal do segmento, os clipes de artéria coronária de Fogarty se mostraram mais adequados, pois são borrachas, levando a oclusão apertada do cólon, apesar do tubo intraluminal entre os ramos da braçadeira. </li><li> Use uma segunda seringa (1 mL padrão com uma cânula 30G) para injetar cuidadosamente 50 - 80 μL de tripsina-EDTA a 0,25% no segmento do cólon apertado e incubar durante 10 min. Deixe a cânula e a seringa ligadas ao tubo de Teflon para evitar que o fluido fique para trás. <li> Primeiro remova a braçadeira distal e, em seguida, o tubo de tripsina. </li><li> Lavar o cólon distal com ~ 500 μL de solução salina normal para remover a tripsina remanescente. </li><li> Insira um novo tubo de Teflon, coloque a braçadeira distal no local e infle o segmento do cólon com 50 a 80 μL de solução adenoviral (10 11 unidades formadoras de placa (PFU) / mL em solução salina tamponada com fosfato) e incube durante 30 min ( Figura 2A ). NOTA: Não derrame a solução viral, pois o contato com adeno-cre pode levar ao desenvolvimento de tumores em qualquer tecido de camundongos condicionalmente mutantes. </li><li> Remova as braçadeiras e o tubo. </li></ol></li><li> Encerramento do abdômen e recuperação pós-operatória <ol><li> Feche a parede abdominal com 6-0 de absorção rápida(Por exemplo , polidioxanona (PDS)). </li><li> Feche a pele com os clipes da ferida cirúrgica. </li><li> Coloque o mouse sobre uma almofada de aquecimento ajustada para 38 ° C até se recuperar completamente da anestesia. </li><li> Administrar outro bolus de 0,05 mg / kg de buprenorfina ip 12 h após a cirurgia, seguido de bolos de buprenorfina adicionais a cada 12 h, se necessário. </li><li> Monitore os ratos pelo menos uma vez por dia para detectar sinais de angústia devido ao crescimento do tumor. </li></ol></li></ol> 2. Colonoscopia NOTA: Dependendo das mutações condicionais utilizadas, a infecção adenoviral leva a tumores endoscopicamente visíveis dentro de 2 a 4 semanas. Portanto, realize a primeira colonoscopia pós-operatória 2 semanas após a indução adenoviral e repita a cada 2 semanas. Um sistema comercialmente disponível é recomendado para colonoscopia murina. 20 <ol><li> Preparação de animais para colonoscopia NOTA: Não é necessário jejumEd. A matéria fecal restante geralmente está bem formada no cólon distal e pode ser empurrada para além do tumor durante a colonoscopia, tornando desnecessário o processo estressante do jejum repetido. <ol><li> Use sevoflurano com 3 a 3,5% vol para anestesia geral. Uma perda do reflexo de pinça do dedo do pé indica anestesia suficiente. </li><li> Cubra os olhos dos ratos anestesiados com pomada oftálmica para evitar a dessecação da córnea. </li><li> Limite os camundongos em posição supina numa mesa pequena. </li></ol></li><li> Colonoscopia <ol><li> Insira o escopo (diâmetro 1,9 mm, comprimento 10 cm) no trato intestinal através do ânus e cuidadosamente insufa ar sob controle visual para distender o cólon. Não insufie mais ar do que o necessário para o exame. NOTA: Para a insuflação de ar, a bomba de ar anti-nevoeiro do sistema de colonoscopia pode ser utilizada. Se nenhuma bomba de ar anti-neblina estiver disponível, qualquer outra bomba de ar com configurações de pressão muito baixa pode ser usada, ou préAr ssurizado com uma delicada válvula de redução de pressão. O dióxido de carbono (CO 2 ) facilmente conduz a acidose em pequenos roedores e, portanto, deve ser evitado. </li><li> Pressione cuidadosamente o escopo até que uma lesão da mucosa no cólon distal possa ser identificada ( Figura 1A - 1D ). </li><li> Salve imagens endoscópicas para avaliação posterior. Um sistema endoscópico de pontuação para tumores intraluminais já foi descrito anteriormente. 20 </li><li> Remova cuidadosamente o escopo e coloque o mouse na almofada de aquecimento ajustada para 38 ° C até que ele tenha sido totalmente recuperado da anestesia. </li></ol></li></ol>

<ol><li>Siegel, R. L., Miller, K. D., Jemal, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cancer+statistics%2C+2016%5BTitle%5D)+AND+%22CA+Cancer+J+Clin%22%5BJournal%5D)">Cancer statistics, 2016.</a> CA Cancer J Clin. 66 (1), 7-30 (2016).</li>
<li>Weitz, J., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/15639298">Colorectal cancer.</a> Lancet. 365 (9454), 153-165 (2005).</li>
<li>Bork, U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prognostic+relevance+of+minimal+residual+disease+in+colorectal+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22World+J+Gastroenterol%22%5BJournal%5D)">Prognostic relevance of minimal residual disease in colorectal cancer.</a> World J Gastroenterol. 20 (30), 10296-10304 (2014).</li>
<li>Steinert, G., Schölch, S., Koch, M., Weitz, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biology+and+significance+of+circulating+and+disseminated+tumour+cells+in+colorectal+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Langenbecks+Arch+Surg%22%5BJournal%5D)">Biology and significance of circulating and disseminated tumour cells in colorectal cancer.</a> Langenbecks Arch Surg. 397 (4), 535-542 (2012).</li>
<li>García, S. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((LDB1+overexpression+is+a+negative+prognostic+factor+in+colorectal+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Oncotarget%22%5BJournal%5D)">LDB1 overexpression is a negative prognostic factor in colorectal cancer.</a> Oncotarget. 7 (51), 84258-84270 (2016).</li>
<li>van Noort, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+Drug+Candidates+for+the+Treatment+of+Metastatic+Colorectal+Cancer+through+Global+Inverse+Gene-Expression+Profiling%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Novel Drug Candidates for the Treatment of Metastatic Colorectal Cancer through Global Inverse Gene-Expression Profiling.</a> Cancer Res. 74 (20), 5690-5699 (2014).</li>
<li>Nanduri, L. K., García, S., Weitz, J., Schölch, S. <a target="_blank" href="https://www.omicsonline.org/peer-reviewed/mouse-models-of-colorectal-cancerderived-circulating-tumor-cells-76740.html">Mouse Models of Colorectal Cancer-Derived Circulating Tumor Cells.</a> Med Chem (Los Angeles). 6 (7), 497-499 (2016).</li>
<li>Taketo, M. M., Edelmann, W. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/19263594">Mouse models of colon cancer.</a> Gastroenterology. 136 (3), 780-798 (2009).</li>
<li>Schölch, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Circulating+tumor+cells+exhibit+stem+cell+characteristics+in+an+orthotopic+mouse+model+of+colorectal+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Oncotarget%22%5BJournal%5D)">Circulating tumor cells exhibit stem cell characteristics in an orthotopic mouse model of colorectal cancer.</a> Oncotarget. 7 (19), 27232-27242 (2016).</li>
<li>Schölch, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Radiotherapy+combined+with+TLR7%2F8+activation+induces+strong+immune+responses+against+gastrointestinal+tumors%5BTitle%5D)+AND+%22Oncotarget%22%5BJournal%5D)">Radiotherapy combined with TLR7/8 activation induces strong immune responses against gastrointestinal tumors.</a> Oncotarget. 6 (7), 4663-4676 (2015).</li>
<li>Corbett, T. H., Griswold, D. P., Roberts, B. J., Peckham, J. C., Schabel, F. M. Jr <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumor+induction+relationships+in+development+of+transplantable+cancers+of+the+colon+in+mice+for+chemotherapy+assays%2C+with+a+note+on+carcinogen+structure%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Tumor induction relationships in development of transplantable cancers of the colon in mice for chemotherapy assays, with a note on carcinogen structure.</a> Cancer Res. 35 (9), 2434-2439 (1975).</li>
<li>Roper, J., Hung, K. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Priceless+GEMMs%3A+genetically+engineered+mouse+models+for+colorectal+cancer+drug+development%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Pharmacol+Sci%22%5BJournal%5D)">Priceless GEMMs: genetically engineered mouse models for colorectal cancer drug development.</a> Trends Pharmacol Sci. 33 (8), 449-455 (2012).</li>
<li>Hung, K. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+a+mouse+model+for+sporadic+and+metastatic+colon+tumors+and+its+use+in+assessing+drug+treatment%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+USA%22%5BJournal%5D)">Development of a mouse model for sporadic and metastatic colon tumors and its use in assessing drug treatment.</a> Proc Natl Acad Sci USA. 107 (4), 1565-1570 (2010).</li>
<li>Sharpless, N. E., Depinho, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+mighty+mouse%3A+genetically+engineered+mouse+models+in+cancer+drug+development%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Drug+Discov%22%5BJournal%5D)">The mighty mouse: genetically engineered mouse models in cancer drug development.</a> Nat Rev Drug Discov. 5 (9), 741-754 (2006).</li>
<li>Shibata, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+colorectal+adenoma+formation+initiated+by+conditional+targeting+of+the+Apc+gene%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Rapid colorectal adenoma formation initiated by conditional targeting of the Apc gene.</a> Science. 278 (5335), 120-123 (1997).</li>
<li>Kuraguchi, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adenomatous+polyposis+coli+%28APC%29+is+required+for+normal+development+of+skin+and+thymus%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Genet%22%5BJournal%5D)">Adenomatous polyposis coli (APC) is required for normal development of skin and thymus.</a> PLoS Genet. 2 (9), e146(2006).</li>
<li>Jackson, E. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+lung+tumor+initiation+and+progression+using+conditional+expression+of+oncogenic+K-ras%5BTitle%5D)+AND+%22Genes+Dev%22%5BJournal%5D)">Analysis of lung tumor initiation and progression using conditional expression of oncogenic K-ras.</a> Genes Dev. 15 (24), 3243-3248 (2001).</li>
<li>Olive, K. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mutant+p53+gain+of+function+in+two+mouse+models+of+Li-Fraumeni+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Mutant p53 gain of function in two mouse models of Li-Fraumeni syndrome.</a> Cell. 119 (6), 847-860 (2004).</li>
<li>Madisen, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+robust+and+high-throughput+Cre+reporting+and+characterization+system+for+the+whole+mouse+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Neurosci%22%5BJournal%5D)">A robust and high-throughput Cre reporting and characterization system for the whole mouse brain.</a> Nature Neurosci. 13 (1), 133-140 (2010).</li>
<li>Becker, C., Fantini, M. C., Neurath, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High+resolution+colonoscopy+in+live+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">High resolution colonoscopy in live mice.</a> Nat Protoc. 1 (6), 2900-2904 (2006).</li>
<li>Moser, A. R., Pitot, H. C., Dove, W. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+dominant+mutation+that+predisposes+to+multiple+intestinal+neoplasia+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">A dominant mutation that predisposes to multiple intestinal neoplasia in the mouse.</a> Science. 247 (4940), 322-324 (1990).</li>
<li>de Wind, N., Dekker, M., Berns, A., Radman, M., te Riele, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inactivation+of+the+mouse+Msh2+gene+results+in+mismatch+repair+deficiency%2C+methylation+tolerance%2C+hyperrecombination%2C+and+predisposition+to+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Inactivation of the mouse Msh2 gene results in mismatch repair deficiency, methylation tolerance, hyperrecombination, and predisposition to cancer.</a> Cell. 82 (2), 321-330 (1995).</li>
<li>Reitmair, A. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spontaneous+intestinal+carcinomas+and+skin+neoplasms+in+Msh2-deficient+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Spontaneous intestinal carcinomas and skin neoplasms in Msh2-deficient mice.</a> Cancer Res. 56 (16), 3842-3849 (1996).</li>
<li>Ayala, J. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Standard+operating+procedures+for+describing+and+performing+metabolic+tests+of+glucose+homeostasis+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Dis+Model+Mech%22%5BJournal%5D)">Standard operating procedures for describing and performing metabolic tests of glucose homeostasis in mice.</a> Dis Model Mech. 3 (9-10), 525-534 (2010).</li>
<li>Jensen, T. L., Kiersgaard, M. K., Sørensen, D. B., Mikkelsen, L. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fasting+of+mice%3A+a+review%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Anim%22%5BJournal%5D)">Fasting of mice: a review.</a> Lab Anim. 47 (4), 225-240 (2013).</li>
</ol>

Os autores não têm nada a divulgar.

Embora geralmente sejam fáceis de gerar e manter, os modelos clássicos de ratos CRC baseados na injeção de linha celular são artificiais e não são capazes de recapitular completamente a doença humana. Como conseqüência, os GEMMs foram desenvolvidos. O primeiro CRC GEMM foi o mouse Apc Min , que abriga uma mutação nula heterozigótica no gene Apc, imitando a polipose adenomatosa familiar (FAP) da doença hereditária humana. 21 Contudo, os ratos Apc Min invariavelmente desenvolv...

O câncer colorretal (CRC) continua a ser uma das principais causas de morte relacionada ao câncer nos países ocidentais. 1 Embora o prognóstico de pacientes com doença em estágio inicial seja bom, muitos tumores são diagnosticados em estágios posteriores em que, apesar das numerosas opções de tratamento, o prognóstico é limitado. 2 , 3 , 4 , 5 A maioria dos modelos de ratos atuais de CRC baseia-se na implantação de células tumorais derivadas de linhas celulares ou tumores de pacientes em camundongos imunodeficientes. 6 , 7 , 8 Isso leva ao local e, dependendo do local da injeção e das células tumorais usadas para injeção, às vezes tumores metastáticos. 9 , 10 No entanto, os modelos de xenoenxerto resultantes têm majoLimitações. Eles devem ser estabelecidos em camundongos imunodeficientes, eliminando assim a interação complexa entre o tumor e o sistema imune do hospedeiro. Além disso, como o estroma do tumor é derivado de células hospedeiras, a interação entre o parênquima do tumor humano eo estroma murino é defeituosa e, portanto, não é representativa da doença. Essas deficiências podem ser evitadas pelo uso de linhas celulares murinas para injeção. No entanto, apenas algumas linhas celulares CRC murinas estão disponíveis e, semelhantes às linhas celulares humanas de CRC, são monoclonais e altamente anaplásticas. 11 Em resumo, a maioria dos modelos de ratos CRC actualmente disponíveis são altamente artificiais e não são totalmente representativos da doença humana. Os modelos de mouse geneticamente modificados (GEMMs) do CRC podem evitar essas desvantagens, pois apresentam tumores de mouse genuínos que são criados através da indução de mutações-chave do CRC no cólon. 12 , 13 ,14 Isso pode ser conseguido pela ativação de mutações germinais condicionais (floxed) pela recombinase cre dentro da mucosa colorretal. Enquanto em GEMMs de muitas outras entidades tumorais, a expressão de cremes germinativas (indutíveis) conduzida por promotores específicos de tecidos é usada, o credo germinal não pode ser usado no cólon, pois isso leva a um grande número de adenomas em todo o cólon causando a morte por carga tumoral benigna em Uma idade muito jovem. Portanto, no modelo descrito aqui, um credo que expressa o vetor adenoviral é usado para infectar um curto segmento do cólon. Isso leva à indução de tumorigênese dentro deste segmento da mucosa em um ponto de tempo definido pelo investigador, resultando em adenomas em última instância, progredindo em carcinoma invasivo e metastático. Os tumores são tumores de ratos genuínos, crescem em um microambiente intacto e, portanto, são capazes de simular a totalidade da oncogênese colorretal, incluindo a interação tumor-hospedeiro e a cascata metastática. Este modelo éPortanto, uma plataforma atraente para estudos de biologia do câncer e ensaios terapêuticos pré-clínicos. Uma grande desvantagem dos modelos de mouse geneticamente modificados da CRC é a sua complexidade técnica. A entrega de crema local usando enemas de adeno-creativo rectal em camundongos com alelos de Apc floxed foi descrita anteriormente; No entanto, a incidência, a multiplicidade ea localização dos tumores intestinais podem ser altamente variáveis ​​com esta técnica. 15 Portanto, a técnica de confinamento da infecção adeno-creativa pelo aperto cirúrgico do segmento a induzir foi desenvolvida. 13 Alteramos este procedimento para melhorar o bem-estar dos animais, bem como reduzir a mortalidade e o número de tumores resultantes. Com este protocolo, todos os laboratórios com experiência em cirurgia de roedores pequenos devem poder reproduzir o modelo e produzir tumores altamente reprodutíveis e de fácil acesso à colonoscopia. Dependendo do condicional mUsos utilizados para a tumorigênese, o espectro completo de adenoma, carcinoma invasivo e metástases podem ser observados. À medida que os tumores estão localizados no cólon distal, a avaliação endoscópica em série é facilmente possível neste modelo.

<table><tbody><tr><td><forte>Reagentes/consumíveis</forte></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Dulbecco's Phosphate Buffered Saline</td><td>Life Technologies GmbH</td><td>14190169</td><td></td></tr><tr><td>Tripsina-EDTA (0,25%, Vermelho de fenol)</td><td>Life Technologies GmbH</td><td>25200072</td><td></td></tr><tr><td>Solução salina normal 0,9% (E154)</td><td>Serumwerk Bernburg AG</td><td>10013</td><td></td></tr><tr><td>Aqua ad injectabilia</td><td>B. Braun Melsungen AG</td><td>235144</td><td></td></tr><tr><td>Ad5CMV-Cre (adenovírus, c = 2E+11 PFU/mL)</td><td>Gene Transfer Vector Core Universidade de Iowa</td><td></td><td></td></tr><tr><td>15 mL, tubos de centrífuga de 50 mL</td><td>Greiner Bio-One GmbH</td><td>188271/227270</td><td></td></tr><tr><td>Eppendorf tubes 1,5 mL/ 2 mL</td><td>Sarstedt AG & Co.</td><td>72.695.400</td><td></td></tr><tr><td>Placa de Petri PS 100/15 mm (estéril, Nuclon)</td><td>Fisher Scientific GmbH</td><td>10508921/ NUNC150350</td><td></td></tr><tr><td>Seringa de 1 mL (sem volume morto) - Injekt-F Agulha</td><td>de injeção 194291661</td><td></td>30G <td>da Braun/neoLab</td></tr><tr><td></td><td>BECTON DICKINSON</td><td>304000</td><td></td></tr><tr><td>Nome</td><td>Empresa</td><td>Número de catálogo</td><td>Comentários</td></tr><tr><td>Analgesia / anestesia</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Sevoflurano (Sevoflurano AbbVie)</td><td>AbbVie Germany GmbH & Co. KG-Medical</td><td></td><td></td></tr> <tr><td>oxygen</td><td>Air Liquide Medical</td> <td>GmbH-Buprenorfina</td><td></td></tr> <tr><td>(Temgesic)</td><td>Indivior Eu Ltd.</td><td>-</td><td></td></tr><tr><td>Bepanthen - pomada oftálmica</td><td>Bayer Vital GmbH</td><td>10047757</td><td></td></tr><tr><td>Máquina de anestesia de pesquisa de mesa x / O2 Flush w / vaporizador de sevoflurano</td><td>Parkland Scientific</td><td>V3000PS / PK</td><td></td></tr><<tr><td>strong>Nome</td><td>Empresa</td><td>Número de catálogo</td><td>Comentários</td></tr><tr><td><forte>Equipamento Cirúrgico</forte></td>Cotonetes de <td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>celulose</td><td>Lohmann & Seringa de insulina Rauscher Deutschland</td><td>13356</td><td></td></tr><tr><td>EMG 1 mL (com cânula 30G)</td><td>B. Braun Melsungen AG</td><td>9161627S</td><td></td></tr><tr><td>Tubo de furo fino (furo: 0,28 mm/ diâmetro: 0,61mm)</td>Pinça Micro-Adson <td>Smiths Medical Deutschland</td><td>800/100/100</td><td></td></tr> Ferramentas de Íris <tr><td></td><td>Fine Science</td><td>Tools 11018-12</td><td></td></tr><tr><td>- ToughCut</td><td>Fine Science Tools</td><td>14058-11</td><td></td></tr><tr><td>Olsen-Hegar Porta-agulhas</td><td>Fine Science Tools</td><td>12002-12</td><td></td></tr><tr><td>Kit AutoClip</td><td>Ferramentas Fine Science</td><td>12020-00</td><td></td></tr><tr><td>PDS Z1012H 6/0 C1 (sutura cirúrgica)</td><td>Johnson & Johnson Medical GmbH</td><td>Z1012H</td><td></td></tr><tr><td>Braçadeira Vascular Micro Serrefine Curvada</td><td>Ferramentas de Ciência Fina</td><td>18055-05</td><td></td></tr><tr><td>Clipes de Mola Fogarty</td><td>Edwards</td><td>CDSAFE 6</td><td></td></tr><tr><td>Placa Quente 062</td><td>Labotect</td><td>13854</td><td></td></tr><tr><td>Isis - Barbeador de cabelo</td><td>Aesculap - Braun</td><td>-</td><td></td></tr><tr><td>Nome</td><td>Empresa</td><td>Número de catálogo</td><td>Comentários</td></tr><tr><td>Colonoscopia</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Fonte de luz fria XENON 175 SCB</td><td>Karl Storz</td><td>20132101-1</td><td>Karl Storz Coloview System Mainz</td></tr><tr><td>Cabo de luz de fibra óptica</td><td>Karl Storz</td><td>69495NL</td><td>Karl Storz Coloview System Mainz</td></tr><tr><td>TRICAM Cabeça de Câmera de Três Chips</td><td>Karl Storz</td><td>20221030</td><td>Karl Storz Coloview System Mainz</td></tr><tr><td>TRICAM SLII Unidade de Controle</td><td>de Câmera Karl Storz</td><td>20223011-1</td><td>Karl Storz Coloview System Mainz</td></tr><tr><td>15" Monitor de Tela Plana EndoVue</td><td>Karl Storz</td><td>9415NN</td><td>Karl Storz Coloview System Mainz</td></tr><tr><td>Telescópio HOPKINS Straight Forward diâmetro 1,9 mm; comprimento 10 cm autoclavável transmissão de luz de fibra óptica incorporada</td><td>Karl Storz</td><td>64301AA</td><td></td></tr><tr><td>Bainha de proteção e exame</td><td>Karl Storz</td><td>61029C</td><td></td></tr></tbody></table>

um modelo de mouse de engenharia genética de câncer colorretal esporádico

A Genetically Engineered Mouse Model of Sporadic Colorectal Cancer

Apesar das vantagens da aplicabilidade e da relação custo-eficácia, os modelos de ratos de câncer colorretal baseados na injeção de células tumorais apresentam limitações severas e não simulam com precisão a biologia do tumor e a disseminação de células tumorais. Modelos de mouse geneticamente modificados foram introduzidos para superar essas limitações; No entanto, esses modelos são tecnicamente exigentes, especialmente em órgãos grandes, como o cólon, no qual apenas um único tumor é desejado. Como resultado, desenvolveu-se um modelo de câncer colorretal imunocompetente, geneticamente modificado, que desenvolve tumores altamente uniformes e pode ser utilizado para estudos de biologia tumoral, bem como ensaios terapêuticos. O desenvolvimento de tumores é iniciado por infecção cirúrgica segmentar do cólon distal com vírus adeno-cri em murganhos condicionalmente mutantes compostos. Os tumores podem ser facilmente detectados e monitorados via colonoscopia. Aqui descrevemos a técnica cirúrgica da infecção segmentar de adeno-creO cólon, a vigilância do tumor através de colonoscopia de alta resolução e apresentar os tumores colorretais resultantes.

Se for realizado adequadamente,&gt; 85% dos animais desenvolvem tumores. A mortalidade do procedimento cirúrgico aqui apresentado é &lt;5%, a mortalidade da colonoscopia é praticamente inexistente. Na maioria dos ratos, uma única lesão é detectada; Em cerca de 30% 2 - 3 pequenos adenomas podem ser detectados, que geralmente se fundem em um único tumor dentro de 2 a 3 semanas após a indução do tumor. O fenótipo eo comportamento...

É apresentado um protocolo para o estabelecimento de um modelo de ratinho geneticamente modificado de câncer colorretal por infecção segmentar adeno-cre e sua vigilância através de colonoscopia de alta resolução.

Um modelo de mouse de engenharia genética de câncer colorretal esporádico

Despite the advantages of easy applicability and cost-effectiveness, colorectal cancer mouse models based on tumor cell injection have severe limitations ...

O objetivo geral deste procedimento é obter infecção segmentar por adeno-cre no cólon de um modelo de camundongo geneticamente modificado. Este método pode ajudar a responder perguntas-chave na área do câncer colorretal, ou CRC, pois fornece um excelente modelo para o estudo da biologia e do tratamento do CRC. A principal vantagem desta técnica é que qualquer laboratório com experiência em cirurgia de roedores pequenos pode utilizar este modelo para produzir tumores localizados no cólon altamente reprodutíveis e de fácil acesso.Inicie posicionando um camundongo anestesiado em posição supina e aplique pomada nos olhos do animal. Fixe o camundongo em uma posição segura e, em seguida, confirme o nível adequado de sedação por meio da pinça no dedo do pé. Faça uma incisão mediana de aproximadamente 15 milímetros na pele do abdômen inferior.Em seguida, utilize pin&ccedil;as para segurar a musculatura da parede abdominal e realize uma incis&atilde;o cuidadosa do m&uacute;sculo com tesoura para abrir a cavidade abdominal. Ap&oacute;s identificar o c&oacute;lon distal, prenda cuidadosamente o tecido com uma pin&ccedil;a delicada aproximadamente 15 mil&iacute;metros pr&oacute;ximos ao &acirc;nus. A seguir, insira cuidadosamente um tubo flex&iacute;vel de tefl

a-genetically-engineered-mouse-model-of-sporadic-colorectal-cancer

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Pesquisa sobre o Câncer

Duas técnicas podem ser usadas para estabelecer esse modelo: injeção de uma suspensão de células de câncer na parede cecal ou transplante de um pedaço de tumor subcutâneo para o ceco. Este modelo é útil para estudar a progressão natural do câncer colo-retal e testes de novos agentes terapêuticos contra o câncer colorretal.

Modelo rato ortotópico de câncer colorretal

Nós demonstramos um protocolo em que a administração do agente genotóxico azoximetano (AOM), seguido por três ciclos da pró-inflamatória de sódio sulfato de agente de dextrano (DSS) de forma rápida e consistentemente gera tumores do cólon em ratos com semelhanças morfológicas e moleculares para as observadas em humanos colite Associadas cancro.

Câncer de modelagem Colite Associada com Azoximetano (OMA) e sulfato de sódio Dextran (DSS)

Este vídeo descreve o protocolo para gerar um modelo de camundongo de câncer colorretal de xenoenxerto ortotópico derivado de paciente para estudar a progressão de células de câncer colorretal em camundongos diabéticos/imunodeficiência combinada grave (NOD/SCID) não obesos. Este modelo murino ajuda a entender o crescimento do tumor primário e o padrão de metástases.

Gerando modelo de camundongo PDOX de câncer colorretal: estudando a progressão do câncer colorretal em um modelo murino

Este vídeo descreve o protocolo para estabelecer um modelo de camundongo com metástase espontânea de xenoenxertos derivados de pacientes com câncer colorretal ou PDXs. Esses modelos de xenoenxerto imitam parcialmente as características dos carcinomas humanos e entendem os aspectos críticos das malignidades humanas, incluindo invasão e metástase.

Modelos de camundongos com metástase espontânea: uma plataforma para estudar o potencial metastático de células de câncer colorretal injetadas ortotopicamente

Este vídeo descreve a geração de um modelo de camundongo colorretal por infecção segmentar por adeno-cre. O segmento do cólon infectado leva à tumorigênese dentro desse segmento da mucosa, resultando em adenomas que evoluem para carcinoma invasivo e metastático. Este modelo é uma plataforma atraente para estudos de biologia do câncer e ensaios terapêuticos pré-clínicos.

Infecção Segmentar por Adeno-Cre: Uma Técnica para Gerar Câncer Colorretal Isolado usando Modelos de Camundongos Geneticamente Modificados

Descrevemos o estabelecimento de tumores colorretais ortotópicos através da injeção de células tumorais ou organoides no ceco de camundongos e o subsequente isolamento de células tumorais circulantes (CTCs) deste modelo.

Isolamento de células tumorais circulantes em um modelo de rato ortotópico de câncer colorretal

O objetivo deste manuscrito é descrever o modelo de mouse KitV558Δ/+ e técnicas para dissecção e processamento bem-sucedidos de amostras de camundongos.

Técnicas moleculares e imunológicas em um modelo de rato geneticamente modificado de tumor estrommal gastrointestinal

Este protocolo descreve o implante ortotópico de células cancerosas derivadas de pacientes na parede do ceco de camundongos imunodeficientes. O modelo recapitula a doença metastática avançada do câncer colorretal e permite a avaliação de novas drogas terapêuticas em um cenário clinicamente relevante de metástases pulmonares e hepáticas.

Implante Ortotópico de Células Cancerosas Derivadas do Paciente em Camundongos Recapitula o Câncer Colorretal Avançado

Este estudo se concentra na indução subcutânea in vivo de células cancerígenas colorretais luminescentes em um modelo murino e na subsequente medição de luminescência usando um sistema de imagem. O procedimento visa estabelecer um modelo de crescimento tumoral reprodutível para monitoramento em tempo real e avaliação terapêutica.

Injeção subcutânea de células de câncer colorretal humano em camundongos nus atímicos para avaliar a eficácia antitumoral

Um procedimento para implantar células cancerígenas pancreáticas que expressam proteínas fluorescentes verdes (PANC-1 GFP) ortotopicamente no pâncreas de camundongos Balb-c Ola Hsd-Fox1nu para avaliar a progressão e metástase do tumor é apresentado aqui.

Fluorescente modelo de camundongo ortotópico de câncer de pâncreas

Aprenda a criar um modelo de câncer colorretal esporádico em camundongos por infecção segmentada com adeno-cre. Este método permite monitorar tumores por colonoscopia de alta resolução.

Um modelo de mouse de engenharia genética de câncer colorretal esporádico

Explorar mais vídeos