27 de setembro de 2017
Descrevemos aqui métodos para tratamento neonatal capsaicina induzir a dermatite atópica em ratos e exposição de formaldeído vaporizado para investigar os efeitos da inalação do formol na dermatite atópica.
O objetivo geral deste procedimento é induzir sintomas semelhantes aos da dermatite atópica pelo tratamento neonatal com capsaicina. E para medir o efeito do formaldeído nos sintomas dermatis-like atópicos. Este método pode ajudar a responder a uma questão-chave relacionada à fisiopatologia da dermatite atópica no campo dermatológico.
A principal vantagem desta técnica é a indução de sintomas semelhantes à dermatite atópica e o estabelecimento de um importante sistema de exposição com os incrementos. Para preparar cinco miligramas por mililitro de solução de capsaicina, adicione um mililitro de Tween 80, um mililitro de etanol a 100% e 50 miligramas de capsaicina a um tubo cônico de 15 mililitros. Em seguida, adicione oito mililitros de solução salina normal ao tubo cônico.
Tampe e agite o tubo vigorosamente até que nenhuma camada separada seja visível. É fundamental administrar a capsaicina entre 12 a 48 horas após o nascimento. Injete a solução de capsaicina no tecido subcutâneo na linha média e na parte de trás do pescoço de um rato Sprague Dawley neonatal.
Para evitar a parada respiratória devido à injeção de capsaicina, coloque os neonatos em uma câmara de oxigênio até que a respiração se torne normal. Se necessário, empurre o peito dos recém-nascidos para estimular a respiração. Comece preparando câmaras de plástico equipadas com um espelho para permitir uma cobertura total para visualização e orifícios para permitir que os ratos respirem.
Coloque os ratos na câmara de plástico e cubra o teto da câmara com um objeto pesado para evitar que a tampa se abra. Em seguida, configure uma câmera de vídeo digital para gravar simultaneamente as vistas espelhadas e frontais dos ratos. Em seguida, registre os comportamentos espontâneos dos ratos por uma hora.
Reproduza os videoclipes e conte o número de comportamentos de coçar, como os exibidos pelo rato à direita. E o rato no centro. Para pontuar as lesões, identifique a extensão e a gravidade da dermatite nas orelhas e em outras partes de um rato anestesiado.
Defina o tamanho da unidade para a extensão das lesões cutâneas como 0,25 centímetros quadrados. E a gravidade das lesões cutâneas usando esta tabela. Prepare uma caixa de vidro acrílico com dois conectores em lados opostos.
Para a circulação do gás formaldeído, a saída de ventilação deve ser colocada mais alta do que a saída de entrada de gás. Conecte os tubos a ambos os conectores. Passe o tubo de saída de ventilação para a coifa ou para fora do prédio para emissão do gás.
E conecte o outro tubo de entrada a um regulador de oxigênio médico. Coloque uma gaiola de rato convencional dentro da caixa de vidro acrílico. Coloque ratos de uma semana na gaiola e feche a caixa de vidro acrílico o mais firmemente possível para evitar vazamento de gás.
Aplique filme plástico para envolver a câmara e feche a câmara com uma tampa emborrachada para uma vedação hermética. Adicione a solução de formaldeído a 0,5% ao frasco do umidificador conectado ao regulador de oxigênio medicinal. Não se esqueça de que trabalhar com formaldeído pode ser extremamente perigoso.
E precauções como máscaras e luvas devem sempre ser tomadas ao realizar este procedimento. Em seguida, ligue o regulador e ajuste a vazão para cinco litros por minuto. Exponha os ratos ao gás formaldeído por um período de duas horas.
Aqui são mostradas fotografias representativas da inflamação da pele no rato tratado com capsaicina. O desenvolvimento cronológico da dermatite dos ratos tratados com capsaicina é mostrado aqui. Esta imagem mostra o desenvolvimento cronológico dos comportamentos de coçar nos ratos tratados com capsaicina.
Esta é uma imagem representativa de lesões cutâneas recidivantes de ratos tratados com capsaicina com 16 semanas de idade. Os níveis séricos de IgE são significativamente elevados em animais tratados com capsaicina. Elevação significativa da expressão de mRNA de IL-4 também é observada em animais tratados com capsaicina.
A elevação significativa da expressão de mRNA de IL-13 em animais tratados com capsaicina é mostrada aqui. Essas fotografias representativas mostram dermatite atópica após a quinta semana de tratamento usando 1,2 partes por milhão. E 0,8 partes por milhão de formaldeído em comparação com o tratamento controlado com ar.
A exposição a 1,2 partes por milhão de formaldeído, mas não a 0,8 partes por milhão de formaldeído, exacerbou significativamente a prurido no modelo de dermatite atópica tratada com capsaicina. Resultados semelhantes foram observados quando a dermatite foi medida. Níveis séricos aumentados de IgE foram observados no modelo de rato com DA tratado com capsaicina tratado com 1,2 partes por milhão de exposição ao formaldeído.
Seguindo este procedimento, outros materiais, como a solução de gylcol, podem ser usados para responder a perguntas adicionais relacionadas aos efeitos de uma matéria específica na dermatite atópica. Após esses desenvolvimentos, essa técnica abriu caminho para pesquisadores da área de dermatologia explorarem o papel dos fatores ambientais na patogênese da dermatite atópica.
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Este artigo descreve métodos para induzir sintomas semelhantes aos da dermatite atópica em ratos por meio do tratamento neonatal com capsaicina e investigar os efeitos da inalação de formaldeído. O estudo tem como objetivo aprimorar a compreensão da fisiopatologia da dermatite atópica.
Os fatores ambientais desencadeantes na dermatite atópica permanecem como um aspecto crítico desconhecido na dermatologia translacional, afetando a confiança preditiva no desenvolvimento terapêutico. Este modelo em rato permite a avaliação sistemática de exposições ambientais, como o formaldeído, sobre a progressão da doença e a resposta de biomarcadores. A abordagem auxilia na redução de riscos mecanicistas e orienta decisões em estágios iniciais sobre portfólios em pipelines de dermatologia.
Este modelo conecta a fase inicial de descoberta e a validação pré-clínica, permitindo testes controlados de hipóteses sobre fatores ambientais no desenvolvimento da dermatite atópica.