Name: Efeitos da exposição de formol para um modelo do rato da dermatite atópica, induzido pela capsaicina Neonatal tratamento (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-09-27T12:30:00.000+00:00
Duration: 6 min 47 s
Description: Aprenda a induzir sintomas de dermatite atópica em ratos usando tratamento neonatal com capsaicina e avaliar os efeitos da exposição ao formaldeído. Este método ajuda a compreender a fisiopatologia da doença.

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Esta pesquisa foi apoiada pelo bem-estar público &#38; programa de pesquisa de segurança através da nacional Research Foundation de Coreia (NRF) financiado pelo Ministério da educação, ciência e tecnologia (NRF-2014M3C8A5030612) e apoiado por The Chung Yang, Cha Young Sol, M.D. e Jang Oi Joo Yeu Sa Memorial fundo.

todos os métodos descritos aqui foram aprovados pelo cuidado do Animal Internacional e Comité de uso (IACUC) de Coreia Universidade faculdade de medicina. 6 semanas após o nascimento, experimentadores podem induzir enthansasia e recolher vários exemplos como a pele e soro de ratos.
 1. indução da AD por tratamento Neonatal de capsaicina <ol><li>para preparar a 5 mg/mL solução de capsaicina, adicionar 50 mg de capsaicina a 1 mL de Tween 80 e 1 mL de etanol 100% em um tubo cônico de 15 mL.</li>
	<li>Adicionar 8 mL de solução salina ao tubo cónico. Agite o tubo vigorosamente até sem camadas separadas são visíveis</li> <li>injecte a solução de capsaicina (10 µ l/g) no tecido subcutâneo, na linha média e posterior do pescoço de um rato Sprague-Dawley neonatal.
	<ol><li>Entregar a capsaicina entre 12 h a 48 h após o nascimento (crítica). 
		Nota: Se a injeção é adiada por mais de alguns dias, dermatite não irá desenvolver ou serão mantidas apenas por algumas semanas. Se a injeção é muito cedo, dificuldade respiratória pode ocorrer devido à dor severa.</li>
		<li>Para evitar ratos neonatais de parada respiratória devido a injeção de capsaicina, empurrar o peito dos neonatos para estimular a respiração ou manter os recém-nascidos em uma câmara de oxigênio, até que a respiração se torna normal... desde que a dor induzida por capsaicina pode desencorajar a respiração, adicionar anestesia geral possivelmente poderia agravar a dificuldade para respirar. Assim, os experimentadores devem não usar anestésico para aumentar a sobrevida de ratos.</li>
	</ol></li></ol> 2. Avaliação de prurido e dermatite em um modelo do rato de AD <ol><li>medição do prurido contando espontâneo arranhando comportamento <ol><li>preparar plástico câmaras (20 x 30 cm x 20 cm) equipado com um espelho, para permitir a cobertura total para visualização e furos para permitir que os ratos respirar.</li>
		<li>Conjunto para cima e ajustar a câmera de vídeo digital corretamente para gravar o espelho vistas e vistas frontais dos ratos simultaneamente.</li>
		<li>Lugar ratos no plástico de câmara e cobrir o teto da câmara com um objeto pesado para impedir abertura.</li>
		<li>Gravar os comportamentos espontâneos de ratos por 1h, reproduza os clipes de vídeo e contar o número de comportamentos de risco.</li>
	</ol></li> <li>Avaliação da lesão de pele usando um sistema de Pontuação <ol><li>colocar o rato na câmara de indução.</li>
		<li>Ativar o medidor de fluxo de oxigênio de 2 L/min vazão e ajustar o vaporizador de isoflurano para 3% para anestesia.</li>
		<li>Identificar a extensão e gravidade da Dermatite das orelhas e outras partes de um rato.</li>
		<li>Define o tamanho da unidade para a extensão das lesões de pele como 0,25 cm 2 e a gravidade das lesões de pele pela seguinte tabela 1: índice de gravidade; grau de Pontuação de dermatite, multiplicando-se a extensão e gravidade (ver Pontuação de dermatite em < classe forte = "xfig" > figura 1B).</li>
	</ol></li></ol> 3. Exposição de FA gasoso para animais <ol><li>preparação da câmara de inalação <ol><li>preparar uma caixa de vidro acrílico (55 cm x 40 cm x 35 cm) que tem duas saídas em lados opostos.</li>
		<li>Cuidado. Para circulação do gás FA, coloque a tomada mais elevada do que a entrada e fazer o tamanho da saída do maior que o de entrada de.</li>
		<li>Cuidado. Para a medição da concentração de gás interno, do outro lado das saídas, perfurar três pequenas passagens, que podem ser fechadas.</li>
		<li>Connect tubos para ambas as saídas. Colocar um tubo de saída para capa de circulação ou fora do prédio para a emissão do gás e conectar o outro tubo de saída de um regulador de oxigênio médico.</li>
		<li>Colocar uma gaiola do rato convencional dentro da caixa de vidro acrílico.</li>
		<li>Colocar ratos na gaiola de uma semana após o nascimento por 5 semanas (2 h/dia e 5 dias/semana).</li>
		<li>Fechar a caixa de vidro acrílico tão firmemente quanto possível para evitar o vazamento de gás. 
		Nota: Para a vedação, a tampa da câmara deve conter de borracha. Aplicar a película aderente para embrulhar a câmara para vedação.</li>
	</ol></li> <li>Geração de FA gasosa usando um regulador de oxigênio médico <ol><li>dissolver 5 g de FA em 1 L de água.</li>
		<li>Colocar a solução de FA de 0,5% na garrafa do umidificador de regulador de oxigênio médico.</li>
		<li>Depois de ligar o tubo de entrada para o regulador, gire o regulador e definir a taxa de fluxo de 5 L/min.</li>
		<li>Ajustar a concentração da solução e a taxa de fluxo para determinar a concentração do gás na câmara.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>

<ol><li>Geha, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Allergy+and+hypersensitivity.+Nature+versus+nurture+in+allergy+and+hypersensitivity%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Immunol%22%5BJournal%5D)">Allergy and hypersensitivity. Nature versus nurture in allergy and hypersensitivity.</a> Curr Opin Immunol. 15 (6), 603-608 (2003).</li>
<li>Novak, N., Bieber, T., Leung, D. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immune+mechanisms+leading+to+atopic+dermatitis%5BTitle%5D)+AND+%22The+J+Allergy+Clin+Immunol%22%5BJournal%5D)">Immune mechanisms leading to atopic dermatitis.</a> The J Allergy Clin Immunol. 112 (Suppl 6), S128-S139 (2003).</li>
<li>Back, S. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chronically+relapsing+pruritic+dermatitis+in+the+rats+treated+as+neonate+with+capsaicin%3B+a+potential+rat+model+of+human+atopic+dermatitis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Dermatol+Sci%22%5BJournal%5D)">Chronically relapsing pruritic dermatitis in the rats treated as neonate with capsaicin; a potential rat model of human atopic dermatitis.</a> J Dermatol Sci. 67 (2), 111-119 (2012).</li>
<li>Jin, H., He, R., Oyoshi, M., Geha, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+atopic+dermatitis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Invest+Dermatol%22%5BJournal%5D)">Animal models of atopic dermatitis.</a> J Invest Dermatol. 129 (1), 31-40 (2009).</li>
<li>Han, R. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Formaldehyde-Induced+Aggravation+of+Pruritus+and+Dermatitis+Is+Associated+with+the+Elevated+Expression+of+Th1+Cytokines+in+a+Rat+Model+of+Atopic+Dermatitis%5BTitle%5D)+AND+%22PLOS+ONE%22%5BJournal%5D)">Formaldehyde-Induced Aggravation of Pruritus and Dermatitis Is Associated with the Elevated Expression of Th1 Cytokines in a Rat Model of Atopic Dermatitis.</a> PLOS ONE. 11 (12), e0168466(2016).</li>
<li>Xu, B., Aoyama, K., Takeuchi, M., Matsushita, T., Takeuchi, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expression+of+cytokine+mRNAs+in+mice+cutaneously+exposed+to+formaldehyde%5BTitle%5D)+AND+%22Immunol+Lett%22%5BJournal%5D)">Expression of cytokine mRNAs in mice cutaneously exposed to formaldehyde.</a> Immunol Lett. 84 (1), 49-55 (2002).</li>
<li>Kim, J. Y., Jeong, M. S., Park, K. Y., Seo, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aggravation+of+atopic+dermatitis-like+symptoms+by+consecutive+low+concentration+of+formaldehyde+exposure+in+NC%2FNga+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Dermatol%22%5BJournal%5D)">Aggravation of atopic dermatitis-like symptoms by consecutive low concentration of formaldehyde exposure in NC/Nga mice.</a> Exp Dermatol. 22 (3), 219-221 (2013).</li>
<li>Laske, N., Niggemann, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Does+the+severity+of+atopic+dermatitis+correlate+with+serum+IgE+levels%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatr+Allergy+Immunol%22%5BJournal%5D)">Does the severity of atopic dermatitis correlate with serum IgE levels?</a> Pediatr Allergy Immunol. 15 (1), 86-88 (2004).</li>
<li>Fujii, Y., Takeuchi, H., Sakuma, S., Sengoku, T., Takakura, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+a+2%2C4-dinitrochlorobenzene-induced+chronic+dermatitis+model+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Skin+Pharmacol+Physiol%22%5BJournal%5D)">Characterization of a 2,4-dinitrochlorobenzene-induced chronic dermatitis model in rats.</a> Skin Pharmacol Physiol. 22 (5), 240-247 (2009).</li>
<li>Sugimoto, T., Xiao, C., Ichikawa, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neonatal+primary+neuronal+death+induced+by+capsaicin+and+axotomy+involves+an+apoptotic+mechanism%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Neonatal primary neuronal death induced by capsaicin and axotomy involves an apoptotic mechanism.</a> Brain Res. 807 (1-2), 147-154 (1998).</li>
<li>Saito, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+skin+inflammation+induced+by+repeated+exposure+of+toluene%2C+xylene%2C+and+formaldehyde+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Environ+Toxicol%22%5BJournal%5D)">Characterization of skin inflammation induced by repeated exposure of toluene, xylene, and formaldehyde in mice.</a> Environ Toxicol. 26 (3), 224-232 (2011).</li>
<li>Jung, W. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Formaldehyde+exposure+induces+airway+inflammation+by+increasing+eosinophil+infiltrations+through+the+regulation+of+reactive+oxygen+species+production%5BTitle%5D)+AND+%22Environ+Toixcol+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Formaldehyde exposure induces airway inflammation by increasing eosinophil infiltrations through the regulation of reactive oxygen species production.</a> Environ Toixcol Pharmacol. 24 (2), 174-182 (2007).</li>
</ol>

Os autores não têm nada para divulgar.

O protocolo descrito aqui para a indução de sintomas de AD em ratos pode ser adaptado para estudar a fisiopatologia do AD e usado como uma ferramenta de triagem para teste de drogas. O instrumento para a exposição de FA gasoso de ratos tratados com capsaicina pode ser aplicado para avaliar os efeitos da exposição a diversos gases em diversos modelos animais.
O modelo de AD tratados com capsaicina neonatal depende de um procedimento mais simples do que outros modelos atópicas como o DNCB tratam...

Para interrogar os efeitos da inalação de formaldeído (FA) na progressão da dermatite atópica (AD), temos estabelecido um protocolo para indução de AD e desenvolveu uma câmara de circulação convencional para exposição crônica de FA.
AD é uma doença de pele inflamatória crônica atribuída para as interações complexas entre a predisposição genética e gatilhos ambientais1,2. Um modelo animal adequado é necessário estudar a AD no estado pré-clínicos. Isso é mais importante quando a elucidação da patogenia da AD sob a influência de fatores ambientais. Além disso, para melhor investigar os efeitos dos gatilhos ambientais sobre a progressão de AD, é essencial para separar os fatores ambientais individuais e quantificar o grau de exposição.
Demonstrámos um modelo do rato de romance de AD induzida pelo tratamento neonatal capsaicina. Este modelo de AD3 tem alguns méritos sobre outros modelos de AD, como os modelos AD induzidos pela sensibilização epidérmica, os modelos AD geneticamente modificadas e os modelos de rato espontânea de AD4. Em primeiro lugar, este modelo desenvolve sintomas de AD na idade de 3 semanas, que corresponde ao Infante AD e é mais cedo do que outros modelos de rato espontânea de AD, tais como o rato NC/Nga. Em alguns casos, ao contrário dos modelos AD geneticamente modificadas, os sintomas dos modelos AD subside em recaída espontaneamente durante um período de 20 semanas. Além disso, o processo de indução de sintomas de AD no modelo é mais fácil do que o modelo de sensibilização epidérmica, que é mais parecido com a dermatite de contato alérgica, na perspectiva do processo de indução.
Nós introduzimos o romance protocolo para exposição de FA a um modelo animal por meio de uma câmara de vidro acrílico e um regulador de oxigênio médico convencional5 para estudar os efeitos da inalação de FA no desenvolvimento da AD em períodos infantis e adolescentes. O regulador nos permitiu expor os animais para uma concentração constante de gás, ajustando as taxas de fluxo e a concentração da solução. Estudos anteriores relataram várias maneiras de exposição de FA de modelos animais. Xu et al descreveram o método de exposição no qual FA solução foi diretamente aplicada a pele6. Outro estudo recente dirigida o protocolo de exposição de gás FA usando um gerador de solventes voláteis especializados, modelo 49127. Em comparação com métodos de estudos anteriores, o novo método está equipado mais facilmente e pode ser aplicado para outras soluções além de FA.

<table><tbody><tr><td>Regulador de oxigênio médico</td><td>Yuyao Jiahua O fabricante médico</td><td></td><td>não afetará os resultados</td></tr><tr><td>O fabricante do tubo</td><td></td><td></td><td>não afetará os resultados</td></tr><tr>O fabricante da<td>câmara de acrílico</td><td>Taejin Acryl</td><td></td><td>não afetará os resultados</td></tr><tr>O fabricante de <td>Taejin Acryl</td><td></td> da<td>câmara de plástico</td><td>não afetará os resultados</td></tr><tr><td>Paraformaldeído, pó</td><td>O</td> fabricante <td>do Sigma 158127</td><td>não afetará os resultados</td></tr><tr><td>O</td> fabricante <td>do filme Wrap Uniwrap</td><td></td><td>não afetará os resultados</td></tr><tr><td>O fabricante da Capsaicina</td><td>Sigma</td><td>M2028</td><td>não afetará os resultados</td></tr><tr><td>O</td><td></td><td></td><td>fabricante</td>da</tr> câmera <tr><td>de vídeo digital</td><td>Sony</td><td>HDR-CX380y</td><td>não afetará os resultados afetar os resultados</td></tr><tr>O fabricante farmacêutico <td></td> de<td>isoflurano</td><td>JW</td><td>não afetará os resultados</td></tr></tbody></table>

efeitos da exposição de formol para um modelo do rato da dermatite atópica, induzido pela capsaicina neonatal tratamento

Effects of Exposure of Formaldehyde to a Rat Model of Atopic Dermatitis Induced by Neonatal Capsaicin Treatment

Dermatite atópica é cronicamente Policondrite eczema pruriginosa e prevalece em todo o mundo, especialmente nos países desenvolvidos. Interações complexas entre fatores genéticos e ambientais são conhecidas por desempenhar um papel importante na fisiopatologia da dermatite atópica. No entanto, ainda falta um quadro detalhado da patogênese desta doença. Assim, é de importância para desenvolver modelos animais apropriados para elucidar a progressão da dermatite atópica. Além disso, investigar o efeito de fatores ambientais, tais como poluentes atmosféricos na dermatite atópica amplia a compreensão da doença. Aqui, descrevemos um método para indução de dermatite atópica em ratos com tratamento neonatal capsaicina e um protocolo para a exposição de uma constante concentração de formaldeído para ratos para revelar os efeitos sobre o desenvolvimento da dermatite atópica em infantil e adolescente períodos. Estes protocolos foram aplicados com sucesso a vários experimentos e podem ser usados para outras substâncias.

A inflamação da pele AD-como o modelo de rato AD tratados com capsaicina em 7 semanas de idade é apresentada na figura 1A. Comportamentos arranhando robustos do modelo de ratos tratados com capsaicina AD é mostrado no vídeo 1. Tratamento neonatal capsaicina suscitou dermatite e agravada coçando comportamentos em ratos 3 semanas de idade, e AD-como os sintomas persistiram durante várias semanas (figura 1B,...

Descrevemos aqui métodos para tratamento neonatal capsaicina induzir a dermatite atópica em ratos e exposição de formaldeído vaporizado para investigar os efeitos da inalação do formol na dermatite atópica.

Efeitos da exposição de formol para um modelo do rato da dermatite atópica, induzido pela capsaicina Neonatal tratamento

Atopic dermatitis is chronically relapsing pruritic eczema and prevails around the world especially in developed countries. Complex interactions between ...

O objetivo geral deste procedimento é induzir sintomas semelhantes aos da dermatite atópica por meio do tratamento neonatal com capsaicina. E medir o efeito do formaldeído sobre os sintomas semelhantes aos da dermatite atópica. Este método pode ajudar a responder uma questão fundamental relacionada à fisiopatologia da dermatite atópica na área dermatológica.A principal vantagem dessa técnica são a indução de sintomas semelhantes aos da dermatite atópica e o estabelecimento de um importante sistema de exposição com os incrementos. Para preparar uma solução de cinco miligramas por mililitro de capsaicina, adicione um mililitro de Tween 80, um mililitro de etanol 100% e 50 miligramas de capsaicina a um tubo cônico de 15 mililitros. Em seguida, adicione oito mililitros de solução salina normal ao tubo cônico.Tampe e agite o tubo vigorosamente até que não sejam visíveis camadas separadas. É fundamental administrar a capsaicina entre 12 e 48 horas após o nascimento. Injete a solução de capsaicina no tecido subcutâneo ao longo da linha média e na parte posterior do pescoço de um rato neonato Sprague Dawley.Para prevenir parada respiratória devido à injeção de capsaicina, coloque os neonatos em uma câmara de oxigênio até que a respiração se normalize. Se necessário, pressione o tórax dos neonatos para estimular a respiração. Comece preparando câmaras de plástico equipadas com um espelho para permitir visualização completa e orifícios para permitir que os ratos respirem.Coloque os ratos na câmara de plástico e cubra o teto da câmara com um objeto pesado para impedir que a tampa se abra. Em seguida, configure uma câmera de vídeo digital para gravar simultaneamente as vistas do espelho e as vistas frontais dos ratos. Depois, grave os comportamentos espontâneos dos ratos por uma hora.Reproduza os clipes de vídeo e conte o número de comportamentos de coçar, como os exibidos pela rata à direita e pela rata no centro. Para pontuar as lesões, identifique a extensão e gravidade da dermatite nas orelhas e em outras partes de uma rata anestesiada.Defina o tamanho da unidade para a extensão das lesões cutâneas como 0,25 centímetros quadrados. E a gravidade das lesões cutâneas usando esta tabela. Prepare uma caixa de vidro acrílico que tenha dois conectores em lados opostos.Para a circulação do gás formaldeído, a saída de ventilação deve ser posicionada mais alta do que a entrada do gás. Conecte tubos a ambos os conectores. Conduza o tubo da saída de ventilação até a capela de circulação ou para fora do edifício, a fim de liberar o gás.E conecte o outro tubo de entrada a um regulador médico de oxigênio. Coloque uma gaiola convencional para ratos dentro da caixa de vidro acrílico. Coloque ratos com uma semana de idade na gaiola e, em seguida, feche a caixa de vidro acrílico o mais hermeticamente possível para evitar vazamento de gás.Cubra a câmara com filme plástico e feche-a com uma tampa revestida de borracha para vedação hermética. Adicione solução de formaldeído 0,5% ao frasco umidificador conectado ao regulador de oxigênio médico. Não se esqueça de que trabalhar com formaldeído pode ser extremamente perigoso.E precauções, como o uso de máscaras e luvas, devem sempre ser tomadas ao realizar este procedimento. Em seguida, ligue o regulador e ajuste a taxa de fluxo para cinco litros por minuto. Exponha os ratos ao gás formaldeído por um período de duas horas.Mostradas aqui são fotografias representativas da inflamação da pele na rata tratada com capsaicina. O desenvolvimento cronológico da dermatite em ratos tratados com capsaicina é mostrado aqui. Esta imagem mostra o desenvolvimento cronológico dos comportamentos de coçar em ratos tratados com capsaicina.Esta é uma imagem representativa de lesões cutâneas recidivantes de ratos tratados com capsaicina com 16 semanas de idade. Os níveis séricos de IgE estão significativamente elevados nos animais tratados com capsaicina. Também é observada uma elevação significativa da expressão de mRNA de IL-4 nos animais tratados com capsaicina.Elevação significativa da expressão de mRNA de IL-13 em animais tratados com capsaicina é mostrada aqui. Essas fotografias representativas mostram dermatite atópica após a quinta semana de tratamento usando 1,2 partes por milhão e 0,8 partes por milhão de formaldeído em comparação com o tratamento controlado com ar.A exposição a 1,2 partes por milhão de formaldeído, mas não a 0,8 partes por milhão de formaldeído, agravou significativamente a prurida no modelo de dermatite atópica tratado com capsaicina. Resultados semelhantes foram observados quando a dermatite foi avaliada. Níveis séricos aumentados de IgE foram observados no modelo de ratos com DA tratados com capsaicina e expostos a 1,2 partes por milhão de formaldeído.Após este procedimento, outros materiais, como solução de glicol, podem ser utilizados para responder perguntas adicionais relacionadas aos efeitos de substâncias específicas na dermatite atópica. Após esses avanços, esta técnica abriu caminho para pesquisadores na área de dermatologia explorarem o papel de fatores ambientais na patogênese da dermatite atópica.

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Immunology and Infection

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