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DOI: 10.3791/55996-v
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A localização exacta dos residentes de Golgi é essencial para a compreensão de Golgi a funções celulares. No entanto, a microscopia óptica convencional é incapaz de resolver a estrutura sub-Golgi. Aqui descrevemos o protocolo para um método de super-resolução microscopia convencional baseado determinar quantitativamente a localização sub-Golgi de uma proteína.
O objetivo geral deste método baseado em imagem é localizar quantitativamente uma proteína golgi em resolução nanométrica. Este método pode ajudar a responder às questões-chave no estudo do aparelho de golgi, como a organização de golgi e como ela funciona. A principal vantagem desse método é que ele usa um microscópio óptico convencional e ferramentas de software.
Para começar, cultive células HeLa em um frasco T25 em DMEM suplementado com 10% de FBS e incube a cultura a 37 graus Celsius e 5% de dióxido de carbono. Quando as células atingirem aproximadamente 80% de confluência, aspirar o meio de cultura e adicionar um mililitro de 25% de tripsina EDTA ao frasco. Incube as células a 37 graus Celsius por dois minutos.
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